ORIGINAL BREVE

Evaluación de la técnica 2,2-Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPH) para determinar

capacidad antio[idante

(PLOLR*XLMD3RPD10LJXHOÉQJHO,QRFHQWH&DPRQHV2-RKQ3RQFH3DUGR2(GZLQ=DU]RVD1RUDEXHQD

RESUMEN

Este estudio evalúa la actividad antioxidante usando el método del radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidracilo
(DPPH). Este método se utiliza para determinar la capacidad antioxidante de alimentos y compuestos
VLQWpWLFRV SDUD HVWH ÀQ VH KD KHFKR XVR GH HVWH UDGLFDO OLEUH HQ FRQFHQWUDFLRQHV FRPSUHQGLGDV HQWUH
\P0DVtPLVPRSDUDOOHYDUDFDERHVWDHYDOXDFLyQVHXWLOL]yORVHVWiQGDUHVGHFDWHTXLQD\
HSLFDWHTXLQDHQXQUDQJRGHFRQFHQWUDFLyQTXHHVWXYRHQWUH[\[P0/RVYDORUHVGH
,&SDUDDPERVHVWiQGDUHVIXHURQGHSHQGLHQWHVGHODFRQFHQWUDFLyQGH'33+KDELpQGRVHREVHUYDGRTXH
el valor anterior aumenta al incrementar la concentración de DPPH. El resultado obtenido en este estudio
indica la importancia de la concentración del DPPH para evaluar la capacidad antioxidante. (Horiz Med


Palabras clave:$QWLR[LGDQWH'33+FDWHTXLQDHSLFDWHTXLQDUDGLFDOOLEUH)XHQWH'H&6%,5(0(

$VVHVVPHQWRIGLSKHQ\OSLFULOKLGUD]LOR'33+7HFKQLTXHWRGHWHUPLQHDQWLR[LGDQWFDSDFLW\

ABSTRACT

:HDVVHVVHGWKHWHFKQLTXHXVLQJIUHHUDGLFDOGLSKHQ\OSLFULOKLGUD]LO'33+XVHGWRGHWHUPLQHWKH

antioxidant capacity of foods and synthetic compounds; for that purpose this free radical has been used
LQ FRQFHQWUDWLRQV EHWZHHQ  DQG  P0 OLNHZLVH WR SHUIRUP WKLV HYDOXDWLRQ WKH FDWHFKLQ DQG
HSLFDWHFKLQVWDQGDUGVKDYHEHHQXVHGLQDFRQFHQWUDWLRQUDQJHRI[DQG[P0&,
values for both standards were dependent on the concentration of DPPH, having observed that the above
value increases with increasing concentration of DPPH, for which reason it is suggested that all research
XVHDVLQJOHFRQFHQWUDWLRQRI'33+LQWKHUHDFWLRQPHGLXP+RUL]0HG

Key words: $QWLR[LGDQW'33+FDWHFKLQHSLFDWHFKLQIUHHUDGLFDO6RXUFH0H6+1/0

1
 'RFWRUHQIDUPDFLD\%LRTXtPLFD,QVWLWXWRGH,QYHVWLJDFLyQ&HQWURGH,QYHVWLJDFLyQGH%LRTXtPLFD\1XWULFLyQ)0+8603/LPD3HU~
2
Químico Farmacéutico. ,QVWLWXWRGH,QYHVWLJDFLyQ&HQWURGH,QYHVWLJDFLyQGH%LRTXtPLFD\1XWULFLyQ)0+8603/LPD3HU~

