Medios de Cultivos

MEDIOS DE CULTIVOS
 Agente solidificante en medios de cultivo bacteriológicos y en otras aplicaciones (cultivo de tejido,

difusión inmunológica, estudios nutricionales, etc.).
 El Agar es un poligalactósido que se obtiene a partir de algas rojas marinas. La mayoría de
microorganismos son incapaces de degradarlo.
 Las concentraciones más habitualmente utilizadas en los medios de cultivo bacteriológicos son de
13─20 g/L para medios sólidos y 5─7 g/l para medios semisólidos. En las distintas aplicaciones,
se precisan distintos grados de pureza. El tratamiento de un Agar y los métodos utilizados en su
purificación dan, básicamente, 4 tipos de Agar: Agar Técnico, Agar Bacteriológico Tipo
Americano, Agar Bacteriológico Tipo Europeo y Agar Purificado.
 El Agar Técnico es el de menor pureza, y puede ser utilizado para la
Agar Técnico preparación de medios de cultivo para microorganismos no exigentes
y en el que el medio de cultivo no requiera una transparencia total.
 Agar soluble en agua purificada, proporcionando soluciones
transparentes.
AGAR─AGAR Agar Bacteriológico  Es el más indicado en la preparación de medios de cultivo en general.
Tipo Europeo  Es el más utilizado en Europa para los cultivos bacteriológicos.
 Está ausente de inhibidores que pueden interferir el crecimiento
microbiano y es altamente transparente.
 Este Agar es similar al Agar Bacteriológico Tipo Europeo pero con una
menor fuerza de gel.
 Con este Agar se debe trabajar a mayores concentraciones.
Agar Bacteriológico
 Es usado en la preparación de medios de cultivo y otras aplicaciones
Tipo Americano
bacteriológicas.
 Está ausente de inhibidores que pueden interferir el crecimiento
microbiano y es altamente transparente.
 Agar de alta pureza, exento de compuestos nitrogenados, sales
Agar Purificado inorgánicas y vitaminas.
 Se utiliza en difusión inmunológica, cultivos de tejidos y otros.
AGAR BAIRD─PARKER
DESCRIPCIÓN COMPOSICIÓN FUNDAMENTO/MODO DE EMPLEO
 Se trata de una base a la que se deben añadir Emulsión de Yema
de Huevo y Potasio Telurito. También se puede añadir
Sulfametacina para inhibir el crecimiento de Proteus. Por la
presencia del Litio Cloruro y el Potasio Telurito se inhibe el
 Se emplea para el aislamiento
crecimiento de microorganismos no deseados. Por la presencia
selectivo de Estafilococos en
del Sodio Piruvato y la Glicina se favorece el crecimiento de los
alimentos, productos farmacéuticos,
 Extracto de carne Estafilococos. A su vez el Potasio Telurito combinado con la
productos cosméticos y otras muestras
 Glicina acción de la yema de huevo permite diferenciar los Estafilococos.
biológicas.
 Digerido pancreático de caseína El Staphylococcus aureus da colonias negras, por la reducción
 Este medio fue puesto a punto por  Agar del potasio telurito a teluro, rodeadas de un halo de transparencia
Baird-Parker en 1962. Medio  Extracto de levadura debido a la actividad lecitinasa. Existe un paralelismo importante
reconocido por la USP y por la Ph. Eur.,  Litio cloruro entre los coagulasa-positivos y la reacción descrita con la yema
además, de otros organismos oficiales.  Sodio piruvato de huevo y el telurito; es por lo que estas características se
Se ha demostrado que este medio es utilizan como indicativo de esta actividad. Para la demostración
el menos inhibidor para los fines directa de S. aureus coagulasa-positivos puede suplementarse el
propuestos. medio con plasma de conejo en lugar de yema de huevo.
 Incubar a 35─37 ºC durante 18─72 horas.
 Las colonias sospechosas se confirmarán con la prueba de la
coagulasa y desoxiribonucleasa.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo de las colonias Color de la colonia Halos de lecitina
Bacillus subtilis Leve─inhibido Marron (─)
Staphylococcus epidermidis Leve–bueno Negro (─)
Staphylococcus aureus Bueno Negro (+)
Proteus mirabilis Bueno Marrón (─)
AGAR BASE─CHOCOLATE
 Se emplea para el cultivo de Gonococos y
aislamiento de Neisserias patógenas.
Como tal base debe ir acompañada de  Se trata de La mezcla de peptonas constituye el elemento
uno o varios suplementos según el fin que nutritivo del medio. Los dos fosfatos tamponan el pH y el
se persiga. Sodio Cloruro mantiene el nivel salino adecuado para el buen
 Johnston desarrolló un Agar Chocolate  Almidon de maíz
crecimiento de los gérmenes. El Almidón de Maíz ejerce una
que debidamente suplementado producía acción neutralizante ante la posible presencia de tóxicos
 Potasio di─hidrógeno fosfato
un crecimiento acelerado en 24 horas de producidos en el metabolismo bacteriano. La adición de los
 Sodio cloruro
la Neisseria gonorrhoeae. Más tarde suplementos como la sangre de caballo lisada o hemoglobina
 Mezcla de peptonas
Carpenter y Morton introdujeron soluble completa la funcionalidad del medio. Pueden
 Di─potasio hidrogeno fosfato
modificaciones a la formulación original adicionarse antibióticos para evitar el desarrollo de flora
 Agar
de Johnston encontrando resultados acompañante.
óptimos para el cultivo de este  Sembrar un inóculo abundante en la superficie del medio.
microorganismo. El medio permite una Incubar entre 35 y 37 ºC de 24 a 48 horas en atmósfera
amplia variedad de aplicaciones en húmeda y 5-10% CO2.
función de los suplementos que se le
añadan.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo de las colonias
Haemophilus influenzae Satisfactorio
Neisseria meningitidis Satisfactorio
Neisseria gonorrhoeae Satisfactorio
Streptococcus pneumoniae Satisfactorio
Streptococcus pyogenes Satisfactorio
AGAR BILIS ESCULINA CON AZIDA
 La presencia de azida sódica y bilis de buey inhibe el crecimiento
de la flora acompañante, mientras los Enterococos pueden crecer
 Bilis de buey sin dificultades. Ello unido a la capacidad de hidrolizar la esculina
 Sodio azida son propiedades constantes de los Enterococos. El producto
 Hierro (III) citrato resultante de la hidrólisis de la esculina es la esculetina que forma
 Sodio cloruro un complejo con el Hierro (III) Citrato de un color pardo oscuro.
 Medio de cultivo para la identificación  Agar
 Sembrar en superficie aquellas colonias sospechosas aparecidas
presuntiva de Enterococos.  Esculina en el medio Slanetz─Bartley o bien transferir directamente el filtro
 Extracto de levadura de membrana con colonias sospechosas crecidas sobre el medio
 Peptona Slanetz─Bartley. Después de incubar a 44 ºC durante 2─4 horas,
 Triptona se deben considerar como Enterococos intestinales aquellas
colonias que aparecen rodeadas de medio virado de marrón a
negro como consecuencia de la hidrólisis de la esculina.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo de las colonias Esculina
Streptococcus faecalis Bueno (+)
Streptococcus faecium Bueno (+)
Streptococcus pyogenes Nulo (─)
Escherichia coli Nulo─moderado (─)
AGAR VERDE BRILLANTE
 El verde brillante es un potente inhibidor de la flora Grampositiva.
Este medio está indicado para el desarrollo de las especies de
Salmonella a excepción de Salmonella typhi. Tampoco es
aconsejable para el crecimiento de especies del género Shigella.
 Se emplea como medio altamente
Las colonias típicas de Salmonella aparecen de color rosado con
selectivo para el aislamiento de
un halo rojo alrededor. Los microorganismos fermentadores de la
Salmonella, salvo la Salmonella typhi, en
 Bilis de buey lactosa y/o de la sacarosa forman colonias de color amarillo
gran diversidad de muestras.
