UNIVERSIDAD ANDINA NESTOR CACERES VELASQUEZ

FACULTAD DE INGENIERIAS Y CIENCIAS PURAS

CARRERA ACADÉMICA PROFESIONAL INGENIERÍA SANITARIA Y AMBIENTAL

REECUNETO DE COLIFORMES EN MUESTRA DE AGUA RESIDUAL

PRACTICA DE LABORATORIO N°05
CATEDRA DE MICROBIOLOGIA SANITARIA Y AMBIENTAL
DOCENTE: Dr. Juan José Pauro Roque
RESPONSABLES:
Laura Lechuga Jordy Danny
Larico Yucra Betssy Nery
Quispe Oscalla Bertha Alejandra
Ramos Marca Luz Yodina
Uscamayta Paricela Erika Yesabella

SEMESTRE: SEGUNDO “D”

JULIACA –PERU
2015
 RECUENTO DE COLIFORMES EN MUESTRAS DE AGUAS RESIDUALES

Laura Lechuga Jordy Danny

Larico Yucra Betssy Nery

Quispe Oscalla Bertha Alejandra

Ramos Marca Luz Yodina

Uscamayta Paricela Erika Yesabella

Cátedra de Microbiología Sanitaria Ambiental

CAPISA-UANCV

RESUMEN

La práctica de microbiología acerca de recuento de coliformes en agua residual y de refresco, se

realizó en el laboratorio de calidad ambiental de CAPISA - UANCV de la ciudad de Juliaca. El
objetivo de la práctica fue el recuento de coliformes de agua residual y de refresco. La
metodología aplicada fue: La técnica de diluciones “número más probable”, en cada tubo de
ensayo se transfirió 9 ml. de agua destilada, indicador de pH, se agregó el caldo lactosado y 1
ml. de la muestra de agua residual. El caldo lactosado es un medio rico en nutrientes para los
microorganismos (coliformes) que consumen, al consumir liberan ácido láctico y al metabolizar
producen CO2 (dióxido De carbono) y otros gases que hacen que las campanas Durham floten
dentro de los tunos de ensayo indicando la presencia de coliformes.

Palabras Claves:

Caldo, coliforme, recuento, pH y láctico.

ABSTRACT

The practice of microbiology about coliforms in residual water and soda, was conducted in the
laboratory of environmental quality CAPISA - UANCV city of Juliaca. The purpose of the
practice was the coliform count of residual water and soda. The methodology used was:
dilutions technique “most probable number “in each test tube was transferred 9 ml. Of distilled
water, pH indicator, the lactose broth and 1 ml was added. Sample of wastewater. The lactose
broth is a medium rich in nutrients for microorganisms ( coliforms) consuming , consuming
released to metabolize lactic acid and produce CO2 (carbon dioxide ) and other gases that cause
Durham bells float within the test indicating tunos the presence of coliforms.
Key Words:

Broth, coliform count, pH and lactic.

 INTRODUCCION

La detección de microorganismos coliformes se usa como un indicador de la calidad sanitaria

del agua, o como un indicador general de las condiciones higiénicas del ambiente en un área de
producción, consume y venta de productos de alimentación (Arellano, 2009),

Las pruebas de detección de bacterias coliformes (Enterobacter aerogenes y Escherichia coli)

suelen efectuarse utilizando un medio de cultivo selectivo, por su alta concentración de sales
biliares y con lactosa como único azúcar. En este medio, 4as bacterias coliformes pueden
desarrollar y fermentar dicho azúcar con producción de gas, propiedad que sirve, justamente,
para detectar la presencia de este grupo bacteriano. (Graciela N. Pucci1, 2009)

Las bacterias coliformes son el principal indicador de la adecuación del agua para uso
doméstico, industrial, o de otro tipo. La experiencia ha demostrado que la densidad del grupo de
los coliformes es un indicador del grado de contaminación y por lo tanto de la calidad sanitaria
(Zapata Carrillo & Lozano Caicedo , 2008) . Los coliformes se definen como bacterias
anaerobias facultativas, gramnegativas, no esporulandas, con forma de bacilo, que fermentan la
lactosa con formación de gas en 48 horas a45°C. el grupo de coliformes incluye. E-coli,
enterobacter aerogenes y klebsiella pneumoniae. (Cabrera, Bonilla, Tornero , & Castro , 2005)

En tal sentido, esta práctica tiene de mucha importancia de reconocer la evaluación de la carga
microbiana de suelos, para ello nos planteamos los siguientes objetivos:

 Adquirir la destreza del recuento de coliformes por el método de NMP.

 Cuantificar la carga de coliformes totales de muestra de agua residual.
 MATERIALES Y METODOS
1. Materiales
 Tubos de ensayo
 Papel aluminio  Azul de bromothymol
 Tijera  Ligas
 Matraz Erlenmeyer  Alcohol
 Pipeta  Plumón indeleble
 Probeta  Papel toalla
 Agua destilada  Autoclave
 Mechero  Caldo nutritivo
 Campanas Durham  Gradillas
 Espátula  Muestra de agua residual de
 Balanza analítica Torococha
 Papel kraft  Encendedor
 Incubadora

2. Zona de estudio
Laboratorio de calidad ambiental CAPISA-UANCV Juliaca, que se encuentra sobre
3.825m.s.n.m., que se encuentra a 45 minutos de la capital del departamento de Puno.
La muestra de agua residual se obtuvo de laguna Torococha ubicado en la cuidad
Juliaca.
3. Metodología
a. se realizaron cálculos de caldo nutritivo para pesar en la balanza analítica.
18g 1000ml
Xg 85ml
X= 1.53g de caldo nutritivo
b. se pesaron en una balanza analítica 1.53g de caldo nutritivo para 85ml de agua
destilada.

