UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

CARRERA DE MEDICINA
Asignatura: Laboratorio de Microbiología
PRACTICA 7: Estreptococo. Infección de vías respiratorias altas
Octubre/2014 a marzo/2015
OBJETIVO: Conocer los diferentes tipos de estreptococo su patogenio y diagnostico
UNIDAD DE ELEMENTOS DE TECNICAS/INSTRUMENT
TRABAJO AUTONOMO CRITERIOS DE EVALUCACION
COMPETENCIA COMPETENCIA (contenido) OS DE EVALUACION
Dominio lo anteror + formacocimetica
Aparato respiratorio dibujar aparato Avance lo anterior+ inmunologia
consulta/teorico/practica
superior respiratorio alto Proceso lo anterior + fisiologia
Inicio anatomia
Dominio lo anterior + otras forma de identificacion
Practica N° 7: Tecnicas moleculares
Avance lo anterior + gram y cultivo
Infecciones Genero Estreptococo rapidas y moleculares consulta/teorico/practica
Proceso lo anterior + clasificacion
respiratorias altas para estreptococos
Inicio concepto
1.-Criterios de Jones y Dominio lo anterior + tratamiento
Centor modificados 2.- Avance lo anterior+ complicaciones, agentes causantes
Faringo-amigdalitis consulta/teorico/practica
otras patologias Proceso lo anterior + diagnostico
respiratorias altas Inicio concepto

Resultado del aprendizaje: Diagnostica la faringoamigdalitis bacteriana aguda e interpreta ASTO y PCR

1.- INTRODUCCIÓN
Anatomía El sistema respiratorio puede dividirse en el tracto superior y tracto inferior. El tracto
respiratorio superior abarca epiglotis y tejido circundante, laringe, cavidad nasal y faringe (naso, oro y
laringe), la amígdala se encuentra dentro de la oro faringe; la laringe se localiza entre la base de la lengua
y el extremo superior de la tráquea. Empieza en los conductos nasales y orales, que sirven para
humedecer el aire inspirado, y se extiende más allá de la nasofaringe y la oro faringe hasta la tráquea y
luego los pulmones.

Fig. 1
Anatomía del tracto respiratorio, incluye las regiones de las vías aéreas superiores
Defensas del tracto respiratorio El huésped humano tiene varios mecanismo que protegen al tracto respiratorio
en forma inespecífica ante las infecciones: vellos nasales, cornetes y membrana mucosa de los cornetes nasales; la
IgA secretora y las sustancias antibacteriana inespecíficas (lisozima); los cilios y el revestimiento mucosa de la
tráquea, y los reflejos como de la tos, el estornudo y la deglución.
Flora microbiana El término flora microbiana normal se define en la población de microorganismos que habitan la
mucosa de las vías respiratorias superiores de las personas sanas6. La flora microbiana de la nariz consta
principalmente de corinebacterias, estafilococos y estreptococos. La mucosa de la boca y faringe del recién nacido
casi siempre es estéril al nacimiento, 12 horas después el Estreptococo viridans coloniza de forma predominante y se
establece como miembro más notable de la flora residente, probablemente al paso por el canal de parto. En las
primeras horas de vida también se adquiere estafilococos aerobios y anaerobios, diplococos gran negativos,
difteroides y en ocasiones lactobacilos. Cuando comienza la erupción de los dientes se establecen espiroquetas
anaerobias. Especies Actinomyces se encuentran normalmente en el tejido amigdalino y en las encías de los
adultos5.
En la faringe y tráquea se encuentra flora microbiana muy similar, sin embargo en los bronquios normales hay muy
pocas bacterias, los bronquios de pequeño calibre y los alveolos son estériles. Los microorganismos predominantes
en las vías respiratorias superiores, principalmente en la faringe, son estreptococos no hemolíticos, α-hemolíticos,
neisserias (excepto Neisseria gonorrhoeae siempre es patógeno), estafilococos, difteroides, Haemophilus influenzae,
Moraxella catarrhalis, neumococos, micoplasma, prevotellas, además de levaduras como Cándida albicans, virus
como el adenovirus y, virus del herpes simple. Las infecciones de la boca y vías respiratorias casi siempre son
producidas por gérmenes anaerobios5.

