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BIOLOGIA MOLECULAR
TEMA:
TRANSFERENCIA DE GENES
DOCENTE: GRUPO # 13
DR. JULIO RAMÓN VILLACRÉS PASTOR.
INTEGRANTES:
o MELISA TERESA QUIMIZ ORTEGA
o ERIKA ROXANA OCHOA SANTANA
o ARIANNA CEDEÑO ESPINOZA
o CINDY DE LAS MERCEDES MORÁN YAMBAY
AÑO LECTIVO
2017-2018
El material genético se puede transferir de
manera horizontal de un cromosoma, de un
organismo o de una especie a otras. Esto se da
mediante la transducción, transformación,
transposición, transfección y Conjugación.
A los elementos transponibles se les supone un
origen muy antiguo relacionado con los virus,
incluso anteriores a la separación de procariotas
y eucariotas.
Estos mecanismos permiten por tanto la
diseminación de los EGM entre distintas
bacterias y consecuentemente la propagación de
los diferentes factores de virulencia que
codifican , destacando los genes de resistencia antibiótica.
TRANSMI
SIÓN
VERTICAL HORIZONTAL
PROGENITOR AL
TRANSDUCCION TRANSPOSICIÓN TRANSFORMACIÓN
HIJO.
Vertical:
Es un proceso en el que un organismo transfiere material genético a otra célula que no es
descendiente.
Horizontal:
Ocurre cuando un organismo recibe material genético de sus ancestros.
TRANSDUCCIÓN
La transducción es un proceso mediante el cual el ADN es transferido desde una bacteria a otra
mediante la acción de un virus. También se utiliza para designar al proceso mediante el cual
ADN exógeno es introducido en una célula mediante un vector viral.
Esta es una herramienta que usualmente utilizan los biólogos moleculares para introducir en
forma controlada un gen extraño en el genoma de una célula receptora.
Cuando los bacteriófagos (virus que infectan bacterias) infectan una célula bacteriana, su modo
normal de reproducción consiste en capturar y utilizar la maquinaria
de replicación, transcripción, y traducción de la célula de la bacteria receptora para producir
gran cantidad de virones, o producir partículas virales, incluido el ADN o ARN viral y la
cubierta de proteína.
El empaquetamiento del DNA viral comienza por sitios especÌficos del concatámero viral (sitios
pac). Estos sitios pac no se encuentran en el genoma bacteriano, pero aparentemente secuencias
similares pueden ser reconocidas por el fago y producirÌan la encapsidación errónea del DNA
bacteriano. Sitios similares a los sitios pac han sido encontrados tanto en E. coli como en S.
typhimurium.
La cantidad de partÌculas de transducción generalizada que pueden producir las células
infectadas es muy variable. Mientras algunas células no producen ninguna, otras pueden llegar a
encapsidar el 20% del genoma bacteriano. Si bien en este tipo de transducción todas las regiones
del DNA bacteriano pueden ser encapsidadas, algunos loci son transducidos con mayor
frecuencia.
El DNA lineal donante inyectado por la partÌcula transductora puede incorporarse de diversas
maneras con el DNA bacteriano:
La recombinación del DNA transductor puede ocurrir por tres vÌas diferentes:
b) Recombinación por adición: La recombinación entre las dos copias del DNA
bacteriano lleva a la incorporación de toda la molécula de DNA del fago transductor y
se forma un merodiploide. Los transductantes de adición pueden ser generados
simplemente por la formación de ciertos empalmes entre una cadena del DNA
transductante y bacteriano (Holliday junction-Empalmes de Holliday) que llevan a la
integración del DNA del fago transductor de manera análoga a la integración del
transductor por recombinación sitio-especÌfica.
Solo se empezó a pensar que no eran artefactos cuando 20 años después, científicos
varones encontraron lo mismo en la bacteria de moda por entonces: Escherichia coli.
