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Antibiograma

OBJETIVO GENERAL

Conocer el mtodo de difusin en medio solido o antibiograma utilizado para la realizacin de


pruebas de sensibilidad a antimicrobianos.

MARCO TERICO

Los antimicrobianos son sustancias son qumicas caracterizados como metabolitos producidos por
microorganismos capaces de matar otros microorganismos (bactericidas) o de inhibir el
crecimientos (bacteriosttico).

Desde el descubrimiento de la penicilina una gran cantidad de antibiticos han sido aislados,
sintetizados y subsecuentemente usados en el tratamiento de enfermedades causadas por una
variedad de microorganismos patgenos. Debido a que la sensibilidad de un microorganismo varia,
ya que los antimicrobianos presentan diferentes modos de accin y a su vez los microorganismos
han encontrado modos para resistir dicha accin, es que se deben realizar pruebas para decidir cual
es el agente quimioterapeuta apropiado, pues de ello depende la efectividad de un tratamiento y
posiblemente la vida de una persona.

Las pruebas de sensibilidad a agentes antimicrobianos pueden realizarse in vivo o in vitro. Las
pruebas in vivo consisten en aplicar diferentes dosis del frmaco de estudio a animales infectados en
el laboratorio para observar como es su evolucin, mientras las pruebas in vitro, se usan para
seleccionar el tratamiento ms eficaz para una enfermedad infecciosa. En cuanto las pruebas in
vitro existen dos tipos: la prueba de dilucin, en la que se busca la concentracin ms baja del
antimicrobiano (concentracin inhibitoria mnima del frmaco) y la prueba de difusin, tambin
conocido como Antibiograma, en la cual se pueden probar varios antimicrobianos al mismo tiempo
sobre una bacteria pretendiendo conocer la capacidad de un frmaco para inhibir el desarrollo de
esta.

Mtodo de difusin en medio solido o Antibiograma

El principio del mtodo involucra la aplicacin de una cantidad determinada de antimicrobiano en


un reservorio (disco de papel, sensidisco, etc.) en la superficie del agar sobre la cual se ha
distribuido un inoculo del microorganismo. Simultneamente con el crecimiento de la bacteria el
reservorio del antimicrobiano absorber agua del medio de cultivo y se formar as, por difusin, un
gradiente de concentracin de antimicrobiano alrededor del reservorio y la sensibilidad del

microorganismo estar indicada por el tamao de la zona de inhibicin del crecimiento bacteriano
(halo de inhibicin). El dimetro obtenido depender no slo de la sensibilidad del microorganismo
y la carga del disco, sino tambin del espesor de la capa de agar, pH y composicin del medio de
cultivo, de la capacidad de difusin de la droga en ese medio, de la temperatura y atmsfera de
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incubacin, de la velocidad de duplicacin bacteriana, y del tamao del inoculo y fase de
crecimiento de la bacteria (factores que ya se tienen en cuenta antes de realizar la practica).

En cuanto a los medios de cultivo usados el agar Mueller Hinton es considerado como el mejor para
las pruebas de sensibilidad de rutina de microorganismos de rpido crecimiento sin exigencias
nutricionales especiales debido a que:

Muestra buena reproducibilidad entre los distintos lotes.


Tiene bajo contenido de inhibidores para sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclinas
Es adecuado para el crecimiento de la mayora de las bacterias patgenas.
Existen suficientes datos recopilados que avalan la calidad de los resultados de las pruebas
de sensibilidad realizadas con este medio.

Interpretacin de la prueba

Para cada antimicrobiano se establecen concentraciones crticas que permiten separar a los
microorganismos infectantes en tres categoras, sensibles, resistentes o de sensibilidad intermedia,
segn si la concentracin requerida para la inhibicin del desarrollo de cada uno de ellos es inferior
o no a dichas concentraciones.

Sensible: Un microorganismo se considera sensible a un antibitico cuando se puede


esperar que una infeccin causada por el mismo responda al tratamiento con dicho frmaco
a la dosis recomendada.

Resistente: Este trmino indica que no es probable que la infeccin causada por el
microorganismo responda al antibitico en cuestin, cualesquiera que sean la dosis y la
localizacin de la infeccin.

Sensibilidad intermedia: Esta categora se aplica a dos situaciones. Por un lado, se incluyen
en ella las cepas con sensibilidad disminuida a un antibitico que puede utilizarse con xito,
para el tratamiento pero en una dosis ms alta. En esta categora se incluyen asimismo las
cepas de "sensibilidad intermedia" a antibiticos que, por ser ms txicos, no puede usarse
en dosis ms altas. Muchas veces un resultado intermedio requiere la definicin de la
sensibilidad mediante el uso de una prueba de dilucin.

La decisin definitiva sobre el uso de un determinado antibitico y sobre la dosificacin del mismo
no slo depende de los resultados de las pruebas de sensibilidad. Tambin habr que tener en cuenta
otros factores como la importancia patognica del microorganismo, los efectos secundarios y el
modo de accin del medicamento, su difusin en las diferentes regiones del cuerpo y el estado
inmunitario del paciente.

PROCEDIMIENTO

* El marco terico del informe de esta prctica, ser una sntesis de un artculo sobre resistencia a
los antibiticos que encontrara en la fotocopiadora.
Antibiticos

1. Sulfatrimetoprim 25g (SX). 2. Eritromicina 15g (EM).


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3. Cloranfenicol 30g (C). 5. Norfloxacino10g (NOR).
4. Nitrofurantoina 300g (NIT). 6. Novobiocina 30g (NV).

Mtodo de la difusin en medio slido

Siembre el microorganismo esparcindolo por todo el medio de cultivo Mueller Hinton, con
la ayuda de un escobilln o hisopo estril.
Espere de 3 a 5 minutos, pero no ms de 15 para que el medio se seque.
Tome las pinzas de diseccin (mantenidas en un vaso precipitado con alcohol al 96%),
pselas por la llama del mechero y tome un sensidisco.
Sobre la superficie del medio Muller Hinton ya sembrada, se coloca el sensidisco (nunca lo
mueva una vez situados en un punto).
Se repite los paso 2,3 y 4 para el sensidisco de cada antibitico. Deje una distancia
aproximada de 4 cm entre cada uno (use solo tres sensidiscos por caja de petri, formando un
triangulo centrado en la caja)
Incube a 37C por 24 horas.

Reporte de los resultados del antibiograma.

Recopilar los resultados despus del tiempo de incubacin, informe el radio del halo de
inhibicin (medida del borde del sensidisco al borde del halo), en milmetros, para cada
antibitico.
Discutir en cada caso cual fue el rango de sensibilidad (resistente, intermedia y sensible) de
su microorganismo ante los diferentes antibiticos de acuerdo al dimetro del halo de
inhibicin.

Con respecto a la carga de antibitico que tienen los sensidiscos a usados en esta prctica. La gua
de interpretacin para el radio del halo de inhibicin es:

RADIO DEL HALO (mm)


ANTIBITICO
Resistente Intermedio Sensible
Sulfatrimetoprim 10 11 - 15 16
Eritromicina 13 14 - 22 23
Cloranfenicol 12 13 - 16 17
Nitrofurantoina 14 15 - 16 17
Norfloxacino 12 13 - 16 17
Novobiacina 14 15 - 21 22

BIBLIOGRAFIA

Madigan, M; Martinko, J & Parker, J. (2004). Brock: Biologa de los Microorganismos. 10 edicin.
Prentice Hall. Pag. 807 808.

American Society for Microbiology (2004). Clinical Microbiology Procedures Handbook.


Washington DC.