TEMA 7.

VIRUS Y PARTCULAS SUBVIRALES

Historia de la Virologa. Definicin , caracteres generales y origen de los virus.
Mtodos de cultivo. Mtodos de purificacin. Cuantificacin. Partculas
subvirsicas : viroides, priones. Composicin qumica , tamao y estructura de
los virus. Grupos de virus. Infeccin virsica productiva y no productiva en
bacterias. Infeccin virsica productiva y no productiva en clulas animales.
Enfermedades producidas por virus y partculas subvirsicas. Terapia antiviral.

Virus papiloma

Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

La VIROLOGIA es la rama de la Biologa que se encarga del estudio de los

virus y de otros agentes infecciosos , viroides y priones.
Los virus se descubrieron a finales del siglo XIX (1892)
Se reconocieron como agentes infecciosos, diferentes a las bacterias,
capaces de causar enfermedades en plantas , animales y ser humano, a
mediados del siglo XX .
La primera imagen de un virus con microscopio electrnico se obtuvo en
1939
La Virologa no alcanz entidad como Ciencia hasta los aos 50 (1955)
En 1967 se descubrieron los viroides (Diener)
En 1981 se descubrieron los priones (Prusiner)

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Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

NOMBRES IMPORTANTES PARA LA HISTORIA DE LA VIROLOGA

1892 Ivanowsky (VMT)

1898 Loefler- Frosch y Beijerinck (Parsitos /Virus animales)
1901 Reed (1 enfermedad virsica)
1909 Landsteiner y Popper (Poliomielitis)
1911 Rous (Sarcoma)
1915- 17 Twort y DHerelle (Fagos)
1935- 37 Stanley (Naturaleza qumica , cristalizacin)
1940 Delbrck (Ciclo ltico fagos)
1941 Bernal y Fankuchen (Estructura)
1952 Hersey y Chese (Infeccin Acidos Nucleicos)
1955 Fraenkel- Conrat y Williams (VMT in vitro)
1967 Diener (Viroides)
1981 Prusiner (Priones )

Chamberland,1884 : filtros de porcelana, autoclave

Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

VIROLOGIA. IMPORTANCIA DEL ESTUDIO DE LOS VIRUS

- Los virus estn presentes en todos los ambientes de la tierra que

contengan clulas . El nmero estimado es de 1031.
-En el agua del mar el nmero es de 107/ml
-La diversidad gentica de la tierra reside en los virus. Segn estudios de
metagenmica el 75% de las secuencias gnicas encontradas, no
muestran semejanza con las depositadas en las bases de datos, en el
caso de las bacterias es el 1 0%
-Los virus son agentes productores de numerosas enfermedades, muchas
mortales
- Han sido y son por su sencillez de vital importancia para el desarrollo
de la Biologa Molecular, la Gentica o la Biomedicina:
-Intrones y exones, maduracin de los mRNA, Reversotranscripcin
-Mecanismos de produccin del cncer etc.
-Ingeniera gentica
-Terapia gnica

Tema 7 A- B-C- D- E

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Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

TEMA 7 A: CARACTERES GENERALES DE LOS VIRUS. MTODOS DE ESTUDIO.

PARTCULAS SUBVIRSICAS

- Definicin , caracteres generales y origen de los virus

- Mtodos de cultivo : cultivo de virus de bacterias ( fagos)
cultivo de virus vegetales
cultivo de virus animales
- Mtodos de purificacin :centrifugacin diferencial
centrifugacin en gradiente de densidad
otros mtodos
- Cuantificacin de un virus

- Partculas subvirsicas : Viroides y priones

VMT

Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

Un virus es un parsito intracelular estricto que necesita una clula hospedadora

adecuada para replicarse .
Un Virin es la forma extracelular de un virus. Est constituido por un solo tipo
de cido nucleico , ADN o ARN y protenas.
Una vez dentro de la clula, el virin o su cido nucleico, utilizan la maquinaria
metablica de la clula hospedadora para replicarse .

