1. Forma y dimensión.

(a) La tropomiosina, una proteína muscular de 70 kd, está formada

por un superhélices de hélices α con dos hebras. Calcular la longitud de la molécula. (b)
suponer que un segmento proteico de 40 residuos se pliega en una estructura β
antiparalela de dos hebras con un giro en horquilla de 4 residuos. ¿Cuál es la longitud
máxima de este motivo?
2. Contraste entre isómeros. La poli-L- leucina es hélice α en un disolvente orgánico como el
dioxano, mientras que la poli L-isoleucina no lo es. ¡Por que estos aminoácidos con el
mismo número y tipo de átomos tienen diferentes tendencias para formar hélices?
3. De nuevo activo. Una mutación que cambia sin residuo de alanina por valina en el interior
de una proteina produce perdida de actividad. Sin embargo, la actividad se recupera
cuando una segunda mutación en una posición diferente cambia un residuo de isoleucina
por glicina. ¿Cómo podría esta segunda mutación conducir a un restablecimiento de la
actividad?
4. Ensayo desconcertante. Se ha aislado un enzima llamado proteina disulfuro isomerasa
(PDI) que cataliza las reacciones de intercambio disulfuro-sulfhidrilo. El PDI convierte
rápidamente la ribonucleasa revuelta en ribonucleasa enzimáticamente activa. Por otra
parte, la insulina se inactiva rápidamente por PDI. ¡Que implica esta importante
observación en la relacion entre la secuencia de aminoácidos de la insulina y su estructura
tridimensional?
5. Extender una diana. Una proteasa es una enzima que cataliza la hidrolisis de los enlaces
peptídicos de las proteinas diana. ¿Cómo puede la proteasa unirse a la proteína diana de
modo que la cadena principalmente del péptido se extienda completamente en la cercanía
del enlace peptídico vulnerable?
6. A menudo irremplazable. La glicina es un residuo de aminoácido muy conservado en la
evolución de las proteinas ¿Por qué?
7. Socios potenciales. Identificar los grupos de una proteina que pueden formar puentes de
hidrogeno y enlaces electrostático con una cadena lateral de arginina a pH 7.
8. Ondulación permanente. La forma del pelo está determinada en parte por el patrón de
puentes disulfuro de la queratina, su proteína principal. ¿Cómo se pueden crear rizos?
9. La ubicación lo es todo. Las proteinas que atraviesan las membranas biológicas contienen
a menudo hélices α. Habida cuenta que el interior de las membranas es muy hidrofóbico,
predecir qué tipo de aminoácidos habría en esas hélices. ¿Por qué una hélice α es
especialmente adecuada para encontrarse en el entorno hidrofóbico del interior de una
membrana?
10. Rasgos de estabilidad. Las proteínas son muy estables. LA vida media de un enlace
peptídico en disolución acuosa es casi 1 000 años. Sin embargo, la energía libre de la
hidrolisis de las proteínas es negativa y muy grande. ¿Cómo se puede justificar la
estabilidad del enlace peptídico teniendo en cuenta el hecho de que la hidrolisis libera una
gran cantidad de energía?
11. Especies menores. Es un aminoácido como la alanina, la forma principal a pH 7 en
disolución es la zwitteriónica. Suponiendo un valor de pKa de 8 para el grupo amino y un
valor de pKa de 3 para el ácido carboxílico, calcular la proporción entre la concentración de
 la forma neutra del aminoácido (con el ácido carboxílico protonado y el grupo amino
neutro) y la forma zwitteriónica a pH 7.
12. Cuestión de convención. Todos los L-aminoácidos tienen una configuración absoluta S,
excepto la L-cisteína que tienen una configuración R. Explicar por qué se considera que la
L-cisteína tienen una configuración absoluta R.
13. Mensaje oculto. Traducir la siguiente secuencia de aminoácidos en código de una letra:
Glu-Leu-Val-Ile-Ser-Ile-Ser-Leu-Ile-Val-Ile-Asn-Gly-Ile-Asn-Leu-Ala-Ser-Val-Glu-Gly-Ala-Ser.
14. ¿Quién va primero? ¿Se esperaría que los enlaces peptídicos Pro-X tendieran a adoptar
una configuración cis Como los enlaces X-Pro? ¿Por qué si o por qué no?
15. Emparejamiento. Para cada uno de los derivados de aminoácidos mostrados abajo (A-E)
encontrar su correspondiente seria de valores 𝜙 y 𝜓 (a-c).

16. ¿Cuál es el enlace que puede formarse entre dos cisteínas en proteinas secretadas? ¿Por
qué este enlace no forma ordinariamente parte de proteínas intracelulares? ¿Cómo difiere
esta interacción de las interacciones que pueden ocurrir entre las cadenas laterales de
otros aminoácidos?
17. Una mutación que ocurre en DNA puede causar una sustitución en la codificación de la
proteina. Las sustituciones de aminoácidos son descritas como conservativas cuando el
aminoácido en la proteina mutada tiene propiedades química similares al aminoácido
que fue reemplazado. ¿Cuál de los siguientes aminoácidos es en reemplazo conservativo
para el aminoácido tirosina?
A) B) C) D)

18. La formacion de un enlace peptídico es un ejemplo de reacción de condensación. Explica

lo que significa esta afirmación y por qué la formacion de enlace peptídico es también una
reacción de deshidratación.
19. Describe como una cadena β difiere de un β sándwich.
20. Las proteinas de unión a oxigeno hemoglobina y mioglobina difieren en que la
hemoglobina funciona como un tetrámero en eritrocitos, mientras que la mioglobina es un
monómero en células musculares. La estructura globular de la mioglobina y cada
monómero de hemoglobina involucra ocho segmentos α hélice. ¿Es la estructura primaria,
secundaria, terciaria o cuaternaria lo que más difiere entre estas dos proteinas?
21. Para los siguientes aminoácidos, sugiere si es más probable encontrarlos en el encerrados
o expuestos en un plegamiento estable de un dominio proteico.
a. Fenilalanina
b. Arginina
c. Glutamina
d. Metionina
22. Tú tratas una proteina con urea (desnaturalizante). Para cada interacción o enlace abajo,
afirma si la interacción o enlace es roto por el tratamiento con urea.
a. Enlace iónico
b. Puentes de hidrógeno
c. Enlace disulfuro
d. Enlace peptídico
e. Interacciones de van der Waals
23. Describe la importancia de las argininas y lisinas en la interacción entre Gcn4 y DNA.
24. Predice el efecto de sustitución de uno o más de las cisteínas o histidinas conservadas en
un dedo de zinc Cys2His2 con alanina.
25. Describe la característica inusual de la interacción de LEF-1 con DNA.
26. ¿Cómo realzan las enzimas el índice de una reacción?
27. Considera un ligando que es estructuralmente similar al sustrato de una enzima y que une
débilmente en el sitio activo, excluyendo al sustrato normal. ¿Cuál es la diferencia entre
tal “inhibidor competitivo” y un inhibidor alostérico?
28. Una factor de traducción, llamado Tif3 o eIRF4B, en células de levadura tiene la siguiente
secuencia de elementos en su cadena polipeptídica
a. Un dominio amino terminal conteniendo motivo de reconocimiento de RNA (RRM)
b. Un segmento central con siete secuencias repetidas plegadas ricas en aminoácidos
básicos y ácidos.
c. Una región carboxi-terminal sin evidente homología con motivos o dominios.

