Tecnológico de Estudios Superiores de

Ecatepec

División de Ingeniería Química

Bioquímica

Materia: MICROBIOLOGÍA
Profesora:
DRA. JOSEFINA PEREZ VARGAS

Resumen artículos
Grupo: 3651

Equipo 4
 Jiménez Gómez Beatriz Adriana
 Juárez Molina Karen
 Martínez Hernández Emmanuel
 Ramírez Gómez Itzel Berenice
 Ramírez Vélez Mayra
 Rodríguez Juárez Monserrat
 Rueda Rojas Jaime Iván
 Tenorio Sánchez Daniela
 Viveros Aguilar Areli
 CARACTERIZACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS MEDIANTE
TÉCNICAS MOLECULARES

En la industria alimentaria, en Biofarmacología y Salud Pública es importante la caracterización de

los microorganismos ya que es un avance en seguridad microbiológica del proceso industrial porque
permite establecer la fuente de contaminación e identificar las cepas implicadas y establecer su
trazabilidad. Los métodos moleculares de caracterización basados en la amplificación de fragmentos
repetidos no codificantes (REP-PCR) mediante una técnica automatizada, constituyen un método
rápido, fiable y sencillo de genotipado molecular de cepas bacterianas y fúngicas. La capacidad de
identificar los microorganismos a nivel de cepa y al mismo tiempo establecer un análisis comparativo
de las diferentes cepas analizadas.
La metodología es la siguiente:
-Aislamiento e identificación del microorganismo a nivel de familia y/o género
-Extracción del ADN bacteriano mediante lisis térmica de los microorganismos, detergentes y lisis
mecánica en una solución de microesferas, unión del ADN a filtros de sílica, lavado y elución en
tampón Tris.
-Lectura espectrofotométrica del ADN a una longitud de onda de 260 y 280 nm para su cuantificación,
ajuste del ADN a una concentración de 25 ng/µl.
-REP-PCR. Amplificación de fragmentos repetidos de regiones no codificantes del genoma del
microorganismo.
-Detección de los amplicones mediante un bioanalizador (2100 Bioanalyzer. Agilent) y el uso de un
chip con una matriz de microfluidos.
-Interpretación de los resultados mediante un potente software de análisis vía web (Diversilab System
v.3)
o Tipificación
Permite el análisis comparativo entre cepas para ver similitudes y diferencias.
Aplicaciones: Estudios epidemiológicos Trazabilidad de patógenos y alterantes en la cadena
alimentaria y autentificación de microorganismos de interés (cultivos iniciadores, fermentos,
probióticos…)
o Clasificación:
Identificación de las cepas mediante la comparación de los perfiles genéticos con una base de datos.
Aplicaciones: Confirmación de resultados analíticos. Identificación de serotipos (Salmonella, Listeria
monocytogenes
PLAZO DE ENTREGA
El plazo de entrega de resultados es de forma habitual de 10 días
DIVERSIDAD BACTERIANA DEL SUELO: MÉTODOS DE ESTUDIO NO DEPENDIENTES
DEL CULTIVO MICROBIANO E IMPLICACIONES BIOTECNOLÓGICAS
Tradicionalmente los estudios para caracterizar la diversidad bacteriana en diferentes ambientes se
basan en la suposición de que las técnicas de cultivo permiten recuperar la mayor parte de los
microorganismos en una muestra. Sin embargo, únicamente entre 0.1 y 10% de las bacterias en el
ambiente son ahora cultivables, también se ha propuesto que las bacterias no cultivables son
microorganismos filogenéticamente similares a los cultivables, pero en un estado fisiológico que los
hace recalcitrantes a ser cultivados. La base de esta explicación es que algunas bacterias cultivables
pueden convertirse en viables, pero no cultivables en condiciones ambientales adversas, y revertirse
a un estado cultivable al restaurarse las condiciones favorables. Por tanto, 90.0 a 99.9% de las
bacterias no cultivables están representadas por su contraparte cultivable.
Para estudiar la diversidad bacteriana, las técnicas del ADN recombinante permiten superar la
limitación de no poder cultivar la mayoría de las bacterias de un ambiente particular. La necesidad de
cultivar las bacterias presentes en una muestra, ha sido substituida por la capacidad de aislar y
caracterizar el material genético presente. Al conjunto de los genomas de microorganismos en una
muestra de un nicho ecológico determinado, se le llama metagenoma. El análisis del metagenoma
bacteriano por técnicas moleculares ha permitido determinar que algunos grupos bacterianos no son
fáciles de cultivar y que la diversidad de esta mayoría no cultivable es muy amplia.
ANÁLISIS DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA POR MÉTODOS NO DEPENDIENTES DEL
CULTIVO MICROBIANO
La primera aproximación metodológica para determinar la diversidad bacteriana no cultivable en el
suelo fue desarrollada por Torsvik y Goksoyr a finales de la década de 1970, comparando la tasa de
reasociación del metagenoma bacteriano de una muestra de suelo desnaturalizada térmicamente con
la del ADN genómico de una cantidad conocida de células de Escherichia coli. Los resultados de
dicho estudio indicaron que la complejidad genética de la muestra es una función del número de
genomas presentes en ella. Una muestra de metagenoma bacteriano extraída de un suelo sin perturbar
