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Claudia Eith
Prof. Dr. Maximilian Kolb
Prof. Dr. Andreas Seubert
Dr. Kai Henning Viehweger (Hrsg.)
Metrohm Monographie
8.792.2001 d
8.792.2003 e
khv 1 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Inhaltsverzeichnis
1 Die Autoren ...................................................................................................................................... 4
2 Einfhrung ........................................................................................................................................ 5
3 Theoretischer Teil............................................................................................................................. 6
3.1 Historie und Bedeutung der Ionenchromatographie ................................................................. 6
3.2 Grundlagen der Chromatographie ............................................................................................ 7
3.2.1 Einteilung und Begriffe der Chromatographie ................................................................... 7
3.2.2 Theoretische Konzepte zur Beschreibung der Chromatographie ................................... 10
3.3 Grundlagen der Ionenchromatographie (IC)........................................................................... 14
3.3.1 Terminologie und Einordnung in die LC .......................................................................... 14
3.3.2 Der Ionenaustausch......................................................................................................... 15
3.3.3 Die Ionenpaarbildung....................................................................................................... 16
3.3.4 Der Ionenausschluss ....................................................................................................... 17
3.4 Retentionsmodelle in der Ionenchromatographie ................................................................... 18
3.4.1 Retentionsmodelle in der Anionenchromatographie........................................................ 18
3.4.2 Retentionsmodelle in der Kationenchromatographie....................................................... 23
3.5 Detektionssysteme in der Ionenchromatographie .................................................................. 26
3.5.1 Elektrochemische Detektoren.......................................................................................... 27
3.5.2 Spektroskopische Detektionen ........................................................................................ 31
3.6 Stationre Phasen in der Ionenchromatographie ................................................................... 32
3.6.1 bersicht gebruchlicher stationrer Phasen.................................................................. 32
3.6.2 Stationre Phasen fr die Anionenchromatographie....................................................... 33
3.6.3 Stationre Phasen in der Kationenchromatographie....................................................... 34
3.6.4 Kationenaustauscher auf Silicagelbasis .......................................................................... 34
3.6.5 Kationenaustauscher auf Basis von organischen Polymeren ......................................... 35
3.6.6 Pellikulare Kationenaustauscher ..................................................................................... 35
3.6.7 Stationre Phasen in der Ionenausschlusschromatographie .......................................... 35
3.6.8 Die Bedeutung der Kapazitt von Ionenaustauschern .................................................... 35
3.7 Eluenten in der Ionenchromatographie................................................................................... 36
3.7.1 Anionenchromatographie................................................................................................. 37
3.8 Kationenchromatographie....................................................................................................... 39
3.8.1 Kationenchromatographie von Alkali-, Erdalkali- und Ammonium-Ionen mit
Leitfhigkeitsdetektion.................................................................................................................... 39
3.8.2 Kationenchromatographie von bergangs- und Erdalkalimetall-Ionen mit
Nachsulenderivatisierung und photometrischer Detektion........................................................... 40
3.8.3 Ionenausschlusschromatographie ................................................................................... 41
4 Praktischer Teil............................................................................................................................... 42
4.1 Hinweise zum praktischen Arbeiten........................................................................................ 42
4.2 Versuche zur Theorie der Ionenchromatographie .................................................................. 45
4.2.1 Versuch 1 Ionenchromatographie mit und ohne chemische Suppression ................... 45
4.2.2 Versuch 2 Kapazitt von Trennsulen.......................................................................... 49
4.2.3 Versuch 3 Selektivitt von Trennsulen ....................................................................... 52
4.2.4 Versuch 4 Kalibration, Nachweis- und Bestimmungsgrenzen in der
Ionenchromatographie ................................................................................................................... 57
4.2.5 Versuch 4a Bestimmung von Anionen mit chemischer Suppression ........................... 58
4.2.6 Versuch 5 Vernderung der Selektivitt mit Hilfe von Kronenethern (18 Crown-6) ..... 60
4.2.7 Versuch 6 Vernderung der Selektivitt mit Hilfe von Komplexbildnern ...................... 63
4.2.8 Versuch 7 Anreicherungstechnik .................................................................................. 68
4.3 Versuche fr die Bestimmung von Anionen............................................................................ 71
4.3.1 Versuch 8 Bestimmung von Anionen in Trinkwasser ................................................... 71
4.3.2 Versuch 9 Anionen in Ethanol ...................................................................................... 74
4.3.3 Versuch 10 Anionen in Kopfsalat.................................................................................. 80
4.3.4 Versuch 11 Phosphorsure in Cola.............................................................................. 83
4.3.5 Versuch 12 Anionen im Wein ....................................................................................... 88
4.3.6 Versuch 13 Bestimmung von Verunreinigungen in Borat Chlorid und Sulfat in Borax
93
4.3.7 Versuch 14 Bestimmung von Anionen in Abwasser..................................................... 96
4.3.8 Versuch 15 Fluorid in Zahnpaste................................................................................ 101
4.3.9 Versuch 16 Anionen in braunem und weissem Zucker .............................................. 105
4.3.10 Versuch 17 Verunreinigungen im Wasserstoffperoxid ............................................... 110
4.4 Versuche fr die Bestimmung von Kationen......................................................................... 115
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
4.4.1 Versuch 18 Alkli- und Erdalkalimetalle in Trinkwasser und Mineralwasser ............... 115
4.4.2 Versuch 19 Bestimmung der bergangsmetalle ........................................................ 119
4.4.3 Versuch 20 Verunreinignungen im Silikagel Bestimmung von Calcium- und
Magnesiumionen .......................................................................................................................... 125
4.4.4 Versuch 21 Kosmetik und Korrosionsschutz: Bestimmung von Ethanolamin und
Alkalimetallen ............................................................................................................................... 128
4.4.5 Versuch 22 Alkali- und Erdalkalimetalle im Wein ....................................................... 132
5 Literatur ........................................................................................................................................ 136
5.1 Literatur zum Praktikumsbuch .............................................................................................. 136
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
1 Die Autoren
Claudia Eith
Chemiestudium an der Fachhochschule Aalen, Praxissemester im Bereich der Trinkwasser und
Abwasseranalytik in Adelaide (Australien), seit 2000 im Bereich Forschung & Entwicklung der
Metrohm AG.
Maximilian Kolb
Chemiestudium an der Technischen Universitt Mnchen, Promotion auf dem Gebiet der homogenen
Katalyse, danach fr 5 Jahre Leiter des Sachgebiets Gewssergte am Wasserwirtschaftsamt
Traunstein. Seit 1982 Professor an der Fachhochschule Aalen; Arbeitsgebiete: Umwelttechnik,
Umweltanalytik und Chemometrie.
Andreas Seubert
Chemiestudium an der Universitt Hannover, Promotion 1990: Ultraspurenanalytik in hochreinen
Refraktrmetallen mit ionenchromatographischer Spuren-Matrix-Trennung. Habilitation 1995:
Einsatzgebiete der On-line Kopplung HPLC-Atomspektrometrie in der Elementanalytik, 1998 bis
2000 Vertretungsprofessur fr Analytische Chemie an der Universitt Gh Kassel, seit Mrz 2000
Professur fr Analytische Chemie an der Philipps-Universitt Marburg.
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
2 Einfhrung
Es ist immer eine Herausforderung, Einblick in Dinge zu nehmen, die sich nicht direkt offenbaren. Die
Grnde hierfr reichen von einfacher Neugier bis zur schlichten Notwendigkeit zu berleben. Es gibt
viele Mglichkeiten hinter die Kulissen zu schauen. Die einfachste ist, sich der menschlichen Sinne zu
bedienen: hren, fhlen, riechen, schmecken und sehen. Die Alchemie hat sich dieser menschlichen
Sinne frher gerne bedient. Deshalb schmecken Suren heute sauer und Brom hat seinen Namen von
bromos, griechisch fr stinken. Chrom zeigt sich dem Auge farbig, da chroma sprachgeschicht-
lich gleich Farbe ist. Gefhlsbetont wird die Alchemie mit Schimpfwrtern wie Du Nickel und Kobold
bzw. Kobalt. Beide haben die Eisenherstellung unsere Vorfahren empfindlich gestrt.
Viele einzelne Dinge zeigen sich nicht direkt. Sie sind gut gemischt oder die menschliche Sensorik
reicht nicht aus, sie zu identifizieren. Dies ist der Moment an dem die Analytik ins Spiel kommt. Sie
kann aus einer undefinierten Gemengelage heraus przise Informationen extrahieren, die mit den
menschlichen Sinnen zu verstehen sind.
Obwohl der Organismus voll davon ist, zeigen sie sich den menschlichen Sinnen nicht direkt. Gemeint
sind Ionen, jene geladenen Atome oder Molekle, die integraler Bestandteil fast aller lebender und
toter Materie sind. Ionen sind dafr verantwortlich, dass die Nerven Informationen weiterleiten, dass
die Verdauung funktioniert, dass der Blutdruck stimmt und genug Sauerstoff ins Blut gelangt. Ionen
bringen das Salz ins Meer, sie regeln den Durst und ionische Bestandteile dienen als Nahrung fr alle
Lebewesen von der Bakterie bis zum Menschen.
Das Wissen um Art und Menge von Ionen, die sich in Umwelt befinden, hilft biochemische und
kologische Zusammenhnge zu verstehen. Die Kenntnis der Ionenkonzentrationen in Lebensmitteln
gibt Hinweise darauf, ob diese gesund oder vielleicht schdlich sind.
Es gibt viele Mglichkeiten, Ionen qualitativ nach ihrer Art und quantitativ nach ihrer Menge zu
bestimmen. Beide Informationen sind wichtig. Ein Verfahren, um an diese Information zu gelangen ist
die Ionenchromatographie. Chromatographie heisst eigentlich Schreiben mit Farbe. In der
traditionellen Analytik bedeutet dies, Substanzen nach ihrer Farbe zu trennen und nachher mit dem
Auge zu bestimmen. Obwohl sich nicht alle Ionen durch sichtbare Farbe auszeichnen, ist der Begriff
geblieben, nur werden heute andere Verfahren zur Bestimmung eingesetzt.
Die Ionenchromatographie ist ein Mitglied in der grossen Familie dieser chromatographischen
Verfahren. Mit ihr lassen sich sehr vereinfacht dargestellt alle Ionen bestimmen, die ein bzw. zwei
Ladungen tragen. War die Ionenchromatographie oder IC in der Vergangenheit ein sehr teures
Verfahren, so ist sie heute wesentlich preiswerter geworden. Sie entwickelt sich deshalb zu einem
universellen und leistungsfhigen analytischen Werkzeug, das leicht zu verwenden ist.
Das Praktikum der Ionenchromatographie zeigt, dass die IC keine abgehobene analytische Spielart
ist, sondern auf ganz alltgliche Fragen schnell Antworten geben kann: Ist das Trinkwasser fr die
Suglingsernhrung geeignet? Wie viel Nitrat ist im Spinat? Warum verkalkt die Waschmaschine?
Belastet das Abwasser die Umwelt? Da eine genaue analytische Praxis ohne theoretischen
Hintergrund nur schwerlich mglich ist, enthlt die vorliegende Monographie auch hierzu detaillierte
Informationen in einem eigenen theoretischen Teil.
Mit dem Praktikum der Ionenchromatographie ist es mglich, nicht nur die Grundzge der IC
kennen zu lernen. Es dient auch dazu, einen generellen Einblick in die generellen Prinzipien der
Chromatographie zu geben. Und die Chromatgraphie leistet vieles: sie stillt naturwissenschaftliche
Neugier und sie sichert das gesunde berleben in einer belasteten Umwelt.
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3 Theoretischer Teil
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
zwischen dem Basispolymer und den eigentlichen funktionellen Gruppen dienen. Diese bestehen im
Regelfall aus quartren Ammonium-Ionen, welche an den Ankergruppen chemisch fixiert sind. Die
Gesamtzahl der funktionellen Gruppen wird als Austauschkapazitt bezeichnet und stellt allgemein ein
zentrales Charakteristikum von Ionenaustauschern dar.
Kommerzielle Packungsmaterialien fr die Anionenchromatographie sind mit Austauschkapazitten
zwischen 50 und 100 Mol pro Trennsule von niederkapazitiver Natur. Dies ist in der dominierenden
Anwendung der fr Ionen universell einsetzbaren Leitfhigkeitsdetektion (LF) begrndet, weil eine
empfindliche Detektion der Analyten eine mglichst geringe Eigenleitfhigkeit der verwendeten
Elutionssysteme erfordert. Bei niederkapazitiven Anionenaustauschern gengen dafr in der Regel
sehr verdnnte wrige Lsungen von NaOH oder Carbonat-Puffern, deren Eigenleitfhigkeit zudem
noch chemisch unterdrckt (suppressiert) werden kann [2,4].
Heute werden in der Anionenchromatographie grsstenteils funktionelle Gruppen vom Typ I
(Trimethylammonium, TMA) und Typ II (Dimethylethanolammonium, DMEA) verwendet. Da die
eigentliche Wechselwirkung zwischen der stationren Phase und den Analyt-Anionen an den
funktionellen Gruppen stattfindet, hat deren Struktur einen entscheidenden Einflu auf das
Selektivittsverhalten der Packungsmaterialien. Nach den bisherigen Erkenntnissen ist dabei
insbesondere die Polaritt der funktionellen Gruppen, die durch die Zahl der Hydroxyethylreste (-
CH2CH2OH) am quartren Stickstoff gesteuert werden kann, von Bedeutung [2,4].
Der Begriff Ionenchromatographie umfasst alle Trennungen ionischer Spezies innerhalb der HPLC
mit online-Detektion und ist somit von apparativen Limitierungen weitgehend befreit [5]. Die IC hat sich
wegen der mittlerweile vielfltigen Auswahl an Trennsulen, Elutionssystemen und Detektoren vor
allem in der Anionen-Analytik zur Methode der Wahl entwickelt. Grund hierfr ist, dass fr Anionen nur
wenige Trennungsgnge existieren, die in der Praxis kaum sinnvoll zu verwenden sind.