A. Describe la significancia de RRMs

La modularidad de la proteina sugirió la siguiente serie de experimentos, para analizar los

roles de sus diferentes partes. Células con una deleción del gen TIF3 no crecen a 37 °C,
pero crecen normalmente a 30°C. Por adición un gen que codifica un fragmento de la
proteína, este es posible por un ensayo por complementación-la capacidad que confiere
el fragmento al tipo silvestre creciendo a 37°C. Los resultados de tales experimentos son
mostrados en la tabla de abajo, en las cuales ++, +, y – indican el grado de
crecimiento/complementación.
Tif3 Crecimiento a 37 °C
Longitud máxima ++
RRM + primeras tres repeticiones ++
RRM + primera repetición -
Todas las siente repeticiones + segmento carboxiterminal +

B. De estos datos, ¿Cuál región de la proteína es requerida para el crecimiento del tipo
silvestre a 37 °C?

Un adicional grupo de experimentos involucran un ensayo de traducción in vitro, usando un

extracto de una cepa que carece del gen TIF3. LA reacción fue iniciada por adición de la
proteina Tif3 purificada o una forma truncada de esta. Los resultados están mostrados en la
tabla de abajo, el cual muestra el porcentaje de la traducción in vitro en relativa a la reacción
con la máxima longitud de Tif3

Tif3 Actividad traductora (%)

Longitud máxima 100
RRM + primeras tres repeticiones 43
RRM + primera repetición 0
Todas las siente repeticiones + segmento 0
carboxiterminal

C. ¿Cómo es que estos resultados comparados con los resultados de complementación

de la parte B? ¡modifican tu conclusión de los experimentos genéticos?
29. Reactivos valiosos. Los siguientes reactivos se utilizan habitualmente en química de
proteínas:
 CNBr
 Urea
 Mercaptoetanol
 Tripsina
 Ácido perfórmico
 HCl 6 N
 Ninhidrina
 Feniltiocianato
 Quimotripsina

¿Cuál es el más adecuado para cumplir con cada una de las siguientes funciones?

a) Determinación de la secuencia de aminoácidos de un péptido pequeño

b) Desnaturalización reversible de una proteína desprovista de puentes de disulfuro.
¿Qué reactivo adicional se necesitaría si hubiese puentes disulfuro?
c) Hidrolisis de enlaces peptídicos en el extremo carboxílico de residuos aromáticos.
d) Ruptura de enlaces peptídicos en el extremo carboxílico de la metionina.
 e) Hidrolisis de enlaces peptídicos en el extremo carboxílico de residuos de arginina
y lisina.

30. En busca de un extremo. La hidracina anhidra (H2N-NH2) se ha utilizado para romper los
enlaces peptídicos en las proteinas. ¿Cuáles son los productos de la reacción? ¿Cómo
podría utilizarse esta técnica para identificar el aminoácido carboxilo terminal?

31. Un nuevo sitio de ruptura. La etilenimina reacciona con las cadenas laterales de cisteína en
las proteinas para formar S-aminoetil derivados. Los enlaces peptídicos del extremo
carboxilo de estas cisteínas modificadas son susceptibles de hidrolisis por tripsina. ¿Por
qué?

32. Espectrometría. La absorbancia A de una disolución se defina como:

A= log10 (I0/I)

Donde I0 es la intensidad de la luz incidente e I la intensidad de la luz transmitida. La

absorbancia está relacionada con el coeficiente de absorción molar (coeficiente de
extinción) ε (en M-1 cm-1), la concentración c (en M) y el paso óptico l (en cm) por la
expresión

A= εlc

El coeficiente de absorción de la mioglobina a 580 nm es 15 000 M -1 cm-1. ¿Cuál es la

absorbancia de una disolución de 1 mg/ml con un paso de 1 cm? ¿Qué porcentaje de la luz
incidente se transmitirá en esta disolución?

33. Movimiento lento. La tropomiosina, una proteína, una proteína muscular de 70 kd,
sedimenta más lentamente que la hemoglobina (65 kd). Sus coeficientes de
sedimentación respectivos son 2.6S y 4.31S. ¿Cuál es la característica estructural
responsable de la lentitud de la tropomiosina en la sedimentación?
34. Esferas que sedimentan. ¿Cuál es la dependencia entre el coeficiente de sedimentación S
de una proteína de 80 kd que una de 40 kd?
35. Determinación del tamaño. Las movilidades electroforéticas relativas de una proteína de
30 kd y una de 92 kd utilizadas como estándar en un gel de SDS-poliacrilamida son
respectivamente 0.80 y 0.41. ¿Cuál es la masa aparente de una proteína que tiene una
movilidad de 0.62 en este gel?
36. ¿una asociación nueva? El gen que codifica una proteína que tiene un único puente
disulfuro experimenta una mutación que sustituye un residuo de serina por uno de
cisteína. Se quiere comprobar si el apareamiento de sulfhidrilos en este mutante es el
mismo que en la proteína original. Proponer un experimento que resuelva esta cuestión.
37. Clasificación de células. La clasificación de células activada por fluorescencia (FACS) es una
técnica eficaz para separar células de acuerdo con su contenido en moléculas
determinadas. Por ejemplo un anticuerpo específico marcado fluorescentemente para una
 proteína de la superficie celular se puede utilizar para detectar células que contengan
dicha molécula. Supongamos que se quiere aislar células que poseen un receptor que les
permite detectar productos de degradación bacteriana. Sin embargo no se dispone
todavía de un anticuerpo contra este receptor. ¿Qué molécula marcada fluorescente
prepararíamos para identificar estas células?
38. Escoger la columna. (a) El octapéptido AVGWRVKS se digirió con tripsina. ¿Sería el
intercambio iónico o la exclusión molecular la técnica más apropiada para separar estos
productos? Explicarlo. (b) supongamos que el péptido se digiere con Quimotripsina. ¿Cuál
sería la técnica de separación optima? Explicarlo.
39. ¿Sintetizar más enzima? Durante la purificación de una enzima un investigador realiza un
paso de purificación que produce un incremento en la actividad total dando un valor
mayor que el que está presente en el extracto crudo. Explicar cómo se puede incrementar
la cantidad de actividad total.
40. Divide y vencerás. La determinación de la masa de una proteína por espectrometría de
masas no permite a menudo se identificación completa entre todas las proteinas posibles
de un proteína completo, pero la determinación de las masas de todos los fragmentos que
se produce tras digestión con tripsina casi siempre nos conduce a una identificación única.
Explica.

