Taller Biologa Molecular

1. Cules son las tres etapas de la traduccin? Discutir los principales eventos
que se producen durante esas tres etapas.
Las tres etapas de la sntesis de la traduccin son:
1. Iniciacin

2. Elongacin

3. Terminacin

INICIACIN: La primera de las etapas que forman parte del proceso de sntesis de
protenas es la iniciacin, la cual abarca la unin de los componentes del sistema
de traduccin y precede a la formacin de enlaces peptdicos.
Estos componentes que intervienen en la primera etapa de la sntesis de protenas
son:
El ARNm traducido.

Las dos subunidades ribosomales (subunidades grandes y pequeas)

El Aminoacil ARNt que se especifica en el primer codn del ARNm.

Trifosfato de guanosina (GTP), el cual tiene la finalidad de proporcionar

energa durante el proceso (las clulas eucariotas requieren tambin
trifosfato de adenosina).

Factores de iniciacin que permiten el ensamblaje de esta compleja fase. En

concreto, las clulas procariotas poseen 3 factores de iniciacin (IF-1, IF-2 e
IF-3), mientras que las eucariotas tienen ms de diez factores designados
con el prefijo IF.

Preparando el escenario para la sntesis de polipptidos; Los tres primeros

nucletidos de un ARNm no sirven como el primer codn Para ser traducido en un
aminocido. En su lugar, una seal especial indica dnde a lo largo de la traduccin
del ARNm debe comenzar. En procariotas, Esta seal se denomina sitio de unin al
ribosoma, y tiene dos elementos importantes. La primera es una secuencia corta de
seis Nucletidos, generalmente 5. . . AGGAGG . . . 3El segundo elemento de un
RNAm como sitio de unin al ribosoma es el triplete 5AUG 3, Que sirve como codn
de iniciacin.
Un iniciador especial tRNA, 5CAU 3 cuyo Anticodon es complementario a
AUG, Reconoce una AUG Precedido por el Shine- Dalgarno Caja de un sitio de
unin al ribosoma. El ARNt iniciador lleva N-formilmetionina (fMet), es una
metionina modificada cuyo extremo amino est bloqueado por un grupo formilo. El
tRNA fMet especializado funciona slo en un sitio de iniciacin. Un codn AUG
situado dentro de un marco de lectura de mRNA es reconocido por un tRNA
diferente que se carga con una metionina no modificada. Este tRNA no puede iniciar
la traduccin. Durante la iniciacin, el extremo 3 del ARNr 16S en la subunidad
ribosomal 30S se une a la caja Shine-Dalgarno del ARNm, el ARNt fMet se une al
codn de iniciacin del ARNm, y una subunidad ribosomal 50S grande se asocia
con la subunidad pequea a redondeada Fuera del ribosoma. Al final de la
iniciacin, el tRNA fMet se encuentra en el sitio P del ribosoma completado. Las
protenas conocidas como factores de iniciacin desempean un papel transitorio
en el proceso de iniciacin.
En los eucariotas, la pequea subunidad ribosomal se une primero a la tapa
metilada en el extremo 5 del ARNm maduro. A continuacin, migra al sitio de
iniciacin -normalmente el primer AUG que encuentra al escanear el ARNm en la
direccin 5 a 3. El iniciador tRNA en eucariotas lleva un modificado de metionina
(Met) en lugar de fMet.
- Se comienza con la subunidad menor sola. IF-1 se une a la base del sitio A
para forzar que el primer fMet-RNAt entre en el sitio P. IF-3 tiene una doble
funcin, ya que se le necesita para estabilizar la subunidad 30S y para que
el RNAm interaccione con dicha subunidad. IF-2 (como otros muchos
factores de traduccin) es del tipo de protenas G que sirve para depositar el
aminoacil-RNAt (fMet-RNAt en este caso) en el ribosoma. Los tres IF junto
con el RNAm, el fMet-RNAt y la subunidad 30S forman el complejo de
iniciacin. El RNAt iniciador que reconoce el AUG (en ocasiones GUG y
rara vez UUG) es especial, ya que porta una formil-Met; presenta
modificaciones postranscripcionales especificas; solo puede usarse en
iniciacin, y es el nico capaz de entrar en el sitio P (no el A) sin la subunidad
mayor del ribosoma. La hidrolisis de GTP y la interaccin con la subunidad
50S permiten la liberacin de los tres factores de iniciacin.

El mecanismo de eucariontes es bsicamente el mismo que el de procariontes, con

la mayor parte de las diferencias acumuladas en la iniciacin. Las principales son:
El ribosoma y sus subunidades son ms grandes (40S + 60S 80S).
Los RNAr son mayores y hay ms protenas por subunidad ribosmica.
La subunidad mayor contiene los RNAr 28S y 5S, pero adems una 5.8S adicional
que no existe en procariontes.
El RNAm es diferente y sus elementos distintivos son importantes.
Durante el viaje al citoplasma, el RNAm puede adquirir una estructura secundaria
que el ribosoma tiene que eliminar antes de traducirlo.
El codon de iniciacin es siempre AUG y no hay secuencias Dalgarno.
La Met iniciadora no est formilada.
El RNAm tiene que prepararse para interaccionar con el ribosoma.
Los factores de traduccin son distintos (aunque muchos tienen funciones
anlogas) y se nombran comenzando por e.