AGENTES PRODUCTORES DE ENFERMEDAD

GÉNERO STREPTOCOCCUS
Los Streptococcus son cocos gran positivos, aerobios facultativos, catalasa negativos que se disponen formando
cadenas. Forman parte de la flora normal del ser humano, principalmente del tracto respiratorio. Poseen en su
pared celular distintos tipos de polisacáridos específicos que permiten su clasificación en grupos serológicos(A, B, C,
D, etc.) denominados grupos de Lancefield (en honor a Rebeca Lancefield). De modo que las especies que poseen
los antígenos polisacáridos específicos en la pared se designan según el grupo serológico al cual pertenecen5. (Ver
cuadro 1)
En los medios de cultivo que tienen sangre la mayoría de los estreptococos tienen la capacidad de causar hemólisis o
destrucción de células rojas in vitro de diferentes grados, por ejemplo se conoce como β- hemólisis a la disrupción
completa de eritrocitos con aclaramiento de la sangre alrededor de las bacterias en crecimiento y se conoce como α-
hemólisis a la destrucción parcial de los hematíes en el medio de cultivo y genera un halo de color verdoso alrededor
de la colonia. El tipo de hemólisis en medios de agar sangre permite clasificar a los estreptococos en β-hemolíticos
(producen hemólisis total), α- hemolíticos (producen hemólisis parcial) y no hemolíticos (estreptococos que no
producen hemólisis)4.

Cuadro 2. Descripción de los tipos de hemólisis

Tipo de hemólisis Descripción Ejemplo
Alfa (α)
Hemólisis incompleta en agar sangre, presenta
un halo verdoso alrededor, debido a la lisis
incompleta de eritrocitos y por la generación
de biliverdina a partir de hemoglobina

Beta (β)
Hemólisis completa en agar sangre, producen
un halo transparente por acción total de las
estreptolisinas O y/o S
 Gamma (ϒ)
No hay acción de estreptolisinas, por lo tanto,
no producen halo de hemolisis alguno

PATOGENIA
Los estreptococos, expresan una serie de enzimas, toxinas, factores de adherencia que les permite realizar su acción
patógena en el ser humano, es de particular importancia su conocimiento debido a que muchos de estos factores
llevan a un daño tisular grave y hasta la muerte del paciente.

STREPTOCOCCUS PYOGENES
S. pyogenes es un estreptococo β-hemolítico perteneciente al grupo A de la clasificación de Lancefield. Forma parte
de la flora normal del hombre, coloniza un 15 – 20% de la población, principalmente el aparato respiratorio de niños
y adolescentes. La infección se produce por transmisión de persona a persona a través de secreciones respiratorias5.
Las infecciones más frecuentes son: Infecciones respiratorias (faringitis, amigdalitis, sinusitis u otitis), infecciones de
la piel (impétigo, erisipela, escarlatina), puede producir infecciones piógenas en pacientes inmuno competentes. Las
complicaciones producto de la infección de S. pyogenes pueden dar lugar a cuadros clínicos graves como la fiebre
reumática y la glomérulo nefritis aguda, que pueden aparecer semanas después de una infección faríngea o cutánea
respectivamente5.
La proteína F media la adherencia a las células epiteliales y la proteína M es antifagocítica; produce varias enzimas y
hemolisinas que contribuyen a la invasión y la destrucción de los tejidos, entre ellas la estreptolisina O, la
estreptolisina S, la estreptocinasa, la DNasa y la hialuronidasa. Las exotoxinas estreptocócicas pirógenas median la
aparición de erupciones cutáneas (escaratina) o de efectos multisistémicos que pueden conducir a la muerte.
Reacciones cruzada de los anticuerpos producidos contra los antígenos estreptocócicos y el tejido cardiaco humano.
Depósito renal de complejos antígeno estreptocócico – anticuerpos que producen daño en los glomérulos.