Gravimetrische und volumetrische Verfahren sind durch ihre Empfindlichkeit und ihre Selektivitt
limitiert. Auch die strmische Entwicklung der Gaschromatographie ab 1965 brachte fr Anionen keine
grossen Vorteile, da die nichtflchtigen Ionen zunchst derivatisiert werden mssen und die
Empfindlichkeit nicht den heutigen Anforderungen an die Spurenanalytik gerecht wird [6]. Fr die
Kationenanalytik existieren leistungsfhige atomspektrometrische Alternativen zur IC, z.B. die ICP-
AES/MS, so dass der Stellenwert der Kationenchromatographie verglichen zur
Anionenchromatographie wesentlich geringer ist. Im Bereich der Analytik der Alkali- und
Erdalkalimetalle sowie bei der Bestimmung von Ammonium-Stickstoff (Trinkwasseranalytik) hat die
Kationenchromatographie aber eine gewisse Bedeutung. Bei der Speziierung von ionischen
Verbindungen ist die IC in Verbindung mit elementspezifischen Detektoren unverzichtbar. Einen guten
berblick ber die Anwendungen der IC in den verschiedensten Bereichen der Analytik geben die
Werke von Haddad et al. und Weiss [2,4].
mobile Phase
stationre Phase
flssig gasfrmig
Abbildung 1 Einteilung chromatographischer Methoden nach Aufbau von stationrer und mobiler
Phase
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Retentionsparameter
Betrachtet man ein Stoffgemisch und unterwirft dieses einer chromatographischen Trennung, so wird
sich fr jede Komponente ein Verteilungsgleichgewicht zwischen mobiler und stationrer Phase
ausbilden. Eine Stofftrennung ist nur dann erfolgreich, wenn sich die Verteilungskoeffizienten D der
Komponenten hinreichend voneinander unterscheiden. D ist definiert als das Verhltnis der
Konzentrationen eines Stoffes A in der stationren (Index S) und der mobilen Phase (Index M):
[A] S
DA = (1)
[A] M
tR = t S + tM (2)
t0 Totzeit
Analyt 1 tR,n Retentionszeit Analyt n
tR,2 tR = tR t0 Nettoretentionszeit
k = tR / t0 Retentionsfaktor
Analyt 2
T = b/a Tailingfaktor
R = tR / w Auflsung
Signal = k1 / k2 Selektivitt
Flche
Auflsung
Hhe
Tailing
w
a b
t0 tR,2
Zeit oder Volumen
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Durch Diffusionsprozesse, die mit zunehmender Verweilzeit auf der stationren Phase an Einfluss
gewinnen, beobachtet man eine mit der Retentionszeit einer Substanz zunehmende
Bandenverbreiterung. Dieses Phnomen ist fr alle chromatographischen Verfahren charakteristisch.
Wie bereits erwhnt, stellt ein Peak in einem Chromatogramm idealerweise eine Gaussverteilung dar.
Abbildung 3 zeigt schematisch eine Gaussverteilung.
B
T= . (3)
A
Fr Gauss-Peaks ist T = 1. Abweichungen zu grsseren T-Werten werden als Tailing, zu kleineren als
Fronting bezeichnet. In der Praxis strebt man Symmetriefaktoren von T = 0,9 bis 1,1 an.
VS t u tR
k' = D = S = -1 (4)
VM tM L
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Bei kleinen Werten von k eluiert eine Substanz nahe an der Totzeit bzw. am Totvolumen des
chromatographischen Systems, was gleichbedeutend mit einer schlechten Trennung ist. Ist k sehr
gross, bedeutet dies zwar eine gute Trennung, gleichzeitig aber auch eine hohe Verweilzeit auf der
Trennstrecke und damit eine Peakverbreiterung. Im Realfall sollte der Retentionsfaktor zwischen 2
und 5 liegen.
Zwei Stoffe werden nur dann ausreichend getrennt, wenn sich ihre Retentionsfaktoren hinreichend
voneinander unterscheiden. Der Selektivittskoeffizient , auch relativer Trennfaktor genannt, gilt
als Mass fr die Trennbarkeit zweier Substanzen und ist wie folgt definiert:
t R2 - t M t S2 k' 2
= = = mit k' 2 > k' 1 (5)
t R1 - t M t S1 k' 1
Lassen sich zwei Substanzen nicht auftrennen, ist = 1 und es kommt zur Koelution. Je grsser ist,
desto besser die Trennung. Allerdings vergrssert sich mit zunehmendem auch der Zeitaufwand fr
die Trennung, so dass man in der Praxis Selektivittskoeffizienten von = 1,5 anstrebt [10].
Der Selektivittskoeffizient beschreibt nicht die Gte eines Trennvorganges. Die Auflsung R
(Resolution) bercksichtigt nicht nur die relativen Lagen der Peaks zueinander, sondern auch ihre
Halbwertsbreiten (b0,5) bzw. die Basisbreiten (w), wie aus Gleichung 6 hervorgeht.
t R2 - t R1 2 t R t R2 - t R1
R = = = 1,198 (6)
(w 1 - w 2 )
2
w1 w 2 b (0,5) 1 - b (0,5)2
Ist die Differenz der Retentionszeiten zweier Peaks gross im Verhltnis zu ihren Basis- oder
Halbwertsbreiten, erhlt man eine hohe Auflsung. Unter Voraussetzung einer idealen Peaksymmetrie
knnen zwei Stoffe bei R = 0,5 noch identifiziert werden. Fr qualitative Trennungen sollte R = 1
betragen (4-Trennung), fr eine Quantifizierung strebt man eine Auflsung von R = 1,2 bis 1,5 an
[25]. Auflsungen von R 2 (8-Trennung) sind aufgrund der damit verbundenen langen
Analysezeiten nicht erwnscht.
2 2 2
t t
= R
t
N = 16 R = 8 ln (2) R (7)
w b 0,5
Anstelle der Trennstufenzahl kann auch die Trennstufenhhe HETP (Height Equivalent to a
Theoretical Plate) zur Beschreibung der Trennleistung herangezogen werden.
2 2
L 2 L b 0,5 L tR
HETP = = = = (8)
N L 8 ln (2) t R 16 w
Aus den Gleichungen 5 ... 8 lsst sich ableiten, dass eine stationre Phase mit einer sehr grossen
Zahl an theoretischen Trennstufen auch dann noch Substanzen voneinander separieren kann, wenn
deren Selektivittskoeffizienten oder Auflsung sich kaum voneinander unterscheiden. Die
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Gleichungen erlauben ebenso die Berechnung der Zahl an theoretischen Bden, die zur Bewltigung
eines Trennproblems zwingend notwendig ist.
Das Modell der theoretischen Trennstufen kann zur Erklrung des Auftretens gaussfrmiger Signale in
der Chromatographie herangezogen werden, wenn man zugrunde legt, dass es aufgrund von
Strmungs- und Diffusionsprozessen nur zu einer endlich schnellen und unvollstndigen
Gleichgewichtseinstellung zwischen mobiler und stationrer Phase kommt. Daraus resultiert eine
Bandenverbreiterung, da eine am Anfang der Trennstrecke schmale Substanzzone mit zunehmender
Verweilzeit auf der stationren Phase deutlich auseinandergezogen wird.
Die Berechnung der theoretischen Trennstufenzahl gemss Gleichung 7 setzt eine ideale Peakform
voraus, welche aber im Realfall nur sehr selten gegeben ist. Bei asymmetrischen Peakformen muss
die Berechnung ber die Momentenmethode erfolgen [13]. Gleichung 9 ergibt unter Einbeziehung des
Symmetriefaktors nherungsweise sinnvolle Werte.
2
tR
b 0,5
N = 41,7 (9)
T + 1,25
Eine effektive Trennstufenzahl n, welche der realen Trennleistung nher kommt als die theoretische
Trennstufenzahl N, ist um den Retentionsfaktor k korrigiert und berechnet sich zu:
2
k'
n =N (10)
k'+1
B
HETP = A + + Cu (11)
u
Die drei Terme A, B und C hngen dabei in unterschiedlicher Weise von der
Strmungsgeschwindigkeit u der mobilen Phase ab. Die Terme A und B beschreiben den gesamten
Massentransport durch die stationre Phase, whrend der Term C durch Strungen bei der
Gleichgewichtseinstellung zwischen mobiler und stationrer Phase bestimmt wird.
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Durch den Term A wird die Streudiffusion (Eddy-Diffusion) beschrieben, welche aufgrund eines
Mehrwege-Effektes als eine Ursache fr die Bandenverbreiterung anzusehen ist. Dieser auch
Packungsfaktor genannte Term ist von der linearen Geschwindigkeit u der mobilen Phase zumindest
in erster Nherung unabhngig. Fr den Term A gilt folgende Beziehung:
A = 2 dp (12)
In Gleichung (12) ist dp der mittlere Teilchendurchmesser in der stationren Phase, kennzeichnet die
statistische Unregelmssigkeit der Packung, welche mglichst homogen sein und aus uniformen
Teilchen bestehen sollte.
Der Term B beschreibt die Longitudinaldiffusion in oder entgegen der Strmungsrichtung der mobilen
Phase. Er ist insbesondere bei Verwendung von Kapillarsulen in der Gaschromatographie (GC) von
Bedeutung, da die Diffusionskoeffizienten in Gasen um 4 bis 5 Dekaden grsser sind als in
Flssigkeiten. B berechnet sich als Produkt aus dem Diffusionskoeffizienten in der mobilen Phase DM
und dem Labyrinthfaktor , welcher die Porositt der stationren Phase beschreibt.
B = 2 DM (13)
Da die Bedeutung der Diffusion mit zunehmender Strmungsgeschwindigkeit der mobilen Phase
abnimmt, ist B umgekehrt proportional zu u.
Der Term C wird als Massenbergangsterm bezeichnet. Der verzgerte Massentransfer zwischen
mobiler und stationrer Phase hat zumeist den grssten Anteil an der Bandenverbreiterung. Die
Strungen in der Gleichgewichtseinstellung zwischen mobiler und stationrer Phase werden mit
zunehmendem u grsser, weshalb sich eine direkte Proportionalitt zur linearen Fliessgeschwindigkeit
ergibt. Die Verzgerungen im Massentransfer resultieren aus den im Vergleich zur mobilen Phase
sehr kleinen Diffusionskoeffizienten DS in der stationren Phase, weshalb Teilchen, die sich gerade in
den Poren der stationren Phase aufhalten, hinter dem Peakmaximum, welches sich mit der mobilen
Phase weiterbewegt, zurckbleiben. Durch kurze Diffusionswege und schnelle Austauschvorgnge
lsst sich der Term C deutlich verringern. Dies kann ber eine Lokalisierung der Poren vor allem an
der Oberflche erfolgen, die so nur wenig in das Innere der stationren Phase hineinreichen. Der
Massenbergangsterm C berechnet sich wie folgt:
16 k' dp 2
C= (14)
(1 + k' ) D S
Die graphische Darstellung der Van-Deemter-Gleichung ergibt eine hyperbelartige Kurve, in deren
Minimum sich die Fliessgeschwindigkeit u fr die minimale Bodenhhe (maximale Trennstufenzahl)
bestimmen lsst (Abbildung 4).
Abbildung 4 Darstellung der Einzelterme aus der van-Deemter Theorie mit der resultierenden Van-
Deemter-Kurve mit Optimum der Fliessgeschwindigkeit
Auch die dynamische Theorie geht letztendlich von idealisierten Voraussetzungen aus. Im Realfall
sind die drei Terme A, B und C nur in erster Nherung unabhngig voneinander, wobei es zustzlich
einen Einfluss der Fliessgeschwindigkeit u auf die Streudiffusion (Term A) gibt. Der Term C lsst sich
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
in die Terme CM und CS differenzieren, die den Massentransfer in der mobilen Phase (CM) bzw. zur
stationren Phase und zurck beschreiben (CS). Daher ist die ursprngliche Van-Deemter-Gleichung
in zahlreichen Anwendungsfllen fr die HPLC, GC und die TLC modifiziert worden [17,18].
Abbildung 5 Aufbau einer HPLC- bzw. IC-Anlage mit den wichtigsten Komponenten
Die Pumpe ist neben der Trennsule das Kernstck eines jeden HPLC-Systems. Sie muss in der Lage
sein, den Eluenten mglichst konstant und pulsationsfrei auch gegen hohe Staudrcke zu frdern.
Diese machen auch die Verwendung eines speziellen Schleifen-Injektors zur Probenaufgabe
notwendig. blich ist ein 6-Wege-Ventil, das in der Lage ist, die Probe unter Normaldruck in einer
Schleife mit definiertem Volumen aufzunehmen und in das unter hohem Druck stehende HPLC-
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
System zu berfhren. Die Zusammensetzung der mobilen Phase muss wie die Art der Trennsule an
die analytische Fragestellung angepasst werden. Dies trifft ebenso auf die Auswahl des
Detektionssystems zu. Die Datenaufnahme und -verarbeitung erfolgt heute ausschliesslich
computergesteuert. Je nach Problemstellung lsst sich dieser grundlegende Aufbau einer HPLC-
Apparatur nahezu beliebig erweitern.
Trennprinzipien in der LC
Die HPLC lsst sich anhand der verschiedenen physikalisch-chemischen Wechselwirkungen zwischen
den Substanzen in einer Probe und der stationren Phase differenzieren. Obwohl im Realfall meist
mehrere Mechanismen fr eine erfolgreiche Trennung verantwortlich sind [9], ist eine grobe
Klassifizierung nach den folgenden Trennmechanismen mglich:
Adsorption
Verteilung
Grssenausschluss
Affinitt
Ionenaustausch
Ionenpaarbildung
Ionenausschluss
Die Adsorptionschromatographie ist definiert durch Grenzflchenreaktionen, bei denen flssige
oder gasfrmige Stoffe an einer festen Phase angereichert werden. Zur qualitativen und quantitativen
Beschreibung von Adsorptionsprozessen existieren verschieden Modelle, wobei an dieser Stelle auf
die einschlgige Literatur der Physikalischen Chemie verwiesen sei [19]. In der Anwendung lassen
sich zwei Ausfhrungstechniken unterscheiden. Bei der Normalphasen-Chromatographie ist die
stationre Phase meist ein Silicagel und damit wesentlich polarer als das Laufmittel
(Kohlenwasserstoffe). In der Umkehrphasenchromatographie (Reversed-Phase) sind die Verhltnisse
genau entgegengesetzt. Aus praktischen Grnden, welche vor allem die Handhabung der Eluenten
betreffen, wird heute fast nur noch die RPC eingesetzt [3,9].
Bei der Verteilungschromatographie ist die stationre Phase eine mit der mobilen Phase nicht
mischbare Flssigkeit. Die Trennung beruht auf den unterschiedlichen Lslichkeiten der Analyten in
beiden Phasen. Dabei gilt im Idealfall das Nernstsche Verteilungsgesetz. Dieser Trennmechanismus
spielt vor allem in der Gaschromatographie eine bedeutende Rolle, wenn mit Trennflssigkeiten
beschichtete Kapillaren als stationre Phasen verwendet werden. Verteilungschromatographie kann
auch in der HPLC vorliegen, wenn mit unpolaren Kohlenwasserstoffen modifizierte Silicagele, z.B.
sogenannte Octadecyl-Phasen, als Trennmaterialien zum Einsatz kommen.
Die Grssenausschlusschromatographie, auch Size-Exclusion-Chromatography (SEC) genannt,
ermglicht eine Trennung nach der Moleklgrsse aufgrund von Siebeffekten. Als stationre Phasen
werden Silicagele oder organische Polymerharze mit definierter Porenstruktur verwendet. Kleinere
Analyten knnen in die Poren diffundieren und werden retardiert. Mit zunehmender Moleklgrsse
wird eine Wechselwirkung mit den Poren immer unwahrscheinlicher, bis ab einer bestimmten Grsse
Molekle ganz ausgeschlossen werden und praktisch im Totvolumen eluieren. Die SEC findet vor
allem in der Polymer- und Bioanalytik breite Anwendung.