41. Problema de purificación de proteinas. Completa la tabla.

Procedimiento Proteína Actividad total Actividad Nivel de Rendimie

de purificación total (mg) (unidades) especifica purificación nto (%)
(unidades mg-1)

Extracto crudo 20 000 4 000 000 1 100

Precipitación con
5 000 3 000 000
(NH3)2SO4

Cromatografía 1 500 1 000 000

DEAE-celulosa

Cromatografía
500 750 000
de exclusión
molecular

Cromatografía 45 675 000

de afinidad.

42. Estructura cuaternaria. Una proteína se purifico hasta homogeneidad. La determinación

del peso molecular por cromatografía en presencia de urea 6 M da un valor de 30 kd.
 Cuando se repite la cromatografía en presencia de urea 6 M y β-mercaptoetanol 10 mM,
aparece una especie molecular única de 15 kd. Describir la estructura de la molécula.
43. Transiciones hélice-ovillo.(a) Las medidas de NMR han demostrado han mostrado que la
poli-L-lisina es un ovillo estadístico a pH 7, pero se transforma en hélice α cuando el pH se
eleva por encima de 10. Explicar esta transición conformacional dependiente del pH. (b)
Predecir la dependencia del pH en la transición hélice-ovillo del poli-L-glutamato.
44. Péptidos en un chip. Se pueden sintetizar un gran número de péptidos diferentes en una
pequeña área sobre un soporto sólido. Este ordenamiento de alta densidad se puede
ensayar con una proteína marcada fluorescente para averiguar que péptidos se
reconocen. En la figura se muestra la unión de un anticuerpo a un ordenamiento de 1 024
péptidos diferentes que ocupan una superficie similar a la de una uña. ¿Cómo
sintetizaríamos tal ordenamiento peptídico? (Sugerencia: utilizar luz en vez de ácido para
desproteger el grupo amino terminal en cada ciclo de síntesis.)

45. Secuenciación de proteinas I. Determinar la secuencia de un hexapéptido en base a los

siguientes datos. Nota: cuando no se conoce la secuencia, los aminoácidos se separan con
una coma.
a. Composición de aminoácidos: (2R, A, S, V, Y)
b. Análisis N-terminal del hexapéptido: A
c. Digestión por tripsina: (R, A, V) y (R, S, Y)
d. Digestión por carboxipeptidasa: No hay digestión
e. Digestión por quimotripsina: (A, R, V, Y) y (R, S)
f. Digestión por quimotripsina: (A, R, V, Y) y (R, S)

46. Secuenciación de proteinas II. Determinar la secuencia de un péptido de 14 aminoácidos

en base a los siguientes datos.
a. Composición de aminoácidos (4S, 2L, F, G, I, K, M, T, W, Y)
b. Análisis N-terminal: S
c. Digestión por carboxipeptidasa: L
d. Digestión por tripsina: (3S, 2L, F, I, M, T, W) (G, K, S, Y)
e. Digestión por quimotripsina; (F, I,S); S
f. Tratamiento con bromuro de cianógeno: (2S, F, G, I, K, L, M*, T, Y)(2S, L,W)
M*, metionina detectada como homoserina.
47. Degradación de Edman. La amida de alanina se trató con fenilisotiocianato para formar
PTH-alanina. Escribir un mecanismo para esta reacción.
48. La hormona peptídica estimulante de los melanocitos, α-melatropina, tiene la siguiente
secuencia.

Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Gly-Lys- Pro- Val.

a. Escribir la secuencia utilizando las abreviaturas de una letra.

b. Calcular el peso molecular de la α-melatropina. ¿Por qué este resultado no es
exactamente correcto a pH neutro?
49. (a) Esbozar la curva de titulación que sería de prever para la α-melatropina.
(b) ¿Qué carga sería de esperar aproximadamente a valores de pH de 11, 5 y 1?
(c) Calcular el punto isoeléctrico de la α-melatropina.

50. ¿Qué péptidos cabe prever que se produzcan cuando la α-melatropina se fragmenta por la
a. Tripsina
b. CNBr
c. Termolisina
51. Existe otra hormona estimulante de los melanocitos denominada β-melatropina. La
fragmentación de la β-melatropina con tripsina produce los siguientes péptidos y acido
aspártico libre.
WGSPPK DSGPYK MEHFR
Si se supone una homología de secuencia máxima entre la α-melatropina y la β-
melatropina, ¿Cuál debe ser la secuencia de esta última?

52. Dado el péptido siguiente:

Ser-Glu-Pro-Ile-Met-Ala-Pro-Val-Glu-Tyr-Pro-Lys

a) Calcular la carga neta a pH7 y a pH 12

b) ¿Cuántos péptidos se producirían si este péptido se tratase con:
i. CNBr
ii. Tripsina
iii. Quimotripsina
c) Sugerir un método para separar los péptidos producidos por el tratamiento con
tripsina.
53. Una forma mutante de la hormona polipeptídica angiotensina II tiene la composición de
aminoácidos siguiente
(Asp, Arg, Ile, Met, Phe, Pro, Tyr, Val)

Se realizan las siguientes observaciones:

 La tripsina produce un dipéptido que contiene Asp y Arg, y un hexapéptido que
contiene todo el resto.
  La fragmentación con bromuro de cianógeno produce un dipéptido que contiene
Phe y Pro, y un hexapéptido que contiene todos los demás.
 La quimotripsina fragmenta la hormona en dos tetrapéptidos con la siguiente
composición.
(Asp, Arg, Tyr, Val) y (Ile, Met, Phe, Pro)
 El dipéptido de composición (Pro, Phe) no puede fragmentarse por la
quimotripsina ni por la carboxipeptidasa.

¿Cuál es la secuencia?

54. Se ha secuenciado una proteina tras la destrucción de los enlaces -S-S-. Se sabe que
contienen 3 residuos de Cys, situados del modo que se muestra a continuación Sin
embargo solo uno de ellos es un -SH libre; dos de ellos forman parte de un enlace S-S.

La única metionina y el único aminoácido aromático (Phe) de esta proteína se encuentran

en las posiciones indicadas. La fragmentación de la proteína intacta (con el puente S-S
intacto) con bromuro de cianógeno o quimotripsina no divide la proteína en dos péptidos.
¿Dónde está el puente -S-S- (AB,BC o AC)?