ELONGACIN: La elongacin de la traduccin es el segundo de los pasos de la

sntesis de protenas. Durante esta fase la cadena de polipptido aade
aminocidos hasta el extremo carboxilo de la protena, un hecho que permite crecer
a la cadena a medida que el ribosoma se vuelve desde el extremo 5 al extremo 3
del ARNm.
La adicin de aminocidos a un polipptido en crecimiento; Las protenas conocidas
como factores de elongacin introducen el tRNA apropiado en el sitio A del
ribosoma. El anticodn de este ARNt cargado debe reconocer el siguiente codn en
el mRNA. El ribosoma sostiene simultneamente el ARNt de iniciacin en su sitio P
y el segundo ARNt en su sitio A de manera que la peptidil transferasa puede
catalizar la formacin de un enlace peptdico entre los aminocidos transportados
por los dos ARNt. Como resultado, el ARNt en el sitio A lleva ahora dos aminocidos.
El extremo N de este dipptido es fMet; el trmino C es el segundo aminocido,
cuyo grupo carboxilo permanece unido covalentemente a su ARNt. Despus de la
formacin del primer enlace peptdico, el ribosoma se mueve, exponiendo el
siguiente codn de mRNA. El movimiento del ribosoma requiere la ayuda de
factores de alargamiento y una entrada de energa. A medida que el ribosoma se
mueve, el ARNt iniciador, que no lleva ningn aminocido, es transferido al sitio E,
y el otro ARNt que lleva el dipptido cambia del sitio A al sitio P.
El sitio vaco A recibe ahora otro ARNt, cuya identidad est determinada por el
siguiente codn en el ARNm. El tRNA del iniciador no cargado es eliminado del sitio
E y sale del ribosoma. La peptidil transferasa luego cataliza la formacin de un
segundo enlace peptdico, generando una cadena de tres aminocidos conectados
en su extremo C al ARNt actualmente en el sitio A. Con cada ronda subsiguiente de
movimiento de ribosomas y formacin de enlaces peptdicos, la cadena peptdica
crece un aminocido ms largo. Obsrvese que cada ARNt se mueve desde el sitio
A al sitio P hasta el sitio E (aceptando el ARNt iniciador, que primero ingresa al sitio
P). Debido a que la maquinaria de alargamiento aade aminocidos al extremo C
del polipptido de alargamiento, la sntesis de polipptidos procede del extremo N
hasta el extremo C. Como resultado, fMet en procariotas (Met en eucariotas), el
primer aminocido en la cadena en crecimiento, ser el aminocido N-terminal de
todos los polipptidos finalizados antes del procesamiento de protenas. Adems, el
ribosoma debe moverse a lo largo del ARNm en la direccin 5 a 3 de modo que el
polipptido pueda crecer en la direccin N a C. Una vez que un ribosoma se ha
movido lo suficientemente lejos de la sitio de unin al ribosoma del mRNA, ese sitio
se hace accesible a otros ribosomas. De hecho, varios ribosomas pueden trabajar
el mismo ARNm a la vez. Un complejo de varios ribosomas traducir del mismo
ARNm se llama un polirribosoma. Este complejo permite la sntesis simultnea de
muchas copias de un polipptido a partir de un solo ARNm.
- La peptidil-transferasa es una enzima muy importante en esta fase del
proceso pues se encarga de catalizar la formacin de los enlaces peptdicos.
La actividad enzimtica es intrnseca al ARNt 23S ubicado en la subunidad
ribosmica ms grande. Debido a que este ARNr cataliza la reaccin de
formacin de los polipptidos, recibe el nombre de ribozima.

El ARNt ubicado en el sitio P transporta el polipptido sintetizado hasta el momento,

mientras que en el sitio A se encuentra un ARNt unido a un nico aminocido.
Despus de que el enlace peptdico entre el polipptido y el aminocido se haya
formado, el polipptido resultante entrar en contacto con el ARNt en el sitio A. Una
vez este proceso haya llegado a su fin, el ribosoma se mover 3 nucletidos, es
decir, hasta el extremo 3 del ARNm. Esta fase es conocida como translocacin (en
las clulas procariotas se requiere la participacin de EF-G-GTP y la hidrolizacin
de GTP, mientras que las eucariotas usan EF-2-GTP y tambin precisan de la
hidrlisis de GTP.
Durante el desplazamiento, el ARNt descargado se mueve desde el sitio P al E y el
peptidil-ARNt ocupa su lugar. Este es un proceso repetitivo puesto que tiene lugar
tantas veces sea necesario hasta que se llega al codn de terminacin.
Terminacin: La terminacin de la traduccin sucede cuando el sitio A del ribosoma
alcanza uno de los tres codones de terminacin (UAA, UAG o UGA).

El ribosoma libera el polipptido completado; Ningn tRNA normal lleva anticodones

complementarios a la tres codones sin sentido (stop) UAG, UAA, y UGA. Por tanto,
cuando el movimiento del ribosoma lleva un codn sin sentido al sitio A del
ribosoma, ningn ARNt puede unirse a ese codn. En su lugar, las protenas
llamadas factores de liberacin reconocen los codones de terminacin y llevan a la
sntesis de polipptidos a un alto. El tRNA que especifica el aminocido C-terminal
libera el polipptido completado, el mismo ARNt as como el ARNm separado del
ribosoma, y el ribosoma se disocia en sus subunidades grandes y pequeas.

- En las clulas procariotas, estos codones que hemos comentado son

reconocidos por los diferentes factores de liberacin (FL a partir de ahora).
El FL-1 es el responsable del reconocimiento de los codones de terminacin
UAA y UAG, mientras que el FL-2 se encarga de los UGA y UAA. Cuando
estos FL se unen al complejo se desencadena la hidrlisis del enlace que
une el pptido del ARNt en el sitio P y libera la protena naciente del ribosoma.
A continuacin, un tercer FL (FL-3-GTP) provoca la liberacin del FL-1 o FL-
2 como GTP, el cual es hidrolizado y convertido en GDP para quedar como
un mero fosfato residual.

Por el contrario, las clulas eucariotas poseen un nico factor de liberacin, eFL, el
cual puede reconocer los tres codones de terminacin. Hay un segundo FL
involucrado llamado eFL-3 que ejerce funciones similares al FL-3 de las procariotas.

2. Enumerar los componentes necesarios para la traduccin. Describir la

relacin de estos diferentes componentes.
En el proceso de traduccin intervienen de forma fundamental los tres tipos ms
frecuentes de RNAs, cada uno con una funcin complementaria para llevar a
cabo de forma conjunta el proceso:

2.1. RNA-m.

2.2. RNA-t.

2.3. Ribosomas.

2.4. Aminoacil RNA-t sintetasa, translocasas, peptidasas.

 2.5. GTP, factores de iniciacin y terminacin.

Mecanismo.