Die Affinittschromatographie ermglicht die Trennung von Stoffgemischen durch selektive oder
spezifische Wechselwirkungskrfte. Vor allem bei Enzymen und ihren Substraten beobachtet man
hochspezifische Wechselwirkungen, ebenso zwischen Antikrpern und Antigenen (Schlssel-Schloss-
Prinzip). In der Praxis werden Enzyme oder Antikrper auf einer stationren Phase chemisch
immobilisiert. Befindet sich nun ein entsprechendes Substrat oder Antigen in der Probe, so wird dieses
mit extremer Selektivitt retardiert. Daher ist die Bioaffinittschromatographie im Bereich der
Wirkstoffanalytik (Pharmakologie) ein unverzichtbares Verfahren.
Die Ionenaustauschchromatographie (IC) wird ebenso wie die Ionenpaar- und
Ionenausschlusschromatographie im folgenden Kapitel ausfhrlich behandelt.
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
geladenes Gegen-Ion in der Nhe der funktionellen Gruppe. Das Gegen-Ion stammt in der Regel aus
dem Laufmittel und wird deshalb auch als Eluent-Ion bezeichnet.
Wird eine Probe aufgegeben, die zwei Analyt-Ionen A- und B- enthalten, so verdrngen diese
kurzzeitig die Eluent-Ionen E- und werden an der fixierten Ladung zurckgehalten, bevor sie ihrerseits
wieder durch das Eluent-Ion ausgetauscht werden. Fr die Anionenchromatographie ergeben sich
damit folgende reversiblen Gleichgewichte:
Durch die unterschiedlichen Affinitten von A- und B- zu den funktionellen Gruppen ist eine Trennung
der Komponenten mglich. Die Gleichgewichtskonstante K wird auch Selektivittskoeffizient genannt
und berechnet sich fr das Anion A- wie folgt:
[Harz - N + R 3 A ] [E ] [A ] S [E ] M
KA = = (17)
[Harz - N + R 3 E ] [A ] [E ] S [A ] M
Unter der Voraussetzung, dass die Konzentration der Eluent-Ionen normalerweise um mehrere
Grssenordnungen hher ist als die der Analyt-Ionen, kann [E-] in mobiler und stationrer Phase als
konstant betrachtet werden. Damit lassen sich der Verteilungskoeffizient DA (Gleichung 1) und der
Retentionsfaktor kA (Gleichung 4) berechnen. Derartige Berechnungen sind aber strenggenommen
nur dann zulssig, wenn die Konzentrationen in Gleichung 17 den Aktivitten entsprechen, was nur
bei unendlicher Verdnnung der Fall ist [19]. Die Aktivitten der Ionen in der stationren Phase sind
prinzipiell nicht zugnglich [4]. Fr die am hufigsten eingesetzten Ionenaustauscher geringer
Kapazitt, die nur mit sehr verdnnten Elektrolyten als Laufmittel verwendet werden knnen, behilft
man sich mit der Vernachlssigung der Aktivitten. Diese sehr grobe Nherung trifft fr
Packungsmaterialien mit hherer Kapazitt (> 200 mMol/g) und konzentriertere Eluenten nicht mehr
zu, bei denen sich deutliche Abweichungen vom idealen Verhalten zeigen.
khv 16 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
khv 17 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Das Gleichgewicht lsst sich nach dem Massenwirkungsgesetz durch eine thermodynamische
Gleichgewichtskonstante beschreiben. Man erhlt bei Bercksichtigung der Aktivitten der beteiligten
Ionen die folgende thermodynamische Gleichgewichtskonstante:
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
[A Sx ] y [E My ] x A Sx EMy
y x
K A,E = (19)
[A Mx ] y [E Sy ] x yA x Ex y
M S
Die Aktivitten der beteiligten Ionen in stationrer und mobiler Phase werden mangels Bestimmbarkeit
in der stationren Phase im allgemeinen vernachlssigt und gleich Eins gesetzt.
Fhrt man nun fr das Analyt-Anion Ax- zwei aus Kapitel 3.2.1 bekannte Grssen ein, den
Verteilungskoeffizienten DA und den Retentionsfaktor kA .
[A] S VS
DA = mit k' A = D A (20)
[A] M VM
so lsst sich Gleichung 19 durch diese Beziehungen und unter Vernachlssigung der Aktivitten
umformen zu:
y x
V [E My ]
K A,E = k' A M y (21)
VS [E ]
S
Da die Konzentration der Eluent-Ionen E im Regelfall um mehrere Zehnerpotenzen grsser ist als die
der Analyt-Anionen Ax-, kann man in guter Nherung annehmen, dass alle funktionelle Gruppen mit Ey-
belegt sind. Die nicht bestimmbare Konzentration von Ey- in der stationren Phase lsst sich unter
dieser Annahme durch die leichter zugnglichen Parameter Austauschkapazitt Q und Ladung des
Eluent-Anions y ersetzen:
Q
[E Sy ] = (22)
y
y x
V Q
K A,E = k 'A M [E My ] x
(23)
VS y
Der Retentionsfaktor kA des Analyt-Anions Ax- ist aus einem Chromatogramm leicht zugnglich.
Gleichung 23 wird daher nach dieser Grsse aufgelst.
x
1 x
V Q y
k = S (K A,E )
'
A
y
[E My ] y (24)
VM y
Diese Gleichung ist von entscheidender Bedeutung fr die Anionenchromatographie, da durch sie ein
quantitativer Zusammenhang zwischen dem Retentionsfaktor kA und einigen experimentell
zugnglichen Parametern wie der Konzentration des Eluenten und der Austauschkapazit hergestellt
wird. In der Praxis arbeitet man aus Grnden der bersicht mit der logarithmierten Form der
Gleichung 24.
1 x Q x VS
log k' A = log K A,E + log + log log [E My ] mit = (25)
y y y y VM
khv 19 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Q
k' A (26)
[E My - ]
Aus Gleichung 26 ist ersichtlich, dass bei einer Steigerung der Austauschkapazitt Q die
Konzentration des Eluenten [Ey-] proportional erhht werden muss, damit konstante
Retentionsfaktoren erreicht werden. Dies ist der Grund, warum in der Ionenchromatographie
blicherweise niederkapazitive Trennphasen verwendet werden, da hohe Elektrolytkonzentrationen
die wichtigste Detektionsmethode in der Ionenchromatographie, die Leitfhigkeitsdetektion, praktisch
unmglich machen.
Zur Optimierung von Trennproblemen wird oft die Eluentenkonzentration [E y-] variiert. Werden alle
anderen in Gleichung 25 auftretenden Parameter konstant gehalten, vereinfacht sich diese zu:
x
log k' A = C1 log [E My ] (27)
y
Die graphische Auftragung der Gleichung 27 ergibt eine Gerade mit der Steigung m = - x/y und dem
Achsenabschnitt C, der die Grssen Q, und KA,E enthlt. Bei Verwendung monoanionischer
Eluenten wird m auch als effektive Ladung bezeichnet. Abbildung 10 stellt schematisch das Ergebnis
der Gleichung 27 fr verschiedene Kombinationen unterschiedlich geladener Eluent- und Analyt-
Anionen dar.
khv 20 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
x Q
log k' A = C + log (28)
y y
Die graphische Darstellung dieser Gleichung hnelt Abbildung 10, allerdings mit positiven
Geradensteigungen. Chromatographische Untersuchungen zur Variation von Q wurden bisher nur
einmal bei der Trennung von divalenten Kationen durchgefhrt. Dabei zeigte sich, dass im Gegensatz
zu den bisherigen Annahmen der Retentionsfaktor und auch die Selektivittskoeffizienten nicht
unabhngig von der Austauschkapazitt betrachtet werden knnen. Es wird deutlich, dass zur
Optimierung von Trennproblemen neben der Konzentration des Eluenten [E y-] auch die
Austauschkapazitt Q eine wichtige Grsse darstellt.
Die bisherigen Betrachtungen gelten nur fr ein Analyt-Anion. Konkurrieren dagegen zwei
unterschiedliche Anionen Ax und Bz um die funktionellen Gruppen, so gilt fr den
Selektivittskoeffizienten KA,B:
[A Sx ] z [B Mz ] x
K A,B = (29)
[A Mx ] z [A Sz ] x
k' A [A Sx ] [B Mz ]
A,B = = (30)
k' B [A Mx ] [B Sz ]
1 xz k' V
log A.B = log K A,B + log B M (31a)
z z VS
1 xz k' V
log A.B = log K A,B + log A M (31 b)
x z VS
die sich fr gleichgeladene Analyten (x = z) vereinfachen zu:
1 1
log A,B = log K A,B (32) bzw. log A,B = log K A,B (33)
z x
Fr die Selektivitt zwischen zwei gleichgeladenen Analyt-Anionen bedeutet dies:
sie ist nur eine Funktion des Selektivittskoeffizienten KA,B und der Ladungen z bzw. x,
sie hngt bei konstantem KA,B weder von der Konzentration [E y-] noch von der chemischen
Beschaffenheit des Eluent-Anions ab (!)
Bei unterschiedlichen Ladungen von A und B ergibt sich:
hngt vom Retentionsfaktor einer der beiden Analyten ab,
die beiden Retentionsfaktoren kA und kB sind nicht unabhngig voneinander (!)
An den Gleichungen 31 bis 33 ist besonders bemerkenswert, dass die Selektivitten zweier Anionen
zunchst weder von der chemischen Beschaffenheit noch von der Ladung des Eluent-Anions abhngt,
solange das Phasenvolumenverhltnis und der Selektivittskoeffizient konstant sind. In der Praxis
lsst sich aber dennoch eine Vernderung von durch die Variation von [E y-] erreichen, da sich zwei
Analyten trotz gleicher Ladung deutlich in ihren chemischen Eigenschaften, z.B. Polarisierbarkeit und
Hydratation, unterscheiden knnen, was unterschiedliche Affinitten zur stationren Phase zur Folge
hat. Diese Wechselwirkungen werden aber in der klassischen Ableitung nicht bercksichtigt.
khv 21 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
A M + H 2PS A S + H 2 PM ; x1 (34)
A M + 1
2
HPS2 A S + 1
2
HPM2 ; x2 (35)
A M + 1
3
PS3 A S + 1
3
PM3 ; x3 (36)
Die Grssen x1..3 entsprechen dabei den Anteilen der jeweiligen Reaktionen an der Retention,
weshalb gilt:
x1 + x2 + x3 = 1 (37)
Sowohl das Modell des dominanten Gleichgewichtes als auch das der effektiven Ladung postulieren,
obwohl mehrere Spezies vorhanden sind, eine bestimmte Ladung fr das Eluent-Anion, so dass das in
Kapitel 4.1.1 fr monoanionische Eluenten abgeleitete Retentionsmodell verwendet werden kann.
Das Modell des dominanten Gleichgewichtes nimmt an, dass Gleichung 36 ganz auf der rechten
Seite liegt, da P3- aufgrund der hheren Ladung wesentlich strker als H2P- und HP2- an der
stationren Phase gebunden wird. Damit ist P3- allein fr die Elution massgeblich, so dass sich die
Ladung des Eluent-Anions zu -3 ergibt. Dieses Modell erzielt allerdings nur bei multivalenten Analyten
eine gute bereinstimmung mit der Praxis [4].
Beim Modell der effektiven Ladung wird unter Bercksichtigung des pH-Wertes aus den
Molenbrchen der mglichen Spezies H2P-, HP2- und P3- eine effektive Ladung berechnet [22]. Mit
dieser und den vorliegenden Konzentrationen der Eluentspezies lsst sich eine Beziehung analog
Gleichung 27 aufstellen. Voraussetzung fr derartige Berechnungen ist aber, dass sich die
Selektivitten der Eluent-Spezies bezglich des Analyt-Ions A- nicht wesentlich unterscheiden. Das
Modell der effektiven Ladung lsst sich vor allem bei monovalenten Analyten sinnvoll anwenden [4].
In der Realitt ist das Modell der vielfachen Eluentspezies zur Beschreibung von Eluenten, deren
Komponenten sich chemisch voneinander ableiten, am besten geeignet. Die folgenden Betrachtungen
basieren auf dem Modell von Mongay et al. [27], welches eine Weiterentwicklung der Arbeiten von
Jenke und Pagenkopf darstellt [25].
Aus den Gleichungen 34 bis 36 lsst sich das globale Gleichgewicht auf der Trennsule darstellen
(Gleichung 38). Unter Bercksichtigung von Gleichung 37 lsst sich bei Vernachlssigung der
Aktivitten die Gleichgewichtskonstante KA,P fr den Austauschprozess definieren (Gleichung 39).
khv 22 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
x1 x x
(x 1 + x 2 + x 3 ) A M + H 2 PS + 2 HP2 + 3 PS3 (38)
1 2 3
KA,P
x1 x x
(x 1 + x 2 + x 3 ) A S + H 2 PM + 2 HPM + 3 PM3
1 2 3
Die weitere mathematische Behandlung erfolgt wie bei der Ableitung des Retentionsmodells fr
monoanionische Eluenten. Bercksichtigt werden mssen vor allem:
Die (mgliche) Dissoziation des Analyt-Anions A
Die Gesamtkonzentration der Eluentspezies: cP = [H3P] + [H2P-] + [HP2] + [P3]
Das Ausmass der Wechselwirkungen der Eluentspezies mit den funktionellen Gruppen
Die Einfhrung des Retentionsfaktors kA (Gleichung 20) und der Kapazitt Q (Gleichung 22) liefert
nach weiterer mathematischer Umformung einen komplizierten Ausdruck fr kA [28], der hier nur in
seiner logarithmierten und weiter vereinfachten Form dargestellt wird:
x x x
log k' A = C 3 1 + 2 + 3 log c P (40)
1 2 3
C3 ist eine Konstante, die analog Gleichung 27 Grssen wie das Phasenvolumenverhltnis, die
Kapazitt und die Gleichgewichtskonstante enthlt, cP die Summe der Konzentrationen der
Eluentspezies. Aus Gleichung 40 lsst sich folgern, dass die Steigungen der Geraden bei einer
doppelt logarithmischen Auftragung immer kleiner sein mssen als nach dem einfachen
Retentionsmodell fr monoanionische Eluenten (Gleichung 27), da die Summe in der Klammer stets
kleiner als Eins ist. Weiterhin wird deutlich, dass der pH-Wert einen entscheidenden Einfluss auf das
Ausmass der Beeinflussung der log-log-Beziehung hat.