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
S.pneumoniae neumococo es un estreptococo α- hemolítico, a la tinción gran aparecen como diplococos
grampositivos alargados y que presentan una cápsula de polisacárido que permite tipificarlos con antisueros
específicos. Habitan las vías respiratorias superiores en el 5-40% de individuos sanos y pueden causar neumonía,
otitis, bronquitis, bacteriemia, meningitis y otros procesos infecciosos5.
Los neumococos producen enfermedad por su capacidad para multiplicarse en los tejidos. No producen toxinas
significativas sin embargo la virulencia del germen depende de la función de la cápsula que evita o retarda la
ingestión por las células fagocitarias. Un suero con anticuerpos contra el polisacárido de tipo específico protege
contra la infección. La inmunidad a la infección por neumococos es de tipo específico y depende de los anticuerpos
al polisacárido capsular y de la integridad de la función fagocitaria. Las vacunas pueden inducir producción de
anticuerpos a los polisacáridos capsulares5.

INFECCIONES DE LAS VIAS RESPIRATORIAS SUPERIORES

RESFRIADO COMÚN O RINITIS

Se constituye en la inflamación de la mucosa nasal, provocados por varios agentes etiológicos, su gran mayoría
constituidos por virus pertenecientes a varias familias, predominando en los adultos el rinovirus. Clínicamente se
presenta con obstrucción y secreción nasal, dolor de garganta severo, sin adenopatías, tos y malestar generalmente
sin fiebre. Es un cuadro autolimitado de 7 días de duración. La infección puede complicarse en los niños produciendo
otitis media, sinusitis. El tratamiento va orientado a la sintomatología, el uso de antibióticos solo está indicado ante
la presencia de una sobre infección bacteriana5.

FARINGITIS, AMIGDALITIS Y ABSCESO PERIAMIGDALINO

La faringitis es un proceso inflamatorio caracterizado por dolor faríngeo, en ocasiones disfagia, enrojecimiento y
presencia de exudado en las paredes de la faringe y amígdalas, que pueden cursar con fiebre.
La etiología es diversa: VIRUS: Son la causa mas frecuente de faringitis infecciosa aguda. Los virus respiratorios
(rinovirus, adenovirus, respiratorio sincitial, influenza, parainfluenza, coronavirus) frecuentemente causan faringitis.
Otros virus asociados son: virus coxsackie, echovirus y virus herpes simple. El de Epstein-Barr es causa frecuente de
mononucleosis infecciosa; cuadro clínico que cursa con faringitis aguda. Las infecciones sistémicas por
citomegalovirus, virus de la rubéola, sarampión y otros también pueden asociarse con faringitis aguda. El virus de la
inmunodeficiencia humana (VIH) también puede producirla; no hay que olvidar que la presentación inicial de esta
infección puede ser de un cuadro catarral.
BACTERIAS. Causa el 5-40% de las faringitis agudas. Las faringitis bacterianas, según la etiología, se pueden dividir
en: 1). Faringitis estreptocócicas S. Pyogenes es la bacteria más frecuente (responsable del 20-40% de los episodios
de faringitis aguda en la edad pediátrica y del 2-26% de los casos en adultos). Otros estreptococos beta-hemolíticos,
pertenecientes a los grupos C y G y con tamaño grande de colonia, también se han asociado con brotes de faringitis,
pero se desconoce su importancia en los casos esporádicos. S. pyogenes es la única causa frecuente de faringitis que
requiere tratamiento antibiótico específico, cuyos principales objetivos son: prevenir las complicaciones supurativas
locales (principalmente absceso periamigdalar, linfadenitis cervical y mastoiditis) y las no supurativas (fiebre
reumática aguda y glomerulonefritis). Además, el tratamiento antibiótico mejora la sintomatología, disminuye la
infectividad del paciente y por tanto la transmisión de la infección, y puede minimizar potenciales efectos adversos
(rash, anafilaxia, trastornos gastrointestinales) de tratamientos inadecuados. 2).-Faringitis no estreptocócicas a)
Arcanobacterium haemolyticum faringitis en adolescentes y adultos jóvenes. La faringitis se acompaña
generalmente de un rash. b) Neisseria gonorrhoeae puede producir faringitis de forma ocasional en pacientes que
tienen contacto sexual orogenital tiene baja incidencia, debe incluirse en el diagnóstico. c) Mycoplasma pneumoniae
produce faringitis recurrentes) Chlamydophila pneumoniae y Chlamydophilapsittaci.Son causa de neumonía y en
muchos casos se describe la faringitis como manifestación inicial de la infección. La verdadera incidencia de faringitis
por estos microorganismos no se conoce.) Treponema pallidum. La infección faríngea se puede adquirir tras
relaciones sexuales orogenitales. Aparece el chancro faríngeo.) Corynebacterium diphteriae debido a los programas
de inmunización activa la difteria se ha convertido en una enfermedad infrecuente en nuestro medio.g) Yersinia
enterocolitica muy poco frecuente. Sólo hay descritos dos brotes de faringitis en la literatura. h) Francisella
tularensis. La tularemia orofaríngea puede adquirirse a través del contacto con artrópodos o animales infectados. i)
Anaerobios
El diagnóstico etiológico para confirmar o excluir la infección por Estreptococo del grupo A se hace a partir del
exudado faríngeo por medio de cultivo o pruebas de detección rápida del antígeno estreptocócico. La muestra del
cultivo se toma frotándola faringe y las amígdalas con un hisopo de algodón, dacron o alginato, si el hisopo
permanece húmedo, no es necesario tomar precaución alguna si se cultiva dentro de las 4 horas de obtención de la
muestra. El S. pyogenes es muy resistente a la disecación y permanece viable en un hisopo seco hasta 48 a 72 horas
después de obtenerlo. El tratamiento de elección de la faringitis estreptocócica sigue siendo la penicilina.