 Sodio azida verdoso con halo verde─amarillento; presentando un crecimiento
 Las primeras formulaciones del medio se
 Hierro (III) citrato más moderado, a veces inhibición completa. Para inhibir el halo
deben a Kristensen y colaboradores, que  Sodio cloruro de Proteus puede adicionarse el medio con 2,5 g/L de Sodio
lo encontraron muy indicado para
 Agar Desoxicolato.
diferenciar ciertas Salmonellas de otros
 Esculina  La Farmacopea Europea 6.0 indica este medio como agar
microorganismos intestinales Gram-
 Extracto de levadura selectivo en el test de Salmonella junto a XLD Medio y
negativos. Posteriormente Kauffmann
 Peptona Desoxicolato Citrato Agar. Sembrar el medio de cultivo en
modificó la fórmula inicial que mejoró  Triptona superficie con muestra preincubada en Agua de peptona
notablemente los resultados. La fórmula
tamponada y posterior enriquecimiento en Caldo
actual corresponde a las
Bilis─Tetrationato Verde Brillante. Las placas se incuban a 35-37
recomendaciones de la USP
ºC durante 18-72 horas.
 Las colonias sospechosas son pequeñas, transparentes,
incoloras o algo rosadas rodeadas de un halo rosa-rojizo y se
deberán confirmar.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo de las colonias Color de la colonia
Escherichia coli Inhibido─moderado Amarillo─verde
Salmonella enteriditis Bueno Rosa─blanco
Salmonella typhi Inhibido─moderado Rojo
Salmonella typhimurium Bueno Rosa─blanco
Staphylococcus aureus Inhibido─moderado Amarillo
AGAR BROLACIN/CLED (Cistina Lactosa Electrolito Deficiente)
 Se emplea para el recuento, aislamiento
e identificación orientativo de diversos
gérmenes. También se emplea como
medio de transporte para inóculos en  Azul de bromotimol  El Azul de Bromotimol cambia de color por la fermentación ácida
inmersión.  Extracto de carne de la Lactosa. La Cistina favorece el crecimiento de las
 Sandys fue el primero en trabajar sobre  Peptona caseína Enterobacteriáceas y el bajo contenido en electrolitos reduce la
un medio que permitiera la observación  Agar difusión de Proteus. Las peptonas, el extracto de carne y la
de colonias al mismo tiempo que se  L─cistina Lactosa constituyen los elementos nutrientes del medio.
evitara la aglomeración por Proteus. Más  Lactosa  Sembrar por estría en la superficie del medio. Incubar a 35 ±2 ºC
tarde, conjuntamente con Mackey,  Peptona de gelatina de 18 a 24 horas.
fueron modificando las formulaciones de
los primeros ensayos hasta llegar a la
composición actual.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo de las colonias Color del medio
Escherichia coli Satisfactorio Amarillo
Proteus vulgaris Satisfactorio Azul─azul verdoso
Staphylococcus aureus Satisfactorio Amarillo claro o sin cambio
AGAR CEREBRO─CORAZÓN

 Se emplea para el cultivo de bacterias
exigentes como Estreptococos,
Neumococos, Meningococos y otros. Por
la adición de Estreptomicina,
 Por la presencia de peptona, infusión de cerebro de ternera e
Gentamicina o Cloranfenicol resulta un
 Infusión de cerebro de ternera infusión de corazón de res, se tienen los componentes necesarios
medio selectivo para hongos.
 D (+)─glucosa para nutrir microorganismos exigentes. La glucosa se emplea
 Este medio se basa en el caldo de
 Di─potasio hidrógeno fosfato para la fermentación y el fosfato como tampón. Por la adición de
Rosenow. Los primeros estudios  Agar antibiótico es un medio adecuado para el estudio de hongos
demostraron que el medio era más eficaz  Infusión de corazón de res patógenos. Debido a su contenido de glucosa es menos indicado
que otros como base glucosada en el
 Mezcla de peptonas para la caracterización de hemólisis, pero puede utilizarse
aislamiento de determinadas bacterias.  Sodio cloruro suplementado con sangre.
Si además se le añadía antibiótico el
 Incubar a 35 ±2 ºC de 24 a 72 horas.
medio se hacía selectivo para el cultivo
de levaduras y hongos, sobre todo en
muestras altamente contaminadas por
bacterias.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Crecimiento sin sangre Crecimiento con 5% de sangre
Aspergillus niger Bueno Bueno
Neisseria meningitidis Moderado Bueno
Streptococcus pneumoniae Moderado Bueno
Streptococcus pyogenes Moderado Bueno
Saccharomyces cerevisiae Bueno Bueno
AGAR CETRIMIDA

 La Cetrimida actúa como elemento inhibidor de una amplia
variedad de microorganismos, de tal manera que no inhibiendo el
crecimiento de las Pseudomonas aeruginosa sí lo hace con otras
especies de Pseudomonas. Además, su acción tensioactiva
produce la liberación del fósforo y del nitrógeno a las células
bacterianas distintas de Pseudomonas aeruginosa. Por la
presencia de Magnesio Cloruro y Potasio Sulfato se favorece la
 Infusión de cerebro de ternera
producción de piocianina que dará al medio coloración azul
 D (+)─glucosa
verdoso o marrón. Algunas especies de Proteus, Klebsiella y
 Medio selectivo para el recuento de  Di─potasio hidrógeno fosfato
Providencia pueden contaminar el medio. Si se precisa aumentar
Pseudomonas aeruginosa en diversas  Agar
la selectividad del medio, puede suplementarse con ácido
muestras biológicas.  Infusión de corazón de res
nalidíxico 15 µg/mL. También puede reducirse la temperatura de
 Mezcla de peptonas
incubación (20 °C de 3 a 5 días) para evitar las contaminaciones
 Sodio cloruro
antes mencionadas.
 La Farmacopea Europea recomienda el medio para el control de
Pseudomonas aeruginosa.
 Se incuban las placas a 30─35 ºC durante 18─24 horas con
muestra preenriquecida en Soja Triptona (TSB), Caldo. El
crecimiento de colonias sobre el medio indica presunción de P.
aeruginosa. Confirmación con tests identificativos.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo Color de la colonia
Escherichia coli Inhibido ───
Pseudomonas aeruginosa Satisfactorio Amarillo─verde a azul
Staphylococcus aureus Inhibido ───
AGAR CITRATO DE SIMMONS
 Se emplea para la diferenciación e
identificación de Enterobacteriáceas y  Este medio se fundamenta en el distinto comportamiento de los
ciertos Hongos, basándose en la Coliformes fecales y los Aerógenos en un ambiente que contiene
utilización del Citrato. sales inorgánicas de amonio como única fuente de nitrógeno y
 Este medio fue desarrollado por primera  Tri─sodio citrato citrato como única fuente de carbono. En tal situación los
vez en forma líquida por Koser. No  Amonio di─hidrógeno fosfato primeros muestran su incapacidad de desarrollo, mientras que los
obstante, presentaba el inconveniente de  Azul de bromotimol segundos lo hacen sin dificultad. La presencia de azul de
enturbiarse cuando se empleaban  Magnesio sulfato bromotimol hace que el medio, inicialmente verde, pueda cambiar
inóculos grandes, incluso sin producirse  Di─potasio hidrógeno fosfato de color por la producción de álcali, a un azul oscuro. Para
crecimiento alguno. Más tarde Simmons  Sodio cloruro caracterizar Klebsiella es preciso añadir Inosita a razón de 10 g/L
desarrolló el mismo medio en forma  Agar antes de esterilizar.
sólida y consiguió superar las  El medio preparado es de color verde, cuando se siembra en los
desventajas anteriores. La formulación tubos se hace en la columna vertical y por estría en la superficie
de este medio cumple las inclinada. Incubar entre 35 ±2 ºC de 24 a 96 horas.
recomendaciones de la APHA.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo Viraje a azul
Enterobacter aerogenes Bueno (+)
Escherichia coli Inhibido (─)
Salmonella enteritidis Bueno (+)
Salmonella typhimurium Bueno (+)
Salmonella typhi Bueno (─)
Shigella dysenteriae Inhibido (─)
AGAR DESOXICOLATO─LACTOSA
 Se emplea para el aislamiento de bacilos  Los Coliformes dan lugar a colonias rojas mientras que los
 Sodio desoxicolato
entéricos Gram─negativos. También se microorganismos entéricos al no ser capaces de fermentar la
 Lactosa
usa en el recuento de Coliformes en lactosa dan colonias incoloras, al tiempo que las bacterias no
 Di─potasio hidrógeno fosfato
leche y productos lácteos. entéricas quedan inhibidas por la presencia de citrato y
 Tri─sodio citrato
 La formulación del medio es, en esencia, desoxicolato. En algunos casos se puede añadir sacarosa a
 Agar
la descrita por Leifson para la concentración del 1% para ciertos Coliformes que fermentan la
 Hierro (III) citrato
diferenciación de bacilos entéricos, Sacarosa más fácilmente que la Lactosa.