Fr Eluentspezies, die sich chemisch nicht voneinander ableiten, existiert ein Modell von Jano et al.,
welches zur Beschreibung von Eluenten entwickelt wurde, die einen Phosphatpuffer und zustzlich
Perchlorat enthalten [29]. Die Ableitung dieses Modells erfolgt analog den obigen berlegungen,
allerdings muss zustzlich ein Austauschgleichgewicht fr ein weiteres, monovalentes Eluent-Ion
betrachtet werden. Die Berechnungen liefern sehr komplizierte Ausdrcke fr den Retentionsfaktor,
die sich aber fr neutrale oder saure Eluenten drastisch vereinfachen lassen. Fr den Fall, dass neben
dem Perchlorat nur eine weitere monovalente Eluent-Spezies vorliegt, erhlt man Gleichung 41, in der
x und y die Beitrge der entsprechenden Gleichgewichtsreaktionen (x: Phosphatpuffer, y: Perchlorat)
an der Retention reprsentieren. C ist wie in den brigen Modellen eine Konstante, whrend der nicht
nher bestimmte Faktor a bercksichtigen soll, um wieviel strker das Perchlorat-Ion an der
stationren Phase gebunden wird als die betreffende Phosphat-Spezies.
x x
log k' A = C1 y + i log a y + i log [E - ] (41)
i i
Da die Klammerterme in Gleichung 41 stets kleiner als Eins sind, ist die Steigung in der log-log-
Auftragung immer geringer als nach dem einfachen Retentionsmodell zu erwarten. Das Modell liefert
im konkreten Anwendungsfall gute bereinstimmungen mit den experimentellen Daten. Es kann
allerdings in der beschriebenen Form nicht auf alkalische Elutionssysteme angewendet werden.
Phase Carbonsure-Gruppen als Funktionalitt. Bei der Trennung von zwei- und hhergeladenen
Metallionen kommt man um den Einsatz eines Komplexbildners nicht herum, dessen Einfluss auf die
Retention im Kapitel Retentionsmodell fr die Elution in Gegenwart von Komplexbildnern auf Seite
24 beschrieben wird.
x+ 2 x-2
mit K MeL =
[MeL ] x 2
Me + L MeL
[Me ][L ]x+ 2
(42)
[MeL ][L ] x -2 2
(43)
[MeL ][L ]
x 2 2
(44)
[Me ][HL ]
x+
(45)
khv 24 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Komplexierung des Analyten beschreibt, wird der M-Wert eingefhrt. Der Bruchteil M der freien
Analyt-Ionen in der mobilen Phase ist gegeben als
M =
[Me ] x+
=
[Me ] x+
[Me x+
] + [MeHL ] + [MeL ] + [MeL ] [Me']
x 1 x 2 x4
2
(45)
mit der Gesamtkonzentration [Me] der Metall-Ionen. Der M-Wert lsst sich aus den
Komplexbildungskonstanten, den Suredissoziationskonstanten der Carbonsure und dem pH-Wert
des Eluenten berechnen. Fr den Verteilungskoeffizienten DMe erhlt man unter Bercksichtigung der
Komplexbildung:
DMe =
[MeR x ] = [MeR x ]
[Me'] M
[Me x+ ] (46)
Setzt man voraus, dass nur freie Analyt-Ionen Mex+ mit den Carbon- oder Sulfonsure-Gruppen
wechselwirken und c(Ez+) >> c(H+), so ergibt sich fr Gleichung 21:
y x
k'
K Me, E = Me
Q
[E ]
y+ x
(47)
M y
1 x Q x
log k' Me = log M + log K Me,E + log + log log [E My + ] (48)
y y y y
Liegen nebeneinander mehrere kationische Metall-Spezies vor, z. B. Mex+ und MeHL(x-1)+, resultiert
daraus im Chromatogramm in der Regel jedoch nur ein Peak fr den betreffenden Analyten. Die
Anzahl der auftretenden Peaks ist abhngig von der Kinetik der Komplexierungs- und
Dekomplexierungs-Gleichgewichte in der mobilen Phase. Man erhlt nur einen Peak fr den Fall, dass
sich die Komplexgleichgewichte in der mobilen Phase schnell einstellen im Vergleich zur
Aufenthaltszeit des Komplexes in der stationren Phase. Verluft die Umkomplexierung hingegen nur
langsam, knnen asymmetrische oder multiple Peaks auftreten.
Unter der Annahme, dass alle in der mobilen Phase vorliegenden Metall-Spezies mit der stationren
Phase wechselwirken knnen, ergibt sich fr den experimentell bestimmten Kapazittsfaktor kexp des
Analyten:
Bei der Betrachtung der Abhngigkeit des Kapazittsfaktors von den Einflussgrssen Q, [Ey+] sowie
M wird jedoch der in Gleichung 48 dargestellte Zusammenhang zugrunde gelegt, da die divalenten
Analyten mit starken Komplexbildnern berwiegend neutrale oder anionische Komplexe bilden.
khv 25 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
M =
[Me ] 2+
1
[Me 2+
] + [MeL ] + [MeHL ] = 1 + K +
MeL L c L + K MeHL HL c L
(50)
wobei cL die Gesamtkonzentration der Weinsure und HL sowie L die Molenbrche der Sure-
Anionen HL- und L2- sind.
Mit Oxalsure und/oder Pyridindicarbonsure bilden einige Metall-Ionen neben den 1:1-Komplexen
auch stabile MeL22--Komplexe, so dass sich M wie folgt berechnet:
M =
[Me ] 2+
=
1
[Me ] + [MeL] + [MeL ]
2+ 2
2 1 + K MeL L c L + K MeL K MeL 2 L c L
2 2
(51)
[HL ]
(53)
mit den Surekonstanten KS1 und KS2 . Die zur Berechnung des M-Wertes verwendeten
Molenbrche H 2 L , HL sowie L ergeben sich aus den Massenwirkungsgesetzen der einzelnen
Deprotonierungsschritte:
H2L =
[H2L] =
[H ] + 2
HL =
[HL ] =
K S1 H + [ ]
[H L] + [HL ] + [L ] [H ]
(55)
2
2 + 2
+ K S1 [H ] + K
+
S1 K S2
L =
[L ] 2
=
K S1 K S2
[H L] + [HL ] + [L ] [H ]
(56)
2
2 + 2
[ ]
+ K S1 H + + K S1 K S2
Allgemein werden selektive und nicht selektive Detektoren unterschieden. Whrend ein selektiver
Detektor direkt auf eine Eigenschaft des Analyten anspricht, reagieren unselektive Detektoren auf eine
durch den Analyten hervorgerufene nderung einer physikalischen Eigenschaft des gesamten
Elutionssystems. Da sich die Detektoren zur Verwendung mit der Ionenchromatographie im Prinzip
nicht von denen fr die konventionelle HPLC unterscheiden, werden die wichtigsten
Detektionssysteme in diesem Abschnitt zumindest angesprochen. Der universellste und
gebruchlichste Detektor in der IC ist der Leitfhigkeitsdetektor.
Leitfhigkeitsdetektion
Die Leitfhigkeitsdetektion oder auch konduktometrische Detektion hat in der Ionenchromatographie
einen Anteil von etwa 55 % [4]. Aus Sicht der verkauften Ionenchromatographen drfte dieser Anteil
heute noch wesentlich hher liegen. Die Leitfhigkeitsdetektion ist ein unselektives Detektionsprinzip,
wobei auch in diesem Fall direkte und indirekte Bestimmungen mglich sind. Da in der
Ionenchromatographie wssrige Elektrolyte als Laufmittel verwendet werden, muss der Detektor auf
die relativ geringe, durch die Analyt-Ionen verursachte Vernderung der Gesamtleitfhigkeit des
Eluenten ansprechen. Durch die Verwendung sogenannter Suppressionstechniken kann die
Eigenleitfhigkeit bestimmter Eluenten drastisch reduziert werden, wodurch im Falle der starken
Sureanionen eine deutliche Empfindlichkeitssteigerung erreicht wird.
Die Leitfhigkeit einer Lsung wird messtechnisch als Kehrwert des Widerstandes R bestimmt, den
eine Lsung zwischen zwei Elektroden der Flche A und des Abstandes L verursacht.
=L/AR (57)
=/c (58)
Die Grenzleitfhigkeit und die Abhngigkeit der Leitfhigkeit von der Konzentration kann anhand
der Gleichung 59 ermittelt werden. Die Konstanten A und B sind empirische Stoffkonstanten.
= - (A + B ) c (59)
- +
Die Leitfhigkeit eines Elektrolyten setzt sich additiv aus den Ionenleitfhigkeiten Anion und Kation
zusammen
- +
= c (Anion- + Kation+) (60)
khv 27 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
=
i ci
(61)
1000
wobei die Leitfhigkeit in S cm-1, die Grenzleitfhigkeit in S cm2 (z mol L-1)-1 und c die
Konzentration in z mol L-1 (z entspricht der Ladung des Ions) ist. Der Faktor 1000 resultiert daraus,
dass 1 Liter 1000 cm3 entspricht.
Die Leitfhigkeitsnderung durch den Analyten ist proportional zu dessen Konzentration im Effluat.
=
( S E ) c S (62)
1000
wobei S und E fr die Analyt- bzw. Eluent-Ion steht. Da bei der Leitfhigkeitsdetektion die nderung
der Leitfhigkeit gemessen wird, treten in der Anionenchromatographie bei hohen Grundleitfhigkeiten
nur geringe Leitfhigkeitsnderungen auf. Es ist daher meist gnstig, die Grundleitfhigkeit mglichst
gering zu halten.
Abbildung 13 Verlauf der Leitfhigkeit des Eluates einer ionenchromatographischen Trennung eines
Mehrstoffgemisches. Gezeigt sind die Verlufe fr einen Eluenten mit hoher (rot) bzw. niedriger (blau)
Leitfhigkeit
Die Leitfhigkeit eines Eluates in der Ionenchromatographie kann entweder direkt oder nach
Durchlaufen eines Suppressors bestimmt werden. Diese Varianten werden auch als Ein- bzw.
Suppressortechnik bezeichnet. Welche der beiden Ausfhrungsformen zu bevorzugen ist, kann
anhand von berschlagsrechnungen ermittelt werden.
Verwendet man im Bereich der Anionenchromatographie die direkte Leitfhigkeitsdetektion, so erhlt
man fr Empfindlichkeit der Bestimmung Peak ausgedrckt als Differenz zwischen der Leitfhigkeit
von Analyt und Eluentanion fr den Fall Chlorid als Analyt und Carbonat als Eluent-Anion folgende
Gleichungen:
- -
Peak cAnalyt (Cl- - CO 2- ) Peak cAnalyt (76 - 72)
3
Peak cAnalyt 4
Wird der Eluent an die Bedrfnisse der direkten Leitfhigkeitsdetektion angepasst, so erhlt man fr
das obige Beispiel durch Ersatz des Carbonat-Eluenten durch einen Phthalat-Eluenten folgende
Empfindlichkeit:
- -
Peak cAnalyt (Cl- - Phthalat2- ) Peak cAnalyt (76 - 38)
Peak cAnalyt 38
khv 28 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Im Fall der chemischen Suppression der Leitfhigkeit des Eluenten ist die Empfindlichkeit des
Verfahrens nur noch durch die quivalentleitfhigkeit der zu detektierenden Substanz bestimmt. Im
Fall von Cl- gilt dann:
- +
Peak cAnalyt (Cl- + H+ ) Peak cAnalyt (76 + 350)
Aus obigen berschlagsrechnung folgt fr Anionen, dass die direkte Leitfhigkeitsdetektion um den
Faktor 10 unempfindlicher ist als die Leitfhigkeitsdetektion nach chemischer Suppression.
Fr die Kationenchromatographie ergibt sich analog die folgende berschlagsrechnung, wobei als
Analyt Na+ und als Eluent H+ eingesetzt wird. Im Fall der direkten Leitfhigkeitsdetektion (HCl/NaCl)
gilt
+ +
Peak cAnalyt ( Na+ - H+ ) Peak cAnalyt (50 350)
Bei chemischer Suppression der Leitfhigkeit des H+-Ions durch Umsatz zu Wasser gilt:
+ -
Peak cAnalyt ( Na+ + OH-) Peak cAnalyt (76 + 198)
Damit ergibt sich fr die direkte Leitfhigkeitsdetektion von Kationen eine hhere Empfindlichkeit als
fr die Leitfhigkeitsdetektion nach chemischer Suppression.
khv 29 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
dient, die zweite regeneriert und die dritte mit Wasser gesplt wird. Nach Ablauf einer Analyse wird
der Revolver um 120o gedreht und die zuvor gesplte Sule wird als Suppressor benutzt. Auf diese
Weise wird eine quasi-kontinuierliche Arbeitsweise ermglicht.
Eluat
H2SO4 Wasser
1 3 2
Waste Waste
Detektor
H2SO4 Abfall
Detektor Eluat
Ionenaustausch-
Membran
H2SO4 Abfall
Amperometrische Detektion
Voltammetrische Detektoren knnen im Prinzip auf alle Verbindungen angewendet werden, die leicht
reduzierbare oder oxidierbare funktionelle Gruppen tragen. Der amperometrische Detektor ist die
wichtigste Variante. Bei ihm wird zwischen einer Arbeits- und einer Referenzelektrode eine bestimmte
Spannung angelegt. Passiert nun ein elektrochemisch aktiver Analyt die Messstrecke, dessen
Halbstufenpotential so liegt, dass bei der angelegten Spannung eine Reduktion oder Oxidation
abluft, fliesst ein Strom, der das Messsignal darstellt. Die Amperometrie ist sehr empfindlich, wobei
der Stoffumsatz nur etwa 10 % betrgt. Im Bereich der Ionenanalytik lassen sich neben einigen
Kationen (Fe3+, Co2+) vor allem Anionen wie Nitrit, Nitrat, Thiosulfat sowie Halogene und
Pseudohalogene bestimmen. Die wichtigsten Anwendungsflle liegen jedoch in der Analytik von
Zuckern mittels Anionenchromatographie und in der klinischen Analytik. Der coulometrische
Detektor liefert aufgrund einer anderen Arbeitsweise einen quantitativen Stoffumsatz, woraus
allerdings keine gesteigerte Empfindlichkeit resultiert.
Potentiometrische Detektion
Bei der potentiometrischen Detektion wird mit ionensensitiven Elektroden gearbeitet, die teilweise
eine sehr hohe Selektivitt besitzen. Die Sensoren mssen trotz ihrer notwendigen starken
Miniaturisierung zuverlssig arbeiten knnen, was in der Praxis immer noch Probleme bereitet. Daher
bleibt die Anwendung der potentiometrischen Detektion, insbesondere in der Ionenchromatographie,
bisher auf wenige Spezialflle beschrnkt.
khv 30 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Photometrische Detektion
Die photometrische oder UV/VIS-Detektion ist aufgrund ihres sehr grossen Anwendungsbereiches
in der HPLC die wichtigste Detektionsvariante, da nahezu alle organischer Molekle ber
chromophore Gruppen verfgen, die im UV- oder im VIS-Bereich zu absorbieren vermgen.
Voraussetzung ist, dass der verwendetet Eluent im betreffenden Wellenlngenbereich keine
Absorption zeigt. Bei einer direkten Detektion im Absorptionsmaximum eines Analyten ist die UV/VIS-
Detektion praktisch selektiv. Substanzen, die im betrachteten Wellenlngenbereich nur eine geringe
oder gar keine Absorption zeigen, knnen indirekt bestimmt werden, indem man im
Absorptionsmaximum des Elutionssystems misst. Im Bereich der Analytik anorganischer Ionen spielt
die UV/VIS-Detektion eine geringere Rolle. Whrend von den einfachen Anionen nur Analyten wie
Nitrat, Bromid oder Iodid absorbieren, sind wichtige Analyten wie Fluorid, Sulfat oder Phosphat nur
indirekt zugnglich [4]. Viele Kationen absorbieren berhaupt nicht, aber insbesondere multivalente
und bergangsmetalle knnen in einer Nachsulenderivatisierung mit Chelatbildnern wie 4-(2-
Pyridylazo)-Resorcinol (PAR) oder Tiron umgesetzt werden, wodurch farbige Komplexe entstehen.
