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2 Bachillerato
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Apuntes de Biologa
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CLASIFICACIN
Clasificaremos los mtodos que se utilizan para el estudio de la clula en dos grandes grupos:
a) Centrifugacin
b) Cromatografa
c) Electroforesis
d) Cultivos "in vitro"
II) Tcnicas para el estudio morfolgico de la clula: Nos permiten conocer cmo es su
forma, su tamao y su estructura. Son, fundamentalmente:
a) Microscopa ptica
b) Microscopa electrnica
Pensemos,por ejemplo, que una sola de los varios miles de protenas que contiene una clula
puede estar formada por ms 5000 aminocidos.
A) CENTRIFUGACIN
Consiste en la separacin de los componentes de una mezcla
en funcin de las diferencias entre las velocidades que
presentan al someterlos a elevadas aceleraciones (g). Esto se
consigue haciendo girar la mezcla en un rotor a un gran nmero
de vueltas por minuto. Los aparatos empleados con este fin se
denominan ultracentrfugas.
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1) FRACCIONAMIENTO U HOMOGENEIZACIN:
Se realiza con un homogeneizador (ver imagen en pgina anterior). El material biolgico, por ejemplo, un
fragmento de tejido del hgado, es triturado para disgregarlo y romper las membranas celulares.
La rotura de las membranas deja en libertad los orgnulos celulares y el contenido del hialoplasma. Si la
homogeneizacin se realiza suavemente, los orgnulos permanecern intactos. Obtendremos as una
"papilla" que estar compuesta de restos de membranas, orgnulos celulares, ncleos, molculas libres y
agua.
2) CENTRIFUGACIN
B) CROMATOGRAFA
Se fundamenta en la separacin de los componentes de una mezcla por sus diferencias de
absorcin. stas diferencias van a ser debidas a las fuerzas de Van der Wals que se establecen
entre los componentes de la mezcla y una sustancia que acta de fase estacionaria. Segn la
naturaleza de la fase estacionaria, tendremos los siguientes tipos de cromatografa:
2) CROMATOGRAFA DE GASES
El aparato consiste en un serpentn largo y delgado cuyas paredes estn impregnadas de un lquido (fase
estacionaria). La mezcla a separar se vaporiza y atraviesa el serpentn transportada por un gas. La fase
estacionaria retiene ms o menos los diferentes componentes de la mezcla. stos se detectan cuando al
atravesar una llama entran en combustin, lo que aumenta la conductividad elctrica del detector.
Este mtodo tiene la ventaja de necesitar pequesimas cantidades (0,05 mg) y es capaz de
separar sustancias muy parecidas qumicamente; por ejemplo: cidos grasos,azcares u
hormonas.
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C) ELECTROFORESIS
En este mtodo, la mezcla a separar se deposita en una cubeta (ver imagen) sobre un soporte de tipo
poroso (acetato de celulosa o tambin gel de almidn). A continuacin se establece una diferencia de
potencial entre los extremos del soporte.
Naturalmente este mtodo se emplear con sustancias que presenten cargas elctricas
(protenas y cidos nuclicos)
D) CULTIVOS IN VITRO
Estos mtodos nos van a permitir mantener lneas celulares en el exterior de un organismo en
condiciones favorables a su multiplicacin. La gran ventaja va a ser la facilidad para el
tratamiento del material biolgico y su estandarizacin.
Las clulas extradas deben mantenerse para su cultivo en un medio con las condiciones fsicas y
qumicas adecuadas y suministrarles aquellas sustancias que ellas no son capaces de sintetizar. En la
actualidad se venden medios de cultivo concretos para cada tipo celular y que permiten mantener los
cultivos durante largos perodos de tiempo.
Los mtodos morfolgicos nos van a permitir la observacin directa de la estructura celular.
El ojo humano puede distinguir a 25 cm dos objetos separados entre s 0,2 mm. ste es el
poder separador o poder de resolucin del ojo. Las clulas de mamfero suelen tener unos
0,01 mm, por lo que no es posible verlas a simple vista y mucho menos observar en ellas
detalles estructurales. El microscopio va a permitir su observacin al aumentar el poder de
resolucin del ojo.