c. Se colocó 9 ml de agua destilada con la ayuda de pipeta a tres tubos de ensayo

principales y se cubrió con papel de aluminio.

d. Se agregó a un matraz Erlenmeyer 1.53g de caldo nutritivo en 85 ml de agua

destilada y 1g gramo aproximadamente de lactosa, dando como resultado de
caldo lactosado; se tapó el matraz con papel de aluminio, se encendió el mechero
y se dejó calentar de 1 a 2 minutos hasta hervir.
e. Luego se le agrego medio gramo del indicador de PH azul de bromothymol y
una base de 2ml para que la solución sea alcalina, de color azul verdoso y se
dejó de calentar en el mechero hasta hervir.

f. se colocó las campanas Durham a los tubos de ensayo y luego se transfirió 9ml
de caldo lactosado a los 9 tubos de ensayo y se tapó con papel aluminio.

g. Se empaqueto los materiales a esterilizar: pipetas, los tubos de ensayo con

diluciones, todas envueltas por encima con papel y con ligas, luego se colocó
todos los materiales en una canastilla para luego introducir al autoclave, durante
un tiempo de 15 minutos, a una temperatura de 121°C y una presión de 15lb.

h. Después del tiempo transcurrido se retiró de la autoclave los materiales ya

esterilizados, y se procedió a retirar las envolturas de cada material.
i. Se etiquetó los tubos de ensayo con plumón indeleble a los tres hasta los
tres , y se colocó en gradillas de tres en tres, y se enfrió con agua.

j. se procedió a preparar las diluciones, transfiriendo con la ayuda de la pipeta 1ml

de la muestra de agua residual a los 3 tubos principales , y
dejando la pipeta en cada una de ellas y de las cuales se transfirió con la
ayuda de la pipeta 1ml a los tres tubos de y 1ml a los tres tubos de
y 1ml a los tubos .

k. Finalmente se depositó en la incubadora las diluciones de muetra de agua

residual a una temperatura de 37°C durante 48 horas. Para observar si hay tubos
positivos es decir si el medio contiene un indicador de pH, turbidez y producción
de gas en el interior de la campana Durham.
 RESULTADOS Y DISCUSION

Para la determinación de bacterias coliformes totales por el método de recuento en tubo de

ensayo, se utilizó el caldo lactosado, y después de 24 horas pudimos observar que todas nuestras
muestras eran positivas así como podemos ver en la fig.1. Lo cual nos quiere decir que
contenían coliformes.

Fig. (1). Aquí se observa los resultados en 24 horas. En la cual se nota el color del
cambio de viraje, entonces consumieron en el proceso del metabolismo.

Los resultados obtenidos de recuento de coliformes después de 48 horas, los 9 tubos de

ensayo fueron positivos pero a diferencia de 24 horas fue el cambio de color como se
puede observar en la fig. 2. A comparación de 24 horas; pues como medio confirmativo

Levantamiento del
tubo durgan

Cambio de color
más claro

para coliformes totales, el más generalizado es el caldo lactosado.

Fig. (2). Se observa el levantamiento del tubo hurgan y el cambio de color con un tono
más claro a comparación de las otras imágenes.
Calculo de NMP.

Valores en la NMP de resultados positivos, cuando se utilizan 3 tubos por dilución:

NUMERO DE TUBOS (positivos) NMP/100ml

1:10 1:100 1:1000

3 3 3 1100

Calculo del aumento de bacterias coliformes:

NMP/ml = 1100 * 100

100

NMP/ml = 110

DISCUSION

Este trabajo ha permitido ver la cantidad de coliformes que había en cada una de las muestras de
agua residual, esto se debe a que no existe un control de calidad de estas aguas residuales, no
cuentan con elementos básicos para el consumo humano, ya que su disposición afecta
significativamente la calidad sanitaria del cuerpo de agua. Son deficientes y con mala higiene
pues son contaminados con microorganismos patógenos entre otros.
 CONCLUSIONES

Terminado dicha práctica de recuento de coliformes concluimos con lo siguiente:

 Se logró alcanzar la destreza del recuento de coliformes por el método de NMP.

 Se obtuvo que todas eran positivas la cual indica, que la muestra de agua del rio
Torococha contiene coliformes. Entonces el rio está estrictamente contaminado de
por los heces fecales, por lo tanto no está disponible para la sobrevivencia. Esto
indica que estaría, absolutamente prohibido el consumo o cualquier actividad
hídrica proveniente.

BIBLIOGRAFIA

Arellano, I. E. (2009). Recuento de coliformes en productos lacteos. micronoticias.

Cabrera, C., Bonilla, N., Tornero , M., & Castro , A. (2005). Monitoreo de Coliformes Fecales y
Huevos de helmintos en Agua y Sedimentos Lodos .
Graciela N. Pucci1, A. J. (abri de 2009). Identificación de bacterias marinas cultivables de la
ciudad costera Comodoro Rivadavia, Argentina. Revista de biología marina y
oceanografía.
Zapata Carrillo , E., & Lozano Caicedo , A. (2008). Validacion del Metodo de Deteccion de
Coliformes Totales y Fecales en Agua.
 ANEXOS

Fig.1 En un matraz se le agrega el caldo lactosado en 85 ml de agua destilada.

Fig.2 Se muestra las inmersiones de 9ml en los tubos de ensayo ya preparadas y además los
materiales que se van a utilizar ya envueltos, para esterilizar, luego continuar con la práctica.

Fig. (3). Una vez preparado ya con la muestra del agua residual, ya para culminar la práctica. Se
situó respectivamente en la incubadora a 37°C, para obtener resultados después de 24 a 48
horas, donde también se observa el recuento por el NMP.