Redoxaktive Analyten wie Bromat und andere Oxohalogenid-Ionen knnen durch eine
Nachsulenreaktion mit einem elektrochemisch aktiven Indikator der UV/VIS-Detektion zugnglich
gemacht werden.
Fluoreszenzdetektion
Die Fluoreszenzdetektion ist sehr empfindlich und immer dann mglich, wenn Analyten zur
Fluoreszenz angeregt werden knnen, was vor allem bei organischen Verbindungen mit
ausgedehnten -Elektronensystemen der Fall ist. Typische Anwendungen liegen daher im Bereich der
medizinischen bzw. organischen Analytik. Im Zusammenhang mit der Ionenchromatographie wird die
Fluoreszenzdetektion in einigen Spezialfllen angewandt, da nur besondere Ionen wie Ce3+ direkt
zugnglich sind und nicht fluoreszierende Ionen erst nach einer Derivatisierung detektiert werden
knnen. Die Entwicklung von Elutionssystemen fr diese Detektionsmethode ist wegen ihrer starken
Anflligkeit gegen Strungen durch Verunreinigungen sehr schwierig. Weiterhin ist der lineare Bereich
des Verfahrens aufgrund von Selbstabsorptionseffekten mit oft weniger als 2 Grssenordnungen recht
gering.
Kopplungstechniken
Die sogenannten Kopplungstechniken stellen die Verbindung eines chromatographischen Systems
mit einer eigenstndigen Analysenmethode, zumeist spektrometrische Verfahren, dar [3]. Diese
Verfahren haben in den letzten Jahren deutlich an Bedeutung gewonnen. Whrend im Bereich der
Gaschromatographie Kopplungen mit der Massenspektrometrie (GC-MS) wohl etabliert sind, bereitet
die Kopplung der HPLC mit spektrometrischen Verfahren grssere technische Probleme. Fr die
klassische HPLC, also der Analytik von organischen Verbindungen, stehen heute Kopplungen mit der
Massenspektrometrie (LC-MS), der IR-Spektroskopie (LC-FTIR) und der Kernresonanzspektroskopie
(LC-NMR) zur Verfgung [3]. Fr die Ionenchromatographie (IC) finden insbesondere leistungsfhige
atomspektrometrische Detektoren Verwendung. Beispiele sind die Atomemission und die
Massenspektrometrie mit dem induktiv gekoppelten Plasma (IC-ICP-AES, MS), welche aufgrund ihrer
Elementspezifitt und Empfindlichkeit ausgezeichnete Leistungsdaten liefern. Daher werden solche
Kopplungen trotz der vergleichsweise hohen Anschaffungskosten im Bereich der Spezies- und
Ultraspurenanalytik von Elementen angewendet.
Refraktometrie
Die Differentialrefraktometrie ist eine weitere auf einem optischen Verfahren beruhende
Detektionsmethode. Dieser Detektor wird auch RI-Detektor genannt (engl. Refractive Index). Er ist
vllig unspezifisch und kann universell eingesetzt werden, da die Messgrsse eine vom Analyten
bewirkte nderung des Brechungsindex des reinen Eluenten ist. Allerdings resultiert daraus auch
aufgrund der starken Temperaturabhngigkeit des Brechungsindex eine grosse Anflligkeit gegenber
Strungen. Das Verfahren ist, absolute Temperaturkonstanz vorausgesetzt, ber drei
Grssenordnungen linear. Da einfache anorganische Ionen einen extrem niedrigen Brechungsindex
besitzen, knnen diese nur indirekt unter Verwendung eines mit stark brechenden Verbindungen
versetzten Eluenten bestimmt werden.
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Ionenaustauscher
Silicagele Polymerharze
polymer- oberflchen -
beschichtet funktionalisiert
makropors mikropors
mechanische
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
polar. Dieser Umstand ist in der IC von Vorteil, da polarere Trennphasen weniger zu sekundren
Wechselwirkungen wie Adsorption neigen.
Der grsste Vorteil der organischen Polymerharze liegt in ihrer grossen chemischen Stabilitt ber
den gesamten pH-Bereich. Ihre chromatographische Effizienz ist nach anfnglichen Problemen im
Bereich der Silicagele einzuordnen. Bei MMA-Phasen muss allerdings mit einer eingeschrnkten
mechanischen Stabilitt gerechnet werden, die die Lnge der zu verwendenden Trennsule oder die
maximal mgliche Flussrate des Eluenten begrenzt.
In der Ionenchromatographie werden heute zwei prinzipiell unterschiedlich aufgebaute Arten von
stationren Phasen verwendet, die oberflchenfunktionalisierten und die pellikularen
Ionenaustauscher. Bei den ersteren sind die funktionellen Gruppen direkt auf der Polymeroberflche
oder in den Poren lokalisiert, whrend bei den pellikularen Materialien sehr kleine, ebenfalls
oberflchenfunktionalisierte Partikel an grssere Kernteilchen gebunden sind [4]. Die Bindung kann
mechanisch oder durch hydrophobe bzw. elektrostatische Wechselwirkungen erfolgen. Abbildung 17
zeigt schematisch den Aufbau beider Typen von Packungsmaterialien am Beispiel von
Anionenaustauschern.
N+R3
Bindungs-
N+R3 + material R3+N N+R3
+
N R3
R3 N
R3+N N+R3
+
N R3 R3+N N+R3
aminiertes N+R3
Latexparikel
a) b)
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
speziellen Anwendungen wie der Protein-Analytik oder Anreicherungstechniken kommen aber auch
schwach basische Materialien zum Einsatz.
Die beiden wichtigsten funktionellen Gruppen in der Anionenchromatographie leiten sich vom
Trimethylamin (TMA) und Dimethylethanolamin (2-Dimethylaminoethanol, DMEA) ab. Praktisch alle
kommerziell verfgbaren Trennmaterialien verwenden eine dieser Gruppen. TMA-Gruppen werden in
der Literatur auch als Typ I, DMEA-Gruppen als Typ II bezeichnet. Weitere Funktionalitten, die mit
den beiden erstgenannten in enger Beziehung stehen, sind in der Abbildung 18 gezeigt:
Abbildung 18 bersicht ber die wichtigen bzw. in Rahmen dieser Arbeit verwendeten funktionellen
Gruppen
TMA: Trimethylamin (Typ I) DEMA: Diethanolmethylamin
EDMA: Ethyldimethylamin TEA: Triethanolamin
DMEA: Dimethylethanolamin (Typ II)
Bei kommerziellen Materialien, die sich ohnehin meist vom Typ I oder II ableiten, ist der genaue
Aufbau der funktionellen Gruppe ein gut gehtetes Geheimnis [4].
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
dynamischen (effektiven) Kapazitt versteht man dagegen die Zahl der funktionellen Gruppen, die
tatschlich whrend eines chromatographischen Prozesses zur Verfgung steht. Sie wird immer
kleiner sein als die statische Kapazitt [2,4].
Die Austauschkapazitt lsst sich auf verschiedene Arten bestimmen [33]:
volumetrisch bzw. titrimetrisch
durch Elementaranalyse
ber die Bestimmung von Retentionszeiten
Alle Verfahren werden bei demselben Material unterschiedliche Werte fr Q liefern. In der Praxis
werden volumetrische Verfahren am hufigsten angewendet. Bei Anionenaustauschern wird dabei
eine gepackte Trennsule oder eine definierte Menge an Harz z.B. mit einer Chlorid-Lsung beladen.
Nach Auswaschen der Chlorid-Reste kann mit Nitrat eluiert werden. Die eluierte Menge an Chlorid,
welche der statischen Austauschkapazitt unter Gleichgewichtsbedingungen entspricht, wird dann mit
einer AgNO3-Lsung titriert und quantifiziert.
Die pH-Abhngigkeit von Anionenaustauschern ist meist zu vernachlssigen. Bei
Kationenaustauschern ist die Kapazitt der schwach sauren Carbonsure-Gruppen (R-COOH) nur bei
hheren pH-Werten gegeben (Deprotonierung), whrend die stark sauren Sulfonsure-Gruppen (R-
SO3H) stets vollstndig deprotoniert vorliegen und eine pH-unabhngige Kapazitt liefern.
Im Zusammenhang mit den Retentionsmodellen (Kapitel 3.4) ist die Bedeutung von Q fr die Auswahl
von Elutions- und Detektionssystemen deutlich geworden. Die universelle Leitfhigkeitsdetektion war
mit Eluenten hoher Ionenstrke praktisch nicht zu realisieren, gleichgltig welche speziellere Technik
angewendet wurde. Dies ist der Grund, warum seit Einfhrung der Ionenchromatographie 1975 fast
nur niederkapazitive Trennsulen verwendet werden. Hochkapazitive Ionenaustauscher sind in der IC
bisher nur in Verbindung mit Detektionstechniken beschrieben worden, die nicht so stark vom
Elutionssystem limitiert werden, wie etwa die UV/VIS-Detektion [2,4].
Whrend niederkapazitive Trennmaterialien recht gut zur Analytik von Proben geringer Ionenstrke,
also geringer Matrixbelastung, geeignet sind, erreichen sie bei hohen Ionenstrken schnell ihre
Grenzen. Aufgrund ihrer geringen Anzahl an funktionellen Gruppen kommt es zu berladungseffekten
und damit zur Peakdeformation und einem drastischen Einbruch der Effizienz. Auch treten Probleme
auf, wenn die Analyten in sehr unterschiedlichen Konzentrationsverhltnissen vorliegen, was im
Bereich der Ultraspurenanalytik nahezu immer der Fall ist.
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
3.7.1 Anionenchromatographie
Einsulentechnik
Bei der Einsulentechnik, welche durch Gjerde und Mitarbeiter 1979 in der Ionenchromatographie
etabliert wurde [33], ist der Ausgang einer Trennsule direkt mit einem Detektor verbunden, was dem
klassischen Aufbau einer HPLC-Apparatur entspricht. In Abgrenzung zur zweiten prinzipiellen Variante
der IC wird diese Technik auch als Nicht-Suppressierte-Ionenchromatographie bezeichnet. Der die
Trennsule verlassende Eluent und die darin enthaltenen Analyten werden chemisch nicht verndert.
Die Anzahl mglicher Elutionssysteme der unterschiedlichsten chemischen Natur ist praktisch
unbegrenzt. Zu bercksichtigen ist, vom eigentlichen Trennproblem abgesehen, lediglich die
Kompatibilitt des Eluenten mit dem Detektor. Wenn z.B. die direkte UV-Detektion angewendet
werden soll, darf der Eluent nicht im betreffenden Spektralbereich absorbieren. Bezglich der
Detektionsmethoden gibt es bei der Einsulentechnik keine Beschrnkungen, so dass im Prinzip alle
gngigen HPLC-Detektoren Verwendung finden knnen.
Fr niederkapazitive Anionenaustauscher (Q < 100 Mol/Trennsule) stehen fr die Einsulentechnik
eine ganze Reihe von Eluenten unterschiedlicher chemischer Natur zur Verfgung. Die Konzentration
der Eluenten liegt dabei blicherweise im unteren mMol/kg-Bereich oder noch darunter. Verwendet
werden knnen unter anderem die unten genannten Substanzklassen [4]. Daneben knnen in
spezielleren Fllen auch Komplexbildner wie EDTA oder Borat-Mannitol-Komplexe zum Einsatz
kommen.
Aromatische Carbonsuren
Aliphatische Carbonsuren
Sulfonsuren
Alkalihydroxide
Anorganische Suren wie H2SO4, HCl oder H3PO4
Die wichtigste Verbindungsklasse stellen die aromatischen Carbonsuren und ihre Salze dar. Die am
hufigsten verwendeten Vertreter sind in Abbildung 19 dargestellt.
Abbildung 19 Strukturen der wichtigsten aromatischen Carbonsuren zur Verwendung mit der
Einsulentechnik.
Diese Substanzklasse findet deshalb so starke Verwendung, da die Lsungen der Suren und deren
Salze eine sehr hohe Elutionskraft bei relativ geringer Eigenleitfhigkeit besitzen, so dass sie zur
direkten LF-Detektion eingesetzt werden knnen. Bei den mehrbasigen Suren kann die Ladung und
damit die Elutionskraft ber den pH-Wert gesteuert werden. Dieser muss allerdings sehr exakt
eingehalten werden. Aromatische Carbonsuren besitzen eine hohe Absorption im UV-Bereich, so
dass sie auch vorteilhaft mit der indirekten UV/VIS-Detektion angewendet werden knnen.
Fr aromatische Sulfonsuren wie p-Toluolsulfonsure gelten im Prinzip die gleichen Aussagen,
wobei diese aber immer deprotoniert vorliegen und daher keine Pufferkapazitt besitzen. Ihre
Elutionskraft lsst sich nur ber die Konzentration steuern.
Aliphatische Carbonsuren wie Oxalsure und Citronensure zeigen hohe Eigenleitfhigkeiten, sind
aber UV-transparent, so dass sie mit der direkten UV/VIS-Detektion eingesetzt werden. Dies gilt
ebenso fr aliphatische Sulfonsuren, von denen Methansulfonsure am hufigsten verwendet wird.
Die hheren Homologen beider Verbindungsklassen bieten aufgrund ihrer langen
Kohlenwasserstoffketten und der damit verbundenen geringen Equivalentleitfhigkeiten die
Mglichkeit der Anwendung der direkten LF-Detektion [2,4].
Alkalihydroxide lassen sich nur sehr begrenzt in der Einsulentechnik einsetzen, da das OH-Ion von
allen mglichen Eluent-Anionen die geringste Affinitt zu quartren Ammonium-Gruppen besitzt.
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Daher sind selbst bei niedrigen Kapazitten hohe Eluentkonzentrationen notwendig, so dass allenfalls
die indirekte LF-Detektion verwendet werden kann. Gut mglich ist dagegen die direkte UV/VIS-
Detektion, wobei aber auch das eigentlich UV-transparente Hydroxid-Ion bei hheren Konzentrationen
eine deutliche Absorption unterhalb 220 nm zeigt.
Bei Verwendung von anorganischen Suren oder deren Salzen ist man aufgrund ihrer nahezu
vollstndigen Dissoziation und damit hohen Leitfhigkeit auf photometrische Detektoren angewiesen.
Beim Einsatz von Phosphorsure oder Phosphaten lsst sich aber die Pufferkapazitt und die
Elutionskraft ber den pH-Wert des Eluenten steuern.
Die meisten der hier genannten Eluenten lassen auch andere Detektionssysteme wie Amperometrie,
Fluorimetrie oder Kopplungstechniken zu. Zur Verwendung der genannten Elutionssysteme mit diesen
Detektoren sei aber an dieser Stelle auf die einschlgige Literatur verwiesen [2,4,5].