Activacin de aminocidos: Cada RNA-t busca a su aminocido especfico

segn el triplete de su anticodn y se une a l por la accin de una enzima
especfica llamada aminoacil RNA-t sintetasa, que une al aminocido con su RNA-
t en el brazo aceptor, gastndose una molcula de ATP. De este modo, un gran
nmero de transferentes se encuentran unidos a su aminocido antes de iniciarse
la traduccin.

Iniciacin: El RNA-m llega hasta el ribosoma que est separado en sus dos
subunidades y se une a la subunidad mayor; a continuacin se une la subunidad
menor. En los ribosomas existen dos lugares en los que pueden caber transferentes,
el llamado LUGAR P (= peptidil) y el LUGAR A (= aminoacil). El RNA-m se une de
tal forma que el primer codn se coloca en el lugar P. Este primer codon siempre es
el mismo en todos los RNA-m (salvo en algunas mitocondrias), es el AUG ledo
desde el extremo 5', que codifica para el aminocido Metionina, con el que se inician
todos los procesos de traduccin celular. A continuacin, llega hasta ese lugar P un
RNA-t con el aminocido Metionina, y al lugar A llega otro RNA-t con el siguiente
aminocido que corresponda, segn las bases del segundo triplete. En ese
momento una enzima une ambos aminocidos mediante un enlace peptdico y todo
el complejo se desplaza un lugar hacia el primer codn, de tal manera que ahora el
dipptido se coloca en el lugar P (peptidil) y queda libre el lugar A (aminoacil).

Elongacin: Al quedar libre el lugar aminoacil se acerca un nuevo RNA-t, segn la

secuencia de su anticodn, trayendo un nuevo aminocido, volviendo a crearse un
enlace peptdico y repitindose el desplazamiento del complejo. Estos procesos se
repiten siempre que el codn que aparece en el lugar A tenga sentido.

Terminacin de la cadena polipeptdica: En un momento determinado puede

aparecer en el lugar A uno de los codones sin sentido o de terminacin, con lo que
no entrar ningn nuevo RNA-t y el pptido estar acabado, desprendindose del
anterior RNA-t y liberndose al citoplasma al tiempo que los ribosomas quedan
preparados para iniciar una nueva traduccin.

La nueva cadena va adquiriendo su estructura secundaria y terciaria a la vez que

se va formando, de tal manera que al finalizar ya tiene su conformacin. En
ocasiones la protena no es todava funcional y debe ser procesada, aadindole
algo, recortndole algo o, incluso, debe unirse a otros pptidos para adquirir
estructura cuaternaria.

recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/genetica/contenido12.
htm
3. Comparar y contrastar el proceso de sntesis de protenas en clulas
bacterianas y eucariotas. Explique las similitudes y las diferencias.
DIFERENCIA:

SEMEJANZAS:

Ambos utilizan como factor de iniciacin al IF-2.

El codn de iniciacin en ambos es AUG.
Ambos procesos terminan cuando se une el ribosoma en el sitio A cuando
aparece cualquier codn de terminacin,

4. Explicar qu es un polisoma.
La forma funcional del ribosoma. Es un aglomeramiento de ribosomas sintetizando
la misma protena unidos todos por una misma molcula de mRNA.

5. Que significa cuando decimos que el cdigo gentico es degenerado? Discutir

la universalidad del cdigo gentico.

El cdigo gentico es degenerado: existen ms tripletes o codones que

aminocidos, de forma que un determinado aminocido puede estar codificado por
ms de un triplete.
Cdigo degenerado, lo que significa que algunos aminocidos estn codificados
por ms de un codn. Por ejemplo, la prolina se representa con cuatro diferentes
codones (CCU, CCC, CCA y CCG). Si cualquiera de estos codones aparece en un
ARNm, se aadir prolina a la cadena de polipptido.
existen 64 tripletes distintos y 20 aminocidos diferentes, de manera que un
aminocido puede venir codificado por ms de un codn. Este tipo de cdigo se
denomina degenerado. Wittmann (1962) induciendo sustituciones de bases por
desaminacin con nitritos, realiz sustituciones de C por U y de A por G en el ARN
del virus del mosaico del tabaco (TMV), demostrando que la serina y la isoleucina
estaban determinadas por ms de un triplete.

La degeneracin del cdigo se explica teniendo en cuenta dos motivos:

Algunos aminocidos pueden ser transportados por distintas especies

moleculares (tipos) de ARN transferentes (ARN-t) que contienen distintos
anticodones.
Algunas especies moleculares de ARN-t pueden incorporar su aminocido
especfico en respuesta a varios codones, de manera que poseen un
anticodn que es capaz de emparejarse con varios codones diferentes. Este
emparejamiento permisivo se denomina Flexibilidad de la 3 base del
anticodn o tambaleo.

El cdigo gentico nuclear es universal: el mismo triplete en diferentes especies

codifica para el mismo aminocido. La principal excepcin a la universalidad es el
cdigo gentico mitocondrial.
Los tripletes del cdigo tienen el mismo significado en todas las clulas vivas tanto
procariotas como eucariotas.

El desciframiento del cdigo gentico se ha realizado fundamentalmente en la

bacteria E. coli, por tanto, cabe preguntarse si el cdigo gentico de esta bacteria
es igual que el de otros organismos tanto procariticos como eucariticos. Los
experimentos realizados hasta la fecha indican que el cdigo gentico nuclear es
universal, de manera que un determinado triplete o codn lleva informacin para el
mismo aminocido en diferentes especies. Hoy da existen muchos experimentos
que demuestran la universalidad del cdigo nuclear, algunos de estos experimentos
son:
 Utilizacin de ARN mensajeros en diferentes sistemas acelulares. Por
ejemplo ARN mensajero y ribosomas de reticulocitos de conejo con ARN
transferentes de E. coli. En este sistema se sintetiza un polipptido igual o
muy semejante a la hemoglobina de conejo.
Las tcnicas de ingeniera gentica que permiten introducir ADN de un
organismo en otro de manera que el organismo receptor sintetiza las
protenas del organismo donante del ADN. Por ejemplo, la sntesis de
protenas humanas en la bacteria E. coli.