 Peptonas
fundamentada en la fermentación de la  Sembrar el medio en superficie o por el método de incorporación
 Rojo neutro
lactosa como característica diferencial de en gelosa.
 Sodio cloruro
los Coliformes.  Incubar a 35 ±2 ºC de 18 a 24 horas.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Escherichia coli Bueno Rojo─rosa con precipitación biliar
Salmonella typhimurium Bueno Incolora
Staphylococcus aureus Inhibido (─)
AGAR DNasa
 Los microorganismos productores de DNasa depolimerizan el
ácido desoxirribonucléico que contiene el medio, dando lugar a
unas zonas de transparencia alrededor de las zonas sembradas,
 Se emplea para determinar la actividad
después de inundar la placa con ácido clorhídrico 1N. La
de la desoxirribonucleasa producida por
acidificación del medio con ácido clorhídrico provoca la
microorganismos, principalmente
precipitación del ADN quedando el medio turbio, excepto,
Estafilococos.
 Ácido desoxirribonucleico alrededor de las colonias DNasa─positivas. Para aumentar la
 Weckman y Catlin pusieron de manifiesto
 Peptona de caseína información sobre la caracterización de Estafilococos patógenos,
que el aumento de la actividad
 Peptona de soja puede demostrarse el consumo de Manitol suplementando el
productora de DNasa guarda una  Sodio cloruro medio con este producto y un indicador de pH como el azul de
estrecha relación con la producción de
 Agar Bromotimol.
coagulasa. También se demostró que la
 Inocular en superficie por estría. Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.
producción de DNasa es una indicación
Inundar la placa con Ácido Clorhídrico 1N y observar la
fiable en la determinación de
transparencia alrededor de la estría. Si se ha suplementado el
Estafilococos patógenos.
medio con Manitol y Azul de Bromotimol, el medio es azul, pero
las colonias Manitol─positivas son de color amarillo con halo
amarillo alrededor.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo Transparencia
Serratia marcensens Satisfactorio (+)
Staphylococcus aureus Satisfactorio (+)
Staphylococcus epidermidis Satisfactorio (─)
Staphylococcus pyogenes Satisfactorio (+)
AGAR EMB LEVINE/EOSINA AZUL DE METILENO SEGÚN LEVINE
 La eosina y el azul de metileno son productos que inhiben parcialmente el
crecimiento de microorganismos gram─positivos, entre ellos los Estreptococos
fecales. Además, la combinación del azul de metileno y la eosina permite
 Se emplea para la investigación y diferenciar los gérmenes lactosa─positivos de los lactosa-negativos.
diferenciación de bacilos entéricos y
 Los Coliformes dan colonias violetas oscuro, con una zona central más
microorganismos Coliformes. Con este
oscura, mientras, que los lactosa-negativos dan colonias incoloras. Este
medio se puede identificar Escherichia coli
medio es utilizable para la identificación de Candida albicans cuando se
y Enterobacter. También permite la
suplementa con Clortetraciclina clorhidrato a razón de 100 mg/L inhibiendo el
identificación de Candida albicans.  Eosina
crecimiento de la flora acompañante.
 Los primeros en desarrollar este tipo de  Lactosa
 Incubar a 37 ºC de 24 a 48 horas. Para el cultivo de Candida albicans, las
medio fueron Holt─Harris y Teague que  Di─potasio hidrógeno fosfato
placas suplementadas con Clortetraciclina que serán de color azul se incuban
empleaban lactosa y sacarosa como  Azul de metileno
en jarra de anaerobiosis en una atmósfera con 10% de dióxido de carbono.
componentes capaces de ser  Peptona de gelatina
 Agar  Para el cultivo confirmativo de E. coli, las placas se incubarán a 44,5 ±1 °C
fermentados. Más tarde Levine modificó el
con lecturas a las 24 y 48 h.
medio suprimiendo la sacarosa y
aumentando la proporción de lactosa, lo  Las colonias de E. coli en este agar miden 2─3 mm de diámetro, son planas
que permitía fácilmente diferenciar o ligeramente cóncavas, con centros oscuros, casi negros. Con luz reflejada,
Escherichia coli y Enterobacter casi siempre se observa un brillo metálico verdoso. Enterobacter forma
aerogenes. colonias más grandes (4─6 mm) con centro pardo, mientras que Salmonella
y Shigella forma colonias translúcidas, desde incoloras a ámbar. Klebsiella da
colonias mucosas parduzcas. Candida albicans da colonias en forma de
telaraña o de pluma.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
enterobacter aerogenes Satisfactorio Rosa─parduzco
Proteus mirabilis Satisfactorio Incolora
Salmonella typhimurium Satisfactorio Incolora
Escherichia coli Satisfactorio Púrpura─verde, brillo metálico centro negro
Staphylococcus aureus Inhibido ────
AGAR ENDO
 La presencia de Sodio Sulfito y Pararrosanilina inhibe el
 Se emplea para la investigación y
crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Además, las
recuento de Coliformes en aguas,
proporciones de ambos son tales que la Pararrosanilina se
productos lácteos y alimentos en general.
mantiene decolorada, de tal manera que sólo con el acetaldehído
 El inicio fue el trabajo de Endo para
generado en la fermentación de la lactosa se consigue
encontrar un medio que no tuviera sales
restablecer su color original. Así, las bacterias lactosa-negativas
biliares y que permitiera diferenciar las  Lactosa
permanecerán incoloras, mientras que las lactosa─positivas
 Enterobacteriáceas que fermentan la  Peptona
toman un color rojo intenso que llega a colorear el medio que las
lactosa de las que no. En su origen fue  Di─potasio fosfato
rodea. La colonia de E. coli, además del color rojo intenso, puede
desarrollado para el aislamiento e  Sodio sulfito
presentar un brillo metálico.
identificación de los bacilos del tifus,  Agar
 Incubar entre 35 y 37 ºC de 24 a 48 horas. Las placas preparadas
aunque posteriormente aparecieron
son de color rosa y deben conservarse entre 2─8 °C y protegidas
otros medios más eficaces, al tiempo que
de la luz para evitar la oxidación de la Pararrosanilina. El medio
se encontró ser de los medios más
preparado debe utilizarse durante los días siguientes a su
indicados para el análisis bacteriológico
preparación, ya que la oxidación del medio lo hace volver cada
del agua.
vez más rojo e inservible.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Enterobacter aerogenes Satisfactorio Rojo
Salmonella typhi Satisfactorio Incolora
Shigella sonnei Satisfactorio Incolora
Escherichia coli Satisfactorio Rojo con brillo metálico
AGAR LIA/AGAR HIERRO Y LISINA
 El agar hierro lisina permite determinar los microorganismos capaces de
descarboxilar la lisina, produciendo un cambio de color del púrpura de
bromocresol. Sin embargo, esta descarboxilación sólo se puede hacer en un
medio ligeramente ácido, que se consigue con la fermentación de glucosa,
por ello esta prueba está limitada a los microorganismos capaces de utilizar
 Se emplea como medio diferencial  Amonio hierro (III) citrato la glucosa. Cuando el pH del medio baja, el indicador vira a amarillo. Al
para Salmonella y Arizona, basado  L─lisina alcalinizar el medio debido a la descarboxilación de la lisina, el indicador
en la descarboxilación de la Lisina.  Extracto de levadura (púrpura de bromocresol) vira a rojo púrpura. Los cultivos que contienen
 Este medio de cultivo se basa en la  D (+)─glucosa microorganismos capaces de formar Hierro (II) Sulfuro presentan un
fórmula de Edwards y Fife. El Agar  Peptona de gelatina precipitado negro. Además pueden aparecer burbujas de gas, que pueden
Hierro y Lisina se utiliza en la  Púrpura de bromocresol incluso desplazar el medio.