Suppressortechnik
Die Suppressortechnik ist die bei der Einfhrung der IC ursprnglich verwendete Detektionstechnik
[1]. Im Gegensatz zur Einsulentechnik verwendet diese Methode ausschliesslich die
Leitfhigkeitsdetektion (LF-Detektion). Bei der Suppressortechnik wird zwischen Trennsule und
Detektor ein sogenannter Suppressor geschaltet, weshalb diese auch als Suppressierte-
Ionenchromatographie bezeichnet wird [2,4]. Im Suppressor werden sowohl der Eluent als auch die
Analyten chemisch modifiziert, was im Hinblick auf die nachfolgende Leitfhigkeitsdetektion von
besonderer Bedeutung ist. Der Suppressor hat die Aufgabe, die Eigenleitfhigkeit des Eluenten zu
reduzieren und, wenn mglich, die Detektierbarkeit der Analyten zu erhhen.
Das Prinzip der chemischen Suppression ist in den Gleichungen 63 und 64 fr einen Anwendungsfall
aus der Anionenchromatographie dargestellt. Verwendet wird ein NaHCO3-Eluent, als Analyt fungiert
das Chlorid-Ion. Die Suppression erfolgt mit einem stark sauren Kationenaustauscher in der H+-Form.
Die Suppressoreinheit besteht im einfachsten Fall aus einer der Trennsule nachgeschalteten Sule,
woraus sich der alte Begriff Zweisulentechnik erklrt. Der Eluent Natriumbicarbonat wird gemss
Gleichung 63 neutralisiert, da die Natrium-Ionen durch Protonen ersetzt werden. Dadurch wird die
Eigenleitfhigkeit des Eluenten drastisch herabgesetzt. Der Analyt Cl- wird selbst nicht verndert
(Gleichung 64), allerdings wird sein Gegen-Ion Na+ durch H+ ausgetauscht, welches eine deutlich
grssere Equivalentleitfhigkeit besitzt [19]. Da der Detektor die Summe der Leitfhigkeiten von
Analyt- und Gegen-Ion als Signal registriert, ergibt sich also aus beiden ablaufenden Reaktionen ein
deutlicher Empfindlichkeitsgewinn.
Die ursprnglich als Suppressoren verwendeten Sulen mit Kationenaustauschern in der H+-Form
tragen deutlich zur Bandenverbreiterung bei. Ausserdem knnen sie nur diskontinuierlich betrieben
werden, da der Kationenaustauscher regeneriert werden muss. Deshalb werden heute berwiegend
kontinuierlich arbeitende Membransuppressoren verwendet, bei denen der Regenerant,
normalerweise verdnnte Schwefelsure, und der Eluent im Gegenstromprinzip aneinander vorbei
gefhrt werden [6].
Die Suppressortechnik hat trotz ihrer Vorzge aber auch einige entscheidende Nachteile. In der Praxis
lassen sich in der Anionenchromatographie nur solche Eluenten erfolgreich suppressieren, die auf
Alkalihydroxiden oder -carbonaten basieren. Anionen schwacher Suren, z.B. Acetat oder Fluorid,
liegen nach der Suppressionsreaktion praktisch vollstndig protoniert vor, so dass ihre
Detektierbarkeit im Vergleich zur Einsulentechnik wesentlich geringer ist. Hherwertige Kationen
mssen vor der Analyse entfernt werden, da sie schwer lsliche Hydroxide bilden, die auf der
Trennsule ausfallen und zur Verstopfung fhren knnen.
Wie bereits deutlich wurde, ist die Suppressortechnik gleichbedeutend mit der chemischen
Suppression des Eluenten und der Anwendung der direkten LF-Detektion [2,4]. Diese Technik ist in
der Anionenchromatographie ausserordentlich weit verbreitet, vor allem weil sie in vielen Fllen
empfindlicher als die direkte LF-Detektion in der Einsulentechnik ist. Die Eigenleitfhigkeit von
klassischen Eluenten (z.B. 2 mMol/kg Phthalat, pH = 8) in der Einsulentechnik liegt bei etwa 200
S/cm. Bei suppressierbaren Eluenten ist sie mindestens um eine Grssenordnung niedriger.
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Die chemische Unterdrckung der Eigenleitfhigkeit ist nur bei sehr wenigen Eluenten mglich. Dies
sind Lsungen von [4]:
Alkalihydroxiden
Alkalicarbonaten und -hydrogencarbonaten
Boraten (z.B. B4O72)
Aminosuren
In der Praxis haben von den genannten Eluenten aber nur die Alkalihydroxide und die Carbonat-Puffer
eine grssere Bedeutung, womit die Auswahl an potentiellen mobilen Phasen sehr beschrnkt ist.
Das Hydroxid-Ion ist ein extrem schwaches Eluent-Ion, so dass auch bei niederkapazitiven
Trennmaterialien bereits mit hohen Konzentrationen oberhalb von 50 mMol/kg gearbeitet werden
muss. Bei Anwendung sehr polarer funktioneller Gruppen kann die relative Retentionskraft des OH-
Ions unter Ausnutzung der Hydroxid-Selektivitt deutlich erhht werden. Bei OH-Eluenten ist eine
Manipulation von Retentionszeiten oder Selektivitten nur ber die Konzentration mglich.
Der Einsatz von Alkalicarbonaten und- Alkaliydrogencarbonaten ermglicht wesentlich flexiblerer
Elutionssysteme. Beide Spezies, HCO3 und CO32, liegen nach der Suppression als Kohlensure
H2CO3 vor, die nur zu einem sehr geringen Anteil dissoziiert ist. Hydrogencarbonat ist in seiner
Elutionskraft nur geringfgig strker als Hydroxid, whrend Carbonat einen relativ starken Eluenten
darstellt. Beide Anionen werden blicherweise zusammen verwendet, was zu einem Eluenten mit
Pufferwirkung fhrt, dessen Elutionskraft sehr leicht ber die Konzentrationen der beiden
Komponenten und deren Konzentrationsverhltnis gesteuert werden kann. Aufgrund der Ladungen
der Eluent-Spezies lassen sich die Selektivitten fr mono- und multivalente Analyten sehr gezielt
beeinflussen. Das Konzentrationsverhltnis beider Eluent-Ionen lsst sich zudem sehr genau ber den
pH-Wert einstellen, weshalb der sinnvolle pH-Bereich fr HCO3/CO32-Eluenten zwischen 8 und 11
liegt. Wie auch bei den OH--Eluenten kann die Elution durch Verwendung stationrer Phasen mit
polaren funktionellen Gruppen beschleunigt werden.
Beide Elutionssysteme lassen sich bei oberflchenfunktionalisierten Anionenaustauschern mit Erfolg
nur dann anwenden, wenn entweder das Grundgerst (Methacrylat-Copolymere) oder aber die
funktionellen Gruppen eine hohe Polaritt besitzen. Bei auf PS-DVB basierenden Trennsulen werden
fr weiche Analyten (Nitrat, Bromid) auch bei Anwendung polarer Funktionalitten sehr schlechte
Peaksymmetrien und lange Retentionszeiten beobachtet. Bei pellikularen Materialien treten diese
Effekte nicht so stark hervor, was ihre ausserordentlich grosse Verbreitung in der Suppressortechnik
erklrt [2,4].
3.8 Kationenchromatographie
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Bei der Durchfhrung der Leitfhigkeitsdetektion unterscheidet man zwei Arten. Ist die Grundleitfhig-
keit des Eluenten hoch, z. B. bei verdnnten Mineralsuren aufgrund der hohen Leitfhigkeit der H+-
Ionen, bietet sich die Mglichkeit der direkten Leitfhigkeitsdetektion an, wobei die Analyten eine
deutlich geringere Leitfhigkeit als der Eluent aufweisen. Es werden daher negative Peaks erzeugt,
die aber durch Umpolung des Detektors oder durch eine einfache Invertierung in bliche Chromato-
gramme verwandelt werden knnen. Lsst die Qualitt des Leitfhigkeitsdetektors die empfindliche
Leitfhigkeitsmessung auf hohem Niveau nicht zu, so wird auch in der Kationenchromatographie mit
Suppression gearbeitet. Die Konstruktion von Supressoren fr die Kationenchromatographie ist weit-
aus schwieriger als in der Anionenchromatographie und auch ihre Lebensdauer ist deutlich geringer.
OH O OH O
O OH HO OH
HO
OH
HO O O OH O
O OH
Weinsure Oxalsure Citronensure
Me L
"pulling"-Effekt des Komplexbildners
2- +
H2L L +2H
+
2+ +
Me 2E
- -
SO3 SO3
"pushing"-Effekt des Gegenions
man durch pH-Wert und Konzentration des Eluenten variieren. Zudem kann man das
Elutionsvermgen durch den Einsatz mehrerer Komplexbildner sowie durch Verwendung eines
zweiwertigen Kations als Gegenion beeinflussen.
Whrend fr die Detektion von Alkali- und Erdalkalimetallen beide Anwendungsformen der
Leitfhigkeitsdetektion geeignet sind, kann man bergangs- und Schwermetall-Ionen nur durch
direkte Leitfhigkeitsmessung ohne Suppressor bestimmen. Bei der Anwendung der Suppressor-
Technik werden diese Metalle durch die Suppressorreaktion in meist unlsliche Hydroxide berfhrt.
Die direkte Leitfhigkeitsdetektion ist nur mglich, wenn man beim Einsatz von niedrigkapazitiven
Kationenaustauschern Eluenten mit geringer Grundleitfhigkeit verwendet.
Zur Detektion von bergangs- und Schwermetall-Ionen wird daher hauptschlich die
Nachsulenderivatisierung zu photometrisch detektierbaren Metall-Komplexen eingesetzt. Dabei wird
dem Effluat nach der analytischen Trennsule in einem Nachreaktor ein metallochromes Reagenz
beigemischt, das sich mit den Analyten zu farbigen Metall-Komplexen umsetzt, die photometrisch
detektiert werden. Als Farbreagenz lassen sich eine Vielzahl von Azofarbstoffen einsetzen [2,4], die
mit einer grossen Anzahl an Metall-Kationen reagieren. bergangsmetalle und die Lanthanide
reagieren mit 4-(2-Pyridylazo)resorcinol (PAR) (Abbildung 22) zu farbigen Komplexen. Lanthanide und
Actinide lassen sich mit 2,7-bis(2-Arsenophenylazo)-1,8-dihydroxynaphthalin-3,6-disulfonsure
(Arsenazo III) detektieren. Brenzkatechin-3,5-disulfonsure (Tiron) ist zur Nachsulenderivatisierung
von Aluminium geeignet.
HO
N N OH
N
4-(2-Pyridylazo)resorcin (PAR)
3.8.3 Ionenausschlusschromatographie
Die Auswahl des Elutionsmittels in der IEC ist wie die Wahl des Packungsmaterials wenig aufregend.
Angefangen von reinem Wasser bis hin zu verdnnten Mineralsuren reicht die Palette. Fr die
Auswahl des jeweils am besten geeigneten Systems muss die Detektion beachtet werden. Die
hufigsten Detektionen sind die photometrische und die Leitfhigkeitsdetektion. Im Fall der
Photometrie wird hufig verdnnte Schwefel- oder Perchlorsure aufgrund ihrer absoluten UV-
Transparenz eingesetzt. Soll die Leitfhigkeitsdetektion verwendet werden, so findet meist verdnnte
Salzsure in Verbindung mit einem Kationenchromatographie-Suppressor Anwendung.
Die Konzentration der Sure bestimmt die Dissoziation der Analyten und damit auch deren Retention.
Allgemein verringert sich die Retention mit steigender Surekonzentration. Die Peakform wird ebenso
von der Surekonzentration beeinflusst. Fr organische Suren ist reines Wasser aufgrund einer
steigenden Adsorption meist nicht geeignet, fr Carbonat und Borsure liefert es dagegen
hervorragende Resultate.
khv 41 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
4 Praktischer Teil
Im praktischen Teil des Lehrbuches werden Versuche vorgestellt, die einen ausfhrlichen Streifzug
durch die Welt der Ionenchromatographie ermglichen. Begonnen wird mit den Versuchen zur Theorie
der Ionenchromatographie (Seite 45), es geht weiter im zweiten Teil auf Seite 71 mit der Analyse von
Anionen und im dritten und letzten Teil ab Seite115 werden organische und anorganische Kationen
analysiert.
Die Versuche knnen prinzipiell auf jedem Ionenchromatographen durchgefhrt werden. Einige
Anforderungen an die Ausstattung des Gertes sollten trotzdem erfllt sein:
pulsationsarme Doppelkolbenpumpe, die mglichst ohne externe Stickstoff-/oder Heliumver-
sorgung auskommt
Flussregelung entsprechend den Sulenanforderungen
elektrisches Injektionsventil
Anschlussmglichkeiten fr verschiedene Probenschleifen und Anreicherungssulen
elektronische Suppression fr Anionen und Kationen
chemische Suppression fr Anionen
temperaturstabilisierter Leitfhigkeitsdetektor, mglichst besser 0.01 C
thermisch und elektronisch abgeschirmtes Gehuse
Anionen- und Kationenbetrieb
PC-Kontrolle ist empfehlenswert
Alle aus dem Hause Metrohm stammenden kompakten oder modularen C-Systeme erfllen
selbstverstndlich diese Anforderungen. Der Basic IC 792 ist allerdings speziell fr Ausbildung und
Lehre konzipiert und deshalb fr die nachfolgenden Versuch besonders zu empfehlen.
Abbildung 23 Der Metrohm Basic IC 792: speziell fr Forschung und Lehre entwickelt
Bakterielles Wachstum
Um bakterielles Wachstum zu verhindern sollten Eluenten, Spl- und Regenerationslsungen immer
frisch angesetzt und nicht nach lngerer Zeit wiederverwendet werden. Sollten sich trotzdem
Bakterien oder Algen bilden, kann dem Eluenten 5 % Methanol oder Aceton zugesetzt werden. Dies
ist bei der Verwendung von Membransuppressoren nicht mglich, da diese durch organische
Lsungsmittel zerstrt werden knnen. Das Metrohm Suppressor Modul MSM aber ist 100 %
lsungsmittelbestndig.
Chemikalienqualitt
Smtliche Chemikalien sollten mindestens die Qualitt p.a. oder puriss. besitzen. Die Standards
mssen speziell fr die Ionenchromatographie geeignet sein.
khv 42 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Kationenanalysen
Bei allen durchgefhrten Analysen mssen die Proben mit Salpetersure (circa 100 L einer 2 mol/L
HNO3 auf 100 mL Probe) angesuert werden (pH 2.5 3.5), da ansonsten fr die zweiwertigen
Kationen keine reproduizierbaren Resultate erhalten werden.
Lagerung der Trennsulen
khv 43 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Sulenauswahl
Die meisten der vorgestellten Versuche, werden auf sehr kostengnstigen Sulen ausgefhrt
METROSEP Dual 1 fr die Anionen und METROSEP C2 fr die Kationen. Diese Sulen liefern eine
ausreichend gute Trennung fr alle beschriebenen Experimente. Selbstverstndlich gibt es aus der
METROSEP-Produktlinie Trennsulen, die wesentlich leistungsfhiger, deshalb aber auch teurer sind.