55. La apamina es una pequeña toxina proteica presente en el veneno de las abejas. Su
secuencia es la siguiente

CNCKAPETALCARRCQQH

a. Se sabe que la apamina no reacciona con yodoacetato. ¿Cuántos enlaces disulfuro

están presentes?
b. Suponga que la fragmentación con tripsina produce dos péptidos. ¿Dónde está (o
están) el enlace o los enlaces S-S?

56. La poliglicina, un polipéptido simple, puede formar una hélice con 𝜙 = -80°, 𝜓 = +150°. A
partir de la representación de Ramachandran, describa esta hélice en cuanto a
 (a) su lateralidad
(b) su número de residuos por vuelta.

57. Algunas secuencias polipeptídicas que muestran una tendencia pronunciada a dimerizar
en una estructura de ovillo enrollado antiparalela presentan una repetición exacta de
leucina cada 7 residuos. Si también se sabe que la hélice α está ligeramente distorsionada
respecto a sus habituales 3.6 residuos/vuelta en los ovillos enrollados, proponga un
mecanismo para la dimerización. ¿Qué valor sugiere que podría tener la cifra de residuos/
vuelta en un ovillo enrollado?

58. Se presenta a continuación una estructura esquemática de la subunidad de la hemeritrina

(una proteína que une oxígeno presente en los animales invertebrados).

(a) Se ha observado que en algunas de las áreas de hélice α de la hemeritrina,

aproximadamente cada tres o cuatro residuos de aminoácido hay uno hidrófobo. Sugiera
un motivo estructural para esta observación.
(b) ¿Cuál sería el efecto de una mutación que colocase un residuo de prolina en el punto A
de la estructura?
(c) Esbozar un mecanismo razonable (esto es, una serie de pasos) para el plegado de la
hemeritrina desde un ovillo aleatorio hasta la estructura que se presenta.
59. En la proteína adenilato quinasa, la región C-terminal es una hélice α con la secuencia

Val–Asp–Asp–Val–Phe–Ser–Gln–Val–Cys–Thr–His–Leu–Asp–Thr–Leu–Lys–

Los residuos hidrófobos de esta secuencia se presentan en negrita. Sugerir un posible

motivo para la periodicidad de su espaciamiento.

60. A pesar de que la energía de enlace para el enlace de hidrógeno en el vacío es de

aproximadamente 20 kJ/mol, observamos que cada uno de los enlaces de hidrógeno de
una proteína plegada contribuye mucho menos, probablemente menos de 5 kJ/mol, a la
entalpía de estabilización de la proteína. Sugiera una explicación de esta diferencia.
61. Considere una pequeña proteína que contiene 101 residuos de aminoácidos. La proteína
tendrá unos 200 enlaces alrededor de los cuales puede producirse rotación. Suponga que
son posibles tres orientaciones alrededor de cada uno de estos enlaces.
a. Sobre la base de estos supuestos, ¿aproximadamente cuántas conformaciones de
ovillo aleatorio serán posibles para esta proteína?
b. El cálculo obtenido en (a) seguramente es demasiado grande. Dé una razón que lo
explique.
62. (a) Basándose en una respuesta más conservadora al problema anterior (2.7 X 1092
conformaciones), calcule el cambio de entropía conformacional del plegado de un mol de
esta proteína para dar una estructura con una sola conformación.
(b) Si la proteína se pliega por completo formando una hélice a con enlaces de H como
único origen de entalpía de estabilización, y cada mol de enlaces de H contribuye con -5
kJ/mol a la entalpía, calcule el ΔHplegado. Obsérvese que no se pueden formar 4 enlaces de
H en un extremo.
(c) A partir de sus respuestas a las preguntas (a) y (b), calcule el ΔGplegado para esta proteína
a 25°C. ¿Es estable la forma plegada de la proteína a 25°C?
63. La secuencia siguiente es parte de una proteína globular. Utilizando las reglas de Chou-
Fasman, predecir la estructura secundaria de esta región.

RRPVVLMAACLRPVVFITYGDGGTYYHWYH

64. (a) Se comprueba que una proteína es un tetrámero de subunidades idénticas. Indique dos
simetrías posibles para una molécula de este tipo. ¿Qué clases de interacciones (isólogas o
heterólogas) estabilizarían a cada una de ellas?
(b) Suponga que un tetrámero, como la hemoglobina, está formado por dos pares de dos
tipos de cadenas, a y b. ¿Cuál es en este caso la simetría más elevada posible?
65. En condiciones fisiológicas, la proteína hemeritrina existe como un octámero de ocho
cadenas del tipo que aparece en el problema 58.
(a) Indique dos simetrías posibles para esta molécula.
(b) ¿Cuál cree que es la más probable? Explíquelo.
(c) Para la simetría más probable, ¿qué tipo de interacciones (isólogas, heterólogas o
ambas) esperaría? ¿Por qué?
66. Un investigador estudia la desnaturalización térmica de la hemeritrina mediante dos
métodos:
(1) utilizando dicroísmo circular, que mide el contenido de hélice a
(2) utilizando calorimetría de barrido diferencial
Observa un ΔH considerablemente mayor por calorimetría del que registra con dicroísmo
circular. Sugiera un motivo para esta diferencia.
67. La hormona peptídica vasopresina se utiliza en la regulación del equilibrio hidrosalino en
muchos vertebrados. La vasopresina porcina (de cerdo) tiene la siguiente secuencia:
Asp–Tyr–Phe–Glu–Asn–Cys–Pro–Lys–Gly
(a) Utilizando los datos de la Figura 5.6 y la Tabla 5.1, calcule el coeficiente de extinción e
(en unidades de cm2/mg) para la vasopresina, utilizando radiación con l = 280 nm.
 (b) Una disolución de vasopresina se coloca en una cubeta de 0.5 cm de grosor. Se observa
que su absorbancia a 280 nm es de 1.3. ¿Cuál es la concentración de vasopresina, en
mg/cm3?
(c) ¿Qué fracción de luz incidente pasa a través de la cubeta en (b)?