diferenciación de Salmonella y  Sodio tiosulfato  Incubar a 37 ºC de 18 a 24 horas. Este medio se siembra a partir de un
Arizona frente a Proteus.  Agar cultivo puro. Debe sembrarse tanto en la superficie inclinada como por
picadura en la columna vertical. Los microorganismos capaces de
descarboxilar la lisina (LDC positivos) tales como Salmonella y Arizona
presentarán un medio rojo-púrpura después de la incubación; mientras que
los microorganismos LDC negativos como Proteus mantendrán la columna
vertical de color amarillo.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo de las colonias Superficie inclinada Base H2S
Citrobacter freundii Bueno Rojo─púrpura Amarillo (+)
Escherichia coli Bueno Rojo─púrpura Rojo─púrpura (─)
Proteus mirabilis Bueno Rojo─profundo Amarillo (─)
Salmonella typhimurium Bueno Rojo─púrpura Rojo─púrpura (+)
Shigella flexneri Bueno Rojo─púrpura Amarillo (─)
Salmonella arizonae Bueno Rojo─púrpura Rojo─púrpura (+)
AGAR MANITOL SALADO/SAL Y MANITOL
 Se emplea para el aislamiento selectivo y
recuento de Estafilococos patógenos en  El efecto inhibidor se debe a la alta concentración de Sodio
productos lácteos, cárnicos, marinos y Cloruro del medio. Con la fermentación de la D (─)─Manita se
otros productos alimenticios. También se genera ácido que ocasiona el viraje del rojo de fenol al amarillo,
emplea con el mismo fin en productos permitiendo así una mayor claridad en el momento de establecer
farmacéuticos y cosméticos. el diagnóstico, ya que la mayoría de los Estafilococos patógenos
 La formulación del medio se basa en la  Sodio cloruro fermentan este azúcar.
propiedad, ya enunciada por Koch, de que  Extracto de carne  Sembrar grandes inóculos en la superficie del medio. Incubar a
el crecimiento de los Estafilococos no era  Digerido péptico de tejido animal 30─35ºC de 18 a 72 horas. La adición de un 5% de Emulsión de
inhibido por una concentración de Sodio  Agar yema de huevo permite detectar la actividad en Estafilococos.
Cloruro del 7,5%, mientras que esto sí  D (─)─manita  La Farmacopea Europea y la USP lo indican para el control de S.
sucedía con la mayoría de las bacterias  Digerido pancreático de caseína aureus. La muestra preincubada en Soja Triptona (TSB) Caldo a
restantes. Chapman confirmó esta  Rojo de fenol 30─35 ºC durante 18─24 horas, se inocula sobre placa de Sal y
experiencia añadiendo que los Manitol Agar. Después de incubar las placas a 30─35 ºC durante
Estafilococos patógenos crecían de forma 18─72 horas, se observa la presencia o no de crecimiento
abundante al tiempo que los no patógenos característico de colonias amarillas rodeadas de halo amarillento
lo hacían en pequeñas colonias. La que indica la posible presencia de S. aureus. Se deberán
formulación de este medio corresponde a confirmar colonias sospechosas.
las recomendaciones de la USP
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Enterobacter aerogenes Inhibido ────
Escherichia coli Inhibido ────
Staphylococcus aureus Satisfactorio Amarillo
Staphylococcus epidermidis Acepatable/satisfactorio Rojo
AGAR MAC CONKEY
 Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe
el crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Por la presencia
de la lactosa, las bacterias capaces de fermentarla acidifican el
 Medio de cultivo utilizado en la
medio, cambiando el color del rojo neutro y formando colonias
investigación de organismos coliformes.
 Lactosa rojas o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio
 Este medio se basa en la fórmula original
 Sales biliares correspondiente al precipitado biliar. Las bacterias
de MacConkey a base de sales biliares,  Rojo neutro lactosa─negativas dan colonias incoloras.
rojo neutro y lactosa para el aislamiento de  Sembrar la muestra por estría en la superficie de la placa
 Violeta cristal
bacilos entéricos Gram─negativos. El
 Peptona (carne y caseína) preenriquecida en MacConkey, Caldo. Incubar a 35─37 ºC de 18
medio ha sufrido múltiples variaciones en
 Peptona de gelatina a 72 horas.
el transcurso del tiempo, ya sea por la
 Sodio cloruro  La Farmacopea indica este medio para el control de E. coli.
adición de otros ingredientes o por la  Agar  Sembrar sobre MacConkey Agar muestra preenriquecida en TSB
modificación de las proporciones entre
y posteriormente enriquecida en MacConkey Caldo. Incubación
ellos.
de las placas inoculadas a 30─35 ºC durante 18─72 horas. El
crecimiento de colonias sobre el medio indica presunción de
E. coli. Confirmar con tests identificativos.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Enterobacter aerogenes Bueno Rosa─rojo
Escherichia coli Bueno Rosa─rojo (precipitado biliar)
Proteus vulgaris Bueno Incolora
Salmonella enteritidis Bueno Incolora
Shigella dysenteriae Bueno Incolora
AGAR MUELLER─HINTON
 Se emplea para ensayos de sensibilidad de los  En la preparación de este medio es fundamental que las
microorganismos frente a antibióticos y concentraciones de timina, timidina y ácido 4-
sulfamidas. También en aislamiento primario de aminobenzoico, sean lo suficiente bajas para no inhibir la
Gonococos y Meningococos. actividad antibacteriana de antibióticos y sulfamidas. Las
 Mueller y Hinton tomaron como punto de partida dos primeras inhiben los antibióticos y el último las
de sus estudios el medio complejo de Gordon y sulfamidas. El ensayo de sensibilidad de un
Hine con el fin de encontrar un medio capaz de microorganismo frente a un antibiótico se puede realizar
resistir el autoclavado. El primer paso fue sustituir sobre placas de agar Mueller─Hinton por procedimientos
la harina de guisante por el almidón, que a su vez de difusión, por diluciones seriadas o por técnicas
 Almidón
protegía el medio de las toxinas que pudieran turbidimétricas en el Caldo Mueller─Hinton. En las técnicas
 Infusión de carne
estar presentes. Después sustituyeron la peptona de difusión se mide el halo de inhibición del crecimiento
 Peptona de caseína hidrolizada
de carne por la de caseína hidrolizada, que por confluente alrededor del depósito de antibiótico (discos,
 Agar
ser más fragmentada favorecía más los torrecillas, etc.). El diámetro del círculo de inhibición es
crecimientos. Finalmente ha sido reconocido inversamente proporcional a la concentración mínima
como el más indicado para los ensayos de inhibitoria (CMI) del agente antibacteriano.
sensibilidad a antibióticos y sulfamidas por el  El antibiograma debe ser efectuado sobre cultivos puros.
procedimiento de los discos. En las técnicas de difusión se inoculan las placas de Agar
 El Caldo MUELLER─HINTON es el más utilizado para que formen un confluente. Los discos u otros
en la determinación de la “concentración mínima contenedores del antibiótico deben apoyarse sobre el
inhibitoria” (CMI) por la técnica de diluciones medio de manera que queden adheridos a él. Incubar a la
seriadas. temperatura óptima del microorganismo durante 24 horas.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Escherichia coli Satisfactorio
Staphylococcus aureus Satisfactorio
Enterococcus faecalis Satisfactorio
Pseudomonas aeruginosa Satisfactorio
AGAR NUTRIENTE
 Después de amplios trabajos en la industria de la fermentación se
llegó a la conclusión que el sistema de control de calidad debía
contemplar el empleo de dos medios, uno que permitiera el desarrollo
de mohos y levaduras y otro que realizara las mismas funciones que
el anterior pero inhibiera el crecimiento de levaduras permitiendo la
 Se emplea en la determinación de la flora numeración de todas las bacterias que hay que tener en cuenta en la
 Calcio cloruro
bacteriana en los procesos de elaboración fermentación. Este último efecto se consigue en el medio diferencial
 D (+)─glucosa
de la cerveza. También se usa para el al añadir cicloheximida como antibiótico. Según el tipo de proceso
 Magnesio sulfato
cultivo de levaduras y bacterias en las fermentativo se deberá ajustar el pH del medio a determinados
 Potasio cloruro
industrias de fermentación. valores. El pH 5,5 es óptimo para la industria cervecera; si se realiza
 Triptona
 Este medio se prepara de acuerdo con la  Agar
la numeración de levaduras en panificación ajustar el pH a 6,5, con
formulación de Green y Gray. Se trataba una solución acuosa al 1% de Sodio Carbonato.