Hoy se sabe que hay transposones en todos los organismos y que la tasa de
transposición es similar a la de mutación espontánea, por lo que cabe la posibilidad que
sean los transposones (y no las mutaciones aleatorias) las que introduzcan la
variabilidad en las especies.
Clasificación según mecanismo de transposición
Transposición conservativa: el transposón sale de la sede donadora que queda vacía y
se incorpora en una nueva sede (sede receptora). No aumenta el número de copias del
transposón en el interior de la célula.
Se expresa la transposasa, y realiza dos cortes de doble cadena a la misma altura en el
genoma donante, dejando aislado el transposón. A continuación localiza una secuencia
diana (pongamos, ATGCA) en el genoma aceptor, y realiza un corte cohesivo. Tras eso
une los extremos a los del transposón aislado, y la ADN Polimerasa de la célula rellena
las zonas de cadena sencilla dejadas en la secuencia señal tras el corte cohesivo. Debido
a esto, la secuencia señal queda duplicada. Queda, sin embargo, un hueco en el genoma
donante, que puede ser letal si no se repara.
Transfección
En sentido amplio, la transfección consiste en la introducción de material genético
externo en células eucariotas mediante plásmidos, vectores víricos u otras herramientas
para la transferencia. En un sentido más reducido, frecuentemente se usa solo para
referirse a la introducción de material genético en células animales, prefiriéndose otros
términos para otras células.
Métodos empleados
Métodos Químicos
Métodos Físicos
Basados en la introducción mecánica de las moléculas en el interior de la célula.
Micro-inyección directa: Se emplea en la introducción del DNA recombinante
en las células embrionarias en el proceso de obtención de animales transgénicos,
esta técnica es muy efectiva pero laboriosa.
Electroporación: Se provoca un aumento significativo de la permeabilidad de
la membrana plasmática celular mediante un campo eléctrico aplicado
externamente, que genera poros que el ADN puede atravesar. Una variante es la
nucleofección, una electroporación optimizada para dirigir ácidos nucleicos no
solo al citoplasma, sino al núcleo celular.
Biobalística: Introducción del DNA adherido a micro-partículas que se disparan
sobre la célula.
Métodos Biológicos
Transfección estable
Para la generación de líneas celulares estables el transgen de interés debe ser co-
transfectado con un marcador de selección que produzca resistencia a una droga. Para
cada ensayo de transfección estable se debe monitorear de manera cuidadosa la
integración del transgen en el genoma de la célula blanco. El método más utilizado en la
investigación clínica para lograr una transfección estable es el de la transfección
mediada por virus, también conocida como transducción. Este método es altamente
eficiente debido a la naturaleza viral de la integración en el genoma del huésped. Por
ejemplo, se ha utilizado el virus de la leucemia murine (MLV) como vector viral para
establecer la expresión sostenible de genes de interés en humanos. El MLV integra su
DNA en el genoma del hospedero, el cual es posteriormente expresado. El DNA del
MLV integrado se replica con el genoma del hospedero, lo que permite la expresión
sostenible del gen de interés.
En un experimento de transfección típico se debe permitir a las células recuperarse de la
transfección por un periodo de 24 a 72 horas en la ausencia de selección. Esto permite a
la célula expresar la cantidad necesaria de la enzima de resistencia para proteger a las
células transfectadas establemente contra la droga. Después de 48 o 72 horas de la
transfección el medio de cultivo debe ser cambiado y reemplazado con medio nuevo
complementado con la droga. La selección se produce dentro de las primera a las tercera
semana posterior a la transfección con cambios frecuentes del medio de cultivo
selectivo. Finalmente la integridad y número de copias del gen debe ser determinado por
Southern Blot.