CARACTERSTICAS GENERALES
ENTIDADES NO CELULARES (Agentes infecciosos no celulares)
SLO CONTIENEN UN TIPO DE CIDO NUCLECO
PARSITOS INTRACELULARES OBLIGADOS
PRESENTAN UNA FASE EXTRACELULAR EN LA QUE SE COMPORTAN COMO
PARTCULAS INERTES, CAPACES DE CRISTALIZARSE (Viriones)

INFECTAN A CLULAS PROCARIOTAS (Bacteriofagos) y EUCARIOTAS ( virus de

plantas y virus de animales)
Son los agentes infecciosos mas numerosos del planeta

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ORIGEN Y EVOLUCIN DE LOS VIRUS

Existen dos hiptesis principales para los Virlogos:

1. EVOLUCIN RETRGRADA
Se ha propuesto que los virus, al menos los mas complejos, surgieron a
partir de clulas pequeas, Procariotas, que parasitaban clulas ms
complejas
Es difcil imaginar el mecanismo de tal transformacin
No existen formas intermedias

2. Los virus son CIDOS NUCLEICOS CELULARES QUE SE HAN HECHO

PARCIALMENTE INDEPENDIENTES DE LAS CLULAS
Unas pocas mutaciones pueden originar cidos nucleicos infecciosos
a partir de normales
Retrovirus y otros virus contienen secuencias similares a las de clulas
normales, plsmidos y transposones
Los viroides, son pequeos RNA infecciosos
Puede que hayan surgido por ambos mecanismos y parece probable que hayan
surgido de forma independiente muchas veces a lo largo del proceso evolutivo y
que unos virus hayan evolucionado a partir de otros

Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

CULTIVO DE VIRUS
Es necesario un soporte celular

. BACTERIOFAGOS
. VIRUS de VEGETALES
. VIRUS de ANIMALES

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CULTIVO DE UN BACTERIFAGO

Inculo con el fago

Cultivo de Medio que contiene

bacteria los fagos y restos
bacterianos
En medio lquido

En medio slido

Agar de
cobertura

Muestra del Clulas

fago bacterianas

Placa de Petri

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CULTIVO DE VIRUS VEGETALES

A
- En tejidos de plantas
- En clulas independientes
- En protoplastos
- En plantas enteras

Lesiones necrticas en hojas de plantas:

A. VMT sobre Nicotiana glutinosa
B. VMT en una orqudea

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CULTIVO DE VIRUS ANIMALES

-Parte de un rgano
Inoculacin en
-Disociacin de clulas mediante
membrana
corialantoidea tratamiento enzimtico
Clulas
-Adicin decon virus
medio dedel
cultivo ( vitaminas,
aa,herpes simple bicarbonato, suero y
sales, glucosa,
antibiticos)
Inoculacin en
cavidad amnitica -Incubacin para la obtencin de una
monocapa celular

Inoculacin en
cavidad alantoidea
LINEAS CELULARES

Inoculacin en
saco vitelino

CULTIVO EN EMBRIN DE POLLO CULTIVO en CLULAS

LINEAS CELULARES:
PRIMARIAS: derivadas de una porcin de tejido. Duran unas pocas generaciones
DIPLOIDES: obtenidas a partir de embriones humanos (100 generaciones) : V. rabia
CONTINUAS o PERMANENTES: son clulas cancerosas que crecen indefinidamente (HeLa), para cultivos
virales de rutina en el laboratorio

Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

CLULAS HeLa

Las originales fueron aisladas de

un carcinoma de tero de una
paciente llamada Henrietta Lacks
para evaluar su malignidad

Clulas HeLa en divisin

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PURIFICACIN DE LOS VIRUS

Separacin de las partculas virsicas de los restos de las clulas

en que han sido cultivados

b MTODOS
Centrifugacin diferencial
Centrifugacin en gradiente de densidad
Precipitacin con sales
Desnaturalizacin (agentes fsicos y qumicos)
Digestin enzimtica