 0DJLVWHUHQ%LRTXtPLFD\1XWULFLyQ,QVWLWXWRGH,QYHVWLJDFLyQ&HQWURGH,QYHVWLJDFLyQGH%LRTXtPLFD\1XWULFLyQ)0+8603/LPD3HU~

Horiz Med 2015; 15 (1): (QHUR0DU]R

 (PLOLR*XLMD3RPD0LJXHOÉQJHO,QRFHQWH&DPRQHV-RKQ3RQFH3DUGR
(GZLQ=DU]RVD1RUDEXHQD

INTRODUCCIÓN caracterizado por la cesión de un átomo de hidrógeno

/RV UDGLFDOHV OLEUHV VRQ PROpFXODV R IUDJPHQWRV
de moléculas caracterizadas por tener uno o más
electrones desapareados en su orbital externo,
condición que los torna altamente reactivos (1).
proporcionado por el agente antioxidante.
/RV HVWXGLRV FLQpWLFRV PXHVWUDQ TXH HVWH SURFHVR
ocurre a través de una reacción de pseudo primer
orden la que puede seguirse midiendo la disminución
En el ser humano se generan radicales libres en la GHODDEVRUEDQFLDHQIXQFLyQGHOWLHPSR
cadena respiratoria mitocondrial, cuando reacciona
el peróxido de hidrógeno con el ion ferroso, por Esta medición permite observar una primera fase
acción catalítica de la ciclooxigenasa, la reacción muy rápida, seguida ulteriormente por una reacción
GHYLWDPLQD&FRQHOLRQIHUURVRSRUDFFLyQGHOD lenta, lo que podría ocurrir debido a un proceso de
1$'3+UHGXFWDVDHWF dimerización de los productos de la reacción o a
reacciones de los productos de ésta.
En los seres vivientes existen sistemas de defensa
antioxidante que tienen la propiedad de impedir la /D UHDFFLyQ DQWHV GHVFULWD HQWUH HO '33+ \ XQ
acción nociva de los radicales libres, habiéndose antioxidante, podemos representarla de la siguiente
LGHQWLÀFDGR FRPSXHVWRV FRQ SURSLHGDGHV manera:
antioxidantes de naturaleza enzimática como
la catalasa, superóxido dismutasa, glutatión >'33+
@>$2+@  >'33++@>$2
@
peroxidasa, etc., así como, sustancias no
enzimáticas: ascorbato, ferritina, ceruloplasmina, Por cuyo motivo, las condiciones de ensayo en que
polifenoles, antocianinas. se mide la capacidad antioxidante puede describirse
por la siguiente ecuación:
&XDQGRODGHIHQVDDQWLR[LGDQWHHVLQVXÀFLHQWHSDUD
SURWHJHU DO RUJDQLVPR GHO HIHFWR GDxLQR GH ORV
radicales libres puede conducirlo al estrés oxidativo,
condición que está estrechamente vinculado a una
gran diversidad de patologías como la psoriasis,
cáncer, diabetes mellitus, aterosclerosis, cataratas,
hipertensión arterial. (2-5) /D GHWHUPLQDFLyQ GH OD FRQFHQWUDFLyQ GH
compuestos antioxidantes utilizando la técnica
Existe un gran número de estudios epidemiológicos del DPPH ha sido descrita hace más de cincuenta
que vinculan la ingesta de una dieta rica en
frutas y verduras con un disminuido riesgo de
padecer enfermedades cardiovasculares, cáncer,
aterosclerosis, artritis, etc., y ello debido a que
dichos alimentos tienen un elevado contenido de
SROLIHQROHVÁDYRQRLGHVDQWRFLDQLQDVYLWDPLQD&
DxRVSHURKHPRVREVHUYDGRTXHORVDXWRUHV
no utilizan la misma concentración del DPPH en los
medios de reacción y ello no permite realizar una
evaluación precisa, considerando especialmente
que los resultados experimentales se expresan
FRPRHOYDORU,&HVGHFLUODFRQFHQWUDFLyQGHOD
YLWDPLQD(şFDURWHQROLFRSHQR muestra problema que produce una inhibición del
GHOUDGLFDOOLEUH'33+
Se han descrito diversas técnicas para evaluar la
capacidad antioxidante de alimentos y plantas En tal sentido, podemos considerar que el valor
PHGLFLQDOHV SHUR DTXHOOD TXH KD UHFLELGR
una preferencial atención es la técnica que utiliza
el radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo conocido
por las siglas DPPH (11,12).
Este radical libre es susceptible de reaccionar con
compuestos antioxidantes a través de un proceso
,& HV GHSHQGLHQWH GH OD FRQFHQWUDFLyQ GHO
DPPH, así como, de la naturaleza del compuesto
antioxidante.
El objetivo del presente trabajo reside en mostrar
que la concentración del DPPH en el medio de
UHDFFLyQ LQÁX\H HQ OD HYDOXDFLyQ GH OD FDSDFLGDG
antioxidante.