6. Describir las caractersticas estructurales de todas las molculas de tRNA.

Qu tienen en comn?

En la estructura secundaria de los ARNt se distinguen las siguientes

caractersticas:10

1. Brazo aceptor formado por el extremo 5' y el extremo 3', que en todos los
ARNt posee la secuencia CCA, cuyo grupo -OH terminal sirve de lugar de
unin con el aminocido.11
2. El bucle (o brazo) TC, que acta como lugar de reconocimiento del
ribosoma.
3. El bucle (o brazo) D, cuya secuencia es reconocida de manera especfica
por una de las veinte enzimas, llamadas aminoacil-ARNt sintetasas,
encargadas de unir cada aminocido con su correspondiente molcula de
ARNt.
4. El bucle situado en el extremo del brazo largo del "bmeran", que contiene
una secuencia de tres bases llamada anticodn. Cada ARNt "cargado" con
su correspondiente aminocido se une al ARNm, mediante la regin del
anticodn, con tripletes de bases del ARNm (cada tres bases del ARNm
definen un triplete o codn) en el proceso de la traduccin de la informacin
gentica que conduce a la sntesis de las protenas.

7. Cul es el papel de las aminoacil-tRNA sintetasa?

Cada aminoacil ARNt sintetasa posee dos sitios activos: uno que reconoce el
anticodn; y otro que reconoce al aminocido especfico que corresponde a un
ARNt. Una vez que la sintetasa reconoce el anticodn del ARNt y al aminocido
correspondiente, cataliza la unin del grupo COOH del aminocido al radical OH
del extremo 3 del ARNt, liberando AMP y pirofosfato (PPi). El papel de la
sintetasa es reconocer tanto al aminocido como al anticodn del ARNt, y de
esa forma garantizar la fidelidad del proceso de activacin de los aminocidos y
de la traduccin. Tienen funcin correctora de sus propios errores si incorporan
un aminocido errneo.
8. Cmo los tRNAs se unen a sus aminocidos correspondientes? Explicar

La unin del aminocido al ARNt se produce gracias a las enzimas aminoacil-ARNt-

sintetasas. Existe una aminoacil-ARNt-sintetasa para cada aminocido. Estas
enzimas son las verdaderas protagonistas de la traduccin ya que colocan el
aminocido correcto en el ARN de transferencia con el anticodn especfico para ese
aminocido. Estas enzimas son en realidad las que cambian el cdigo de nucletidos
(anticodn) a cdigo de aminocidos y por tanto son los elementos clave de la
traduccin. Esto ocurre en el extremo de la L contiene el anticodn con los tres
nucletidos complementarios a los del codn que codifica su aminocido

9. Qu papel juegan los factores de iniciacin en la sntesis de protenas?

10. Explicar los roles funcionales de los sitios A, P Y E durante la traduccin.

El sitio A es el punto de entrada para el aminoacil-ARNt (excepto para el primer

aminoacil-ARNt, fmet-ARNt, que entra en el sitio P).

El sitio P es donde se "aloja" el peptidil-ARNt.

El sitio E es el sitio de salida del ARNm, una vez descargado tras ofrecer su
aminocido a la cadena peptdica en crecimiento.

11. Cules son los factores de elongacin usados en la traduccin bacteriana?

Explicar el papel desempeado por cada factor de traduccin.
EF-Tu: El factor de elongacin Tu acta con el resto de aminoacil-tRNAs de forma
similar a como lo hace el de iniciacin IF2 con el primero: une GTP y colabora en la
incorporacin del aa-tRNA al ribosoma. Al terminar, hidroliza el GTP a GDP + Pi. El
factor de elongacin Tu (EF-Tu) se une al aminoacil-ARNt y protege al enlace aa-
ARNt de la hidrlisis. Coloca al nuevo aminoacil-ARNt en el sitio A del ribosoma.
Este factor se une al aminoacil-ARNt y a GTP.

EF-G: El factor de elongacin G, o translocasa, facilita el desplazamiento del

ribosoma a lo largo del mRNA (translocacin), con lo cual el aminoacil-tRNA del
sitio P sale del ribosoma (a travs del sitio E) y el peptidil-tRNA del sitio A pasa a
estar en el sitio P. El sitio A queda libre para recibir un nuevo aminoacil-tRNA. La
accin del factor G tambin va acompaada de la hidrlisis del GTP unido a l.

EF-Ts:El factor de elongacin Ts facilita el intercambio de nucletidos unidos a Tu,

de modo que se regenera la forma activa, Tu:GTP. El factor de elongacin EF-Ts
se une al complejo e induce la disociacin del GDP, permitiendo que un nuevo GTP
se una, reciclando el EF-Tu.

12. Describir la secuencia en el mRNA bacteriano que promueve el

reconocimiento por la subunidad 30S.

13. Qu acontecimiento logran la terminacin de la traduccin?

La terminacin de la cadena polipeptdica en bacterias tiene lugar cuando los

ribosomas en su avance a lo largo del ARN-m se encuentran con cualquiera de los
siguientes tripletes de terminacin o codones de fin: UAA, UAG y UGA.

Ocurre cuando un codn de terminacin (UAG, UAA o UGA) entra al sitio A del
ribosoma y una protena llamada factor de liberacin se une a l. El factor de
liberacin no es un ARNt, pero tiene una forma similar estos, lo que le permite entrar
al sitio A. La unin del factor de liberacin provoca que una molcula de agua se
aada al final del polipptido (en lugar de un aminocido) y se rompe as el enlace
que lo conecta con el ARNt del sitio P. Entonces, el polipptido liberado sale a travs
de un tnel en la subunidad ribosomal grande. Es decir ; ocurre cuando aparece
uno de los codones de terminacin ( UAA,UAG,UGA ). En este momento un factor
proteico de terminacin (RF) se une al codn de terminacin e impide que algn
ARNt con otro aminocido (ARNt-aminoacil) se aloje en el sitio A. En este momento
se produce la hidrlisis de la cadena peptdica y se separan las dos subunidades
del ribosoma.

14. Cules son algunos de los tipos de modificacin postraducional de las

protenas? Explquelos.