posee una complejidad equivalente entre 6000 a 10 000 genomas de E. coli el genoma de E. coli
corresponde a 4.6×106 pares de bases.
Los métodos se dividen en dos grupos: microorganismos lisados directamente en una suspensión
amortiguada de la muestra a analizar o microorganismos primero separados del substrato para luego
ser usados.
IMPLICACIONES BIOLÓGICAS DEL ANÁLISIS DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA DEL
SUELO POR TÉCNICAS MOLECULARES NO DEPENDIENTES DEL CULTIVO
El estudio de la diversidad bacteriana con estas técnicas permitió ha permitido obtener información
sobre la composición y estructura de poblaciones y comunidades bacterianas, establecer el impacto
de los factores ambientales sobre la diversidad bacteriana y diseñar de marcadores con fines de
diagnóstico e identificación tanto de bacterias cultivables como no cultivables.
El estudio de la diversidad y la dinámica bacterianas, en una muestra de suelo agrícola, por cuentas
viables y por análisis de perfiles de ácidos grasos de membrana, permitió determinar bacterias Gram
+ (~80% del total cultivado) y pocos miembros del grupo de las proteobacterias y bacterias verde-
sulfurosas (15% y 5%). De los géneros aislados, Micrococcus, Arthobacter y Corynebacterium están
presentes todo el año, mientras que Bacillus sólo se encuentra en julio, cuando la diversidad cultivada
fue más baja. Fue posible observar el mismo patrón de variación temporal: una baja diversidad y
número de grupos bacterianos en enero debido probablemente a la baja temperatura en esa época del
año, un incremento en número y diversidad en mayo y septiembre debido al aporte de nutrientes al
suelo por fertilización (primavera) y por el aporte al suelo de material vegetal durante la cosecha
(otoño). Los resultados del estudio de diversidad bacteriana permitieron establecer una relación entre
la variación de la diversidad de las proteobacterias con los niveles tróficos del suelo.
CLONACIÓN MOLECULAR DEL ADN METAGENÓMICO COMO UNA ESTRATEGIA PARA
EL ANÁLISIS Y EXTRACCIÓN DE LA DIVERSIDAD METABÓLICA DEL SUELO:
IMPLICACIONES BIOTECNOLÓGICAS
Otro enfoque metodológico para estudiar de la diversidad bacteriana de suelos es la utilización de
sistemas de clonación, con lo cual es posible ligar fragmentos de ADN metagenómico para su
propagación dentro de un hospedero bacteriano y su análisis. Algunas bacterias poseen moléculas de
ADN circular llamadas plásmidos, las cuales se replican independientemente del cromosoma, son
significativamente menores que un cromosoma bacteriano. Desde la década de 1970 se han utilizado
estas moléculas como receptoras de fragmentos de ADN provenientes del mismo o de otro organismo
por tanto, a los plásmidos también se les llama vehículos moleculares o vectores de clonación
molecular.
Una vez obtenido el ADN metagenómico de una muestra, se construye un banco metagenómico y se
analiza con base en dos enfoques:
1) Búsqueda de la función de los genes clonados en el banco
2) análisis de la secuencia nucleotídica de los genes representados en el banco.
El análisis del metagenoma bacteriano mediante esas dos aproximaciones se ha aplicado a diversos
problemas microbiológicos y ha permitido
1) La caracterización filogenética de la diversidad microbiana
2) la caracterización de nuevos genomas
3) la elucidación de nuevas vías metabólicas para la síntesis de metabolitos primarios y secundarios
4) la identificación de sistemas biológicos de resistencia a compuestos contaminantes
5) el descubrimiento de nuevas enzimas y biopolímeros.
AISLAMIENTO DE GENES CLONADOS EN UN BANCO DE ADN METAGENÓMICO QUE
CODIFIQUEN PARA PROTEÍNAS CON APLICACIONES BIOTECNOLÓGICAS
Esta estrategia se basa en la identificación de clonas conteniendo ADN metagenómico que expresan
una característica de interés seguida de la secuenciación del inserto de ADN en las clonas positivas y
del análisis del producto o actividad. La principal limitación de este método es que se requiere la
expresión de los genes presentes en el metagenoma por la maquinaria enzimática transcripcional de
la célula hospedera, generalmente E. coli. Además, cuando el producto de interés resulta de una ruta
metabólica, se requiere que todos los genes que la conforman se encuentren en el fragmento de ADN
metagenómico clonado.
ANÁLISIS DE LA SECUENCIA DE LOS GENES CLONADOS EN UN BANCO DE ADN
METAGENÓMICO
La finalidad de esta estrategia es determinar toda la secuencia nucleotídica de segmentos específicos
del ADN metagenómico, para establecer relaciones filogenéticas y funcionales entre las proteínas
codificadas por genes presentes en el metagenoma y secuencias de aminoácidos depositadas en
bancos de datos, es el archivo de secuencias de ADN más importante y extenso. Esta base de datos
contiene secuencias de ADN de diversos organismos en una cantidad equivalente a veinte mil
millones de pares de bases. Esta cantidad de información equivale aproximadamente a 20 millones
de genes o 4000 genomas bacterianos completos de tamaño Similar al de E. coli.

ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

Se utilizan metodologías donde se enmarcan los métodos fenotípicos, moleculares y otros
que han irrumpido recientemente en el laboratorio, y que están basados en métodos
proteómicos.Cada uno de los tres métodos tomados en el momento adecuado aporta
soluciones de gran valor al microbiólogo clínico en su práctica clínica diaria. Las
metodologías que se usan de manera habitual en el laboratorio de microbiología clínica,
tienen como fin identificar el agente etiológico responsable de un cuadro infeccioso
Los esquemas tradicionales de identificación fenotípica bacteriana se basan en las
características observables de las bacterias, como su morfología, desarrollo, y propiedades
bioquímicas y metabólicas. Permite el aislamiento del microorganismo implicado, su
identificación, el estudio de sensibilidad a los antimicrobianos y facilita la aplicación de
marcadores epidemiológicos. En el proceso de identificación bacteriana tradicional, la
experiencia del microbiólogo es fundamental para la elección de una prueba o una batería de
pruebas de forma secuencial en función de la fiabilidad de las mismas, del género o de la
especie bacteriana que se pretende identificar, del origen del aislado bacteriano, así como del
coste de las mismas.

En las pruebas bioquímicas se destacan las: Características microscópicas, características

macroscópicas (morfología y hemólisis), Cultivo (Medios de cultivo y requisitos de
crecimiento en relación a atmósfera, temperatura y nutrición).

