[Determinación de vitamina “C” por espectrofotometría] VI CICLO

“Año del buen servicio al ciudadano”

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERÍA

E.A.P. DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

“DETERMINACIÓN DE VITAMINA C POR ESPECTROFOTOMETRÍA”

ALUMNA: Egoavil Soto Mishel

DOCENTE: Raúl Toro Rodríguez

ASIGNATURA: Análisis Instrumental

GRUPO: “A”

Nuevo Chimbote, 02 de diciembre del 2017

1 | Análisis Instrumental
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I. INTRODUCCIÓN

Cada día son más utilizados los zumos de fruta en la alimentación humana.
Ello se debe al variado contenido en los distintos componentes de interés
dietético tales como azúcares, ácidos orgánicos, proteínas, taninos, pigmentos,
enzimas, sustancias pécticas, sustancias nitrogenadas no proteícas, minerales,
vitaminas, etc.

La vitamina C, también llamada ácido ascórbico, es un derivado de una

hexosa, sintetizada por las plantas a partir de la glucosa y galactosa. El ser
humano, otros primates y algunas especies animales carecen de la enzima l-
gulonolactona oxidasa que es capaz de catalizar la conversión de la glucosa en
vitamina C, por lo que necesitan ingerirla en la dieta diaria.

Las propiedades del ácido ascórbico o vitamina C, que junto a las vitaminas B
pertenecen al grupo de hidrosolubles, son variadas y complejas, pues los
investigadores informan, desde su descubrimiento en 1936, casi
periódicamente sobre nuevas aplicaciones del ácido ascórbico, un alimento
funcional, porque más allá de nutrir tiene efectos benéficos para la salud, tales
como, su utilidad en la prevención de la formación de cataratas y en el riesgo
de desarrollar degeneración macular en personas mayores o ancianas, al servir
de coadyuvante en la fecundidad masculina, al apuntalar al sistema inmune
contra los efectos del resfriado, asma, tabaco y contaminantes aéreos, también
suprime la aparición de células leucémicas y el crecimiento del tumor rectal y
cáncer de cérvix; en los diabéticos potencia la acción de la insulina en el
metabolismo de los carbohidratos y acelera la curación de los heridas, ayuda
en la formación de colágenos, puede reducir edemas, por su efecto de
estimulación de la diuresis, es un potente neutralizador de venenos (mercurio,
arsénico y toxinas bacterianas) y retarda el envejecimiento de la piel.

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II. FUNDAMENTO TEÓRICO

1. Definición:

El ácido ascórbico o vitamina C es una estructura eno-diol en los carbonos 2 y

3. Es un compuesto muy inestable y se oxida fácilmente a ácido
dehidroascorbico. La falta de la dieta de ácido ascórbico en la especie humana
ocasiona la enfermedad carencial denominada escorbuto (LEHNINGER).

Primitivamente al ácido ascórbico se le llamaba con el nombre de ácido

hexurónico y así mismo con el de “ácido cevitamínico”.(GRANDE,F).

CONTENIDO DE VITAMINA C EN FRUTAS

2. Funciones fisiológicas:

Los ácidos ascórbicos y dehidroascorbico forman un sistema redox en el que el

ácido semidehidroascorbico actua como intermediario muy reactivo, este se
forma al ceder un solo electrón el ácido ascórbico o al adicionarlo al ácido
dehidroascórbico. Algunos procesos metabólicos cuya perturbación produce los
síntomas del escorbuto son reacciones en las que el ácido ascórbico es
oxidado (SCHNEIDER, 14).

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3. Métodos de valoración

Son variadas las clasificaciones de los distintos métodos empleados para la

determinación de la vitamina C.

OXIDOMÉTRICO: están basados en la medida de la capacidad reductora del

ácido ascórbico frente agentes reductoras adecuadas. El inconveniente de
estos métodos es su escasa especificidad

Una de las valoraciones más sencillas de estas es la iodométrica.

Dentro de este grupo una de las empleadas es la de TILLMAINS, J (46), se

basa en la reducción del 2-6 Dicloro-Fenol-Indofenol. El análisis implica la
oxidación del ácido ascórbico con un colorante redox, como el 2,6-
diclorofenolindofenol (azul en medio básico y rojo en medio ácido), el cual se
reduce en presencia de un medio ácido, a un compuesto incoloro (Zago).