Aminocidos modificables

Sin tener en cuenta modificaciones del tipo entrecruzamiento, la unin de fosfatidil-

inositol, la formacin de piroglutamato, la formacin de diftamida, la formacin de
al-lisina o la formacin de dionas, los aminocidos que no se suelen modificar son
glicina, alanina (aminocidos pequeos), leucina, isoleucina, valina o triptfano
(aminocidos hidrfobos).

Deformilacin

La deformilasa procaritica elimina el formilo de la fMet en la primera posicin de

las protenas al poco de aparecer el extremo N fuera del ribosoma.

Puentes disulfuro

Se trata de la formacin de un enlace covalente entre dos cistenas de la misma o

distintas cadenas polipeptdicas. Se consigue mediante una reaccin redox
(reaccin de oxidorreduccin) catalizada por la protena-disulfuro-isomerasa en
presencia de glutatin, que sufre el proceso inverso (rotura de su doble enlace). Si
se revierte esta modificacin, la protena se desnaturaliza.

Glucosilacin

Se trata de la unin covalente de varios glucosilos (radicales de carbohidratos)

encadenados o sea, oligosacridos o glucanos. Se glucosilan protenas que se van
a secretar o son de membrana y nunca se da en procariontes.
15. Explicar cmo y cuales antibiticos afectan el proceso de sntesis de protenas.

Interfiriendo con la sntesis de protenas, a diversos niveles del organoide encargado

de su elaboracin, el ribosoma, acta un cmulo de agentes, a saber:
Aminoglucsidos y aminociclitoles, tetraciclinas, cloranfenicol y sucedneos,
lincosamidas y macrlidos. Dada la complejidad de este proceso, hay diversos
blancos que son impactados por los diferentes agentes antiinfecciosos. Los
aminoglucsidos y aminociclitoles actan a nivel de la porcin 30 S del ribosoma,
induciendo errores en la lectura de la informacin aportada por el ARN mensajero.
De esta manera, la protena que se sintetice contendr errores y no ser til.
Tambin son capaces de inducir alteraciones de las membranas. Las tetraciclinas,
por su parte, tambin se unen al ribosoma en la porcin 30 S, en forma similar a lo
que ocurre con los aminoglucsidos. Cloranfenicol, tianfenicol y florfenicol,
actan a nivel de la porcin 50 S del ribosoma, inhibiendo la transpeptidasa, lo que
impide que se formen los pptidos. Lincosamidas y macrlidos, tambin se unen
a la porcin 50 S, inhibiendo la traslocacin. Todos estos mecanismos, de una u
otra manera, detienen o desvan la sntesis de protenas.

Antibiticos inhibidores de la sntesis proteica

La sntesis proteica es uno de los procesos ms frecuentemente afectados por la

accin de los antimicrobianos, y su inhibicin selectiva es posible gracias a las
diferencias estructurales entre los ribosomas bacterianos y eucariotas. Los
ribosomas bacterianos estn formados por dos subunidades (30S y 50S), que
contienen ARN ribosmico (ARNr 16S en la subunidad 30S, y ARNr 5S y ARNr 23S
en la subunidad 50S) y diversas protenas llamadas S (small o pequea, en la
subunidad 30S) o L (large o grande, en la subunidad 50S). En esta estructura
diferentes componentes pueden ser lugares de unin para los antimicrobianos (p.
ej., determinados nucletidos para las oxazolidinonas, algunas protenas S para las
tetraciclinas o protenas L para el cloranfenicol).

La mayora de los antibiticos de este grupo tienen actividad bacteriosttica, aunque

los aminoglucsidos se comportan como bactericidas. La accin bactericida o
bacteriosttica tambin va a depender de las concentraciones del antimicrobiano, y
del microorganismo afectado.

La sntesis proteica se desarrolla en diferentes fases 17, en las cuales actan

diferentes antimicrobianos, como se explica a continuacin.

Inhibidores de la fase de activacin

Los aminocidos son transportados a la cadena peptdica en formacin en el

ribosoma, por molculas de ARN de transferencia (ARNt) que se unirn al ARNm
codificante de la protena en formacin. Para ello, cada aminocido se une con su
ARNt especfico mediante una enzima tambin especfica de aminocido (aminoacil
ARNt sintetasa). En las bacterias, el primer aminocido de la cadena peptdica es
la metionina, es decir, la sntesis proteica se inicia con la formacin del complejo
formilmetionil-ARNt que reconocer el codn de iniciacin AUG del ARNm
(adenosina-uracilo-guanosina).

Mupirocina

Antibitico bacteriosttico obtenido de especies de Pseudomonas spp., que inhibe

competitivamente la enzima isoleucil-ARNt sintetasa, con lo cual no puede
incorporarse el aminocido isoleucina al pptido en formacin y la sntesis de
protenas se interrumpe18.

Su accin es especialmente potente frente a grampositivos, aunque debido a las

altas concentraciones que se alcanzan en piel y mucosa nasal tras su aplicacin
tpica, puede tener tambin alguna actividad frente a microorganismos
gramnegativos. Se usa fundamentalmente en el tratamiento tpico de infecciones
cutneas o para erradicacin del estado de portador de S. aureus.

Inhibidores del inicio de la sntesis proteica

El ARNm dispone de un codn especfico para la fijacin del ARNt que porta el
aminocido formilmetionina. Ambos se unen en la subunidad 30S, y posteriormente
a la subunidad 50S, y constituye el complejo de iniciacin de la sntesis de protenas.
En este complejo hay 2 sitios activos, el locus A, en el que se fijan los aminoacil-
ARNt, y el locus P, donde se engarza el pptido en formacin y donde se ubicar el
formilmetionil-ARNt que inicia la cadena peptdica. En esta fase de inicio de la
sntesis actan las oxazolidinonas y los aminoglucsidos.