Transfección transitoria
La transfección transitoria de genes está sujeta a varios parámetros. El método de
transfección, la fisiología celular, el método enzimático o colorimétrico utilizado para
cuantificar la actividad del gen reportero, la cantidad de DNA y la normalización de la
data. El período de expresión del gen en una transfección génica que varía entre 24 a 72
horas y para el éxito del procedimiento son críticas las condiciones celulares, con las
células saludables y las que se encuentren en división las más susceptibles a aceptar
plásmidos recombinantes. Para determinar la eficiencia y reproducibilidad de la
transfección se puede utilizar un segundo gen reportero que exprese un producto génico
que pueda ser detectado y medido de manera sencilla. Tal gen reportero no debe estar
presente en el genoma del tipo celular o, en el peor de los casos, puede estar presente
pero debe ser expresado en bajos niveles. Es importante recalcar que la eficiencia en la
expresión del gen reportero disminuye drásticamente con la integridad del plásmido y
su habilidad por llegar al núcleo. Los métodos de transfección transitoria generalmente
dirigen el DNA plasmático al citoplasma y no está claro qué porcentaje de estas
moléculas son lineales o circulares los alcanzan el núcleo celular. Además, los
parámetros experimentales deben ser definidos con cuidado para lograr cierto grado de
reproducibilidad. Se ha sugerido que entre los diferentes mecanismos, la difusión pasiva
de los plásmidos a través del citoplasma y los poros nucleares representa la forma más
probable por la cual los genes reporteros pueden migrar al núcleo celular y ser activados
transcripcionalmente. Sin embargo, existe evidencia que sugiere otro mecanismo para
explicar la transferencia del DNA plasmático al núcleo celular, basándose en señales de
importación del DNA. Se piensa que existe una interacción proteína-DNA plasmático
en el citoplasma y que tales interacciones, con factores de transcripción producen
señales de localización nuclear, permitiendo la importación de DNA exógeno al núcleo.
Interés biológico de la Transfección
Mecanismos
Competencia Natural
Algunas bacterias son capaces de incorporar ADN de manera natural bajo condiciones
de laboratorio; y muchas más pueden ser capaces de hacerlo en sus ambientes
naturales. Estas especies traen un conjunto de maquinaria genética específica para
llevar el ADN a través de la membrana o membranas.
Competencia artificial
Transformación de plásmido
Para ser mantenido de manera estable por la célula, el ADN plasmidial debe contener
un origen de replicación, que permitirá la replicación en la célula, independientemente
del cromosoma. Debido a que la transformación usualmente produce una mezcla de
inusuales transformaciones y abundantes células no-transformadas, se necesita de un
método para identificar las células que han adquirido el plásmido. Los plásmidos
utilizados en este tipo de experimentos, contienen usualmente un gen que les otorgue
resistencia a un antibiótico. La cepa bacteriana a transformar, debe ser sensible a éste.
Las células capaces de crecer en un medio de cultivo con este antibiótico, serán las que
han sido transformadas por el plásmido, y las células que no puedan crecer carecerán de
éste.
CONJUGACION
Se define conjugación como el proceso mediante el cual una bacteria transfiere ADN a
otra bacteria de manera directa, es decir, sin ningún tipo de intermediario (virus). Ese
ADN puede proceder de un plásmido (ADN extracromosómico) o del cromosoma
bacteriano, ya sea total o parcialmente. En este proceso hay una bacteria donadora y otra
receptora.
Características
Se produce cuando dos bacterias tienen contacto entre ellas para intercambiar
material genético.
Así se transmiten plásmidos, y otros elementos.
Durante la conjugación las bacterias donadoras poseen una estructura, conocida
como '' pili'' en gram negativos, lo cual hace contacto con la célula receptora.
Pasa una cadena de los plásmidos a la bacteria receptora quedando una en la
bacteria donadora.
Los plásmidos pueden adquirir genes de resistencia por conjugación (
transposones e integrones).
Proceso
1) Célula conjuntiva (F+), con su pelo sexual, y otra no conjuntiva (F-).
2) Contacto entre las dos células por medio del pelo sexual.