 Extracto de levadura
de buscar un medio que permitiera el  Sembrar 0,1 mL del material de ensayo o su dilución sobre el Agar
 Hierro (III) cloruro
crecimiento de levaduras, mohos y para hacer tres cultivos, uno con el medio Nutriente y dos con el
 Manganeso (II) sulfato
bacterias, restringiendo los unos o los medio Diferencial. La del medio Nutriente se incuba para el recuento
 Potasio di─hidrógeno fosfato
otros en función del pH o por la adición de total de levaduras, una de Agar Diferencial se incuba en aerobiosis
 Verde de bromocresol
algún antibiótico. para el desarrollo de bacterias acidoacéticas y la otra en anaerobiosis
para la investigación de bacilos acidolácticos. La temperatura de
incubación en la numeración de levaduras de cerveza es 25 ºC y para
las de pan a 30 ºC. El tiempo de incubación va de 2 a 7 días pudiendo
ser más largo en algunos casos, incluso se ha llegado a incubar
durante 2 semanas.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Escherichia coli Moderado
Lactobacillus fermentum Moderado
Saccharomyces cerevisiae Bueno
Saccharomyces uvarum Bueno
Proteus mirabilis Moderado
AGAR CALDO ÚREA
 Se emplea para la diferenciación de
aquellos microorganismos productores de
ureasa. Es un medio muy interesante para  Dado que no hay más fuente de carbono que la que proviene de
diferenciar Proteus de Salmonella. la urea, en este medio sólo podrán crecer aquellos
 Stuart y sus colaboradores fueron los microorganismos capaces de consumirla como única fuente de
primeros en conseguir un medio de  Úrea energía. La mezcla de fosfatos actúa como regulador del pH,
enriquecimiento que diferenciara Proteus  Potasio di─hidrógeno fosfato sobre todo para neutralizar la producción de amoníaco, que se
de otros gérmenes Gram─negativos. La  Di─sodio hidrógeno fosfato producirá en la degradación de la urea. En cualquier caso una
formulación original fue mejorada  Extracto de levadura reacción positiva a la ureasa se pondrá de manifiesto por el
ajustando las cantidades y proporciones  Rojo fenol cambio de color del medio (de amarillo a rojo) por el viraje del
de la mezcla para hacerlo más selectivo y indicador de pH, Rojo de Fenol.
óptimo a los requisitos de crecimiento de  Sembrar grandes inóculos e incubar a 35 ±2 ºC durante 18─24
Proteus. Recomendado para diferenciar horas, haciendo registros periódicos del crecimiento.
Proteus de Salmonella; además es útil en
la diferenciación de Bacillus y Sarcinas.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Enterobacter aerogenes Bueno Rosa─rojo
Escherichia coli Bueno Rosa─rojo (precipitado biliar)
Proteus vulgaris Bueno Incolora
Salmonella enteritidis Bueno Incolora
Shigella dysenteriae Bueno Incolora
AGAR PLATE COUNT/AGAR MÉTODOS ESTÁNDAR
 Se emplea para el recuento microbiano en
leches, carnes, productos alimenticios en
general, productos farmacéuticos,
productos cosméticos y cualquier tipo de
muestra.
 La composición del medio basada en la peptona de caseína como
 Buchbinder y sus colaboradores aportación nutritiva, el extracto de levadura como sustrato vitamínico
descubrieron que este medio para el  Extracto de levadura
y la glucosa como fuente energética, favorece el crecimiento de la
recuento en placa en leches y sus  Triptona
mayor parte de los microorganismos, sin precisar de otros aditivos.
derivados daba una mayor transparencia,  D (+)─glucosa
 Incubar las placas endurecidas durante 48 ±3 horas a 32 ±1 °C (en
que el medio clásico con leche desnatada.  Agar
productos lácteos) o 35 ±0.5 °C (en alimentos) en una atmosfera
Ello facilita las lecturas tempranas, al
aerobia.
tiempo que el crecimiento de las colonias
es mayor con lo que se facilita el recuento.
Como reconocimiento a su buena aptitud,
este medio se ha convertido en oficial para
APHA.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Escherichia coli Satisfactorio
Staphylococcus aureus Satisfactorio
Staphylococcus epidermidis Satisfactorio
AGAR PLATE COUNT/AGAR MÉTODOS ESTÁNDAR
 En este medio la mezcla de peptonas es la fuente nitrogenada para el crecimiento
de los hongos y levaduras, el carbohidrato (glucosa) es la fuente energética.
 El Agar Glucosa Sabouraud corresponde a las recomendaciones de USP y Ph. Eur.
 Se utiliza para el cultivo de hongos y para recuento de hongos y levaduras, ya que se trata de un medio que suministra
levaduras y para la numeración de todos los requerimientos nutritivos necesarios.
estos microorganismos en alimentos  Sin embargo, se recomienda la utilización de antibióticos de amplio espectro en
y otros materiales. Los medios muestras muy contaminadas. El Cloranfenicol inhibe la mayor parte de
líquidos o caldos están indicados contaminación bacteriana y la Cicloheximida inhibe el desarrollo de hongos
para pruebas de esterilidad; los saprofitos.
 D (+)─glucosa  Los medios de Sabouraud pueden ser adicionados con otros productos para mejorar
agares Sabouraud con glucosa están
 Mezcla de digerido péptico su selectividad:
especialmente indicados para
de tejido animal y digerido ─ Potasio Telurito al 0,015% concentración final, inhibe el crecimiento bacteriano.
dermatofitos, mientras que los que
pancreático de caseína ─ 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro al 100 mg/L, permite diferenciar Candida
contienen maltosa favorecen el
 Agar albicans de las otras Cándidas.
crecimiento de los hongos
filamentosos. ─ Penicilina a razón de 20.000 UI/L, inhibe la mayor parte de bacterias.
 Se aconseja utilizar un medio  Pueden utilizarse otros antimicrobianos, así como indicadores que pueden hacer
suplementado con antibióticos que el medio sea selectivo y/o diferencial.
cuando las muestras están altamente  Sembrar la muestra según fines previstos e incubar entre 20─25 ºC de 3 a 7 días.
contaminadas.
 La Farmacopea Europea recomienda este medio para el recuento total de mohos y
levaduras a 20─25ºC durante ≤ 5 días. Para la promoción de crecimiento de Candida
albicans y Aspergillus niger, inóculo ≤ 100 UFC, se incuban a 20-25ºC durante ≤ 5
días.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Candida albicans Satisfactorio
Escherichia coli Moderado─satisfactorio/Moderado─inhibido
Lactobacillus casei Satisfactorio
Aspergillus niger Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae Satisfactorio
AGAR SANGRE
 Se emplea, añadiendo sangre o sangre
cocida, para el cultivo y aislamiento de
 Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de
microorganismos exigentes, sobre todo
prácticamente todos los microorganismos que pudieran estar
patógenos y para su determinación. Si no
presentes. Si se añade sangre se pueden determinar las distintas
se añade sangre, es adecuado como base  Infusión de corazón
formas de hemólisis que pudieran tener lugar. Si se calienta se
para la preparación de otros medios  Peptona de carne
obtiene el Agar Chocolate, también muy empleado. Por la adición
especiales.  Sodio cloruro
de distintos antibióticos se obtienen medios con caracteres
 Se trata básicamente del medio de  Agar
selectivos.
Huntoon modificado. Más tarde Norton
 Sembrar las placas en la superficie del medio.
observó que el pH ligeramente bajo era
 Incubar a 35 ±2 ºC de 24 a 48 horas.
muy útil para el cultivo de Estreptococos y
Neumococos.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo Transparencia
Neisseria meningitidis Bueno ───
Staphylococcus aureus Bueno Beta
Staphylococcus epidermidis Bueno ───
Streptococcus pneumoniae Bueno Alfa
Streptococcus pyogenes Bueno Beta
AGAR SELECTIVO CEREUS SEGÚN MOSSEL
 Medio concebido por Mossel para la determinación y
enumeración de Bacillus cereus en todo tipo de alimentos. Este
medio permite detectar las características funcionales de Bacillus
cereus de resistencia a ciertas concentraciones de Polimixina B,
 Rojo de fenol producción de lecitinasa y la no fermentación del Manitol.