Así también como las pruebas bioquímicas, estas pruebas se utilizan en la identificación
preliminar y con lectura inmediata como la catalasa y oxidasa, otras pruebas rápidas, con
lectura en menos de 6h tal y como la hidrólisis del hipurato, la -galactosidasa (ONPG), las
aminopeptidasas, la uresa y el indol, pruebas lentas, con lectura de 18 a 48h que incluirían la
óxido-fermentación, reducción de nitratos, fenilalanina-desaminasa, DNasa, hidrólisis de la
gelatina, decarboxilasas, lipasa, lecitinasa, utilización de citratos, utilización de malonato, y
prueba de CAMP entre las más frecuentes,pruebas basadas en caracteres de resistencia a
ciertas sustancias tal y como optoquina, bacitracina, solubilidad en bilis, y crecimiento en
caldo hipersalino.

Una amplia variedad de genes han sido utilizados como dianas moleculares en los estudios
taxonómicos o de filogenia en las distintos géneros y distintas especies bacterianas,
constituyendo el análisis del ARNr 16S el marcador inicial y en numerosas situaciones el
marcador suficiente para realizar una identificación más precisa.
En otras circunstancias, la alta homología genética presente en determinados géneros
bacterianos o un reciente cambio en su asignación taxonómica, no permite realizar con el
ARNr 16S una identificación a nivel de especie o de géneros. En estos casos, podemos
recurrir a otros genes dianas para realizar asignación de especie.
Las técnicas de identificación molecular en bacterias mediante el análisis del 16S ARNr u
otros genes se basan en la amplificación genómica y en la secuenciación de esos genes o
sus fragmentos. El medio de cultivo o las condiciones de incubación no serán factores
determinantes, pero sí serán factores críticos la extracción del ADN cromosómico y la
amplificación; Algunas veces se suceden errores entre el electroferograma y la secuencia
para resolver estas situaciones se reedita visualmente el electroferograma y se corrige, y/o
se alinean y ensamblan las secuencias directa y reversa en una secuencia consenso.
DESCRIPCIÓN DE NUEVOS PATÓGENOS.
Para la descripción de una nueva especie, se recomienda la presencia de diferencias
fenotípicas claras y en la secuencia diferencias de > 1 pb/100 bases. Si estas diferencias son
> 5%, se podría considerar la existencia de un nuevo género. Se estima que entre un 10-20%
de los aislamientos no coinciden con los microorganismos descritos y que puede tratarse de
un género o especie nueva, pero en cepas obtenidas en la práctica clínica esta frecuencia es
muy inferior.
La creciente relevancia del análisis del rpoB se manifiesta en dos situaciones. La primera, es
que el contenido bacteriano GC puede estimarse matemáticamente por el contenido GC del
gen rpoB. La segunda situación es que la similitud presentada en las secuencias rpoB de dos
especies bacterianas se correlaciona de forma muy significativa con sus correspondientes
valores de hibridación ADN-ADN (DDH) y con su identidad media en nucleótidos (ANI).
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS DE DIFÍCIL CULTIVO
Como ejemplo, se ha aplicado exitosamente y se ha podido constatar, la presencia de
Bartonella quintana y Coxiella burnetii como principales agentes etiológicos en endocarditis
con cultivo negativo8. Pero en el caso de que la muestra posea un origen no estéril o del
medio ambiente, y se presente flora mixta, esta estrategia no es eficiente.
DESVENTAJAS DE LA IDENTIFICACIÓN MOLECULAR
Distintas causas originan una incorrecta asignación de género y especie cuando se realiza una
identificación mediante el análisis de la secuencia y su alineamiento con otras secuencias.
CALIDAD DISMINUIDA DE LAS SECUENCIAS DEPOSITADAS EN LA BASE DE DATOS
Y ERRÓNEA ASIGNACIÓN DE ESPECIES
Ya que en la identificación molecular existe una fuerte dependencia con la precisión de las
secuencias depositadas y la idoneidad en la asignación de especie de esas cepas.
AUSENTE O BAJA CORRELACIÓN ENTRE LA IDENTIFICACIÓN GENOTÍPICA Y
FENOTÍPICA
Esto sucede cuando nos encontramos con genotipos idénticos o similares y diferentes
fenotipos o especies con significación clínica distinta. Esto sucede con: Mycobacterium
tuberculosis y M. bovis o M. africanum; Bordetella pertussis con B. parapertussis y B.
bronchiseptica; con las diferentes especies de Brucella..., etc.

