DETERMINACIN DE LONGITUD DE ONDA PARA CUANTIFICAR UNA

SUSTANCIA.

I. OBJETIVOS

1.1 Objetivo General

Determinar experimentalmente mediante el mtodo de espectrofotometra uv-
visible la cantidad de onda absorbida una sustancia

2.1Objetivos especficos
- Reconocer el proceso experimental de espectrofotometra uv-visible.
- Describir los datos obtenidos en el espectrofotmetro uv-visible.
- Analizar nuestros datos obtenidos de la muestra del caf.

II. MARCO TERICO

2.1 Espectrofotometra:
La Espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas
para la deteccin especfica de molculas. Se caracteriza por su precisin,
sensibilidad y su aplicabilidad a molculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomolculas, etc) y estado de agregacin (slido, lquido,
gas). Los fundamentos fsico-qumicos de la espectrofotometra son
relativamente sencillos.
Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en forma de
energa interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos
organismos, entre ellos el de la fotosntesis en plantas y bacterias. La
Mecnica Cuntica nos dice que la luz est compuesta de fotones cada uno de
los cules tiene una energa:
Efotn = h = hc/
Donde c es la velocidad de la luz, es su frecuencia, su longitud de onda y
h= 6.6 10 -34 Js es la constante de Planck. Cuando decimos que una
sustancia qumica absorbe luz de longitud de onda , esto significa que las
molculas de esa sustancia absorben fotones de esa longitud de onda.
2.2 Ley de Lambert-Beer:

Los mtodos espectroscpicos de anlisis estn basados en la medida de la

radiacin electromagntica que es absorbida o emitida por una sustancia. En
funcin de ello se clasifican fundamentalmente en:
Mtodos de absorcin: Se basan en la disminucin de la potencia de un haz
de radiacin electromagntica al interaccionar con una sustancia.
Mtodos de emisin: Se basan en la radiacin que emite una sustancia
cuando es excitada previamente por medio de otro tipo de energa (trmica,
elctrica).
Mtodos de fluorescencia: Se basan en la radiacin que emite la sustancia
cuando es excitada previamente por un haz de radiacin electromagntica.
Otras clasificaciones de los mtodos espectroscpicos se establecen en
funcin de la regin del espectro electromagntico que interviene en la tcnica.
As, pueden utilizarse regiones como rayos X, ultravioleta, visible, infrarrojo,
microondas, etc.
 2.3 Espectrofotmetro uv- visible
La espectrofotometra se basa en la relacin que existe entre la absorcin de
luz por parte de un compuesto y su concentracin. Cuando se hace incidir luz
monocromtica (de una sola longitud de onda) sobre un medio homogneo,
una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra transmitida, como
consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P,
siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz
transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorcin a medir, la
muestra puede estar en fase lquida, slida o gaseosa. En las regiones visibles
y ultravioleta del espectro electromagntico, la muestra es generalmente
disuelta para formar una solucin. (Brunati, Martin 2010).

2.4 Curva de Calibracin

Uno de los mtodos ms utilizados para determinar la concentracin de una muestra

problema, es el mtodo de la curva de calibracin. Esta curva de calibracin es una
grfica que relaciona la concentracin de al menos cinco soluciones de estndar de
concentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de
onda mxima ( max)

Una vez obtenida la grfica se determina la funcin matemtica que presenta dicha
recta a travs del tratamiento estadstico de regresin de los mnimos cuadrados, la
cual relaciona la absorbancia y la concentracin de un analito. La siguiente ecuacin
matemtica corresponde a dicha funcin:
 A = m c + n (Ecuacin 1)

A : Absorbancia.

n : Intercepto de la recta

m : Pendiente de la recta y que corresponde al producto entre absortividad a de la

muestra y el espesor b de la cubeta.

Luego se mide la absorbancia de la solucin problema y se interpola su valor en la

grfica o se reemplaza en la ecuacin (1), para obtener el valor de concentracin del
analito. La concentracin de la solucin problema debe estar comprendida en el rango
de concentracin que comprende la curva de calibracin. Si la concentracin de la
solucin problema es menor que la concentracin del estndar ms diluido, debe
usarse el mtodo de adicin estndar, que consiste en adicionar un volumen
determinado de un estndar concentrado a la solucin problema, antes de realizar la
lectura y que permite que esta lectura este dentro de las obtenidas para la curva de
calibracin. En el caso contrario, si la concentracin del analito es mayor que la
concentracin del estndar ms concentrado la solucin problema deber ser diluida.

III. MATERIALES Y METODOLOGIA

3.1 MATERIALES
Caf molido
Vaso precipitado de 250 mL Kimax Kimble
Centrifugadora pro-research by centuryon Scientific Lid
Cocina Electrica ThermoScientific
Espectrofotmetro uv-visible Perkin Elmer Lambda 650
Tubo bsico para centrifugadora con tapa
Prisma
 3.2 METODOLOGA

Tener la muestra lista para diluirla en el agua.

Pesar en un vaso precipitado kimax kimble una cierta cantidad de la muestra y
apuntar su peso.
Agregar agua hasta obtener los 60 gramos.
Esperar a que la muestra se diluya en el vaso, en algunos casos como hiervas
se requiere el uso de la cocina elctrica.
Colocar la muestra en el prisma y llevarlo a el Espectrofotmetro uv-visible
Perkin Elmer Lambda 650.
Esperar los datos obtenidos.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Se coloc un vaso precipitado de 250 mL kimax kimble en una balanza
analtica.
Se le agrego cierta cantidad de muestra dando un peso de 0.20g
Seguidamente se le agrego agua hasta alcanzar un peso de 60g
aproximadamente; en el experimento se registr un peso total de
disolucin de 67.2 g.
La disolucin presento una apariencia no adecuada para el
experimento, por lo cual se someti 50 mL de la muestra en un tuvo
para centrifuga a 4000 rpm, con el propsito de precipitar los slidos en
la centrifuga.
Se coloc parte de la muestra en un prisma
La muestra fue sometida al Espectrofotmetro uv-visible Perkin Elmer
Lambda 650
Se esper los resultados.