Sicherheitshinweise
Bei der Durchfhrung aller Versuche sind Schutzbrille, Schutzkittel und ggf. Schutzhandschuhe zu
tragen. Die Sicherheitshinweise fr die Chemikalien (R/S-Stze) sind unbedingt zu beachten.
Umweltschutz
Ein grosser Vorteil der Ionenchromatographie ist, das meistens mit wssrigen Medien gearbeitet wird.
Die in der Ionenchromatographie verwendeten Chemikalien sind deshalb weitestgehend ungiftig und
belasten die Umwelt nicht. Trotzdem muss darauf geachtet werden, wenn mit Suren, Basen,
organischen Lsungsmitteln oder Schwermetallstandards gearbeitet wird, dass diese nach Gebrauch
ordnungsgemss entsorgt werden.
Wasserqualitt
In der Ionenchromatographie wird vorwiegend mit wssrigen Medien gearbeitet. Die Wasserqualitt ist
deshalb ganz entscheidend fr eine gute Chromatographie. Ist die Qualitt ungengend, so sind es
die Ergebnisse definitiv auch. Zustzlich besteht die Gefahr, Gerte und Trennsulen zu beschdigen.
Das verwendete demineralisierte Wasser aq. demin. sollte deshalb eine Widerstand grsser 18 M
aufweisen und partikelfrei sein. Es ist deshalb zu empfehlen, das Wasser ber einen 0.45 m Filter zu
filtrieren.
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
= + +
Generell gilt, dass die Leitfhigkeit mit der Elektrolyt- bzw. Ionenkonzentration steigt. Ein linearer
Zusammenhang ergibt sich nur fr verdnnte Lsungen, da konzentrationsabhngig ist
(Kohlrausches Gesetz). Die tabellierten Werte (vergl. Kapitel Leitfhigkeitsdetektion) gelten fr
quivalentleitfhigkeit in unendlich verdnnten Lsungen.
Die Grsse der quivalentleitfhigkeit ist stark temperaturabhngig ( 2 % / C). Vor allem bei
Messungen ohne chemische Suppression, das heisst auf einem hohen Hintergrund, machen sich
Fehler aus einer Temperaturnderung besonders stark bemerkbar. Die Temperaturschwankungen
sollten deshalb unbedingt kleiner 0.01 C sein.
In der Ionenchromatographie ohne chemische Suppression, bei der die Hintergrundleitfhigleit nur
elektronisch unterdrckt wird, sollten die Eluenten eine mglichst geringe Leitfhigkeit aufweisen.
Hierfr kommen die Salze schwacher Suren wie der Phthalsure, Salicylsure und Benzoesure in
Frage. Der ohne Suppression bestimmte Messwert ist von Differenz der quivalentleitfhigkeiten
zwischen Probeion und Eluentuion abhngig.
~ (P E)
Negative Peaks treten immer dann auf, wenn die Leitfhigkeit des Probeions niedriger als die des
Eluentions ist. Ein Beispiel dafr ist das Phosphatanion. Bei einem pH = 5 liegt es berwiegend als
H2PO4 vor. Da die quivalentleitfhigkeit des H2PO4 mit 33 S*cm2/mol niedriger ist als die
quivalentleitfhigkeit des Phthalats mit 38 S*cm2/mol ist, erhlt man einen kleinen, negativen
Peak. Abhilfe schafft ein hherer pH-Wert, bei dem das Phosphat als HPO42 vorliegt, dessen
quivalentleitfhigkeit 57 S*cm2/mol betrgt
Ionenchromatographie mit chemischer Suppression bedeutet, dass die Hintergrundleitfhigkeit
chemisch herabgesetzt wird. Ein Eluent mit hoher Leitfhigkeit wird in einer Nachsulenreaktion der
Suppressionsreaktion zu einem Eluenten mit geringer Leitfhigkeit umgesetzt.
In der Anionenanalytik werden hierfr im Eluenten die Salze schwacher Suren eingesetzt z. B.
HCO3, CO32 und BO33. Im Suppressor werden alle Kationen im Eluenten und in der Probe gegen H+
ausgetauscht. Gemss nachfolgender Reaktion entstehen aus dem Eluenten schwach dissoziierte
Suren:
+ +
+H Na
Na+ + HCO3- H2CO3
Die entstehende Kohlensure liegt berwiegend als CO2 + H2O vor. Daher ist die Restleitfhigkeit
sehr gering. Da auch die Gegenionen der zu bestimmenden Anionen im Suppressor gegen H+
ausgetauscht werden lsst sich folgende Gleichung formulieren:
+ +
+H Na
Na+ + Cl- H+ + Cl-
Statt des ursprnglich in der Probe vorhandenen Na+ und Cl wird nun die wesentlich hhere
quivalentleitfhigkeit von H+ und Cl gemessen und dies zustzlich noch auf einer geringen
Hintergrundleitfhigkeit. Theoretisch lsst sich ein Signal erwarten, dass um den Faktor 10 hher liegt
als bei einer Messung ohne chemische Suppression. In der Praxis gefunden wird hingegen nur ein
Empfindlichkeitszuwachs im Bereich eines Faktors von 2 bis 4.
Im Gegensatz zur linearen Kalibration beim Arbeiten ohne chemische Suppression, erhlt man beim
Arbeiten mit chemischer Suppression eine quadratische Kalibrationsfunktion, deren Berechnung die
Kalibration mehrerer Punkte erforderlich macht. Der Konzentrationsbereich, in dem man mit linear
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Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
arbeiten kann ist wesentlich geringer (ca. 1/20 bis 1/50) als beim Arbeiten ohne chemische
Suppression.
Lerninhalte
Prinzipieller Aufbau eines IC-Systems
Unterschiede zwischen dem Arbeiten mit chemischer und ohne chemische Suppression
Bestimmung der unterschiedlichen Empfindlichkeiten der beiden Methoden
khv 46 22/12/2000
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khv 48 22/12/2000
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Lerninhalte
Erklren der chromatographischen Parameter: Retentionszeit, Auflsung, Flche,
Bodenzahlen, Symmetrie und Area-Hight-Verhltnis
Einfluss einer dominanten Hauptkomponente auf Komponenten wesentlich geringerer
Konzentration: Vernderung der o.a. Parameter
khv 49 22/12/2000
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khv 51 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Lerninhalte
Vergleich von Eluenten mit einwertigen und zweiwertigen Anionen
Vergleich von Natronlauge- und Carbonat/Hydrogencarbonateluenten
Einfluss des Eluent-pH-Wertes auf die Retention des Phosphats
khv 52 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
khv 53 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
khv 54 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
khv 55 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Eluentherstellung
424 mg Natriumcarbonat (wasserfrei), 200 mg NaOH in 1 L Reinstwasser lsen und entgasen.
khv 56 22/12/2000
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Lerninhalte
Was bedeutet Kalibration
Vergleich einer Einpunkt- mit einer Mehrpunktkalibration Fehlerabschtzung
Bestimmung des Systemrauschens
Abschtzung der Nachweisgrenzen
khv 57 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
khv 58 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
khv 59 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
4.2.6 Versuch 5 Vernderung der Selektivitt mit Hilfe von Kronenethern (18 Crown-6)
Mit der Zugabe von Komplexbildnern knnen die Retentionszeiten der Kationen verndert werden.
Der Komplexbildner fungiert als Ligand, das Analytkation wird als Zentralmetallion eingebaut. Je
selektiver ein Ligand bezglich eines Zentralmetallions ist, desto strker wird seine Retentionszeit
beeinflusst. Die Retentionszeiten der brigen Kationen werden im Idealfall nur geringfgig verndert.
Komplexbildner werden zur besseren Trennung von Alkalimetallionen eingesetzt. Der Zusatz des
Kronenethers 18 Crown6 zum Eluenten fhrt zu einer besseren Trennung von Na+, Ammonium und
K+. Besonders drastisch ist die Erhhung der Retentionszeit von K+. Dies lsst sich durch die Bildung
des Komplexes aus K+ und Dibenzo-18-Krone-6-ether (18 Crown-6) erklren. K+ passt genau in den
Kfig des Ethers. Es wird ber die Elektronenpaare der Sauerstoffatome komplexiert. Bei gleicher
Ladung wird nach der Komplexierung ein wesentlich grsseres Molekl getrennt. Bedingt durch die
sterische Hinderung, verlngert sich so die Retentionszeit des Kaliums.
O
O O
K+
O O
O
Lerninhalte
Auswirkung eines sehr selektiven Komplexbildners auf die Retentionszeiten
Erklrung des Effekts im Vergleich mit Versuch 6
khv 60 22/12/2000
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khv 61 22/12/2000
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khv 62 22/12/2000
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Me 2+ - Dipicolinkomplex
O O
C N C
2+
O Me O
H H
+ +
2+ 2+ H 2+ + H 2+ 0
[Me (DPA)] + [Me (DPA)] + [Me (DPA)]
+H +H
Je nach pH-Wert liegt also ein 2-fach positiver, 1-fach positiver oder ungeladener Komplex vor.
Primres Trennkriterium auf einer Kationentauschersule ist die Ladung der zu trennenden Ionen.
Ungeladene Komplexe werden nicht zurckgehalten. Komplexe mit dreifach positiver Ladung wrden
nahezu irreversibel gebunden. Bedingt durch die Komplexbildungskonstante und den eingestellten
pH-Wert liegt eine bestimmte mittlere Gleichgewichtsladung des Komplexes vor. Diese
Gleichgewichtsladung bestimmt die Retentionszeit. Deshalb knnen die zweiwertigen Metallionen
durch die Zugabe von Dipicolinsure und einen bestimmten pH-Wert beschleunigt werden.
Einwertige Metallionen, die keinen Komplex mit der Dipicolinsure bilden knnen, werden in ihrer
Retentionszeit nicht beeinflusst.
Lerninhalte
Einfluss der Komplexbildungskonstante auf die Retentionszeit Vergleich Zink und Calcium
Einfluss des pH-Wertes auf die Gesamtladung des Komplexes
Erklrung des Effekts im Vergleich mit Versuch 5
khv 63 22/12/2000
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khv 64 22/12/2000
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khv 67 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Lerninhalte
Was ist Probenvorbereitung?
Wo ist die Schnittstelle zwischen Ionenchromatographie und Probenvorbereitung?
Was ist der Vorteil von Probenanreicherung?
Was sind die Grenzen des Verfahrens?
khv 68 22/12/2000
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khv 69 22/12/2000
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khv 70 22/12/2000
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khv 71 22/12/2000
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Lerninhalte
Untersuchung des Lebensmittels Nummer 1
berprfung der Angaben auf Mineralwasserflaschen
khv 72 22/12/2000
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khv 73 22/12/2000
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Lerninhalte
Lebensmittelanalytik
Einfluss der Matrix auf die Chromatographie
Matrixeliminierung
khv 74 22/12/2000
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khv 77 22/12/2000
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khv 78 22/12/2000
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khv 79 22/12/2000
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Enzym
NO3 NO2
Nitrit ist in der Lage, Hmoglobin, den roten Blutfarbstoff, zu Methmoglobin umzuwandeln (Fe2+ wird
zu Fe3+ oxidiert). Methmoglobin kann im Gegensatz zu Hmoglobin keinen Sauerstoff im Blut
transportieren. Bei erwachsenen Menschen kann dieser Schaden durch Stoffwechselreaktionen
wieder behoben werden. Der Stoffwechsel von Suglingen bis zum fnften Lebensmonat ist dazu
jedoch nicht fhig. Durch den entstandenen Sauerstoffmangel im Blut verfrbt sich die Haut des
Suglings blulich. Diese Blausucht oder auch Methmoglobinmie kann mitunter tdlich sein.
Aus Nitrit knnen durch Reaktion mit verschiedenen sekundren Aminen (zwei H-Atome des
Ammoniakmolekls sind durch Alkylreste ersetzt), welche durch Medikamente und Nahrung in den
Krper des Menschen gelangen, im sauren Milieu des Magens Nitrosamine entstehen.
R NO2 R
N H N N O
R R
Bei R = CH3: Dimethylnitrosamin
Nitrosamine gehren zu den am strksten krebserzeugenden Stoffen. Sie werden im Organismus aus
nicht kanzerogenen Verbindungen hergestellt.
Lerninhalte
Lebensmittelanalytik
berprfung von Lebensmitteln unter besonderer Beachtung von Nitrit und Nitrat
Probenvorbereitung
Salat zerkleinern, dispergieren, Reinstwasser (Verdnnung 1:100) zugeben und filtrieren.
khv 81 22/12/2000
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khv 82 22/12/2000
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Hufig wird ein Gemisch aus primren und sekundrem Phosphat verwendet, dass im pH-Bereich
6 ... 8 (90 % H2PO4 + 10 % HPO42 bis 10 % H2PO4 + 90 % HPO42) puffert.
Vergleiche auch Henderson-Hasselbach-Gleichung (Puffergleichung)
c( A )
pH = pK S + lg
c( HA)
Lerninhalte
Lebensmittelanalytik
Chemie der Phosphorsure
Einfluss des pH-Wertes auf die chromatographische Trennung
Statistik: Reproduzierbarkeit
khv 84 22/12/2000
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khv 85 22/12/2000
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khv 86 22/12/2000
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khv 87 22/12/2000
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COOH
2
H C OH L-(+) Weinsure
3
HO C H
(2R, 3R)-Form
COOH
Hefe
C6H12O6 + 2 ADP + 2 P 2 C2H5OH + 2 CO2 + 2ATP
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Oxalsure 15,7 13,0 11,0 45,8 16,0 21,7 16,7 40,9 15,4 19,5
Bernsteinsure 194,0 260,1 205,8 282,1 230,2 149,2 243,8 215,1 264,9 269,2
Fumarsure 44,2 31,9 24,6 28,3 20,8 36,0 20,9 51,8 27,0 40,6
Glutarsure 3,7 1,9 4,5 2,6 2,3 7,0 2,6 2,2 1,9 6,2
c- bzw. t- Aconit-sure 2,1 1,9 + 5,5 4,9 6,4 1,4 2,5 1,6 4,5
Glycolsure 1,8 1,3 + + 1,4 6,9 3,7 3,4 1,7 5,8
D- + L-Milchsure 1789 2364 319,8 159,8 151,0 2141 793 221,0 208,1 2096
Anglycerinsure 43,5 62,6 50,1 39,5 59,0 53,0 49,6 87,0 68,8 49,9
Triglycerinsure
3-M-2,3-DHBS
pfelsure 3971 5080 3850 3871 4235 2251 2893 3163 3410 2897
Weinsure 1586 994 1428 1431 817 1251 1280 1014 805 887
Citramalsure 94,5 53,7 63,0 18,6 46,8 48,2 31,3 33,8 24,2 41,0
-Hydroxyglutarsure 24,9 27,5 18,2 24,5 28,4 20,6 18,8 15,3 26,9 22,2
Citronensure 138,9 150,2 241,1 222,8 298,6 287,3 200,7 221,7 240,2 335,1
Glyoxylsure + 1,0 + + 4,0 6,1 2,9 1,8 1,1 3,1
Brenztraubensure 20,6 29,8 17,8 12,4 16,8 8,6 17,6 22,7 18,6 33,0
-Ketoglutarsure 41,1 45,7 38,6 36,8 55,7 35,6 41,0 33,7 40,3 27,5
Gluconsure 59,0 357,2 54,5 95,9 452,1 337,2 53,9 131,1 373,9 540
Schleimsure + 4,1 20,4 + 4,5 11,2
Glucuronsure 2,1 3,4 3,8 5,8 7,9 14,5 1,7 6,0 7,6 10,2
Galacturonsure 11,1 11,7 14,1 19,7 22,0 43,4 10,0 17,3 23,2 34,3
L-Ascorbinsure 12,9 9,0 13,7 10,1 9,8 9,6 12,0 10,4 9,7 8,5
Gesamt-Suren 7977 9491 6349 6302 6474 6744 5685 5284 5565 7333
Abbildung 33 Anmerkungen
- = nicht nachweisbar M = Mittelwert (mg/l) aus 4 bzw. 2 Einzelanalysen 3-M-2,3-DHBS = 3-Methyl-2,3-dihydroxybuttersure
+ = in Spuren = in Spuren (ca. 5 mg/l) vorhanden, nicht ausgewertet
khv 89 22/12/2000
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Lerninhalte
Lebensmittelanalytik
Ionenausschlusschromatographie
Welche Ionen knnen mittels Ionenaustauschchromatographie bestimmt werden?