DIAGNOSTICO
Manifestaciones clínicas
Bacteriológico: agudo
Toma de muestra secreción faríngea para cultivo
Técnicas de detección diferentes al cultivo para estreptococo β hemolítico del grupo A en muestras
faríngeas
Serológico: evidencia de infección
ASTO, ASO
DNasa A,B,C,D
Hialuronidasa
PCR

2. MATERIALES REQUERIDOS
 Centrífuga de 2.500 r.p.m.
 Mezclador,
 Jeringuillas de 5 ml.
 Tubo tapa roja de 10 ml de capacidad
 Tubo pequeño de 5 ml de capacidad
 Láminas oscuras con celdillas de 18 mm de diámetro
 Pipetas automáticas graduables
  Puntas amarillas,
 Torundas,
 Torniquete
 Palillos,
 Reactivo de ASTO
 Controles de sueros humanos estabilizados (positivo – negativo)
 Reactivo de látex P.C.R.
 Un dispositivo de diagnóstico STREP A en formato Tira.
 Escobillones estériles
 Un tubo de extracción con su respectiva tapa gotero
 Reactivo de extracción A ( Nitrato de Sodio 2M)
 Reactivo de extracción B ( Acido Acético 0.4M)
 Reloj o timer

3. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
Estos métodos nos permiten identificar ciertas características morfológicas, antigénicas y de susceptibilidad que en
los estreptococos se presentan, estas se resumen en el cuadro 3:

Cuadro 3. Métodos de Diagnóstico, Estreptococos

Método de diagnóstico Descripción Ejemplo

Tinción Gram Permite identificar la morfología celular

que en este caso son cocos gram
positivos o gram variables dispuestos en
pares o cadenas, la forma de las células
individuales varían desde las que se
asemejan a diplococos hasta las que son
cocobacilares o corineformes. Los S
viridans son mas alargados, S
pneumoniae están en pares y forma
lanceolada y encapsulado

Cultivos Se utiliza agar sangre de cordero, donde

se presentan como colonias > 0.5 mm de
diámetro, translúcidas, blanquecinas o
grisáceas, lisas brillantes, de bordes
completos, con halo de hemólisis
completa