 D (─)─manita  Bacillus cereus crece en este medio de color rojo rodeada de un
 Medio selectivo para el aislamiento y  Peptona de carne halo de precipitación.
recuento de Bacillus cereus según  Extracto de carne
 Sembrar sobre la placa soluciones de muestra e incubar a 30 ºC
MOSSEL  Sodio cloruro durante 48 horas aproximadamente (haciendo lectura a las 24
 Agar horas). La aparición de colonias rojas (no fermentadoras de
Manitol) con halo de precitación (producción de lecitinasa) indica
posible presencia de B. cereus en la muestra que deberían
confirmarse (prueba de Voges-Proskauer, reducción de nitratos,
etc.).
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo de las colonias Color de la colonia Precipitación
Bacillus cereus Bueno Roja (+)
Bacillus subtilis Bueno Amarilla (─)
Proteus mirabilis Inhibido Incolora (─)
Staphylococcus aureus Inhibido Amarilla (+)
AGAR SELECTIVO PARA BACILLUS CEREUS
 La adición de Polimixina-B Sulfato a esta base de agar inhibe el
crecimiento de la flora secundaria. B. cereus es manitolnegativo,
 Se emplea para el aislamiento y lo que permite su distinción de la flora acompañante manitol-
recuento de Bacillus cereus, en todo positiva, que hace virar el Azul de Bromotimol a amarillo. Al
tipo de alimentos.  Acido tartárico tratarse de un microorganismo con actividad lecitinasa se forma
 Mossel concibió este medio para la  Magnesio sulfato un halo de precipitados blancos alrededor de la colonia, como
detección y enumeración de Bacillus  Peptona de caseína resultado de la degradación de la lecitina del huevo.
cereus en todo tipo de alimentos.  Sodio cloruro  B. cereus en condiciones normales y cuando su número es
 Sodio piruvato limitado no se considera patógeno, sin embargo, es capaz de
Además del recuento, este medio
 Azul de bromotimol producir intoxicación alimentaria al hombre cuando un alimento
permite definir determinadas  D (–)–manita está muy contaminado o cuando las condiciones de conservación
características de este  Potasio di–hidrógeno fosfato no son adecuadas. Se utiliza, también, como indicador del
microorganismo: la resistencia a la  Di–sodio hidrógeno fosfato mantenimiento de la cadena del frío en los alimentos.
Polimixina B, la producción de  Agar  Las placas sembradas se incuban a 30ºC de 18 a 24 horas.
lecitinasa y la no fermentación del Pueden existir confusiones con colonias de otros bacilos
Manitol. Gram─positivos. Las pruebas confirmativas a realizar son:
fermentación de glucosa, la utilización de la gelatina y reducción
de nitratos, pruebas positivas para Bacillus cereus.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo de las colonias Color de la colonia Precipitación
Bacillus cereus Aceptable Azul turquesa (+)
Bacillus subtilis Aceptable Amarillo (─)
Proteus mirabilis Inhibido–reprimido Incoloro (─)
Staphylococcus aureus Inhibido–reprimido amarillo (+)
AGAR SS/AGAR SALMONELLA Y SHIGELLA
 Se emplea para el aislamiento de
 Por la presencia de las sales biliares, verde brillante y citrato se
Salmonella y Shigella a partir de muestras
consigue la inhibición de las bacterias Gram─positivas. Por el
de productos alimenticios u otros que
mismo citrato conjuntamente con el tiosulfato se frena
pudieran contener estos gérmenes. Se
notablemente el desarrollo de Coliformes y Proteus que podrían
trata de un medio altamente selectivo.  Extracto de carne
acabar cubriendo todo el cultivo. Las bacterias que no fermentan
 Hormaeche, Surraco, Hardy y otros han  Lactosa
la lactosa dan colonias incoloras, mientras que las que la
encontrado que la formulación de este  Rojo neutro
fermentan hacen virar el rojo neutro por la producción de ácido y
medio es la mejor para el aislamiento de  Tri–sodio citrato
quedan claramente diferenciadas. También se diferencian los
Salmonella y Shigella. Una de las  Verde brillante
microorganismos productores de Hidrógeno Sulfuro que da un
principales aplicaciones es el diagnóstico  Hierro (III) citrato
precipitado negro de Hierro (II) Sulfuro, que se observa en el
de las enfermedades diarreicas debidas a  Sales biliares
centro de la colonia. La peptona y el extracto de carne son
estos gérmenes. La composición del  Sodio tiosulfato
aportes nutritivos suficientes para estas especies patógenas,
medio permite detectar también la  Agar
aunque algunas Shigellas muy exigentes se desarrollen
producción de Hidrógeno Sulfuro. Su lentamente.
formulación corresponde a las
 Sembrar abundantemente por estría en la superficie del medio.
recomendaciones de la APHA para
Incubar a 35 ±2 ºC de 24 a 48 horas.
análisis de alimentos.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo Color de colonia
Salmonella typhi Satisfactorio Incolora con centro negro
Enterobacter aerogenes Parcialmente inhibido Crema–rosa
Salmonella enteritidis Satisfactorio Incolora con centro negro
Salmonella typhimurium Satisfactorio Incolora con centro negro
Shigella flexneri Satisfactorio Incolora
Enterococcus faecalis Inhibido ––––
Escherichia coli Nulo–moderado Rosa–rojo
AGAR TCBS/AGAR TIOSULFATO CITRATO BILIS SACAROSA
 Debido al contenido de Sodio Tiosulfato, tri–Sodio Citrato y al pH alto del
 Se emplea para el cultivo y aislamiento de medio se inhibe el crecimiento de las Coliformes. A su vez la Bilis de
Vibrio cholerae y Vibrio parahaemolyticus  Azul de bromotimol buey y el Sodio Colato inhiben el crecimiento de los microorganismos
en productos marinos o muestras de  Bilis desecada Gram–positivos, aunque pueden crecer algunos Enterococos formando
diversos orígenes.  Hierro (III) citrato colonias pequeñas e incoloras. Las Peptonas, el Extracto de Levadura y
 La formulación original de Nakanishi fue  Peptona de caseína la Sacarosa aportan los nutrientes. Los dos indicadores hacen que los
modificada por Kobayashy y sus  Tri–sodio citrato vibrios den colonias amarillas por acidificación del medio y el Sodio
colaboradores con el fin de conseguir un  Sodio colato Tiosulfato combinado con el Hierro (III) Citrato permiten la detección de
medio con la mayor inhibición posible del  Agar la producción de Hidrógeno Sulfuro.
crecimiento de Coliformes y Proteus sin  Azul de timol  Sembrar las placas por estría en la superficie e incubar la muestra del
detrimento del crecimiento de los Vibrios y,  Extracto de levadura material en estudio a 35 ºC de 18 a 24 horas.
en cualquier caso, que aquellos fuesen  Peptona de carne  Se consiguen mejores resultados inoculando la muestra previamente en
fácilmente distinguibles de éstos. La  Sacarosa agua de peptona alcalina (pH 8,4 a 8,5) subcultivando después de 6
formulación actual corresponde a las  Sodio cloruro horas como mínimo a 35–37 °C sobre TCBS. Las especies de V.
recomendaciones de la OMS y de la  Sodio tiosulfato cholerae aparecerán de color amarillo, mientras que V. parahaemolyticus
APHA. aparecerá de color azul claro. Se han detectado buenos crecimientos de
otras especies de Vibrios.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo Medio (viraje)
Vivbrio cholerae Inaba Satisfactorio Amarillo
Vibrio cholerae Ogawa Satisfactorio Amarillo
Vibrio alginolyticus Moderado Amarillo
Vibrio parahaemolyticus Satisfactorio Azul
Enterobacter cloacae Leve Amarillo
Proteus mirabilis Leve/moderado Azul claro–translúcido
Escherichia coli Negativo –––
Pseudomona aeruginosa Negativo/leve Azul
AGAR TSA/AGAR TRIPTEÍNA SOJA
 Se ajusta a la formulación de la USP y a la Ph. Eur. Por el contenido de peptona de

soja y peptona de caseína resulta una aportación nutritiva que permite el desarrollo
 Digerido papaínico de soja
óptimo de un gran número de microorganismos, tanto exigentes como no exigentes.