68. Una proteína, en condiciones de composición de amortiguador, pH y temperatura

próximas a las condiciones fisiológicas, presenta un peso molecular, mediante medidas de
equilibrio de sedimentación, de 140 000 g/mol. Cuando la misma proteína se estudia por
electroforesis en gel con SDS en ausencia o presencia del agente reductor β-
mercaptoetanol (BME), se observan los patrones de las calles A y B respectivamente. La
calle C contiene estándares del peso molecular indicado. A partir de estos datos, describa
la proteína nativa, en lo relativo a tipos de subunidades presentes, estequiometría de las
subunidades y tipos de enlace (covalente, no covalente) que existen entre las
subunidades.
69. En una ultracentrífuga analítica se han obtenido los siguientes datos para la 𝛾-globulina
humana a 20°C:
S = 7.12 X 10-13 s
𝑣 = 0.718 mL/g
D = 4.00 X 10-7 cm2 s-1
𝜌 = 1.00 g/cm3
¿Cuál es el peso molecular de la 𝛾-globulina? Obsérvese que la constante de los gases R,
en unidades CGS, es 8.314 X 107 erg/K·mol.
70. Una proteína da una única banda en la electroforesis con SDS, como se observa en las
calles 1 y 2 más abajo. Existe poco efecto, si es que lo hay, con la adición de β-
mercaptoetanol (BME) en el gel; si hay algo, la proteína corre un poquito más lenta.
Cuando se trata con la enzima proteolítica trombina y se somete a electroforesis en
ausencia de BME, la proteína migra un poco más rápidamente (calle 3), mientras que
cuando está presente el BME, se encuentran dos bandas que migran mucho más
rápidamente (calle 4). Explicar estos resultados en términos de un modelo para la
proteína.

71. Se ha postulado que la forma normal (no infecciosa) del prión se diferencia de la forma
infecciosa únicamente en la estructura secundaria/terciaria.
(a) ¿Cómo podría demostrar que se producen cambios de la estructura secundaria?
(b) ¿Cómo podría comprobar los cambios de la estructura cuaternaria?
(c) Si este modelo es correcto, ¿qué implicaciones tiene sobre los esquemas predictivos
como los de Chou y Fasman?

72. Configuración absoluta de la citrulina. La citrulina aislada de la sandía tiene la estructura

que se muestra a continuación. ¿Es un aminoácido D o L? Explique por qué.
73. Relacion entre la curva de titulación las propiedades ácido-base de la glicina. Una
disolución de 100 ml de glicina 0.1 M a pH 1.72 se tituló con una disolución de NaOH 2 M.
Se registró el pH y los resultados se representaron como se muestra en la siguiente
gráfica. Los puntos clave de la titulación se señalan como I a V. Para cada una de las
afirmaciones siguientes, (a) a (o) identifique el punto clave adecuado de la titulación y
justifique su elección.
a. La glicina está presente predominantemente en la forma +H3N-CH2-COOH.
b. La carga neta media de la glicina es +1/2.
c. La mitad de los grupos amino están ionizados.
d. El pH es igual al pKa del grupo carboxilo.
e. El pH es igual al pKa del grupo amino protonado.
f. La glicina tiene su máxima capacidad tamponante.
g. La carga neta media de la glicina es igual a cero.
h. El grupo carboxilo ha sido completamente titulado (primer punto de equivalencia).
i. La glicina está totalmente titulada (segundo punto de equivalencia)
j. La especie predominante es +H3N-CH2-COO-
k. La carga neta media de la glicina es -1.
l. La glicina está presente predominantemente como una mezcla 50:50 de +H3N-CH2-
COOH y +H3N-CH2-COO-
m. Corresponde al punto isoeléctrico
n. Corresponde al final de la titulación
o. Representa la peores regiones de pH en cuanto al poder tamponante.
74. ¿Cuánta alanina está presente como especie completamente si carga? A un pH igual a su
punto isoeléctrico, la carga neta de la alanina es cero. Se puede dibujar dos estructuras
con carga neta de cero, pero la forma predominante de la alanina a su pI es zwitteriónica.

a. ¿Por qué la alanina es predominante zwitteriónica y no está completamente

descargada en su pI?
b. ¿Qué fracción de alanina está presente en su pI como forma completamente
descargada? Justifique sus respuestas.
75. Estado de ionización de la histidina. Cada grupo ionizable de un aminoácido puede existir
en uno de dos estados posibles, cargado o neutro. La carga eléctrica del grupo funcional
viene determinada por la relacion entre su pKa y el pH de la solución. Esta relacion viene
descrita por la ecuación de Henderson-Hasselbalch.
a. La histidina tiene tres grupos funcionales ionizables. Escriba las ecuaciones de
equilibrio para sus tres ionizaciones y asigne el pKa adecuado para cada
ionización. Dibuje las estructuras de la histidina en cada estado de ionización.
¿Cuál es la carga neta de la molécula de histidina en cada estado de ionización?
b. Dibuje las estructuras de los estados de ionización de la histidina predominantes a
pH 1, 4, 8 y12. Observe que el estado de ionización puede ser obtenido
aproximadamente tratando independientemente cada grupo ionizable.
c. ¿Cuál es la carga neta de la histidina a pH 1, 4, 8 y 12? Cuando se coloca en un
campo eléctrico a cada uno de estos valores de pH, ¿Se desplazará la histidina
hacia el ánodo (+) o hacia el cátodo (-)?
76. Separación de aminoácidos por cromatografía de intercambio iónico. El análisis de mezclas
de aminoácidos empieza separando la mezcla de sus componentes mediante
cromatografía de intercambio iónico. En una columna con resina de intercambio catiónico
que contienen grupos sulfonato (-SO3-) los aminoácidos fluyen a diferente velocidad
debido a dos factores que influyen en su movimiento: (1) la atracción iónica entre los
residuos sulfonato de la columna y grupos funcionales cargados positivamente en los
aminoácidos y (2) las interacciones hidrofóbicas entre las cadenas laterales de los
aminoácidos y el esqueleto fuertemente hidrófobo de la resina de poliestireno. Para cada
par de aminoácidos señalados, determine cual eluirá antes en una columna de
intercambio catiónico con un tampón a pH 7.0
a. Asp y Lys
b. Arg y Met
c. Glu y Val
 d. Gly y Leu
e. Ser y Ala
77. Nomenclatura de estereoisómeros de la isoleucina. La estructura del aminoácido
isoleucina es:

a. ¿Cuántos centros quirales tiene?

b. ¿Cuántos isómeros ópticos?
c. Dibuje fórmulas de perspectiva de todos los isómeros ópticos de la isoleucina.

78. Comparación de los valores de pKa de la alanina y polialanina. La curva de titulación de la

alanina muestra la ionización de dos grupos funcionales con valores de pKa de 2.34 y 9.69,
correspondientes a la ionización de los grupos carboxilo y aminoprotonado,
respectivamente. La titulación de di-, tri- y oligopeptidos mayores de la alanina también
muestra la ionización de solo grupos funcionales aunque los valores experimentales de
pKa son diferentes. La tendencia de los valores de pKa se resume en la tabla.