Probenvorbereitung
Probe 1:100 verdnnen, Wein filtrieren durch 45 m Filter.
khv 90 22/12/2000
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khv 91 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
khv 92 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
4.3.6 Versuch 13 Bestimmung von Verunreinigungen in Borat Chlorid und Sulfat in Borax
Borax (Dinatriumtetraborat, Na2B4O710 H2O, Na2[B4O5(OH)4]8H2O) hat folgende Struktur:
OH
O B O
HO B O B OH 2 Na 8 H2O
O B O
OH
+ -
B(OH)3 + HOH H + B(OH)4
Lerninhalte
Starke und schwache Suren
Vergleich zwischen Messungen mit elektronischer und chemischer Suppression
khv 93 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Chromatogramm 32 Borat aufgestockt mit 1 ppm Chlorid und 1 ppm Sulfat ohne chemische
Suppression (versuch13a.gif)
khv 94 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Chromatogramm 33 Borat aufgestockt mit 1 ppm Chlorid und 1 ppm Sulfat mit chemischer
Suppression
khv 95 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Bakterien
Org. Substanzen + O2 CO2 + H2O + Zellmasse
Neben der Oxidation von organischen Substanzen kann bei entsprechender Auslegung der Anlage
auch Ammonium zu Nitrat oxidiert werden (Nitrifikation).
Bakterien
NH4+ + 2 O2 NO3- + H2O + 2 H+
In sauerstofffreien Becken benutzen Bakterien den Nitratsauerstoff zur Oxidation von organischen
Substanzen (Denitrifikation).
Bakterien
Org. Substanzen + 2 NO3- 2 CO2 + 2 OH- + 2 H2O + N2
Phosphat wie NH4+ und NO3 ein Pflanzennhrstoff kann z. B. durch Zusatz von Fe3+-
Salzlsungen ausgefllt werden. Neben den sogenannten Summenparametern Biochemischer
Sauerstoffbedarf (BSB), Chemischer Sauerstoffbedarf (CSB), Total Organic Carbon (TOC) die ein
Ma fr die organische Belastung des Abwassers bzw. auch Gewssers darstellen, ist also vor allem
die Analyse von NH4+, NO3-, PO43- wichtig. Cl, SO42 werden nur in Sonderfllen analysiert.
Fr kommunale Klranlagen von mehr als 100 000 sogenannten Einwohnergleichwerten (1
Einwohnergleichwert entspricht der Schmutzfracht eines Einwohners) sind die folgenden Grenzwerte
(D) festgelegt:
BSB 15 mg/l
CSB 75 mg/l
NH4-N 10 mg/l*
NGes 18 mg/l* ( aus NH4-N, NO2-N, NO3-N)
PO4-PGes 1 mg/l
*
Gilt nur fr Abwassertemperaturen 12 C, da die Nitrifikation stark durch die Temperatur beeinflusst
wird.
NH4-N, NO2-N, NO3-N bedeutet, dass sich die Werte auf den in den Ionen enthaltenen Stickstoff
beziehen, analoges gilt fr PO4-P.
Lerninhalte
Umweltanalytik
Probenvorbereitungstechnik
Analytik von Substanzgemischen mit grossen Konzentrationsunterschieden dynamischer
Bereich
khv 96 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
Probenvorbereitung
Probe filtrieren
khv 97 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
khv 98 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
khv 99 22/12/2000
Praktikum der Ionenchromatographie Version 12
OH
F P O Natriummonofluorphosphat
O- Na+
Bemerkung
Citrat eluiert auf der Metrosep Anion Dual 1 (3 x 150) erst nach ca. 90 min.
Zur berprfung ob Citrat in der Zahnpasta vorhanden ist, wird in Versuch 15 b anstelle der Anion
Dual 1 die Vorsule Metrosep Anion Precolumn cartridge (6.1006.030) verwendet.
Lerninhalte
Qualittskontrolle
Probenvorbereitung
Probenvorbereitung
1 g Zahnpasta wird in 19 mL Reinstwasser gelst, danach durch einen 45 L Filter filtriert.
Probenvorbereitung
1 g Zahnpasta wird in Reinstwasser gelst (Verdnnung 1:20), danach durch einen 45 L Filter filtriert.
CH2OH
H O H
H
OH H
OH
H OH O
CH2OH
O
H OH
H CH2OH
OH H
Lerninhalte
Lebensmittelanalytik
Prozesskontrolle
berprfung stark zuckerhaltiger Lebensmittel z.B. Honig
Probenvorbereitung
Zucker in Reinstwasser (Verdnnung 1:10) lsen und ber 0.45 m filtrieren.
Durch den Zusatz von Stabilisatoren werden die Schwermetallionen komplexiert. Die Zersetzung wird
so gehemmt. Die charakteristische Eigenschaft von H2O2 ist seine oxidierende Wirkung. Das
Normalpotential (E0) betrgt + 1.8 V bei pH = 0 und + 0,78 V bei einem pH = 14.
Wasserstoffperoxid zhlt zu den wichtigen Produkten der Grundstoffchemie mit einer
Jahresproduktion von 2,7 Millionen Tonnen. Es wird grosstechnisch durch Umsetzung von
Anthrahydrochinon mit O2 aus der Luft hergestellt. Dabei entsteht das entsprechende Anthrachinon
und H2O2. Anthrachinon wird durch elementaren Wasserstoff am Palladium-Katalysator wieder zu
Anthrahydrochinon reduziert und zurck in den Kreislauf gefhrt.
Ein Grossteil des H2O2 wird fr die Papier- und Zellstoffbleiche verwendet. In vielen Lndern ist die
Chlorbleiche (mit Cl2 oder ClO2), bei der biologisch schwer abbaubare chlorierte organische
Verbindungen ins Abwasser gelangen, ganz oder teilweise durch andere Verfahren ersetzt. Dabei hat
H2O2 eine grosse Bedeutung.
Weitere Anwendungsgebiete sind:
Enteisenung und Entmanganung von Trinkwasser
Entgiftung cyanidhaltiger Abwsser (CN CNO) z. B. Galvanikabwasser mit H2O2 oder H2O2/H2SO4
Die Kombination H2O2 und UV liefert HO-Radikale (Hydroxylradikale), die usserst starke
Oxidationsmittel sind (E0 = + 2,8 V). Sie sind daher fr die Reinigung spezieller Abwsser von
Interesse
Vielversprechend ist die Entwicklung eines Verfahrens zur Herstellung von Propylenoxid aus Propen
und H2O2 (Titanschichtkatalysatoren) anstelle des abwasserbelastenden Chlorhydrinverfahrens.
Unter den H2O2-Folgeprodukten sind Natriumperborat und Natriumpercarbonat am wichtigsten; sie
werden als Bleichmittel in Pulverwaschmittel eingesetzt.
H2O2 wird in der Elektronikindustrie bei der Herstellung gedruckter Schaltungen und zur Reinigung von
Silizium-Wafern verwendet.
Die Bestimmung von Verunreinigungen im H2O2 hat vor allem in der zuletzt angefhrten
Elektronikindustrie grosse Bedeutung. Schon kleinste Mengen (ng/L oder ppt) von Fremdionen
verschlechtern die Ausbeute an Wafern signifikant, da zum Beispiel Phosphat und Nitrat als n-
Fehlstellen im Siliziumkristall wirken.
Lerninhalte
Prozesskontrolle
Matrixeliminierung
Probenvorbereitung
Selektivitt unterschiedlicher Sulen
Eluentherstellung
265 mg Natriumcarbonat (wasserfrei) und 201.5 mg Natriumhydrogencarbonat in 980 mL
Reinstwasser lsen und entgasen. Danach 20 ml Aceton zugeben.
Probenaufgabe
System mit Reinstwasser gut splen, dann 1 mL Probe aufgeben und mit 1 mL Reinstwasser splen.
Bemerkung
Gefsse, Spritze und System mehrmals grndlich splen. Plastikgefsse verwenden. Unbedingt
Schutzbrille tragen! Peaks 1, 4 und 9 nicht quantifiziert.
Bei allen durchgefhrten Analysen mssen die Proben mit Salpetersure angesuert werden (pH 2.5
3.5), da ansonsten fr die zweiwertigen Kationen keine reproduizierbaren Resultate erhalten
werden.
Lerninhalte
Untersuchung des Lebensmittels Nummer 1
berprfung der Angaben auf Mineralwasserflaschen
Lerninhalte
Einfluss des Eluenten auf die Selektivitt
Komplexierung von bergangsmetallionen
Eluentherstellung
600 mg Weinsure und 105 mg Zitronensure in Reinstwasser lsen. 200 L Ethylendiamin und 50
mL Aceton zugeben und auf 1 L auffllen.
Eluentherstellung
315 mg Oxalsure in Reinstwasser lsen, 50 mL Aceton zugeben und mit Reinstwasser auf 1 L
auffllen. Mit Ethylendiamin (ca. 120 L) auf pH = 4 einstellen.
O OH
Si Si
O
O O O
Si
Si O Si
O OH
OH
Neben seiner Verwendung als technisches Adsorptionsmittel wird Silicagel sowohl in der
Gaschromatographie wie auch in der Hochdruckflssigchromatographie eingesetzt.
In der Gaschromatographie wurden zunchst in geringem Ausmass auch noch heute
ausschliesslich gepackte Sulen eingesetzt. Dabei wird eine flssige Phase, z. B. Siliconl auf einen
krnigen Trger, z. B. Silicagel aufgebracht. Die Trennstufenzahl dieser Sulen ist im Vergleich zur
Trennstufenzahl der heute berwiegend verwendeten Kapillarsulen gering.
Im Bereich der Hochdruckflssigchromatographie (HPLC) wird Silicagel als stationre Phase fr
Adsorptions-, Umkehr- (Reversed Phase, RP), Normalphasen- und Ionenchromatographie eingesetzt.
Auch in der Adsorptionschromatographie dient Silicagel neben Al2O3 als stationre Phase. Die
chromatographische Trennung beruht auf Dipol-induzierten Dipolbindungen, Dipol-Dipolbindungen,
Wasserstoffbrckenbindungen und -Komplexbindungen. Die Adsorptionschromatographie wird zur
Trennung unpolarer Substanzen, die sich in Wasser schlecht lsen, eingesetzt.
Fr die RP-Chromatographie werden die freien Silanolgruppen des Silicagels durch chemische
Bindung von Octyl- oder Octadecylgruppen hydrophobiert, z. B.
CH3 CH3
Si OH + Cl Si R Si O Si R
CH3 CH3
Mit dieser polaren stationren Phase wird eine wenig polare oder unpolare mobile Phase fr die
chromatographische Trennung eingesetzt. In der RP-Chromatographie, die ca. 75 % aller HPLC-
Anwendungen ausmacht, sind die Polaritten vertauscht und eine unpolare stationre Phase wird mit
einer polaren mobilen Phase verwendet. Der Name Umkehrphase bzw. Reversed Phase ist somit rein
historisch begrndet, da diese Methode erst spter entwickelt wurde.
In der Ionenchromatographie wird Kieselgel, an das Sulfonsuregruppen gebunden sind, als
Kationenaustauscher fr die Analyse divalenter Kationen eingesetzt.
Fr den Einsatz von Silicagel in der Chromatographie ist die Verunreinigung mit Metallionen von
Bedeutung, da diese zu unspezifischen Wechselwirkungen bzw. Blindwerten fhren. Zur Analyse
dieser Verunreinigungen wird ein stark saurer Kationenaustauscher verwendet, bei dem die
monovalenten Kationen im Totvolumen eluieren und nur die divalenten Kationen getrennt werden
knnen. Fe(III) muss vor der Analyse durch Ascorbinsure zu Fe(II) reduziert werden.
Lerninhalte
Qualittskontrolle
Zusatzversuch: Spiken des Extraktes mit Fe(III);
Bestimmung mit und ohne Zugabe von Ascorbinsure (Vitamin C)
+ -
NR3 + H2O + CO2 HNR3 + HCO3
T
Bei hherer Temperatur wird CO2 wieder freigesetzt und das Ethanolamin NR3 in den
Absorptionsprozess zurckgefhrt.
Das bei hherer Temperatur wieder freigesetzte H2S wird in Claus-Anlagen zu flssigem Schwefel
oxidiert, der ber SO2 und SO3 zur Schwefelsure umgesetzt wird.
Monoethanolamin (MAK-Wert 3 ppm) wird als Fettsureester in Tensiden verwendet. Diethanolamin
kommt in Mbel- und Bodenpflegemitteln, Schuhcremes und Schmiermittel zum Einsatz.
Triethanolamin bildet mit Fettsuren Triethanolaminseifen, z. B. mit Stearinsure C18H35COOH. Diese
sind in Wasser und Minerallen leicht lslich und werden deshalb als Emulgatoren verwendet. Des
weiteren knnen sie in kosmetischen Zubereitungen (z. B. Rasierschaum) enthalten sein. In
Kraftwerken werden sie als Korrosionsinhibitoren eingesetzt, da sie einen schwach alkalischen pH-
Wert stabilisieren und berschssige H+-Ionen wegpuffern.
Fr die ionenchromatographisch Bestimmung werden die Ethanolamine durch Surezusatz protoniert
und knnen so als Ammoniumderivate nachgewiesen werden.
Lerninhalte
Bestimmung von anorganischen und organischen Kationen
Selektivittsnderung durch Zugabe von Komplexbildnern
Probenvorbereitung:
Proben filtrieren und verdnnen (1:10).