Se basan en las siguientes caractersticas de los virus:

Tamao >>> protenas
Estabilidad >>> que componentes celulares
Presencia de protenas de superficie

Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

CENTRIFUGACIN DIFERENCIAL

O : Partculas
virsicas

Partculas en
solucin

Sedimento

Base: Tamao

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CENTRIFUGACIN EN GRADIENTE DE DENSIDAD

Muestra con Tubo de

partculas centrfuga
virsicas Componentes de agujereado
baja densidad

24h Situacin de equilibrio

Gradiente de Componentes de
sacarosa (20-70%) alta densidad

Componentes separados por su

Base: Tamao y densidad
coeficiente de sedimentacin

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OTROS MTODOS DE PURIFICACIN

PRECIPITACIN CON SALES: Sulfato amnico / PEG

Los virus son los ltimos en precipitar

DESNATURALIZACIN: Calor, pH, disolventes orgnicos (Butanol, Cloroformo)

Los virus quedan en la fase acuosa

DIGESTIN ENZIMTICA : Proteasas, Nucleasas

Los virus son menos sensibles que las protenas y cidos nucleicos

Base: composicin y resistencia frente a agentes desnaturalizantes

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CUANTIFICACIN

N de partculas vricas
o
Concentracin de unidades infecciosas
por unidad de volumen

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CUANTIFICACIN DE UN FAGO

Placa mostrando las calvas producidas por un

bacterifago sobre un csped de una bacteria
sensible (UFP/ml)

Mezcla
bacteria- fago
Placa de agar
nutritivo

incubar

Csped de
Calvas clulas
de fagos sensibles

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TIPOS DE CALVAS PRODUCIDAS POR FAGOS

Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

CUANTIFICACIN DE UN VIRUS ANIMAL

Calvas por
poliovirus
en un
cultivo de
clulas
renales de
mono

Recuento con bolitas de Ltex Recuento de calvas

HEMAGLUTINACIN

Virus
Eritrocitos (diluciones)
Titulo de hemaglutinacin (H) = 1/ dilucin ms
alta del virus que produce hemaglutinacin

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PARTCULAS SUBVIRSICAS

VIROIDES
PRIONES

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VIROIDES
Molculas infecciosas de RNA (RNA infectivos) de 246-399 nucletidos
Gran homologa de secuencias = races evolutivas comunes
No codifican protenas
Se replican en el ncleo de las clulas vegetales que infectan
No se transmiten pero pueden viajar de clula a clula (dentro de la planta)
Causan numerosas enfermedades en plantas: (Malformaciones patolgicas
relacionadas con el crecimiento )
Tubrculo fusiforme de la patata (PSTV)
Cadang- cadang del coco
Exocortis en ctricos (cicatrices)
Enanismos, atrofias del tomate
Quemado del aguacate
Se han caracterizado unas 200 especies
No se conocen viroides que infecten a animales ni a procariotas

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ESTRUCTURA DE LOS VIROIDES

ARN MONOCATENARIO
CIRCULAR DE 246-399
NUCLETIDOS

PSTV

ESTRUCTURA APARENTEMENTE BICATENARIA POR

APAREAMIENTO DE BASES INTRACATENARIO

-Una RNA polimerasa con actividad replicasa de la clula vegetal , lo replica mediante el
circulo rodante, originando un RNA multimrico.