BAJA RESOLUCIÓN EN LA IDENTIFICACIÓN MEDIANTE ARNR 16S

En ocasiones el ARNr 16S presenta una baja capacidad de discriminación para algunos
géneros y especies debido a una reciente divergencia, y es necesario complementar la
identificación con el estudio de otros genes o con pruebas fenotípicas. Así sucede con
diferentes especies de los géneros Bacillus (B. cereus y B. thuringiensis; B. globisporus y B.
psychrophilus), en Brucella, Achromobacter, Strenotrophomonas y Actinomyces, en el
complejo Acinetobacter baumannii-A. calcoaceticus.
PRESENCIA DE ELECTROFEROGRAMAS O CROMATOGRAMAS DE ADN MIXTOS
La identificación bacteriana proporcionada por el análisis del ARNr 16S es más certera,
sólida y reproducible que los análisis fenotípicos, resolviendo aproximadamente el 90% de
las identificaciones. Sin embargo, no constituye una herramienta infalible.
La elaboración de recomendaciones en su análisis según los géneros y especies a identificar,
Especialmente el análisis del rpoB va a contribuir a una identificación bacteriana más
eficiente (género, especie, subespecie), detectando y reclasificando nuevos organismos, y
mejorando la resolución filogenético del ARNr 16S.
NUEVAS TECNOLOGÍAS EN LA IDENTIFICACIÓN MOLECULAR MICROBIANA
Recientemente, la aparición de la técnica de PCR-multiplex acoplada a un análisis de la
temperatura de melting (SeptiFast, Roche Diagnostics, Manheim, Germany) identifica de
forma temprana a algunos agentes etiológicos bacterianos y fúngicos de la sepsis a partir de
muestra directa.
De forma adicional han surgido plataformas de identificación de patógenos que modifican o
sustituyen la secuenciación tradicional, como sucede con la pirosecuenciación o la
espectrofotometría de masas, respectivamente. Las plataformas de amplificación-
espectrofotometría de masas (PCR/ESI-MS)10 permiten la detección universal de uno o
varios patógenos (bacterias, virus, hongos y protozoos) presentes en una amplia variedad de
muestras (ambientales, clínicas, alimentarias o en cultivos). Tras extracción y una PCR de
amplificación con parejas de cebadores de amplio espectro, se obtienen uno o varios
productos de PCR que corresponden a regiones genómicas de identificación de los distintos
dominios en relación con la complejidad de la muestra problema. Estos productos se
desalan y son ionizados y aerosolizados hacia un espectrofotómetro de masas.
Recientemente ha aparecido una nueva plataforma comercial, conocida como PLEX-ID
(Abbott), basada en esta metodología, que permite el análisis directo e identificación de
microorganismos
Sobre muestras, incluidos los hemocultivos (BAC Spectrum Assay). Ha demostrado buenos
resultados incluso en bacteriemias polimicrobianas, con independencia de que sean
microorganismos aerobios, anaerobios, cultivables, lentos crecedores o incultivables.
MÉTODOS BASADOS EN PROTEÓMICA
La proteómica es el estudio y caracterización del conjunto de proteínas expresadas por un
genoma (proteoma). Las técnicas de proteómica abordan el estudio de este conjunto de
proteínas y las más usadas se basan en la electroforesis y en la espectrometría de masas.
La espectrometría de masas es una técnica analítica que permite analizar con gran precisión
la composición de diferentes elementos químicos al permitir la medición de iones derivados
de moléculas separándolos en función de su relación masa/carga (m/z)11.