Catalasa Una reacción negativa, aumenta la

posibilidad de ser un estreptococo,
descartando así estafilococos

Prueba de Bacitracina (Disco Ésta prueba ayuda a identificar

Taxo A) estreptococo pyogenes de los otros, por
el principio de que todas estas bacterias
son sensibles a bacitracina, y por ende
en agar sangre veremos un halo de
inhibición alrededor del disco con el
antibiótico (Disco A, en la imagen)
 Test de CAMP
(Christie, Atkins,
Munch-Peterson Test)
En agar sangre hacemos dos inóculos en
forma de T, en la horizontal de la T
inocularemos Stafilococcus productor de
β-lisina y en la vertical Streptococcus
agalactiae, si se forma una flecha de beta
hemólisis confimamos el diagnóstico de
Estreptococo beta hemolítico del grupo
B, es decir, se produjo la proteína
extracelular difusible( factor CAMP)

Método de diagnóstico Descripción Ejemplo

Se toman cultivos puros y se hace una

suspensión en 50 uL de solución salina
Prueba PYR y se les agrega discos con reactivo
(Hidrólisis de L-pirrolidonil-2- pirrolidonil-beta-naftilamida, si el disco
naftilamida) se tiñe de rojo-rosa es positivo si es
blanco es negativo, ayuda a identificar
S.pyogenes y Enterococcus

Se agregan anticuerpos contra

polisacáridos de cápsula de
Reacción de Quellung Neumococos o antisuero polivalente en
un portaobjetos, observaremos una
edematización de las cápsulas.

Algunos microorganismos se lisan en

Solubilidad en bilis-esculina.
presencia de bilis. Se inocula un caldo
nutritivo sin glucosa y con pH alrededor
de 7 con el microorganismo durante 24 h
y se le añade a la solución de bilis al
10% (generalmente desoxicolato de
sodio).Se incuba a 35-37°C y si antes de
3 h se produce un aclaramiento en el
contenido del tubo se identifica
enterococus.

Se evidencia la lisis que tiene el

Prueba de Susceptibilidad a Streptococcus pneumoniaea la
Optoquina optoquina(cloruro de
etilhidrocupreina)(Disco P, en la imagen)
mientras que los otros estreptococos
alfa hemolíticos no son lisados

PRUEBA DE DIAGNÓSTICO INDIRECTAS (SEROLÓGICO)

ANTIESTREPTOLISINA O (ASTO)
El reporte puede ser cualitativo, semicuantitativo y cuantitativo de pendiendo del método utilizado como,
aglutinación o ELISA, nefelometría, quimioluminiscencia, etc. que mide la respuesta de anticuerpos generados por la
presencia de la estreptolisina O del Streptococcus pyogenes. En la práctica realizaremos aglutinación con latex.

Procedimiento cualitativo
 Utilizando una pipeta, se dispensa una gota de suero del paciente (0,05 ml) en un anillo de la lámina, se utiliza
suero sin diluir no plasma.
 Mezclar y homogenizar el reactivo de ASTO y agregar una gota junto al suero
 Mezclar con un palillo las dos gotas y extenderlas en toda la superficie del círculo
 Hacer rotar la lámina en forma de 8 horizontal o ponerla sobre el rotor durante 2 minutos
  Observar si se producen grumos o partículas grandes o gruesas; si no existen las partículas quiere decir que no
hay aglutinación.