+RUL]0HG

 Evaluación de la técnica 2,2-Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPH) para determinar capacidad
antioxidante

METODOLOGÍA condiciones experimentales se observó que la

El medio de reacción estuvo constituido por
FRQFHQWUDFLRQHV ÀQDOHV GH '33+ FRPSUHQGLGDV
 \  P0 GLVXHOWR HQ PHWDQRO JUDGR
+3/& PLHQWUDV TXH ODV FRQFHQWUDFLRQHV GH ORV
estándares catequina y epicatequina se utilizaron
HQFRQFHQWUDFLRQHVFRPSUHQGLGDVHQWUH[
\[P0GLVXHOWDVHQPHWDQROJUDGR+3/&
/DUHDFFLyQVHGHVDUUROOyDWHPSHUDWXUDDPELHQWH
Pi[LPDLQKLELFLyQDOFDQ]DGDIXHGH\
para la catequina y epicatequina respectivamente,
SRU FX\R PRWLYR QR SXGR DOFDQ]DUVH HO  GH
inhibición del DPPH.
7DEOD  9DORUHV ,& GH FDWHTXLQD \ HSLFDWHTXLQD HQ IXQFLyQ GH OD
concentración de DPPH.
ƒ&GXUDQWHPLQXWRVHQODRVFXULGDGDFX\R
término se procedió a leer la densidad óptica en
XQHVSHFWURIRWyPHWURPDUFD6KLPDG]XPRGHOR89
250. Paralelamente se incubó un tubo blanco que
solamente contenía metanol. Todos los reactivos
utilizados fueron de grado para análisis.
HALLAZGOS
3DUD OD HYDOXDFLyQ GHO YDORU ,& GH OD FDWHTXLQD
VHXWLOL]DURQWUHVFRQFHQWUDFLRQHVGH'33+
 \  P0 PLHQWUDV TXH OD FDWHTXLQD
se utilizó en concentraciones comprendidas
HQWUH  [  \  [   P0 KDELpQGRVH
REVHUYDGR TXH ORV YDORUHV ,& IXHURQ  
\  õ0 UHVSHFWLYDPHQWH FRQIRUPH VH REVHUYD
en la Tabla 1, en la que es posible apreciar que
cuando se incrementa la concentración del DPPH
DISCUSIÓN
&RQIRUPH VH KD REVHUYDGR ODV FRQFHQWUDFLRQHV
XWLOL]DGDVGHO'33+SDUDHYDOXDUHOYDORU,&GHORV
antioxidantes catequina y epicatequina estuvieron
FRPSUHQGLGDV HQ XQ DPSOLR UDQJR  \ 
mM, habiéndose obtenido resultados que fueron
dependientes de la concentración del radical libre
DPPH; el hecho de obtener valores diferentes
GH ,& SDUD ORV DQWLR[LGDQWHV DQWHV FLWDGRV
sugiere que es necesario realizar una revisión de
las evaluaciones de la capacidad antioxidante de
alimentos con DPPH, publicadas desde hace más de
SDUDOHODPHQWHDXPHQWDHOYDORU,& DxRV

7DEOD  9DORUHV ,& GH FDWHTXLQD HQ IXQFLyQ GH OD FRQFHQWUDFLyQ GH
DPPH.
Hemos observado que cuando se utiliza
concentraciones altas de DPPH (0.2 mM) se
torna menos sensible la determinación del valor
,& FRQIRUPH VXFHGH FRQ ODV HYDOXDFLRQHV GH
catequina y epicatequina determinadas con dicha
concentración, mientras que cuando se utilizan
$VtPLVPRVHHYDOXDURQORVYDORUHV,&GHFDWHTXLQD
y epicatequina utilizando dos concentraciones
distintas de DPPH: 0.100 y 0.200 mM; en estas
condiciones de ensayo cuando la concentración del
'33+IXHP0HO,&GHODFDWHTXLQDIXHGH
õ0PLHQWUDVTXHHOGHODHSLFDWHTXLQDIXH
õ0SHURFXDQGRVHXVyXQDFRQFHQWUDFLyQÀQDOGH
DPPH correspondiente a 0.200 mM, la catequina y
epicatequina mostraron prácticamente un mismo
YDORU ,& FRPR VH PXHVWUD HQ OD 7DEOD  GLFKR
FRQFHQWUDFLRQHV PHQRUHV GH '33+  P0 HO
YDORU  ,& HV HO PiV EDMR \ HOOR QDWXUDOPHQWH
conduce a una apreciación errada de las propiedades
antioxidantes de un alimento o planta medicinal, ya
que para efectos de comparación aquella muestra
TXHWLHQHHOPHQRUYDORU,&HVODTXHSRVHHXQD
mejor actividad antioxidante.
En diversos trabajos de investigación en los que se
realiza un análisis cinético del comportamiento del
radical libre DPPH, se observa que cuando se evalúa
la capacidad antioxidante de epicatequina con una
FRQFHQWUDFLyQ GH '33+  P0 VH REWLHQH XQ
valor se obtuvo por extrapolación, ya que en las YDORU,&GHõ0HQFDPELRFXDQGRHVWD