Oxazolidinonas

Representan una de las ltimas familias de antimicrobianos incorporadas a la

prctica clnica. Son compuestos obtenidos por sntesis, y su representante en uso
es el linezolid19. Las oxazolidinonas inhiben la sntesis proteica e impiden la
formacin del complejo de iniciacin 70S, formado por formilmetionil-ARNt, ARNm,
diversas protenas y las subunidades ribosmicos 30S y 50S. El linezolid se fija a la
subunidad ribosmica 50S, en el centro peptidiltransferasa dentro del ARN
ribosmico 23S (dominio V), distorsiona as el punto de unin del formilmetionil-
ARNt y evita, por tanto, la formacin del complejo de iniciacin. Esta familia de
antibiticos tiene un mecanismo de accin singular, y al actuar en una diana distinta
no hay resistencia cruzada con otros antibiticos que tambin inhiben la sntesis
proteica.

El linezolid es bacteriosttico frente a bacterias grampositivas (incluidas cepas

multirresistentes de S. aureus y Enterococcus spp.) y carece de actividad frente a
la prctica totalidad de las bacterias gramnegativas.

Aminoglucsidos

Son compuestos naturales obtenidos de actinomicetos del suelo o productos

semisintticos derivados de ellos. Poseen un anillo aminociclitol al que se unen
diferentes azcares.

Aunque la diana primaria de actuacin de los aminoglucsidos est en los

ribosomas y sus procesos de sntesis proteica, su actividad sobre las bacterias no
se entiende sin conocer los fenmenos que se producen en la membrana. Los
aminoglucsidos son molculas muy cargadas positivamente, lo que les permite
concentrarse en torno a las bacterias por atraccin de las cargas negativas de la
superficie bacteriana, aportadas por los grupos fosfatos de los fosfolpidos de la
membrana externa de las bacterias gramnegativas y de los cidos teiicos unidos
al peptidoglucano de las grampositivas. En consecuencia, desplazan los iones de
magnesio y calcio que se enlazan a las molculas de lipopolisacridos adyacentes;
este proceso desestructura la membrana externa y permite al paso de los
aminoglucsidos. Una vez pasada fcilmente la barrera de peptidoglucano
(grampositivos y gramnegativos), vuelve a concentrarse en torno a la membrana
citoplsmica. La difusin a travs de esta membrana ocurre en 2 fases: una inicial
lenta y otra posterior rpida; ambas dependientes de la energa generada por el
transporte de electrones que implica la participacin de sistemas enzimticos del
metabolismo aerobio, que crea un gradiente elctrico a ambos lados de la
membrana20. Este hecho explica la ineficacia de estos compuestos frente a
microorganismos anaerobios. La presencia de iones de magnesio y calcio en el
medio y las situaciones que disminuyen el potencial transmembrana (pH cido,
ambiente anaerobio o hiperosmolaridad), reducen la difusin del aminoglucsidos
al interior de la bacteria y aumentan las CIM de forma importante. Una vez que los
aminoglucsidos han empezado a actuar en los ribosomas, comienzan a producirse
muchos errores en la lectura del ARNm, que darn como resultado protenas
anmalas que se unirn a la membrana, deteriorando su integridad y acelerando la
difusin de ms molculas de aminoglucsido (fase rpida). En consecuencia, una
gran cantidad de aminoglucsidos alcanza los ribosomas, que llegan a bloquearse,
y se detienen irreversiblemente la sntesis de protenas.

En el ribosoma, los aminoglucsidos tienen su accin principalmente en la

subunidad 30S, donde se unen a diferentes protenas S y al ARN 16S. Bloquean la
actividad normal del complejo de iniciacin, impiden el inicio de la sntesis y
provocan tambin una lectura errnea del ARNm.

Los aminoglucsidos tienen un efecto bactericida dependiente de su concentracin

y poseen un importante efecto postantibitico 21, es decir que una breve exposicin
de la bacteria a estos compuestos induce una supresin de su crecimiento, aun
cuando el antimicrobiano no alcance ya concentraciones que inhiban o maten al
microorganismo. Son activos frente a un amplio nmero de especies bacterianas,
especialmente frente a microorganismos gramnegativos aerobios.

Inhibidores de la fijacin del aminoacil-ARNt al ribososma

Una vez iniciada la sntesis proteica, el proceso contina con la incorporacin de

nuevos aminocidos al locus A, donde reconocern los codones internos del ARNm
a travs de los nucletidos complementarios del ARNt que porta el aminocido. Esta
fase se ve bloqueada por antibiticos bacteriostticos como las tetraciclinas y sus
derivadas, las glicilciclinas.

Tetraciclinas

Son molculas naturales o semisintticas con un ncleo hidronaftaceno, que

contiene cuatro anillos fundidos al que se pueden unir distintos radicales que darn
lugar a las diferentes tetraciclinas. Penetran en el citoplasma bacteriano por un
proceso dependiente de energa y se unen de forma reversible a la subunidad 30S
del ribosoma (protenas S7, S14, S19), bloqueando el acceso de los complejos
aminoacil-ARN-t, e impidiendo la continuacin de la sntesis proteica22. Estos
compuestos pueden tambin unirse (aunque menos selectivamente) a los
ribosomas 80S de las clulas humanas y efectuar la misma accin; sin embargo,
carecen de los medios de transporte especficos de la membrana bacteriana.

El compuesto ms usado es la doxiciclina, y en Espaa tambin estn disponibles

minociclina, oxitetraciclina y tetraciclina.
Son el mejor ejemplo de lo que se denomina antibiticos de amplio espectro, con
actividad tanto para grampositivos como frente a gramnegativos, pero esta actividad
depende de los grados de resistencia observados en cada especie, que son muy
variables. Son tambin activas frente a micobacterias atpicas, rickettsias,
micoplasmas, clamidias, espiroquetas, Coxiella burnetii y algunos protozoos.

Glicilciclinas

Son compuestos sintticos derivados de las tetraciclinas, de las cuales est

comercializada la tigeciclina, un derivado de la minociclina. Poseen el mismo
mecanismo de accin aunque se unen al ribosoma con una afinidad 5 veces
superior que la minociclina23. Adems, las glicilciclinas se fijan a la membrana
citoplsmica y alteran su permeabilidad.