-El RNA multimrico es cortado en unidades individuales por la actividad ribozmica del
propio viroide (autocatlisis)

- 200-10000 copias

Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

MOVIMIENTO DE LOS VIROIDES DENTRO DE LAS PLANTAS

Viroide
Plasmodesmo -Entran por heridas
- Se replican en el ncleo o en los
cloroplastos (RNA multimrico)
Ncleo - Van de clula a clula a travs de los
plasmodesmos
- Viajan por la planta a travs del sistema
Sistema vascular
PC vascular

Planta enferma ,
Planta sana infectada por el PSTV

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Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

PRIONES (PrP
(PrP))

-Son Protenas infecciosas

-Son formas infecciosas de una protena celular ( prin nativo)
- La protena normal se denomina PrPC (protena prin celular): neuronas
de animales sanos , sobre todo en cerebro
-La forma patgena se denomina PrPSc (protena prin scrapie)
-Causan enfermedades neurolgicas graves en mamferos (TSEs)
en animales : Scrapie (tembladera) en ovejas y cabras, encefalopatia espongiforme
bovina (EEB , enfermedad de las vacas locas ), caquexia crnica en ciervos y alces,
Humanas: el Kuru , enfermedad de Creutzfeldt- Jacob, el sndrome de Gerstmann-
Straussler- Scheinker ,el insomnio fatal familiar

Presentes tambin en levaduras: (URE3) En S. cerevisiae , se acumula

formando agregados insolubles y se altera la regulacin de los genes implicados
en el metabolismo del Nitrgeno

TSEs: Encefalopatias espongiformes transmisiblles

http://vl21300.dns-privadas.es/~vida/es/category/campus-vida-3/investigacion/grupos-de-investigacion/page/2/

Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

ESTRUCTURA PRIN CELULAR PrPc y DEL PRION SCRAPI PrPSc

FORMA NORMAL FORMA INFECCIOSA

Estructura de la Protena Prion celular ( Pr Pc )

Estructura del prin scrapi ( Pr PSc).
Glicoproteina de PM = 33 35 Kd. Forma alfa
mayoritaria. Forma beta
Codificada por el gen prnp (cromosoma 20, Se acumula en la clula y forma agregados
expresin constitutiva, autosmico, dominante)
Est en la membrana celular
TIENEN LA MISMA SECUENCIA DE
Muy abundante en tejido neuronal, tb cardiaco,
muscular, pancretico y heptico AMINOCIDOS, EL MISMO PM, y
DIFERENTE ESTRUCTURA

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Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

DIFERENCIAS ENTRE PrPc y PrPSc

PrPc PrPSc
ESTRUCTURA 40% ALFA-HLICE 30% Alfa-hlice
bajo % hoja plegada 45% HOJA PLEGADA

LOCALIZACIN Membrana Extracelular (la forma

FINAL Plasmtica de 27-30 Kd)

PROPIEDADES Sensible a proteasa Resistente a :

FSICO QUMICAS Proteasas, EDTA ,
Soluble UV, calor ......

Insoluble
PROPIEDADES No induce respuesta
BIOLGICAS inflamatoria
No es antignica

http://medmol.es/glosario/letra/P/

Microbiologa II: diversidad de los microorganismos Tema 7

PRIONES DE MAMFEROS y ENFERMEDADES QUE PRODUCEN

PRION AFECTA A PRODUCE

PRURITO LUMBAR
Prion SCRAPIE Ovejas y cabras (Tembladera)
ENCEFALOPATIA
Prion BSE Vacas ESPONGIFORME

Prin KURU KURU

ENF. CREUTZFELDT-
Prion CJD
Hombre JACOB
( Hu PrPsc) SNDROME DE
GERSTMANN-
Prin GSS
STRAUSSLER-
SCHEINKER
INSOMNIO FATAL
Prion FFI
FAMILIAR

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 PREGUNTAS DEL TEMA

1. Definicin de virus, viroide, y prin

2. Mtodos de purificacin de los virus. Caractersticas en que se basan.
3. Cmo se cuantifica un fago?
4. Diga las diferencia que existen entre los viroides , los priones y los
virus
5. Replicacin de los viroides
6. Diferencias entre la protena prin normal PrPc y la forma infecciosa
PrPSc

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