Los tres componentes básicos de un espectrómetro de masas son los siguientes:

1. Fuente de ionización. Es el elemento del espectrómetro que ioniza el material que va ser
analizado.
2. Analizador de masas. Utiliza un campo eléctrico o magnético para acelerar los iones y
separarlos en función de su relación masa/carga (m/z).
3. Detector. Los iones que llegan al detector producen una señal eléctrica que es procesada,
ampliada y enviada a un ordenador. El registro obtenido es el espectro de masas o huella
química.
VENTAJAS, INCONVENIENTES Y LIMITACIONES
La utilización de la espectrometría de masas MALDI-TOF presenta ventajas e
inconvenientes. Como ventajas en el laboratorio de microbiología la técnica destaca por su
alta tasa de identificación, rapidez ya que obtiene resultados fiables en menos de un minuto
por muestra y no precisa pre-selección, facilidad por su preparación simple y uniforme.
Como inconvenientes en la metodología mencionar, que es mantener el vacío que el
espectrómetro requiere para trabajar y que sufre demoras en el tiempo de análisis si se
incumplen los procedimientos (no dejar secar completamente la muestra, no cerrar siempre
la tapa, etc.), requiere calibraciones y controles de calidad frecuentes.
Las principales «limitaciones» de la técnica actualmente se clasifican
En cuatro puntos:
– La relación cantidad de microorganismo por micro litro de matriz va influir de manera muy
importante en la obtención de un buen resultado.
-La identificación es independiente de que los medios de cultivo sean o no selectivos
– Pueden existir errores en la identificación por espectrometría de masas MALDI TOF entre
los microorganismos pertenecientes al grupo de los estreptococos viridans y pneumococo
– Existe un amplio número de referencias en las bases de datos comerciales empleadas para
establecer la comparación e identificación de los microorganismos.

TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN
El trabajo del microbiólogo es de suma importancia en el área de la microbiología clínica, ya que
gracias a esta área de estudio se da una solución más rápida y eficaz para su tratamiento, ya que para
un diagnóstico sobre enfermedades infecciosas pretende demostrar la presencia de microorganismos
patógenos, para esto se hacen cultivos con el fin de aislar al microorganismo causante de la infección,
ya aislado debería ser sencillo clasificarlo dentro de un grupo o taxón ya establecidos, para el
diagnóstico microbiológico la mayor parte métodos utilizados son fenotípicos ya que son más fáciles
de realizar y más asequibles que los genotípicos, y de ser posible mediante el mismo cultivo se analiza
la manera de matarlos con antimicrobianos.
Los métodos clásicos para clasificación de bacterias se basan en las características:

 Morfológicas
 Metabólicas
La identificación de una bacteria sospechosa de ser la causa de una infección es uno de los
instrumentos principales del diagnóstico y tratamiento de las enfermedades infecciosas con la mayor
eficiencia posible. Realizar esta tarea de manera efectiva es de gran importancia ya que detectar
diversas infecciones a tiempo y establecer el uso de antibióticos eficientes, traerá una disminución de
infecciones comunitarias.
La taxonomía bacteriana tiene como objetivo la construcción de sistemas que permitan clasificar a
las bacterias. Dentro de la clasificación taxonómica, las categorías y definiciones más utilizadas son
familia (un grupo de géneros relacionados entre sí), género (un grupo de especies relacionadas entre
sí), especie (un grupo de cepas relacionadas entre sí), tipo (grupos de cepas interrelacionados dentro
de las especies; por ejemplo, biotipo, serotipo) y cepa (aislamiento concreto de una especie en
particular).
la taxonomía bacteriana convencional permite la identificación de géneros y especies mediante la
aplicación de diversos criterios.
Las diferenciaciones taxonómicas las podemos hacer mediante Tinción de Gram: separa las bacterias
en dos grandes grupos (gran-positivas, de color violeta azulado, y gram-negativas, de color granate o
rojo-rosado), según se comporten ante esta tinción.
Indicaría la conveniencia de aplicar otras técnicas de diagnóstico rápido, con ello guía la calidad de
su proceso entre los microorganismos que se observan en la visión directa y los que se obtienen,
recuperan o aíslan por cultivo.
Para la identificación presuntiva por la morfología de las colonias, con el cual con el cultivo
microbiológico se obtiene información adicional para aislar e identificar a los microorganismos. Estos
medios de cultivo solido se clasifican en dos; medios no selectivos (agar sangre y agar chocolate)
ayuda al crecimiento de muchas especies de bacterias pero no permite el aislamiento de una y medios
selectivos que ayudan en el aislamiento de especies importantes mediante la adición de inhibidores,
sistemas indicadores y tampones que ayudan a la detección diferencial.
Es importante hacer una identificación preliminar importante de bacterias, basándose en las
características macroscópicas de las células en su disposición en forma de colonias sobre el medio de
cultivo en la que crece y se aíslan. Estas características macroscópicas de las colonias después de
checar visualmente el desarrollo de la superficie de las placas del agar, se debe de observar apreciando
las características de las colonias estas son; con forme al tamaño que por lo general para las bacterias
gam-positivas a las gram-negativas sus colonias son más pequeñas, en su forma, grado de elevación,
el borde que tiene el color que presenta la superficie, densidad, consistencia y olor.
REACCIONES EN EL MEDIO DE AGAR USADA PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS:
1. La hemolisis en medio de agar sangre, esta es una reacción que se observa en el medio
circundante a la colonia que sirve como ayuda para la identificación particularmente, de los
estreptococos esta debe valorarse por transiluminación y frontalmente; la alfa-hemolisis
elimina parciamente la sangre en torno a la colonia que origina una decoloración verdosa en
el medio y la beta-hemolisis elimina completa de la sangre circundante de las colonias por
lisis completa de los hematíes.
2. Producción de pigmentos en medio de agar; característica inherente de cada microorganismo
que puede estar confinados a la colonia o colorear el medio en verde o verde metálico
En los cambios en medios diferenciales en los medios de cultivo se incluyen diversos colorantes,
indicadores de pH y otros componentes que actúan como indicadores de las actividades
enzimáticas que pueden ayudar a la identificación de las bacterias aisladas
El crecimiento en medios líquidos; tiene claves que ayudan a la identificación del
microorganismo observando el crecimiento en los medios líquidos como el caldo tioglicolato o
el Brain-Heart-Infusion
Existen también pruebas bioquímicas rápidas de realización fácil sobre colonias aisladas a partir
de medios de cultivo que permite la diferenciación rápida entre grupos de microorganismos o
entre especies bacterianas. Estas pruebas pueden orientar las técnicas adicionales necesarias para
hacer una identificación definitiva.
Los métodos convencionales se suelen llevar a cabo en forma de cascada decisoria, con un
algoritmo de identificación estandarizado o usando una bacteria de prueba simultanea que
permita la identificación definitiva.
En la identificación de los bacilos gam-negativos aerobios se realiza una bacteria de pruebas
bioquímicas con la que se identifica los que se aíslan más constantemente en el medio
En la identificación de los coco gram-positivos se tiene que diferenciar a los Staphylococcus
aureus que son coagulasa positivo del resto de los estafilococos coagulasa negativos.
Para la identificación de los cocos gram.positivos catalasa negativos, su identificación es esencial
ya que existe una gran variedad de géneros, con lo que en bueno identificarla en cascada con
pocas pruebas, que permitan identificar el género y la especie.
La identificación de los bacilos gram-positivos de los géneros Coryne-bacterium y Bacillus, su
identificación peeliminar deben de hacerse por la morfología de las colonias, color, hemolisis,
características al microscopio, presencia de esporas, etc. También se puede utilizar un sistema
de galerías para los bacilos corineformes
La identificación de bacterias anaerobias se realiza una identificación preliminar, que permite
conocer el género, en función de la morfología, tinción de Gram, disposición y el patrón
hemolisis.
MÉTODOS SEMI O COMPLETAMENTE AUTOMATIZADOS
Hay varios métodos de identificación semiautomáticos y automáticos que superan a los métodos
convencionales debido a su facilidad de realizarlo y en menor tiempo que se requiere para
alcanzar una identificación definitiva de la especie, permite realizar las pruebas de sensibilidad
a los antimicrobianos al mismo tiempo. Los métodos automáticos no permiten siempre la
identificación de todas las bacterias. Por esto, debe de comprobar que los resultados de los
métodos automáticos correspondan con los de otras pruebas y con su diagnóstico, estos sistemas
requieren controles de calidad estrictos.
Los sistemas automáticos actuales son parecidos en el rendimiento de porcentaje de
identificación, su diferencia fundamental está en las pruebas de sensibilidad y en el sistema
experto que utilizan.