Aminoácido o péptido pK1 pK2

Ala 2.34 9.69
Ala-Ala 3.12 8.30
Ala-Ala-Ala 3.39 8.03
Ala-(Ala)n-Ala, n>3 3.42 7.94

a. Dibuje la estructura de Ala-Ala-Ala. Identifique los grupos funcionales asociados

con pK1 y pK2.
b. ¿Por qué aumenta el valor de pK1 a cada adición de un residuo Ala al oligopéptido
de Ala?
c. ¿Por qué disminuye el valor de pK2 a cada adición de un residuo Ala al
oligopéptido de Ala?
79. Tamaño de las proteinas. ¿Cuál es la masa molecular aproximada de una proteina de 682
residuos aminoácidos en una cadena polipeptídica?
80. Numero de residuos de triptófano en la albumina de suero bovino. Un análisis cuantitativo
de aminoácidos indica que la albumina de suero bovino (BSA) contiene =.58% en peso de
triptófano (Mr 204)
a. Calcule la masa molar mínima de BSA (es decir suponiendo que haya un solo
residuo de triptófano por molécula de proteína)
b. La filtración en gel de la BSA da una estimación de masa molecular de unos 70000.
¿Cuántos residuos de triptófano hay en una molécula de albumina de suero?
81. Composición de subunidades de una proteína. Una proteina tiene una masa molecular de
400 kD medida por filtración en gel. Si se analiza mediante electroforesis en presencia de
dodecil sulfato sódico (SDS), la proteina muestra tres bandas moleculares 180, 160 y 60
kD. Cuando la electroforesis se realiza en presencia de SDS y ditiotreitol se observan otras
tres bandas de masas moleculares 160, 90 y 60 kD. Determine la composición subunitaria
de la proteina.
82. Carga eléctrica neta de los péptidos. Un péptido tiene la secuencia
Glu-His-Ser-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly
a. ¿Cuál es la carga neta de la molécula a pH 3, 8 y 11? (utilice los valores de pK a para
las cadenas laterales y grupos amino y carboxilo terminales dados en la tabla de la
pregunta 67.
b. Estime el pI de este péptido.
83. Punto isoeléctrico de la pepsina. Se da el nombre de pepsina a varios enzimas digestivos
secretados (en forma de proteinas precursoras mayores) por las glándulas que recubren el
estómago. Estas glándulas secretan también ácido clorhídrico, que disuelve la materia en
forma de partículas de la comida, permitiendo que la pepsina corte enzimáticamente
moléculas individuales de proteina. La mezcla resultante de comida, HCl y enzimas
digestivos se denomina quimo y tiene un pH cercano a 1.5. ¿Qué pI predeciría para las
proteinas de tipo pepsina? ¿Qué grupos funcionales han de estar presentes para
proporcionar este pI a la pepsina? ¿Qué aminoácidos pueden aportar tales grupos a las
proteinas?
84. Punto isoeléctrico de las histonas. Las histonas son proteinas que se encuentran en el
núcleo de las células eucarióticas, fuertemente unidas al DNA, el cual tiene muchos grupos
fosfato. El pI de las histonas es muy elevado, alrededor de 10.8. ¿Qué aminoácidos deben
estar presentes en número relativamente elevado en las histonas? ¿en qué forma
contribuyen estos residuos a la fuerte unión entre las histonas y el DNA?
85. Solubilidad de los polipéptidos. Un método utilizado en la separación de polipéptidos se
basa en sus solubilidades diferenciales. La solubilidad en agua de los polipéptidos grandes
depende de la polaridad relativa de sus grupos R, especialmente del número de grupos
ionizados: cuantos más grupos ionizados haya más soluble será el polipéptido. De los
pares de polipéptidos siguientes, ¿Cuál es más soluble el pH indicado?
a. (Gly)20 o (Glu)20 a pH 7.0
b. (Lys-Ala)3 o (Phe-Met)3 a pH 7.0
c. (Ala –Ser-Gly)5 o (Asn-Ser-His)5 a pH 6.0
d. (Ala-Asp-Gly)5 o (Asn-Ser-His)5 a pH 3.0

86. Purificación de un enzima. Un bioquímico descubre y purifica un enzima nuevo generando

la siguiente tabla de purificación:
 Procedimiento Proteina total (mg) Actividad (unidades)
1.- Extracto crudo 20 000 4 000 000
2.- Precipitación (sal) 5 000 3 000 000
3. Precipitación (pH) 4 000 1 000 000
4.-Cromatografía de 200 800 000
intercambio iónico
5.- Cromatografía de 50 750 000
afinidad.
6.- Cromatografía de 45 675 000
exclusión molecular

a. A partir de la información dada en la tabla, calcule la actividad específica de la

solución enzimática después de cada procedimiento de purificación.
b. ¿Cuál de los procedimiento de purificación utilizados con este enzima es el más
efectivo (es decir, produce el máximo incremento relativo en pureza)?
c. ¿Cuál de los procedimientos de purificación es el menos efectivo?
d. ¿Hay alguna indicación basada en los resultados de esta tabla de que el enzima
tras el paso 6 sea ya puro? ¿Qué más se podría hacer para evaluar la pureza de la
preparación enzimática?
87. Diálisis. Una proteina purificada se encuentra en un tampón Hepes (N-(2hidroxietil)
piperazina-N´-(2 ácido etanosulfonico) a pH 7 con NaCl 500 mM. Una muestra (1 ml) de la
disolución de proteina se coloca en un tubo hecho con una membrana de diálisis y se
dializa frente a 1 L del mismo tampón Hepes con 0 mM de NaCl. Las moléculas e iones
pequeños (como Na+, Cl- y Hepes) pueden difundir a través de la membrana de diálisis,
pero la proteína no.
a. Al llegar la diálisis al equilibrio, ¿Cuál es la concentración de NaCl en la muestra de
proteina? Asuma que no se producen variaciones de volumen durante la diálisis.
b. Si la muestra original de 1 ml se dializara dos veces sucesivas frente a 100 ml del
mismo tampón Hepes con 0 mM de NaCl, ¿Cuál sería la concentración final de
NaCl en la muestra?
88. Purificación de péptidos. A pH 7.0 ¿Cuál sería el orden de elución de los tres péptidos
siguientes de una columna llena de polímero intercambiador de cationes? Sus
composiciones de aminoácidos son:
Proteína A: Ala 10%, Glu 5%, Ser 5%, Leu 10%, Arg 10%, His 5%, Ile 10%, Phe 5%,
Tyr 5%, Lys 10%, Gly 10%, Pro 5% y Trp 10%.
Proteína B: Ala 5 %, Val 5%, Gly 10%, Asp 5%, Leu 5%, Arg 5%, Ile 5%, Phe 5%, Tyr
5%, Lys 5%, Trp 5%, Ser 5%, Thr 5%, Glu 5%, Asn 5%, Pro 10%, Met 5% y Cys 5%
Proteina C: Ala 10%, Glu 10%, Gly 5%, Leu 5%, Asp 10%, Arg 5%, Met 5%, Cys 5%,
Tyr 5%, Phe 5%, His 5%, Val 5%, Pro 5%, Thr 5%, Ser 5%, Asn 5% y Gln %%.
89. Determinación de la secuencia del péptido cerebral leucina-encefalina. A partir de tejido
cerebral normal se ha aislado un grupo de péptidos que influyen sobre la transmisión
nerviosa en ciertas partes del cerebro. Estos péptidos se conocen como opioides debido a
 que se fijan a receptores que se unen también a drogas opiáceas, tales como la morfina o
la naloxona. De este modo los opioides imitan algunas de las propiedades de los opiáceos.
Algunos investigadores consideran que estos péptidos son los inhibidores del dolor
propios del cerebro.
Utilizando la información que se da a continuación, determine la secuencia de
aminoácidos del opioide leucina-encefalina. Explica por qué su estructura está de acuerdo
con los datos aportados.
a. La hidrolisis completa por HCl 6M a 110 °C seguida de análisis de aminoácidos
indica la presencia de Gly, leu, Phe y Tyr en una proporción molar 2:1:1:1.
b. El tratamiento del péptido con 1- fluoro-2,4- dinitrobenceno seguido por hidrolisis
completa y cromatografía indico la presencia del 2.4- dinitrofenil derivado de la
tirosina. No se encontró tirosina libre.
c. La digestión completa del péptido con quimotripsina seguido de cromatografía dio
lugar a tirosina y leucina libres, más un tripéptido que contenía Phe y Gly en una
proporción 1:2
90. Estructura de un antibiótico peptídico de Bacillus brevis. Los extractos de la bacteria
Bacillus brevis contienen un péptido con iones metálico y, aparentemente, interfiere en el
transporte iónico a través de las membranas celulares de otras especies bacterianas,
matándolas. La estructura de este péptido se ha determinado a partir de las siguientes
observaciones.
a. La hidrolisis completa del péptido enseguida de análisis de aminoácidos produce
cantidades equimolares de Leu, Orn, Phe, Pro y Val. Orn es ornitina, un
aminoácido que no se halla presente en las proteinas pero se encuentra en
algunos péptidos. Tiene la estructura.