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1) CLASES DE MICROSCOPIOS
ocular
revolver
pinzas
Funciona de la siguiente manera: Una fuente
luminosa enva rayos de luz a una primera lente, macromtrico platina
llamada condensador, que concentra los rayos
micromtrico Fuente de
de luz sobre el objeto a observar. Estos rayos iluminacin
atraviesan el objeto y una lente denominada
objetivo da una imagen aumentada de ste.
Una segunda lente, el ocular, vuelve a
aumentar la imagen dada por el objetivo. Esta
ltima imagen es la que ser recibida por el
observador.
En el microscopio ptico la luz atraviesa el objeto a observar. Si ste es muy grueso, la luz no
lo atravesar y el objeto aparecer demasiado oscuro; adems se superpondrn los diferentes
planos dando una imagen borrosa. Si el objeto es demasiado delgado o muy transparente, no
se observarn sus estructuras. En cualquier caso, deberemos realizar una preparacin.
1- CORTE. Los objetos demasiado gruesos son cortados mediante aparatos denominados
microtomos. stos permiten realizar cortes de apenas unas micras de grosor, corrientemente entre 3
y 20 . El tejido destinado al corte debe congelarse o incluirse en parafina para darle una mayor
consistencia y que se pueda cortar con facilidad.
2- FIJACIN. Su fin es matar a las clulas con la menor alteracin de las estructuras posible, para
evitar las modificaciones que pudiesen producirse posteriormente por el metabolismo celular o por la
descomposicin. Como fijadores se emplean determinadas sustancias qumicas (por ejemplo:
formaldehdo y tetrxido de osmio).
3- DESHIDRATACIN. La extraccin del agua del interior de las clulas permitir tambin una mejor
conservacin y la penetracin de los colorantes. Para deshidratar el material a observar se le sumerge
en alcoholes de cada vez mayor graduacin que por dilucin irn extrayendo el agua.
4- TINCIN. Es la coloracin de las clulas o de partes de stas para que resalten y posibilitar as
su observacin. Algunos colorantes son selectivos pues tien partes concretas de la clula.
a) Los colorantes vitales. Que tien las estructuras celulares pero sin matar a las clulas (por
ejemplo: el verde jano, el rojo neutro, el azul tripn, el azul de metileno).
b) Los colorantes no vitales. Que matan a las clulas (eosina, hematoxilina).
5- MONTAJE. Una vez realizadas las anteriores operaciones el material se coloca entre un porta-
objetos y un cubre-objetos. Para un montaje no definitivo, se coloca entre "porta" y "cubre" una gota
de glicerina. Este tipo de preparaciones tiene una duracin limitada y slo sirven para la observacin
momentnea o a lo sumo de unos das. Si se desea una mayor duracin debe realizarse el montaje en
gelatina-glicerina o en euparal.
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B) EL MICROSCOPIO ELECTRNICO
B.1.1) FUNDAMENTO
Los microscopios electrnicos permiten aumentos tiles que van de 2000 a 100.000 pudiendo llegar
hasta 600.000. Los microscopios electrnicos son aparatos de hasta 2 m de alto y llegan a pesar 500 kg.
Los electrones necesitan desplazarse en el vaco, esta es la razn por la que no es posible
la observacin de clulas vivas al microscopio electrnico.
1) FIJACIN. Las clulas son fijadas mediante fijadores no coagulantes. Los ms corrientes son el
tetrxido de osmio (OsO4), el formaldehdo (HCHO) y el permanganato potsico (MnO4K). Los metales
pesados que algunos contienen se fijan selectivamente a las diferentes estructuras celulares. Aquellas
que retengan ms los metales aparecern ms oscuras. Es por esto que la imagen depende mucho
del tipo de fijador utilizado.
2) DESHIDRATACIN e INCLUSIN. La pieza es deshidratada e infiltrada mediante una resina
o plstico para darle una mayor consistencia y facilitar su corte.
3) CORTE. Los cortes se realizan mediante ultramicrotomos de cuchilla de vidrio o de diamante. Los
cortes ms finos (0,03 ) son depositados sobre un tamiz y dispuestos para su observacin
al microscopio.