Horiz Med 2015; 15 (1): (QHUR0DU]R

 (PLOLR*XLMD3RPD0LJXHOÉQJHO,QRFHQWH&DPRQHV-RKQ3RQFH3DUGR
(GZLQ=DU]RVD1RUDEXHQD

HYDOXDFLyQVHUHDOL]DFRQXQDFRQFHQWUDFLyQ D]LQRELVHWK\OEHQ]RWKLD]ROLQHVXOIRQLF DFLG $%76

method to measures antioxidant capacity of selected small fruits
P0VHREWLHQHXQYDORUGHõ0DVtPLVPR DQG FRPSDULVRQ WR IHUULF UHGXFLQJ DQWLR[LGDQW SRZHU )5$3 DQG
OD HYDOXDFLyQ GHO ,& GH FDWHTXLQD XWLOL]DQGR ·GLSKHQ\OSLFU\OK\GUD]\O'33+PHWKRGV-$JULF)RRG&KHP

XQDFRQFHQWUDFLyQP0GH'33+PXHVWUDXQ
YDORU GH  õ0  PLHQWUDV TXH HO YDORU TXH
hemos obtenido en nuestro laboratorio usando una
FRQFHQWUDFLyQGH'33+P0HVGHõ0
&RQIRUPH VH KD PRVWUDGR DQWHULRUPHQWH H[LVWH
una amplia variedad de concentraciones de
DPPH que se utiliza para la determinación de la
 9LOODxR ' )HUQiQGH]3DFKyQ 06 0R\i 0/ 7URQFRVR $0 *DUFtD
3DUULOOD0&5DGLFDO6FDYHQJLQJDELOLW\RISRO\SKHQROLFFRPSRXQGV
WRZDUGV'33+IUHHUDGLFDO7DODQWD
 *RXS\ 3 'XIRXU & /RRQLV 0 'DQJOHV 2  4XDQWLWDWLYH NLQHWLF
analysis of hydrogen transfer reactions from dietary polyphenols to
WKH'33+UDGLFDO-$JULF)RRG&KHP
 %UDQG:LOOLDPV : &XYHOLHU 0( %HUVHW & 8VH RI D IUHH UDGLFDO
PHWKRG WR HYDOXDWH DQWLR[LGDQW DFWLYLW\ /:7 )RRG 6FL 7HFKQRO
capacidad antioxidante de compuestos naturales y
sintéticos, por cuyo motivo, consideramos que sería
FRQYHQLHQWH DGRSWDU XQD GHÀQLGD FRQFHQWUDFLyQ
del DPPH para todas las determinaciones analíticas
la que podría ser 0.1 mM, ya que a concentraciones
mayores disminuye la sensibilidad de esta técnica
para evaluar la capacidad antioxidante de una
muestra.

 %ORLV06$QWLR[LGDQWGHWHUPLQDWLRQE\XVHRIDVWDEOHIUHHUDGLFDO
1DWXUH
 1HQDGLV1/D]DULGRX27VLPLGRX08VHRIUHIHUHQFHFRPSRXQGVLQ
DQWLR[LGDQWDFWLYLW\DVVHVVPHQW-$JULF)RRG&KHP

 6XMD .3 -D\DOHNVKP\ $ $UXPXJKDQ & )UHH UDGLFDO VFDYHQJLQJ
behavior and antioxidant compounds of sesame (Sesamum indicum
/LQ'33+V\VWHP-$JULF)RRG&KHP