Según Nielsen (2003), el ácido ascórbico reduce el tinte indicador a una

disolución incolora. El punto final de la valoración con este tinte, de una
muestra que contenga ácido ascórbico, el exceso de tinte no reducido confiere
una coloración rosada a la disolución acida. La concentración de tinte valorante
se puede determinar utilizando una disolución patrón de ácido ascórbico. A
continuación, se puede valorar con el tinte las muestras de alimentos en
disolución, y utilizar el volumen consumido en la valoración para calcular el
contenido de ácido ascórbico.

Existen modificaciones a este método FUHITA, IWATKE, MARTINI-

BONDTGNORE, W cuyo fundamento es la decoloración que experimenta una
solución de azul de metileno, cuando se ilumina en presencia de vitamina C.
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III. OBJETIVO

 Cuantificar la vitamina C en diferentes productos agroindustriales por

espectrofotometría.

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

Espectrofotómetro
1. Materiales:

 Espectrofotómetro
 Balanza analítica
 Centrifuga
 Gasa
 Fiolas de 100 y 1000ml.
 Tubos de ensayo
 Cuchillos
Centrifuga
 Cuchillos
 Mortero
 Vasos de precipitado
 Pipetas

2. Muestras:

 Limón
 Naranja
 Piña

Fiolas

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3. Método:

a. Preparar una solución de ácido oxálico 4M.

b. SOLUCIÓN MADRE: Preparar una solución de 0.1% de ácido ascórbico
en una solución acida de 0.4% de ácido oxálico/100ml.Pesar 5g. de
ácido ascórbico y llevar al volumen de 100ml. con ácido oxálico 0.4%
una fiola.
c. ESTÁNDARES DE TRABAJO: En 5 fiolas de 100ml. preparar
concentraciones de 2, 4, 6, 8, 10 mg./100ml de ácido oxálico.

 Tubos para la curva estándar:

Armar el siguiente sistema:

L1 L2

T1 T2 T3 T4

Agua Todo 9ml.

Ácido 1ml.
Oxálico
2-6 9ml. 9ml.
diclorofenol
indofenol
Estándar de 1ml. 1ml.
trabajo
Los tubos 1(el blanco) serán iguales para las cinco concentraciones, el tubo 2
también será igual para todas las lecturas en el espectrofotómetro pero
tomando en cuenta de que el colorante se debe agregar solo unos instantes
antes de proceder a leer, para los tubos 3 y 4 variará el estándar de trabaja de
acuerdo a las diversas concentraciones.

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d. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

1. Se cortó las muestras y exprimió el jugo de limón y la naranja, en el caso

de la piña se aplastó en un mortero para extraer el jugo, luego este se
filtró con una gasa.

2. Se pesó 5 g. de cada muestra en un vaso de precipitado.

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3. Buscamos el valor teórico de las concentraciones de cada muestra:

limón(44.2), jugo de naranja(42) y la piña(19.9), como nosotros
trabajamos en un rango de concentraciones de la curva estandar de 2 a
10 de [ ], agregamos un factor de dilución para que lleguen a este
rango, entonces nuestro factor fue 5, divimos a todas las concetraciones
teóricas entre 5.

1
Para el limón: 44.2 × 5 = 8.84

Aplicamos esta concentración en la formula de dilución: 𝑪 𝟏 × 𝑽 𝟏 = 𝑪 𝟐 × 𝑽𝟐

(44.2)(5) = ((8.84)(𝑉2 )

𝑉2 = 25𝑚𝑙.

 Entonces, como hay que llegar a 25ml. le agregamos 20ml. de agua

a los 5 que ya teníamos, y ya tenemos la concentración de 8.84.
 Agregamos 35ml. de ácido oxálico y esta muestra llevamos a leer al
espectrofotómetro.
 De la misma manera se usó como factor de dilución al 5 en las
demás muestras.

V. RESULTADOS

 Lectura de los estándares de trabajo:

Concentración L1 L2 Absorbancia
2 0.0658 0.0579 0.0079
4 0.0704 0.0384 0.032
6 0.0684 0.0061 0.0623
8 0.0694 0.0067 0.0627
10 0.0679 0.0123 0.0556
Eliminando puntos para mejorar nuestro 𝑅 2, no se pudo eliminar a la concentración
(10) porque en las muestras usamos el rango hasta 10 de concentración.