La tigeciclina posee el amplio espectro propio de las tetraciclinas, pero es ms

potente e incluso activa contra bacterias con modificaciones ribosmicas resistentes
a las mismas, incluyendo enterococos resistentes a glucopptidos, S.
aureus resistente a meticilina, S. pneumoniae multirresistentes y diversas bacterias
gramnegativas resistentes a otros compuestos.

Inhibidores de la elongacin

Una vez que el ARNt que porta un aminocido se ha fijado al locus A, el centro
peptidiltransferasa, situado en la subunidad 50S, cataliza la unin entre el
aminocido incorporado y el ltimo aminocido del pptido en formacin (locus P),
proceso denominado transpeptidacin, que puede estar bloqueado por el
cloranfenicol y las lincosamidas.

Una vez formado el enlace peptdico, el ARNt fijado al locus P se libera y se separa
de su aminocido correspondiente, quedando libre el locus P. Seguidamente se
produce la translocacin del peptidil-ARNt del locus A al locus P, desplazndose la
subunidad 30S un codn a lo largo del ARNm. De esta manera queda libre
el locus A, y preparado para recibir un nuevo ARNt con su correspondiente
aminocido. Este proceso, que conlleva gasto de energa, requiere la participacin
clave del factor de elongacin G, que puede estar bloqueado por el cido fusdico.
El pptido en formacin va pasando a travs de un canal peptdico en la subunidad
50S y emerge por la parte posterior del ribosoma, y este proceso puede estar
bloqueado por los antibiticos del grupo MLSB (macrlidos, lincosamidas y
estreptograminas del grupo B) y por los cetlidos. La mayora de los
aminoglucsidos tambin ejercen su accin interfiriendo con la fase de elongacin
peptdica.

Todos los antimicrobianos que inhiben la transpeptidacin y la translocacin actan

sobre la subunidad ribosmica 50S.

Anfenicoles
El cloranfenicol y su derivado, el tiamfenicol, son antibiticos bacteriostticos que
bloquean la sntesis proteica bacteriana unindose reversiblemente a la protena
L16 localizada en la subunidad 50S. Esta protena es la que media la fijacin del
ARNt a la enzima peptidiltransferasa, y por tanto, su bloqueo por el cloranfenicol
evita la formacin de los enlaces peptdicos.

Tiene un amplio espectro de actividad contra microorganismos grampositivos,

gramnegativos y anaerobios. Su espectro incluye a neisserias, Haemophilus spp,
clamidias, rickettsias, micoplasmas y espiroquetas.

Lincosamidas

La principal lincosamida es clindamicina, un derivado semisinttico de la

lincomicina, que es un aminocido unido a un aminoazcar. Generalmente
bacteriostticos, pueden ser bactericidas dependiendo de su concentracin y del
microorganismo considerado.

Acta inhibiendo la sntesis proteica tras unirse reversiblemente a la subunidad 50S

del ribosoma, en un lugar prximo al del cloranfenicol o los macrlidos, impidiendo
la accin de la peptidiltransferasa24.

Es activa frente a bacterias grampositivas, excepto enterococos y microorganismos

anaerobios, incluido el grupo de B. fragilis. Tambin es activa frente a algunos
protozoos como Plasmodium spp. o Toxoplasma gondii. Al igual que los macrlidos
y las estreptograminas, no son activas frente a enterobacterias, Pseudomonas spp.
u otros gramnegativos aerobios, probablemente porque no pueden atravesar la
pared bacteriana.

Macrlidos y cetlidos

Forman un grupo de antimicrobianos que se caracteriza por la presencia de un anillo

lactnico macrocclico al que unen uno o varios azcares. La eritromicina fue el
primer macrlido utilizado en clnica, a partir del cual se introdujeron modificaciones
en su estructura qumica que dieron lugar a derivados semisintticos con mejores
propiedades farmacocinticas aunque, salvo excepciones, no presentaban mejoras
en su actividad antimicrobiana. Dependiendo del nmero de elementos contenidos
en el anillo, se clasifican en: macrlidos de 14 tomos de carbono como eritromicina,
claritromicina, roxitromicina. etc.; macrlidos de 15 tomos de carbono como la
azitromicina, en la que se incorpora un tomo de nitrgenos entre los carbonos 9 y
10 que da lugar a una estructura nueva conocida como azlido; macrlidos de 16
tomos de carbono como espiramicina, josamicina, midecamicina, etc. Los
cetlidos, como la telitromicina, son un grupo nuevo de antibiticos derivados de la
eritomicina, en los que el azcar unido al carbono 3 se sustituye con un grupo
cetnico.

Se unen de forma reversible al dominio V del centro peptidiltransferasa, en el ARNr

23S de la subunidad 50S del ribosoma, interfiriendo as el proceso de elongacin
de la sntesis proteica. Adems los cetlidos interacciona tambin con el dominio II
del ARNr 23S por lo que la afinidad de los cetlidos por el ribosoma es mucho mayor
que el resto de los macrlidos. Estos lugares de unin se sitan en el orificio de
entrada al tnel ribosmico por donde sale la protena en formacin, de manera que
al unirse los macrlidos o los cetlidos, se bloquea este canal, impidiendo
estricamente el crecimiento del pptido25. Tambin se ha descrito en los cetlidos,
una inhibicin de la formacin de los ribosomas 50S al evitar el ensamblaje de los
ARNr 5S y 23S con las riboprotenas, con lo que se impide el inicio de la sntesis 26.

Son generalmente considerados como bacteriostticos, aunque a altas

concentraciones y con un bajo inculo pueden mostrar accin bactericida
especialmente en Streptococcus spp.

Son activos frente a bacterias grampositivas (incluyendo actinomicetos e incluso

micobacterias), Bordetella pertussis, Haemophilus ducreyi, Moraxella spp,
Neisseria spp., Campylobacter spp., Helicobacter pylori (claritromicina),
treponemas, borrelias, Legionellaspp., micoplasmas, clamidias y ricketsias. La
azitromicina es algo menos activa que la eritromicina frente a microorganismos
grampositivos, pero es ms activa frente a gramnegativos. Apenas son activos
frente a enterobacterias y P. aeruginosa, aunque parecen ser tiles (sobre todo,
azitromicina) para el tratamiento de infecciones respiratorias crnicas por P.
aeruginosa, tal vez por propiedades antiinflamatorias o inmunomoduladores o por
inhibicin de la sntesis de alginato, componente de los biofilms.