Este tipo de microscopio permite obtener imgenes tridimensionales del objeto a estudiar. Primero se
efecta un sombreado metlico de la superficie de la muestra, y la rplica obtenida es barrida por un haz
de electrones. Los electrones secundarios que se forman son captados y convertidos en imgenes sobre
una pantalla de televisin. Estos microscopio son muy tiles para revelar estructuras anatmicas
submicroscpicas, sin embargo su aumento no suele pasar de 20.000.
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CONDICIONES INICIALES
Uno de los aspectos ms sorprendentes del origen de la vida sobre la Tierra es el de la rapidez
con la que se llev a cabo. Los estudios de datacin basados en los meteoritos indican todos
ellos una edad de 4500 millones de aos para el Sistema Solar. Si aceptamos que el Sol, los
planetas, los meteoritos y el resto de los componentes del Sistema Solar se formaron al mismo
tiempo a partir de una nube de polvo primitiva, 4500 millones de aos ser tambin la edad de
nuestro planeta. Algunas rocas sedimentarias con una edad de 3400 a 3200 millones de aos
contienen microfsiles similares a bacterias. Por lo tanto, slo 1000 millones de aos despus
de que se originase la Tierra ya exista sobre ella una vida primitiva.
Debemos de tener tambin en cuenta que las condiciones que existan antes de la aparicin
de los seres vivos sobre la Tierra eran muy diferentes de las actuales. Sin entrar en cuestiones
tales como la presin o la temperatura, la composicin de la atmsfera primitiva de la Tierra era
muy distinta de la actual. Se piensa que estaba formada fundamentalmente por una mezcla de
metano (CH4), amonaco (NH3), hidrgeno (H2) y vapor de agua (H2O). Al no haber oxgeno, la
atmsfera no era oxidante como la actual sino reductora, y la falta de ozono (O3) haca posible
que los rayos ultravioleta pudiesen atravesar la atmsfera.
En 1924 el bioqumico ruso A.I. Oparin y en 1929 el ingls J.B. Haldane, emitieron,
independientemente el uno del otro, una teora segn la cual las radiaciones ultravioleta o las
descargas elctricas producidas por las tormentas, al atravesar la atmsfera, originaron los
componentes bsicos de los seres vivos. La ausencia de oxgeno y de organismos, hizo
posible que estas sustancias orgnicas, que se haban formado al azar, se fuesen acumulando
en las aguas de mares y lagos. Se form as lo que se llam "el caldo nutritivo". Las molculas
se fueron asociando hasta que en algn momento adquirieron la capacidad de autorreplicarse y
de formar nuevas molculas orgnicas que les sirviesen de fuente de materiales y energa.
La hiptesis de Oparin y Haldane no se trataba de una nueva edicin de las viejas teoras de la
generacin espontnea. Para ellos la vida se origin en un momento muy concreto con unas
condiciones que ya no existen en la actualidad. Pues la atmsfera con O2 y los seres vivos
hacen imposible que esto pueda darse ahora.
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EL EXPERIMENTO MILLER
En 1952 H.C. Urey volvi a expresar la tesis de Oparin-Haldane en su libro "Los planetas".
Tanto l como S.L. Miller iniciaron en la Universidad de Chicago una serie de experiencias para
averiguar si era posible que las fuentes de energa que haba en un principio en la Tierra,
hubiesen podido generar compuestos orgnicos a partir de los componentes que se
encontraban en la atmsfera del planeta.
Electrodos
Para ello montaron un dispositivo consistente en un baln
de vidrio de 5 l conectado a otro ms pequeo de 0,5 l. En
el primero introdujeron una mezcla formada por H2, NH3,
Entrada de
CH4 y H2O. En el matraz mayor situaron unos electrodos y gases
1) LA EVOLUCIN QUMICA
"protobiontes" diferentes qumicamente del medio que les rodeaba y con una identidad
propias.
4 Desarrollo de algn tipo de maquinaria reproductora que permitiese a las "clulas
hijas" adquirir las caractersticas de las "clulas paternas".