b. La masa molecular del péptido se calculó en alrededor de 1,200

c. Cuando se trató con el enzima carboxipeptidasa el péptido no experimento
hidrolisis alguna. Este enzima cataliza la hidrolisis del residuo carboxilo terminal de
un polipéptido a menos que el residuo sea Pro o no contenga carboxilo libre por
alguna razón.
d. El tratamiento del péptido intacto con 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno, seguido de
hidrolisis completa y cromatografía, dio solo aminoácidos libres y el siguiente
derivado:
 Sugerencia: observe que el 2,4-dinitroferlil derivado implica el grupo amino de una
cadena lateral y no el grupo α-amino.)
e. La hidrolisis parcial del péptido seguida de separación cromatográfica y análisis de
secuencia dio lugar a los di y tripéptidos siguientes (el aminoácido amino-terminal
siempre se encuentra a la izquierda):

Dada la información anterior, deduzca la secuencia de aminoácidos del antibiótico

peptídico. Exponga sus razonamientos. Cuando haya llegado a una estructura,
demuestre que es coherente con cada una de las observaciones experimentales.
91. Eficiencia de la secuencia de péptidos. Un péptido con la estructura primaria Lys-Arg-Pro-
Leu-Ile-Asp-Gly-Ala se secuencia por el procedimiento de Edman. Si cada ciclo de Edman
tuviera una eficiencia del 96%, ¿Qué porcentaje de los aminoácidos liberados en el cuarto
ciclo seria leucina? Haga el cálculo de nuevo, asumiendo en esta ocasión una eficiencia del
99% para cada ciclo.
92. Comparación de secuencias. Las proteinas denominadas chaperonas moleculares ayudan
en el proceso de plegamiento de las proteinas. Una clase de chaperonas presente desde
bacterias a mamíferos es la proteína de choque térmico 90 (Hsp90). Todas las chaperonas
Hsp90 contienen una “secuencia firma” de 10 aminoácidos que permite su rápida
identificación en las bases de datos secuenciales. A continuación se muestran dos
representaciones de esta secuencia firma:

