Section 2 item 5

Chromatographie sur couche mince

CCM

Gnralits
Principe de separation identique la chromato sur colonne
PS dpose sur support en couche mince (anciennement papier)
PS la + ut =silice ou cellulose, alamine ,silices greffes
PM (si silice) ut mme solvant que la chromato dadsorption

Mcanisme :
o mca (sur silice )srtt adsorption (fixation sur site actif)
o mais aussi partage car tjrs de leau ds solvant

Rgle de rtention cf.chromato sur colonne sur silice

Applications :
o surtt analyse qualitative :
ds pharmacope europenne trs ut pour identifier ou rech impuret
la caractrisation se fait en dposant cot 1 talon
o moins ut en analyse quantitative, mais possible
mesure densit des spotschromatogramme

1 Mode opratoire
Plaque sur laquelle on dpose une fine couche de silice de 100 200m dpaisseur PS
Support = mtal (permet la dcoupe),ou verre ou plastique*
Cette PS adhre sur support grce laddition dun liant organique ou minral

1/ Dpt de lchantillon :
o ~1 cm du bord infrieur /seringue/capillaire,
o sous forme dun spot circulaire ou en bandes (analyse quanti)

2/ immersion ds qlq mm ds cuve (= couvercle) contenant la PM

o !! la cuve est qlq fois sature en solvant (rsultats ts)

3/ migration PM /capillarit :
o entrane composs en fct affinit vitesse tes

4/ Rvlation :
o qd migration atteint 12 15 cm ,on retire plaque ,marque front solvant ,
o schage ,
o Rvlation des spots :
lil nu si spots colors
ss lampe UV si fluorescents
pulvrisation de ractifs gnraux ou spcifiques pour rendre composs colors
ou fluorescent
le + courant :plaques + indicateurs de fluorescence
(F254) ss/ UV compos qui absorbent excitatrice :sopots sombres sur fond de plaque fluorescent

Pharmaetudes
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2 Paramtre de sparation

Tout compos est dfini / son Rf front solvant

oo o
Rf = d substance/ d solvant = x/x0
oo
x xo
xxxxx
Rf varie avec :
o T ,
o tat de saturation de la cuve ,
o teneur en eau de la silice

Tjrs identification / talon dpos sur mme plaque

3 Particularit en CCM
syst 3 phases (vapeur + m + s)
comme en CLHP , la migration sur silice se fait par mca dadsorption /dsorption
ici le support nest pas totalement quilibr avec la m
vitesse de progression non cste
Rf des composs ltat pr de celui ds mlange
la rech dimpuret se fait avec solution trs conc de prod analyser _ Rf modifi

4 Applications
Mthode danalyse qualitative +++
o identification des composs par rapport un talon dpos sur la mme plaque
o mais peu sp
o mise en ev de prod de dgradation ,dimpuret de synthse.

Analyse quantitative :
o mesure semi quantitative :
apprciation des dimensions ou intensit des spots par rapport une gamme
talon dpose sur la mme plaque
grattage des spots ,dissolution ,filtration et dosage/spectrophotomtrie

o mesure quantitative prcise :

avec photo densitomtre ou spectrophotomtre chromato :
principe :on balaye la plaque la surf (faire avancer ss/ lumire monochromatique
100% rflchiesur spot rflexion partielle (si adsorption) analyse lumire
rflchie
A
12345
oooo

xxxxxxxxx 1 C

gamme dtalonnage sur mme plaque :aire=f(conc)

chantillon :aire

Pharmaetudes
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Application particulire de la CCM :

o CCMHP=nanochromatographie :
granulomtrie s 3 5m :meilleur rsolution
migration sur 3 5 cm (rapide)
qtit faible de substance (0.01 0.1 g / 0.1 0.5 Ml)

o CCM prparative but :recup substance pur :

couche de s + paisse (admet + de qtit)
dpt de pls mg de substance ; ssf de bandes en gnral
migration
cupration de substance pure par grattage des bandes ,dissolution analyte
et filtration

Pharmaetudes