Estreptograminas

Tambin llamadas sinerginas, forman un grupo de antimicrobianos con un

estructura compleja constituida por una macrolactona (estreptogramina grupo A) y
un polipptido cclico (estreptogramina grupo B)27. Ambos compuestos actan
sinrgicamente de forma bactericida, bloqueando la accin de la peptidiltransferasa
en diferentes puntos. Su principal representante es la asociacin quinupristina-
dalfopristina en proporcin 3:7, con actividad fundamentalmente frente a bacterias
grampositivas (excepto E. faecalis) y tambin frente a algunas bacterias fastidiosas
(Moraxella spp., Neisseria spp., Mycoplasma spp., L. pneumophila) y algunos
anaerobios (Prevotella y Porphyromonas spp.). Las estreptograminas A
(dalfopristina) se unen al ARNr 23S (subunidad 50S), y modifican la estructura
terciaria de ciertas protenas ribosmicas, de manera que aumenta la afinidad por
las estreptograminas del grupo B (quinupristina). Este hecho explica su accin
bactericida cuando actan juntos, ya que por separado son slo bacteriostticos.

cido fusdico

Es un antibitico de estructura esteroide que se une al complejo causante de la

translocacin formado por el factor de elongacin G, GDP y el ribosoma. Al unirse
al complejo, lo estabiliza e impide la liberacin del factor de elongacin G para una
nueva translocacin.
Puede comportarse como bacteriosttico o bactericida segn la concentracin y el
microorganismo. Es de espectro reducido a los microorganismos grampositivos
como S. aureus, S. epidermidis, Clostridium spp. y Corynebacterium spp., aunque
tambin puede ser activo frente a meningococos, gonococos y algunos protozoos
como Giardia lamblia y Plasmodium falciparum.

16. Un mRNA tiene la siguiente secuencia:

5-GGCGAUGGGCAAUAAACCGGGCCAGUAAGC-3

Identificar el codn de inicio y determinar la secuencia de aminocidos que se

traduce a partir de este mRNA.
5 GGC AAU AAA CCG GGC CAG 3
Gly Asn Lys Pro Gly Gln

17. Describir los componentes de las subunidades ribosomales eucariotas.

Dnde ocurre el ensamblaje de las subunidades dentro de las clulas vivas?

EMSAMBLAJE DE LOS RIBOSOMAS

Los RNAr maduros 5.8 S, 18S y 28S y el RNAr 5S se combinan en el nucleolo con
las protenas ribosmicas (importadas desde el citoplasma) para formar las
subunidades ribosomales pre- 40S y pre-60S. Estas pre-subunidades son
exportadas a travs de los complejos del poro nucleares (NPCs) al citoplasma
donde se termina la maduracin.
Los genes que codifican para las diferentes protenas ribosomales se transcriben
fuera del nucleolo por la RNA polimerasa II, originando RNAm que son
transportados a travs de los NPCs al citoplasma donde son traducidos en protenas
ribosomales en los ribosomas citoplasmticos. Las protenas ribosomales son
transportadas entonces de nuevo a travs de los NPCs al nucleolo donde se
ensamblan con los RNAr maduros para formar las partculas pre-ribosmicas. La
asociacin de las protenas ribosomicas con los RNAr tiene lugar a lo largo de la
sntesis y procesamiento del pre-RNA. La maduracin de la pre-subunidad mayor
60S sigue una ruta diferente de la menor 40S. La maduracin de la subunidad
pequea que solo contiene RNAr 18S es ms sencilla e implica cuatro escisiones
en el pre-RNA 47S. La escisin final de la que resulta el RNAr 18S se produce tras
el transporte de la subunidad 40S al citosol, mientras que la maduracin de la
subunidad 60S que contiene implica multiples escisiones del pre-RNA en el ncleo
y se completa totalmente dentro del nucleolo. Por lo tanto la mayora de las
particulas preribosmicas del nucleolo son precursores de las subunidades grandes
60S. Las etapas finales de la maduracin de los ribosomas siguen a la salida de las
partculas preribosomales al citoplasma, formando las subunidades ribosmicas
40S y 60S maduras funcionalmente capaces de formar los ribosomas 80S
encargados de llevar a cabo la sntesis de protenas celulares.

18. Cmo se vera afectada la traduccin en eucariotas si alguno de los

siguientes factores de iniciacin estuviera ausente?
elF2: el RNAt NO reconociera los sitios de terminacion ya que estos no lo reconocen,
por lo que utilizan estas proteinas para reconocer las secuencias terminadoras de
DNA.
elF4: no se diera el rastreo del mRNA desde su extremo 5 en busca del AUG
iniciador (normalmente el primero). Este rastreo es necesario para deshacer las
estructuras secundarias que se han producido en el traslado del mRNA desde el
ncleo hasta el citoplasma.
Elf5: no se activara la actividad GTPasa de eIF-2 para indicar que el rastreo del
AUG ha concluido y liberar todos los factores.

19. Cmo un ribosoma eucaritico selecciona su codn de inicio? Describir las

secuencias en el mRNA eucaritico que proporcionan un contexto ptimo para el
codn de inicio.
Secuencia de nucletidos del ARNm:
AGC UAU AUG CGC ACG CAA ACC CCA AUU UAG AUA
En esta secuencia el codn de iniciacin es el AUG, que est ocupando el tercer
lugar. Este codn codifica el aminocido metionina, por ello, todas las protenas en
principio comienzan por este aminocido; posteriormente, muchas de ellas lo
eliminan. En esta secuencia el codn de terminacin es el UAG, que se encuentra
localizado en penltimo lugar. Estos codones no codifican ningn aminocido, por
ello, se les denomina tambin codones mudos o sin sentido. Provocan la separacin
del ribosoma y el final de la sntesis proteica, ya que no existe ningn ARNt cuyo
anticodn sea complementario con ellos.