GUIA DE LABORATORIOS

DC-LI-FR-001

Versión: 00 Fecha: 28-02-2014 Página 1 de 3

BIOQUIMICA

SOLUBILIDAD Y DESNATURALIZACION DE PROTEINAS

1. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

Identificar la resistencia física y química de las proteínas

Observar la solubilidad y desnaturalización de las proteínas con varios agentes físicos y químicos

2. MARCO TEORICO

La solubilidad de la mayoría de las proteínas disminuye frente a elevadas concentraciones de sales. Este efecto,
llamado desalado (“salting out”), resulta muy útil en la separación de proteínas. Este fenómeno en palabras
simples se basa en la competencia de las moléculas de solvente por parte del soluto, a medida que agregamos
una sal al medio líquido que contiene la proteína disuelta, los iones de la sal disuelta van acaparando las aguas
que se encuentren solvatando la proteína disminuyendo así su solubilidad permitiendo su precipitación. La
dependencia de la solubilidad respecto a la concentración salina difiere de una a una proteína. Por ejemplo, a
una concentración de sulfato 0,8 M, el fibrinógeno precipita, mientras que se requiere una concentración 2,4 M
para precipitar la albúmina sérica. El precipitado por salado también resulta útil para concentrar disoluciones
diluidas de proteínas.

Por otro lado, la desnaturalización es la pérdida de la estructura de una proteína, con o sin pérdida de la actividad
biológica, dependiendo a que nivel de estructura fue la desnaturalización. Para desnaturalizar una proteína
existen varios métodos, tanto físicos como químicos. En los primeros encontramos el calor, el pH, bajas
temperaturas. En los segundos podemos mencionar a los ácidos fuertes, urea, detergentes como el SDS (dodecil
sulfato de sodio), β-mercaptoetanol, ditiothreitol, etc.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Nueve tubos de ensayo

Mechero
Pinzas para tubo de ensayo
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Vaso de precipitados
Rejilla de asbesto

REACTIVOS

H2SO4
HNO3
NaOH
Cloruro de Mercurio
Albúmina
Nitrato de Plata
Ácido Pícrico
Ácido Tricloroacetico

4 PROCEDIMIENTO

Desnaturalización de albumina con ácidos y bases fuertes

Prepara 3 mL de H2SO4 con un 1mL de Albúmina, igualmente hacerlo con los reactivos HNO 3 y el NaOH. (Ácidos
fuertes y alcalinos). Agitar los tubos y observar si se presenta solubilidad.

Desnaturalización de albumina con metales pesados

Preparar 1mL de Cloruro de Mercurio con 2 mL de Albúmina, e igualmente hacerlo con Nitrato de Plata. Agitar
los tubos de Ensayo con los reactivos y ver si se solubilizan.

Desnaturalización de albumina con Ácido Pícrico y Tricloroacetico

En tubos de Ensaye agregar 1 mL de ácido Pícrico con 2 mL de Albúmina. Hacer lo mismo con el Ácido
Tricloroacetico. Calentarlos a baño maría por 5 min y después dejarlos enfriar por 5 min más y hacer
observaciones de cada tubo.
Hacer observaciones.
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Adición de limón y ácido clorhídrico a la leche.

Coloca en dos vasos de precipitado un poco de leche. A uno adicionales unas gotas de limón y al otro unas
cuantas gotas de HCl concentrado. Anota tus observaciones.

5. PREGUNTAS DE PROFUNDIZACIÓN

a. ¿Consultar sobre el método de electroforesis de proteínas y qué relación tiene con lo aprendido
en el laboratorio?
b. ¿Explique qué tipo de proteínas y bajo qué condiciones de separación pueden mantener su
actividad biológica?
c. ¿Qué tipo de proteína contiene la leche, investigue que cambio estructural le sucede a esta
proteína para que precipite?

6. BIBLIOGRAFÍA y CIBERGRAFÍA

GARCÍA, ARCESIO R., Y UBAD L., AQUILINO A. Hacia la Química 2, Primera Edición
Revisada. Editorial Temis S.A. Santa Fé de Bogotá. 1985.

ROBERT HORTON. Principles of biochemestry. Cuarta edición. Editorial: Prentence hall. 2006

7. INFORME

El informe debe realizarse en formato tipo artículo, de acuerdo a la plantilla DC-LI-FR-002.

No olvide presentar todos los cálculos realizados.

Nota: Verifique siempre el estado de agregación de los reactivos y el grado de peligrosidad de los
mismos para prever las medidas de seguridad adicionales que debe cumplir.