 Se emplea como medio de uso  Digerido pancreático de
Se utilizan como tales o como base para preparar medios especiales (Agar Sangre,
general para el cultivo de todo tipo de caseína Agar Proteus).
microorganismos.  Sodio cloruro
 Tratar el medio según los fines a conseguir.
 Agar
 La Farmacopea indica incubar el medio inoculado a 30–35 ºC de 18–24 horas hasta
≤ 3 días.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Crecimiento
Staphylococcus aureus Bueno
Staphylococcus epidermidis Bueno
Streptococcus pneumoniae Bueno
Streptococcus pyogenes Bueno
Pseudomona aeruginosa Bueno
Bacillus subtilis Bueno
Candida albicans Bueno
Aspergillus niger Bueno
AGAR TSC/AGAR TRIPTOSA SULFITO CICLOSERINA
 El agar TSC es considerado superior a otros medios de cultivo selectivos
para el cultivo de Clostridium perfringens y otros microorganismos del
 Medio de cultivo para la detección y
género, que hayan sido dañados por diferentes factores ambientales. Es
recuento de Clostridium perfringens y
un medio con elevado valor nutritivo, el sulfito y el hierro hacen que los
otros anaerobios en agua, alimentos y
microorganismos sulfito-reductores presenten las colonias negras por el
otros materiales.
precipitado de Hierro Sulfuro. La cicloserina es un inhibidor de la flora
 Por su formulación este medio  Extracto de levadura
acompañante, que da al medio una selectividad superior que el que
corresponde a las recomendaciones de la  Peptona de soja
aportan otros antibióticos.
International Organization for  Triptosa
 Hierro (III) citrato  En los análisis de alimentos, habitualmente, se siembra la muestra por
Standardization (ISO), para análisis de
la técnica de doble capa o por inclusión en gelosa y se incuba a 35 ºC
agua y a la FDA para análisis de  Sodio di–sulfito
 Agar durante 20–24 horas. En el análisis de muestras de agua propuesto en
alimentos, entre otras normas. Este medio
la ISO 6461-2, se filtra la muestra a través de un filtro de membrana y se
deshidratado es una base que se
coloca, sobre la superficie del medio boca arriba o boca abajo sobre una
transfoma en TSC cuando se suplementa
placa de Petri. En el segundo caso, posteriormente, se vierten 18 mL de
con cicloserina o en SFP cuando se le
medio de cultivo licuado, el cual se ha dejado enfriar hasta unos 50ºC. El
adiciona Polimixina y Canamicina
cultivo se incuba en condiciones anaeróbicas a 37 ºC durante 20–24
horas y 4 horas a 44 º C.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Clostridium perfringens Satisfactorio Negra
Clostridium sporongenes Satisfactorio Negra
Pseudomonas aeruginosa Inhibido ––––
AGAR TSI/ AGAR HIERRO Y TRIPLE AZUCAR
 El medio Hierro y Triple Azúcar permite diferenciar bacilos entéricos Gram–
 Se emplea para identificar
negativos basándose en su diferente capacidad de fermentación a los tres
Enterobacteriáceas.
azúcares (glucosa, sacarosa y lactosa) y producción de sulfhídrico. La
 Russell fue el primero que demostró
degradación del azúcar da lugar a la formación de ácido que se detecta por un
que la utilización de dos azúcares
cambio de color del rojo de fenol que pasa de anaranjado a amarillo, mientras
(Glucosa y lactosa) permitía  Amonio hierro (III) citrato
que si el medio sufre una alcalinización pasa de anaranjado a rojo/púrpura. Los
diferenciar los bacilos gram–  Extracto de carne
microorganismos que sólo fermentan la glucosa, como Salmonella y Shigella,
negativos de origen intestinal. Otros  Lactosa
(que se encuentra en una concentración 10 veces inferior a los otros azúcares),
autores introdujeron el tercer azúcar,  Mezcla de peptonas
si bien producen el viraje al amarillo, éste sólo se mantiene en la columna vertical
la sacarosa, que permitió detectar (carne/caseína)
(base del tubo) mientras que la superficie inclinada restablece el color rojo por
aquellos Coliformes que degradan  Sodio cloruro
oxidación del ácido. El color amarillo obtenido en la acidificación del medio
lentamente la lactosa y que muchos  Agar
producida por la fermentación de la sacarosa o de la lactosa es persistente. Los
de ellos atacan rápidamente la  D (+)–glucosa
cultivos que contienen microorganismos capaces de formar Hierro (II) Sulfuro
sacarosa. Sulkin y Willett (1940)  Extracto de levadura
presentan el característico precipitado negro. La producción de gas se observa
describieron un medio con tres  Sacarosa
por la formación de burbujas e incluso por la rotura del propio gel.
azúcares y Hierro(II) Sulfato que  Rojo de fenol
 Ph. Eur. indica una incubación entre 35–37 ºC durante 18–72 horas. Incubar a
salvo algunas modificaciones es el  Sodio tiosulfato
37 ºC de 18 a 24 horas. Se pueden realizar incubaciones de hasta 48 horas
actual Agar Hierro y Triple Azúcar,
según la investigación en curso, sin embargo, se recomienda hacer siempre una
con especial valor cuando se utiliza
lectura a las 24 horas de incubación. Este medio se siembra a partir de un cultivo
combinado con medios selectivos
puro. Debe sembrarse por estría en la superficie inclinada y por picadura en la
para Enterobacteriáceas.
columna vertical.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo Superficie inclinada Base Gas H2S
Escherichia coli Bueno Amarilla Amarillo (+) (─)
Proteus vulgaris Bueno Amarilla Amarillo (+) (+)
Salmonella enteritidis Bueno Roja Amarillo (+) (+)
Shigella flexneri Bueno Roja Amarillo (─) (─)
AGAR ÚREA BASE
 Se emplea para la diferenciación de
bacilos entéricos. Está indicado para
detectar aquellas bacterias capaces de
producir ureasa.
 Este medio es menos tamponado que el Caldo Urea además tiene
 Christensen fue quien orientó los primeros
componentes nutritivos y energéticos, lo que permite un crecimiento
trabajos en busca de un medio que
más diversificado de microorganismos y una detección más amplia
permitiera la detección de bacterias  Úrea
de ureasa positivos. A su vez el Sodio Cloruro aporta la salinidad
capaces de descomponer la Urea. En  Peptona de gelatina
necesaria para el buen desarrollo de los microorganismos. En el
esencia los trabajos consistieron en  Rojo de fenol
proceso de degradación de la urea se produce amoníaco, éste hace
ajustar correctamente las proporciones de  D (+)–glucosa
variar el color del indicador Rojo de Fenol (de amarillo a rojo)
elementos nutricionales y de tampón, de  Potasio di–hidrógeno fosfato
poniéndose así de manifiesto la actividad ureasa.
tal manera que el medio permitiese el  Sodio cloruro
 Sembrar en toda la columna del medio. Incubar a 35 ±2 ºC de 18 a
crecimiento de un gran número de
48 horas. Se incubarán los cultivos negativos durante 7 días para
bacterias y se observase la degradación
confirmar Brucella
de la Urea por parte no sólo de los fuertes
productores de ureasa, sino también, de
los más débiles (Enterobacter, Klebsiella,
Micrococo).
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Enterobacter aerogenes Satisfactorio (–) no cambia de color medio
Escherichi coli Satisfactorio (–) no cambia de color medio
Klebsiella vulgaris Satisfactorio (+) medio rojo o púrpura
Proteus vulgaris Satisfactorio (+) medio rojo o púrpura
Salmonella typhimurium Satisfactorio (–) no cambia de color medio
AGAR XLD/AGAR XILOSA LISINA DESOXICOLATO
 El Sodio Desoxicolato inhibe el crecimiento de la flora contaminante Gram–
positiva. La mayoría de las Enterobacteriáceas patógenas, a excepción de la
Shigella, fermentan la D (+)–Xilosa. El ácido producto de la fermentación de la
 Medio de cultivo para el
D (+)–Xilosa, de la lactosa o de sacarosa produce un viraje a amarillo del Rojo
aislamiento de
de Fenol contenido en el medio. Los microorganismos que descarboxilan la
Enterobacteriáceas patógenas,
lisina, como Salmonella, se reconocen por presentar colonias rojo-anaranjadas
especialmente Salmonella y
 Úrea debido al aumento del pH que han provocado en el medio y el consecuente
Shigella.