3) Contracción del pelo sexual y contacto célula - célula. Se forma un poro por
donde pasa el ADN simple cadena desde la célula donadora a la receptora.
4) Síntesis del ADN conjuntivo, continua en la célula donadora y discontinua en la
receptora.
5) Sellado de los poros y separación de las células. Cada una de ellas tiene el factor
F.
Importancia
La transferencia de resistencia múltiple a los antibióticos por conjugación ha llegado a
ser un problema relevante en el tratamiento de ciertas enfermedades bacterianas. Debido
a que la célula receptora se convierte en donadora después de la transferencia del
plásmido, es fácil ver por qué un gen de resistencia a los antibióticos que va en un
plásmido puede rápidamente convertir una población sensible de bacterias en una
resistente.
REACTIVOS.
Características de la TRANSDUCCIÓN:
a) Se da por medio de un virus: bacteriófagos o fagos.
b) Penetran las membranas y la pared celular de la bacteria para inyectarle su material
genético.
c) Durante la replicación del fago, éste puede llevarse material genético de la bacteria
huésped.
d) Este tipo de lesión es la más recurrente o frecuente.
e) Consiste en la pérdida de grupos amino.
Opciones:
1) a,b
2) a,b,c
3) a,c,d
4) a,b,c,d
5) b,c,d,e
Características de la Transposición:
a) Es el fenómeno por el cual un elemento de DNA cambia de ubicación física en el
cromosoma sin aprovechar ningún tipo de homología de secuencia.
b) El transposón modifica el ADN de sus inmediaciones, ya sea arrastrando un gen
codificador de un cromosoma a otro, rompiéndolo por la mitad o haciendo que
desaparezca del todo.
c) A diferencia de los provirus, los transposones se integran en el ADN celular en lugares
bien determinados.
d) Consiste en la introducción de material genético externo en células eucariotas mediante
plásmidos, vectores víricos u otras herramientas para la transferencia.
e) Transfección realizada por medio de virus, o que éstos realizan de forma natural sobre
distintas células.
1) A,e
2) A,b,c
3) A,b,d,e
4) B,c,d,e
5) A,b,c,d,e
Características de la Transafección:
a) Frecuentemente se usa sólo para referirse a la introducción de material genético en
células animales.
b) En células animales generalmente se lleva a cabo abriendo poros o "agujeros"
transitorios en la membrana plasmática de las células mediante electroporación.
c) Permite el paso del material genético (como construcciones de DNA superenrollado)
aunque pueden ser transfectadas incluso proteínas (como anticuerpos, por ejemplo).
d) Utiliza técnicas como liposomas producidos mediante la mezcla de lípidos catiónicos
con el material genético, que se fusionarán con la membrana plasmática celular y
depositarán su carga adentro.
e) Es el fenómeno por el cual un elemento de DNA cambia de ubicación física en el
cromosoma sin aprovechar ningún tipo de homología de secuencia.
1) A,e
2) A,b,c
3) A,c,e
4) A,b,c,d
5) A,b,c,d,e
Opciones
1) a,b,c,d
2) b,c,d,e
3) a,b,e
4) a,b,d,e
BIBLIOGRAFÍA:
https://prezi.com/ozzuwg6svkex/mecanismos-naturales-de-transferencia-genetica/
https://www.youtube.com/watch?v=HrVY8vTZz6M
https://es.wikipedia.org/wiki/Transducci%C3%B3n_(gen%C3%A9tica)
http://www.aulavirtual-
exactas.dyndns.org/MICROGRALF/document/Teorias/TEMA_02-
_ESTRUCTURA_Y_REPRODUCCI%D3N_DE_MICROORGANISMOS_CELU
LARES/BIBLIOGRAFIA/TRANSDUCCION.htm
https://es.slideshare.net/Coordinador_A22/virus-4medio-comn?from_action=save
http://biologochacaloso.blogspot.com/2012/06/unidad-9.html