Concentración L1 L2 Absorbancia
2 0.0658 0.0579 0.0079
4 0.0704 0.0384 0.032
10 0.0679 0.0123 0.0556

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CURVA ESTÁNDAR
0.07
0.06 R² = 0.9198

0.05 y = 0.0055x + 0.0025

Absorbancia

0.04
Series1
0.03
Linear (Series1)
0.02
0.01 Linear (Series1)

0
0 2 4 6 8 10 12
Concentración

FRUTA L1 L2 Absorbancia
Naranja 0.0719 0.0576 0.0143
Limón 0.0725 0.0718 0.0007
Piña 0.0741 0.0639 0.0102

𝒚 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟓𝟓𝒙 + 𝟎. 𝟎𝟎𝟐𝟓

 Dónde: y= Absorbancia; x= Concentración

𝒚 − 𝟎. 𝟎𝟎𝟐𝟓
𝒙=
𝟎. 𝟎𝟎𝟓𝟓

𝟎.𝟎𝟏𝟒𝟑−𝟎.𝟎𝟎𝟐𝟓
1. Para la Naranja: 𝒙 = → 𝒙 = 𝟐. 𝟏𝟒𝟓
𝟎.𝟎𝟎𝟓𝟓

Multiplicamos por el factor de dilución, para sí hallar la concentración real de

ácido ascórbico:

𝒙 = 𝟐. 𝟏𝟒𝟓 × 𝟓 = 𝟏𝟎. 𝟕𝟑

𝟎.𝟎𝟎𝟎𝟕−𝟎.𝟎𝟎𝟐𝟓
2. Para el limón: 𝒙 = → 𝒙 = −𝟎. 𝟑𝟐𝟕
𝟎.𝟎𝟎𝟓𝟓

𝒙 = −𝟎. 𝟑𝟐𝟕 × 𝟓 = −𝟏. 𝟔𝟒

𝟎.𝟎𝟏𝟎𝟐−𝟎.𝟎𝟎𝟐𝟓
3. Para la piña: 𝒙 = → 𝒙 = 𝟏. 𝟒
𝟎.𝟎𝟎𝟓𝟓

𝒙 = 𝟏. 𝟒 × 𝟓 = 𝟕

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VI. DISCUSIÓN

Logramos obtener una curva estándar con 𝑅 2 = 0.9198 , este valor no es

aceptable según: (Dosal & Villanueva, 2008) que dice que: como criterio de
aceptación de la linealidad a partir de la curva estándar (conjunto de
concentraciones que describen el intervalo en el cual se deberá cuantificar el
compuesto por analizar) se considera 𝑅 2 > 0.98. Desde ahí nuestros resultados
no serán certeros por la gran diferencia entre ellos.

Se obtuvo un valor negativo en el caso de la vitamina C en el limón, esto no

corresponde en nada a la concentración de vitamina C teórico por nuestra
bibliografía y pudo haberse dado por haber preparado mal la muestra del limón.
También cabe mencionar que nuestra curva estándar también fue incorrecta y
debido a ello siempre tendremos errores al cuantificar la vitamina C.

VII. CONCLUSIONES

 Construyendo una curva estándar, podemos a partir de su ecuación de

la recta obtenida, calcular la concentración del analito en una muestra de
concentración desconocida.
 Se obtuvo que la naranja tiene mayor vitamina C entre los 3 productos
analizados.

VIII. RECOMENDACIONES

 Realizar la curva estándar de nuevo para corregir las absorbancias.

 Preparar de nuevo la muestra del limón con mucho cuidado y hacer lso
cálculos correctos.
 Tener cuidado al verter las medidas de ácido oxálico en las fiolas, a la
vez tener cuidado al aforar las fiolas siempre analizando la parte
cóncava de ésta.
 Agregar el colorante a los tubos estándar segundos antes de leer en el
espectrofotómetro.

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IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 Cámara, D., & Olortegui, T. (2015). Determinación de Ácido Ascórbico

por titulación visual con 2.6 diclorofenolindofenol. Lima: Universidad
Nacional Agraria la Molina.

 Dosal, M., & Villanueva, M. (2008). CURVAS DE CALIBRACIÓN EN

LOS MÉTODOS ANALÍTICOS. México: Universidad Nacional Autónoma
de México.

 Cea, P., & Palacios, J. (s.f.). VITAMINA C (ácidos ascórbicos y

dehidroascórbicos). La Rioja: Universidad de La Rioja

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