 Peptona de gelatina viraje del Rojo de Fenol. Además, por la presencia de Sodio Tiosulfato y
 El medio fue formulado
 Rojo de fenol Amonio Hierro (III) Citrato las bacterias productoras de hidrógeno sulfuro dan
principalmente para el  D (+)–glucosa colonias ennegrecidas siempre y cuando el pH del medio se mantenga alto.
aislamiento y diferenciación de
 Potasio di–hidrógeno fosfato  Según la ISO 6579:2002, después de un preenriquecimiento no selectivo en
Bacilos Gram–negativos,
 Sodio cloruro Agua de Peptona Tamponada durante 18 ±2 horas a temperatura de 37 ±1 ºC
especialmente de Shigella y
y posterior resiembra en dos caldos selectivos (Tetrationato según Mueller-
Providence aunque es efectivo
Kauffman y Rappaport-Vassiliadis), se procede a la siembra por agotamiento
para muchos otros
en superficie sobre agares selectivos como el medio XLD y otros (Hektoen,
microorganismos entéricos.
Salmonella y Shigella, Cromogénico para Salmonella, etc.). Incubaciones a 37
± 1 ºC durante 24 ±3 horas. Las colonias sospechosas se deben confirmar con
pruebas bioquímicas y serológicas.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Escherichia coli Moderado Amarillo (precipitado biliar)
Salmonella typhimurium bueno Rojo transparente (con centro negro)
Shigella flexneri Bueno Rojo
Staphylococcus aureus Inhibido ––––
AGUA PEPTONADA
 La triptona tiene una elevada concentración de Triptófano, el cual es
degradado a Indol por un cierto número de microorganismos entre ellos E.coli.
La detección de este producto se hace añadiendo el reactivo de KOVACS
después de la incubación. Este medio es adecuado para determinar los
organismos Indol–positivos y puede utilizarse en lugar de los Caldos
 Se emplea como diluyente en Triptófano. En usos generales se puede emplear para el cultivo de una gran
muestras alimentarias, aguas y variedad de microorganismos, siempre y cuando no presenten exigencias
materiales diversos. Para la particulares.
 Triptona
realización de la prueba del  Sembrar tubo de Agua de Peptona con un cultivo puro a estudiar e incubar a
 Sodio cloruro
Indol en aquellos 35 ±2 °C (en el estudio de Escherichia coli la temperatura será de 44 °C)
microorganismos capaces de durante 24-48 horas. Añadir 0,5 mL de Reactivo de Kovacs al tubo para el
producirlo. estudio del Indol.
 Los microorganismos Indol positivos generan, en menos de 1 minuto, un anillo
rosa intenso-rojo. Los microorganismos Indol negativos no producen cambio
de color.
 Como alternativa al Reactivo de Kovacs, se puede utilizar tiras preparadas
(Biofix® Indol).
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo Formación de Indol
Escherichia coli Satisfactorio (+)
Salmonella typhimurium Satisfactorio (–)
Staphylococcus aureus Satisfactorio (–)
CALDO SELENITO
 Se emplea para el enriquecimiento
selectivo de Salmonella en gran
variedad de muestras.
 Guth, Handel y Theodorascu  Por la presencia del Sodio Selenito se inhibe el crecimiento de un gran
observaron que el Sodio Selenito
número de microorganismos, tales como los Coliformes y los
presentaba una toxicidad importante Enterococos, principalmente en las primeras 6–12 horas, en cambio, no
para Escherichia coli, mientras que no
son inhibidas las Salmonellas, los Proteus y las Pseudomonas. La
era así para la Salmonella typhi. Más  Sodio selenito
mezcla de peptonas y la lactosa aportan los recursos nutritivos y
tarde Leifson empleó un caldo a base  Mezcla de peptonas
energéticos del medio, mientras que el tri-Sodio Fosfato mantiene el pH y
de Sodio Selenito para el  Lactosa
limita la toxicidad del selenito.
enriquecimiento selectivo de  Tri–sodio fosfato
 Sembrar los inóculos a proporción 1:10 o 1:1. Si se trabaja a proporción
muestras patológicas en Salmonella
1:1 (muestra líquida) preparar el Caldo doble concentrado. Incubar a 35
typhi y paratyphi. La fórmula definitiva
±2 ºC de 18 a 24 horas. A continuación, sembrar en medio selectivo y
para el medio es prácticamente igual
posterior confirmación de los crecimientos sospechosos.
a la empleada por Leifson.
Actualmente este medio corresponde
a las recomendaciones de la APHA
para análisis de alimentos.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo
Escherichia coli Parcialmente inhibido
Salmonella choleraesuis Satisfactorio
Slamonella typhi Satisfactorio
Salmonella typhimurium Satisfactorio
CALDO LACTOSADO
 Se emplea para el estudio de procesos de
fermentación de la lactosa y en especial para  Por la composición del medio, el contenido en elementos nutritivos
la investigación de microorganismos y energéticos hace que permita el desarrollo sin restricción de
Coliformes, especialmente E. coli en aguas, bacterias Coliformes. La fermentación de lactosa producirá
leches y productos alimenticios. No contiene desprendimiento de gas que se pondrá de manifiesto en la campana
indicadores ni inhibidores.  Lactosa de Durham.
 La formulación del medio corresponde a la  Peptona de gelatina  Utilizar el medio según los fines de aplicación previstos. Incubar a
descrita en la American Public Health  Extracto de carne 37ºC de 24 a 48 horas. La Farmacopea Europea 6.0 lo indica para
Association para la investigación de bacterias preparar solución madre en el estudio de Enterobacterias.
Coliformes en aguas (1981) y productos Habitualmente se incuba durante 2–5 horas a 35–37 °C y se
lácteos (1985). El medio también resiembra una porción en Caldo EE. Incubar a 35 ±2 ºC durante 18–
corresponde a las recomendaciones de la 48 horas y subcultivar en VRBGL Agar.
USP y de la Farmacopea Europea.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo Producción de gas
Klebsiella pneumoniae Satisfactorio (+)
Proteus vulgaris Satisfactorio (–)
CALDO LAURIL TRIPTOSA
 Por la presencia de Sodio Laurilsulfato queda inhibida la práctica
 Se emplea para el recuento y detección de totalidad de la flora secundaria. El resto de los componentes
microorganismos Coliformes en aguas, constituyen los soportes nutritivo, energético, salino y regulador del
leches y productos alimenticios. También se pH necesarios para el buen desarrollo de los Coliformes. La
emplea en estudios del proceso de detección de gas se hace con campanas de Durham.
fermentación de la lactosa.  Sodio laurilsulfato  El medio no lleva ningún indicador de producción de ácido, pero
 La formulación del medio se debe a los  Lactosa puede incorporarse.
trabajos de Mallmann y Darby, que  Di–potasio hidrógeno fosfato  Un buen indicador de pH puede ser el Púrpura de Bromocresol a
demostraron que el Sodio Laurilsulfato es el  Triptosa una concentración de 0,02 g/L de medio o el Rojo de Fenol a una
agente humectante que aporta un buen  Potasio di–hidrógeno fosfato concentración de 0,2 g/L. Este caldo es idóneo para ser
carácter selectivo al medio sin afectar el  Sodio cloruro suplementado con MUG, a razón de 50 mg por litro de medio; MUG
crecimiento de las bacterias Coliformes. es un fluorocromo que permite la detección de E. coli. Además, se
Medio recomendado para la técnica de NMP puede detectar la producción de Indol, añadiendo al cultivo el
en aguas, su formulación corresponde a las reactivo de KOVACS, o con las tiras reactivas del Indol. Esta
recomendaciones de la APHA. determinación permitirá la confirmación de E. coli.
 Incubar a 37 ºC de 24 a 48 horas.
RESULTADOS
MICROORGANISMOS
Desarrollo Producción de gas
Enterobacter aerogenes Satisfactorio (+)
Staphylococcus aureus Fuerte inhibido (–)

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MEDIOS DE CULTIVOS

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