 &KDRXFKH70+DGGRXFKL).VRXUL50HGLQL)(O+DFL,$%RXFKHULW
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS = \ FRO $QWLR[LGDQW DFWLYLW\ SURÀOLQJ E\ VSHFWURSKRWRPHWULF
PHWKRGVRISKHQROLFH[WUDFWRI3UDVLXPPDMXV/)UHH5DG$QWLR[

 &DVFDOHV 0  %LRTXtPLFD \ )LVLRSDWRORJtD GHO HVWUpV R[LGDWLYR
)XQGDFLyQ-RVp&DVDUHV*LO(VSDxD
 ;LH-6FKDLFK.05HHYDOXDWLRQRIWKHGLSKHQ\OSLFU\OK\GUD]\O
IUHH UDGLFDO '33+ DVVD\ IRU DQWLR[LGDQW DFWLYLW\ - $JULF )RRG
 /HH - .RR 1 0LQ '%  5HDFWLYH R[\JHQ VSHFLHV DJLQJ DQG
&KHP
DQWLR[LGDWLYHQXWUDFHXWLFDOV&RPS5HY)RRG6FL6DI

 .HKHU-36PLWK&9)UHHUDGLFDOVLQ%LRORJ\6RXUFHVUHDFWLYLWLHV )XHQWHVGHÀQDQFLDPLHQWR

DQG UROHV LQ WKH HWLRORJ\ RI KXPDQ GLVHDVHV  (Q )UHL % HGLWRU
1DWXUDO DQWLR[LGDQWV LQ KXPDQ KHDOWK DQG GLVHDVH  1HZ <RUN
$FDGHPLF3UHVV
(OHVWXGLRKDVLGRÀQDQFLDGRSRUHO,QVWLWXWRGHLQYHVWLJDFLyQ
&HQWUR GH ,QYHVWLJDFLyQ GH %LRTXtPLFD \ 1XWULFLyQ GH OD
 +DOOLZHOO%*XWWHULGJH-0&)UHHUDGLFDOVLQELRORJ\DQGPHGLFLQH Facultad de Medicina Humana de la Universidad de San
ƒHG2[IRUG8.&ODUHQGRQ3UHVV Martín de Porres.
 3KDP+X\ /$ +H + 3KDP+X\ & )UHH UDGLFDOV DQWLR[LGDQWV LQ
GLVHDVHDQG+HDOWK,QW-%LRPHG6FL &RQÁLFWRVGHLQWHUpV
 5LFFLRQL*%XFFLDUHOOL70DQFLQL%'L,OLR&&DSUD9'·2UD]LR1
The role of antioxidant vitamin supplementation in the prevention of /RVDXWRUHVGHFODUDQQRWHQHUFRQÁLFWRVGHLQWHUpV
FDUGLRYDVFXODUGLVHDVHV([SHUW2SLQ,QYHVWLJ'UXJV

Correspondencia:
 ,TEDO 5 $QDQG 6 2XQSXX 6 ,VODP 6 =KDQJ ; 5DQJDUDMDQ 6 \
col. Dietary patterns and the risk of acute myocardial infarction (PLOLR*XLMD3RPD
LQ  FRXQWULHV UHVXOWV RI WKH ,17(5+($57 VWXG\ &LUFXODWLRQ
'LUHFFLyQ$Y$ODPHGD'HO&RUUHJLGRU8UE/RV6LULXV

/D0ROLQD/LPD
 3DUHGHV/ySH] 2 &HUYDQWHV&DMD 0/ 9LJQD3pUH] 0+HUQiQGH] 7HOpIRQR
3pUH] 7 %HUULHV LPSURYLQJ KXPDQ KHDOWK DQG KHDOWK\ DJLQJ &RUUHRHOHFWUyQLFRHJXLMDS#XVPSSH
DQG SURPRWLQJ TXDOLW\ OLIH$ UHYLHZ 3ODQW )RRGV +XPDQ 1XWU


 +DOYRUVHQ%/%ORPKRII59DOLGDWLRQRIDTXDQWLWDWLYHIRUWKHWRWDO
content of lipophilic and hydrophilic antioxidants in foods. Food 5HFLELGRGH1RYLHPEUHGH
&KHP $SUREDGRGH(QHURGH
 2]JHQ 0 5HHVH 51 7XOLR $= 6FKHHUHQV -& 0LOOHU $5 0RGLÀHG

+RUL]0HG