ProtocolodelaextraccindeADN

Antes de disponerse a visualizar la presentacin de la prctica Extraccin de ADN le

aconsejamos que lea detenidamente este protocolo, el cual contiene los diferentes pasos
queseseguirnenestaprctica.

Reactivos

Muestravegetal(guisantesfrescosocongelados)
Aguadestilada
Etanolabsolutoa20C
Clorurodesodio
EDTA
SDSal20%

Materiales

Tubosdeensayode10mL
Esptula
TubosEppendorfde1,5mL
Vasodemorteroymortero
Embudo
Probetasde100mL
Micropipetasypuntas
Vasosdeprecipitadosde100y250mL
Gasas
Hielopicado

Equipamiento

Balanza
Agitadormagntico
Baodeagua

Objetivos

1. ExtraerADNapartirdematerialbiolgico(guisantes)

Protocolo

1.Preparacindelasolucindelisis

1.1. Se miden con una probeta 80 mL de agua destilada y se pasan a un vaso de

precipitado.
1.2. Se cogen con una micropipeta 2,5 mL de SDS al 20% y se aaden al agua
destilada.
1.3.Sepesan0,5gdeNaClenunabalanzayseaadenalaguadestiladaconelSDS.
1.4. Se pesan 0,2 g de EDTA en una balanza y se aaden posteriormente al agua
destiladaconelSDSyNaCl.
1.5.Semezclalasolucinconlaayudadeunagitadormagntico,posteriormentese
ponelasolucinenunaprobetayseenrasaconaguadestiladahasta100mL.

2.Homogeneizacindelmaterialbiolgico

2.1.Sepesan25gdeguisantesyseponenenelvasodelmortero.
2.2. Se homogeneizan los guisantes, se aade la solucin de lisis y se continua
homogeneizandoconelmortero.Sepasaelhomogenizadoalvasodeprecipitado.

3.Incubacindelhomogeneizado

3.1.Seincubaelhomogeneizadoa55Cenunbaodeaguadurante15minutos.
3.2.Seenfraenhielopicadoelhomogeneizadodurante5minutos.

4.Filtracindelhomogeneizado

4.1.Sedesdoblalagasayseponesobreelembudo.
4.2.Sefiltraelhomogeneizadoatravsdelagasa.

5.PrecipitacindelADN

5.1.Secogen2mLdelhomogeneizadoconunamicropipetayseaadenauntubode
ensayo.
5.2. Se cogen 5 mL de etanol fro con una micropipeta y se aaden al
homogeneizado,observandolaprecipitacindelADN.

6.PreparacindelamuestradeADN

6.1.SecortalapuntadeunamicropipetaysepasaelADNauntuboEppendorf.
6.2.Secentrifugalamuestraenunamicrocentrfugaparaeliminarlosrestosetanol,
obtenindoseelADNenlabasedeltuboEppendorf.
6.3.Seeliminanlosrestosdeetanolconunamicropipetaysedejasecar.

6.4.SedisuelveelADNen1mLdeaguadestilada.