La experiencia de Miller nos ha permitido demostrar que es posible la formacin al azar de los
monmeros bsicos que constituyen los compuestos de los seres vivos a partir de las sustancias
existentes en la Tierra primitiva. La energa necesaria pudo muy bien provenir de las radiaciones o de los
rayos producidos por las tormentas. No obstante, las cantidades que se obtienen son muy pequeas y
adems enseguida quedaran diluidas en las grandes masas de agua de los mares y lagos. De alguna
manera debieron de existir mecanismos que permitieron su concentracin. Se han propuesto algunos muy
sencillos como la concentracin por evaporacin o por congelacin del agua de los lagos. Otros son ms
complejos; as, por ejemplo, se ha propuesto que las sustancias pudieron concentrarse al ser absorbidas
selectivamente por ciertos minerales.
Se ha observado que cuando los adenilaminocidos quedan absorbidos por ciertos minerales arcillosos,
se polimerizan espontneamente formando cadenas peptdicas de 50 o ms elementos. Tambin se ha
observado en mezclas secas de aminocidos una cierta tasa de polimerizacin espontnea a
o o
temperaturas entre los 60 C y los 130 C. En ciertas condiciones los polmeros as formados pueden llegar
a tener hasta 200 aminocidos. Muy probablemente se produjo uno de estos mecanismos u otro similar.
Los polmeros, una vez formados, pudieron difundirse hacia las disoluciones acuosas e irse concentrando
a lo largo de millones de aos por un mecanismo similar a los estudiados en el punto anterior.
Las clulas se caracterizan por mantener un medio interno qumicamente diferente del medio externo.
Esto se consigue por la presencia de una membrana limitante entre ambos medios. Esta membrana
impide que los componentes de la clula se diluyan y desaparezcan. Oparin estudi durante muchos aos
la tendencia a aislarse de las disoluciones acuosas de polmeros para formar coacervatos: pequeas
gotitas ricas en polmeros y separadas del medio acuoso por una membrana.
Existen varias combinaciones de polmeros que dan lugar a la formacin de coacervatos. Por ejemplo:
las de protena-hidratos de carbono, las de protena solas y las de protena-cido nuclico.
Las gotitas de coacervatos son no obstante inestables. Tienen tendencia a descender hacia el fondo de
la disolucin donde forman una capa no acuosa. Oparin descubri que si dotaba a los coacervatos de
molculas que les permitiesen llevar un cierto metabolismo celular, se hacan ms estables. As, al aadir
al medio la enzima fosforilasa, sta se concentraba en el interior de las gotitas. Si posteriormente se
aada glucosa-1-fosfato, sta se difunda haca el interior y la enzima la polimerizaba formando almidn.
El almidn se va aadiendo a la membrana de la gotita con lo que aumenta de tamao. Cuando el
coacervato es excesivamente grande se divide espontneamente dando lugar a varias gotitas "hijas". La
energa necesaria proviene del enlace rico en energa de la glucosa-1-fosfato.
Si se le aaden al medio otras enzimas, los coacervatos se van transformando en estructuras con un
metabolismo y una individualidad qumica que realizan intercambios de materiales y energa. Los
coacervatos no son seres vivos pero poco les falta para serlo. Podramos pensar que en el origen de la
vida pudo pasar un proceso parecido y que poco a poco las "gotitas de vida" que tuviesen un metabolismo
ms adecuado "sobreviviran" ms tiempo y pudieron aumentar en tamao y nmero.
Se trata de algo para lo que no disponemos de modelos de laboratorio. Adems, la complejidad del
material gentico y su gran diversidad no nos dan muchas pistas acerca de como pudo suceder el
proceso. Es posible que los primeros coacervatos estuviesen constituidos por ADN u otros polinucletidos
que fuesen capaces de autoduplicarse y de traducirse a protenas. Aunque la secuencia primaria de sta
fuese al azar, pudieron formar una membrana protectora que envolviese al ADN. Se pudo establecer as
una relacin mutua: el ADN se traduca a protenas y stas protegan al ADN formando una membrana a
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su alrededor. A partir de aqu ambas sustancias pudieron seguir una evolucin conjunta. Esta hiptesis
presenta la dificultad de que la traduccin de las protenas necesita en la actualidad de una compleja
maquinaria qumica: varios tipos de ARN, ribosomas, enzimas, etc.