Falsos positivos
Por el uso de sueros hemolizados, contaminados o lipémicos
Exceso de tiempo de reacción por desecación de la muestra
Falsos negativos
Cuando hay exceso de antígeno no se produce la aglutinación (fenómeno de prozona) si hay sospecha clínica se
puede repetir el procedimiento con dilución del suero 1:10

PROTEINA C REACTIVA (PCR)

Fundamento de la técnica
En la cápsula del neumococo existe una sustancia “C”, que es un ácido teicoico que contiene colina como parte de la
pared celular, esta sustancia reacciona con una beta globulina que se llama proteína “C” que se encuentra en el
suero del paciente. Esta proteína forma un complejo que activa la cascada del complemento y da origen a la emisión
de mediadores inflamatorios. El método se fundamenta en una reacción de aglutinación de una suspensión de
partículas de látex polietileno sensibilizadas con anticuerpos altamente purificados de anti proteína C-reactiva. La
aglutinación es visible a una concentración de PCR en suero igual o superior a 6mg/L

Existe también los métodos semicuantitativos y cuantitativos el primero por diluciones seriadas del suero que se
investiga en 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y el segundo se realiza por nefelometría, ELISA, etc. y se reporta en mg por ml. Es de
utilidad estas mediciones a intervalos de tiempo para evaluar la eficacia de la terapia en el tratamiento de pacientes
con fiebre reumática aguda, es decir como índice de recuperación clínica

PRUEBA RÁPIDA DE DETECCIÓN DE ANTÍGENOS

La prueba rápida STREP A permite mediante un ensayo inmunocromatográfico la determinación visual cualitativa en
un solo paso de la presencia de antígeno de Streptococcus β-hemolítico del grupo A en secreciones faríngeas, como
ayuda en el diagnóstico rápido de infecciones causadas por esta Bacteria, esta prueba se debe realizar en el
consultorio médico. Los resultados de la prueba son rápidos, fáciles de interpretar de manera visual y no se requiere
de instrumentación o reactivos adicionales 8. La sensibilidad de estos ensayos varía entre el 62% y el 96%; la
especificidad en la mayoría de los casos excedía el 97%

Fundamento de la prueba
La prueba STRET A es un inmuno ensayo cualitativo de flujo lateral para la detección del antígeno carbohidrato Strep
A en frotis de garganta.

Procedimiento
1. Identifique el tubo de extracción para cada paciente y colóquelo en un soporte o gradilla.
2. Agregue 4 gotas (240μl Aprox) del reactivo A (de color rojo) y 4 gotas (160μl Aprox) del reactivo B (incoloro) a
cada tubo de extracción.
3. Mezcle la solución agitando varias veces el tubo de extracción. La adición del Reactivo B al Reactivo A cambia el
color de la solución de rojo a amarillo. Inmediatamente introduzca el escobillón que contiene la muestra en el tubo
y agite vigorosamente el escobillón 10 veces en el tubo.
4. Deje el escobillón en el tubo por 1 minuto, entonces presione el escobillón contra el lado interno del tubo para
exprimir la parte inferior mientras se va retirando el escobillón, deseche el escobillón.
5. Coloque la tapa gotero a cada tubo de extracción.
6. Extraiga la tira reactiva del empaque e identifíquela de acuerdo a los procedimientos de su laboratorio.
7. Con las flechas apuntando hacia la muestra, coloque la tira verticalmente en la solución de muestra extractada y
empiece a cronometrar.
8. Si el procedimiento se sigue correctamente la solución de extracción no debe pasar más de la línea máxima (MAX)
sobre la tira cuando la franja está inmersa.
Deje la tira en el tubo de extracción
9. Espere 5 minutos e intérprete los resultados.
10. No interpretar los resultados después de los 10 minutos.
Prueba Inválida: No se visualiza bandas en absoluto o aparece una banda de color en la región de prueba (T) pero
ninguna banda de color en la región de control (C). Repita de nuevo el procedimiento utilizando una nueva prueba
reactiva.

4.- AUTOEVALUACION E INVESTIGACION

 Enumere los microorganismos más frecuentes de infección respiratoria alta
 ¿Cuáles son las complicaciones más graves de la infección por Streptococcus pyogenes?
 ¿Cuál es el agente bacteriano más frecuente causal de faringitis?
 ¿Cuál es el agente causal de la gripe?
 Describa el fundamento del STREP TEST

5.-BIBLIOGRAFÍA.-

1. Jawetz, Melnick. Adelberg. Medical Microbiology, 24th Edition, McGraw-Hi