Esto es, se necesitan protenas para sintetizar el ADN y ADN para sintetizar las protenas. Esta moderna
versin de la paradoja del "huevo y de la gallina" puede resolverse contestando que la maquinaria
gentica debi de evolucionar conjuntamente a partir de mecanismos ms simples que no existen en la
actualidad, al haber sido eliminados por competencia con otros ms perfeccionados.
En resumidas cuentas, en algn momento se form una asociacin ADN, codificador de una
protena, que a su vez catalizaba la formacin de un cido nuclico y ambos evolucionaron
conjuntamente.
Los distintos pasos descritos hasta ahora debieron de dar lugar a los primeros seres vivos. Posiblemente
se trat de organismos similares a las bacterias fermentadoras, como las actuales del gnero Clostridium,
aunque naturalmente su maquinaria bioqumica sera mucho ms simple.
Estos organismos debieron de sobrevivir a base de fermentar los componentes orgnicos que se haban
formado a lo largo de millones de aos de evolucin qumica. La disminucin de la cantidad de materia
orgnica, como consecuencia de los propios procesos de fermentacin, debi de estimular el desarrollo
de los primeros organismos fotosintticos.
Parece ser que la fotosntesis basada en el SH2 como fuente de hidrgeno y electrones, como lo hacen
en la actualidad las bacterias del azufre, es anterior a la fotosntesis basada en el H2O. Esta hiptesis se
fundamenta en el hecho de que la atmsfera primitiva de la Tierra era rica en SH2. Adems, la maquinaria
bioqumica que se necesita para la fotosntesis basada en el SH2 es menos compleja que la fotosntesis
basada en la fotolisis del H2O.
No obstante, la abundancia de H2O trajo este tipo de fotosntesis. Los primeros organismos en dar este
gran paso debieron ser similares a las cianobacterias, llamadas tambin algas verde-azuladas. Las
cianobacterias actuales, como las del gnero nostoc, son organismos procariotas que forman colonias
multicelulares de aspecto filamentoso.
Durante los 2000 millones de aos siguientes (hasta hace 1500 millones de aos) estos organismos
revolucionaron la composicin qumica de la atmsfera. La produccin de oxgeno transform la
atmsfera reductora en una atmsfera oxidante y se form adems una capa de ozono (O3) que filtr
considerablemente los rayos ultravioleta.
Es difcil distinguir entre los microfsiles de hace miles de millones de aos si son procariotas o
eucariotas. Sabemos que ambos tipos de clulas se diferencian en su aspecto, tamao,
morfologa, bioqumica, etc.
Los eucariotas, tal y como los conocemos ahora, no pudieron aparecer antes de hace 1500
millones de aos (3500 millones de aos despus del origen de la Tierra). Con los eucariotas
apareci la reproduccin sexual. No olvidemos que las principales caractersticas de los
eucariotas son la presencia de un ncleo separado del citoplasma y la estructuracin del ADN
en cromosomas. Todo esto se desarroll posiblemente para poder intercambiar ms fcilmente
el material gentico. Es cierto que los procariotas actuales pueden tambin intercambiarlo, pero
en ellos priman sobre todo los mecanismos de reproduccin asexual sobre los de reproduccin
sexual.
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La reproduccin sexual fue lo que permiti la diversificacin de los seres vivos, la aparicin de
los organismos megascpicos y que estos alcanzasen la gran complejidad que tiene en la
actualidad.
Segn la Teora de la Simbiognesis (Lynn Margulis. Chicago 1938) las clulas eucariotas
seran el resultado de la simbiosis de diferentes organismos procariotas. Esto se basa en el
hecho de que muchos orgnulos y estructuras celulares (mitocondrias y plastos,) poseen su
propio ADN, e incluso sus propios ribosomas, ambos de tipo bacteriano.
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