a. ¿Qué aminoácidos son invariantes (conservados en todas las especies) en esta

secuencia?
b. ¿En qué posición(es) está la naturaleza del aminoácido limitada a los de cadena
lateral con carga positiva? ¿Qué aminoácido se encuentra con más frecuencia en
cada posición?
c. ¿En qué posiciones se restringen las sustituciones a los aminoácidos con cadena
lateral de carga negativa? ¿Qué aminoácidos predomina en cada posición?
d. En una de las posiciones puede haber cualquier aminoácido, aunque uno de ellos
aparece con mayor frecuencia que los demás. ¿Qué posición es esta y cuál es el
aminoácido que aparece más a menudo?
93. Protocolos de bioquímica; su primera purificación de proteina. Siendo el estudiante más
nuevo y menos experimentado de un laboratorio de investigación de bioquímica, pasa sus
primeras semanas lavando material de vidrio y etiquetando tubos de ensayo. A
continuación se gradúa para preparar tampones y disoluciones madre para su utilización
en diversos procedimientos de laboratorio. Finalmente, le dan la responsabilidad de
purificar una proteina. Se trata de un enzima del ciclo de ácido cítrico, la citrato sintasa,
localizada en la matriz mitocondrial. Siguiendo un protocolo de purificación, lleva a cabo
los pasos que se explican a continuación. A lo largo del trabajo, un estudiante con más
experiencia le pregunta acerca de la base de cada procedimiento. Dele las respuestas.
a. Recoge 20 kg de corazones de buey de un matadero cercano (las células
musculares son ricas en mitocondrias que proporcionan la energía para la
contracción del músculo). Transporta los corazones en hielo y realiza todos los
pasos de la purificación en una cámara fría o sobre hielo. Homogena el tejido de
los corazones de buey y con un triturados de alta velocidad en un medio que
contiene sacarosa 0.2 M, tamponado a pH 7.2 ¿Por qué utiliza tejido de corazón de
buey, y en tan gran cantidad? ¿Cuál es el propósito de mantener frio y suspenderlo
en sacarosa 0.2 M, a pH 7.2? ¿Qué le pasa al tejido al homogenarlo?
b. Somete el homogenado de corazón resultante, que es denso y opaco, a una serie
de pasos de centrifugación diferencial. ¿Qué consigue con esto?
c. Prosigue con la purificación utilizando la fracción del sobrenadante que contiene
mayoritariamente mitocondrias intactas. A continuación lisa osmóticamente las
mitocondrias. A continuación lisa osmóticamente las mitocondrias. El lisado, que
es menos denso que el homogenado pero aun opaco, consiste principalmente en
membranas mitocondriales y el contenido interno de las mitocondrias. Añade
sulfato amónico, una sal muy soluble, al lisado a una concentración determinada.
Centrifuga la disolución, decanta el sobrenadante, y descarta el pellet. Añade más
sulfato amónico al sobrenadante, que es más transparente que el lisado.
Centrifuga una vez más la muestra, pero esta vez se queda con el pellet, puesto
que contiene la proteina de interés. ¿Cuál es la lógica que aconseja la adicción de
sal en dos pasos?
d. Solubiliza el pellet de sulfato amónico que contiene las proteinas mitocondriales y
dializa a lo largo de una noche frente a volúmenes grandes de una disolución
tamponada (pH 7.2) ¿Por qué no se incluye sulfato amónico en el tampón de
diálisis? ¿Por qué utiliza disolución tamponada en lugar de agua?
e. Pasa la disolución dializada a través de una columna de cromatografía de exclusión
molecular. Siguiendo el protocolo, recoge la primera fracción de proteina que sale
de la columna, y descarta el resto de fracciones que eluyen de la columna
posteriormente. Detecta la proteina midiendo la absorción en el UV (a 280 nm) de
las fracciones. ¿Qué le dice sobre la proteina el hecho de recoger la primera
fracción? ¿Por qué es la absorción en el UV a 280 nm una buena forma de medir la
presencia de proteina en las fracciones eluidas?
 f. Coloca la fracción recogida en (e) en una columna de cromatografía de
intercambio catiónico. Después de descartar la fracción inicial que sale de la
columna, añade una disolución de lavado de pH mayor a la columna y recoge la
fracción que eluye inmediatamente. Explique lo que está haciendo.
g. Analiza una pequeña muestra de su fracción, que ahora tiene un volumen muy
reducido y es bastante transparente (aunque teñida de rosa), en un gel de
isoelectroenfoque. Cuando se tiñe, el gel muestra tres bandas finas. De acuerdo
con el protocolo, la proteina de interés es la que tiene un pI de 5.6, pero decide
realizar otro ensayo de la pureza de la proteina. Corta la banda de pI 5.6 y la
somete a electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS. La proteina se resuelve como
una única banda. ¿Por qué no estaba seguro de la pureza de la banda de proteina
única en su gel con isoelectroenfoque? ¿Qué le dicen los resultados del gel de SDS?
¿Por qué es tan importante realizar la electroforesis en gel de SDS después del
electroenfoque?
94. Determinación de la secuencia de aminoácidos de la insulina. La figura muestra la
secuencia de aminoácidos de la hormona insulina. Esta estructura fue determinada por
Frederick Sanger y colaboradores. La mayor parte de su trabajo se describe en una serie
de artículos publicados en Biochemical Journal entre 1945 y 1955.
Cuando Sanger y sus colegas comenzaron su trabajo en 1945 se sabía que la insulina era
una proteina pequeña con dos o cuatro cadenas polipeptídicas unidas por enlaces
disulfuro. Sanger y sus colaboradores habían desarrollado una serie de métodos simples
para secuenciar proteinas.
Tratamiento con FDNB. El FDNB (1-flouro-2,4-dinitrobenceno) reaccionaba con los grupos
amino libres (pero no con los grupos amido o guanidino) de las proteinas produciendo
derivados dinitrofenilo (DNP) de los aminoácidos:

Hidrolisis ácida. Hirviendo una proteina durante varias horas en HCl al 10% se hidrolizaron
todos su enlaces peptídicos y amida. Tratamientos más cortos generaban polipéptidos
cortos; cuanto más largo era el tratamiento, más completa era la hidrolisis de la proteinas
en sus aminoácidos.
Oxidación de las cisteínas. El tratamiento de una proteina con ácido perfórmico rompía
todos los enlaces disulfuro y convertía todos los residuos Cys en ácido cisteico.
Cromatografía en papel. Esta versión primitiva de la cromatografía en capa fina separaba
compuestos en base a sus propiedades químicas, permitiendo la identificación de
aminoácidos individuales y, en ocasiones, de dipéptidos. La cromatografía en capa fina
separa también péptidos más grandes.
 Como se describe en su primer artículo (1945) Sanger hizo reaccionar insulina con FDNB e
hidrolizó la proteina resultante. Encontró muchos aminoácidos libres pero solo tres DNP-
aminoácidos: α-DNP-glicina (con el grupo DNP unido al grupo α-amino); α-DNP-
fenilalanina; y ε- DNP-lisina (con el grupo DNP unido al grupo ε-amino). De estos
resultados Sanger dedujo que la insulina constaba de dos cadenas de proteina: una con
Gly y otra con Phe en el extremo amino terminal. Una de las dos cadenas también
contenía un residuo de lisina pero no en su extremo amino. A la cadena que empezaba
con Gly la llamo “A” y a la que empezaba con Phe la llamó “B”.
a. Explique cómo justifican los experimentos de Sanger sus conclusiones.
b. ¿son estos resultados consistentes con la estructura de la insulina?

En un artículo posterior (1949), Sanger describió el modo en que utilizo estas técnicas para
determinar los primeros aminoácidos (el extremo amino-terminal) de cada cadena de
insulina. Por ejemplo, para analizar la cadena B, llevo a cabo los pasos siguientes.

I. Oxido la insulina para separar A y B.

II. Preparo una muestra de cadena B pura por cromatografía en papel.
III. Hizo reaccionar la cadena B con FDNB
IV. Hidrolizo la proteina suavemente en medio acido para producir algunos
péptidos más cortos.
V. Separo los DNP-péptidos de los que no contenían grupos DNP.
VI. Aisló cuatro de los péptidos DNP, que recibieron los nombres B1 a B4
VII. Llevo a cabo una hidrolisis fuerte de cada DNP-péptido para obtener
aminoácidos libres.
VIII. Identifico los aminoácidos de cada péptido mediante cromatografía en
papel.

Obtuvo los resultados siguientes

B1: Solamente α-DNP-fenilalanina.

B2: α-DNP-fenilalanina; valina
B3: acido aspártico; α-DNP-fenilalanina; valina
B4: acido aspártico; acido glutámico; α-DNP- fenilalanina; valina

c. En base a estos datos, ¿Cuáles son los primeros cuatro aminoácidos de la cadena B
(el extremo amino terminal)? Explique su razonamiento.
d. ¿coincide el resultado con la secuencia conocida de la insulina? Explique las
discrepancias que hay.
Sanger y sus colaboradores usaron estos y otros métodos relacionados para determinar la
secuencia completa de la cadenas Ay B. Su secuencia para la cadena A era como sigue (extremo
amino a la izquierda)
Al haberse convertido los residuos Asn a Asp y todos los residuos Gln a Glu a causa de la hidrolisis
acida hubo que designar a estos residuos como Asx y Glx, respectivamente (no se conocía su
exacta identidad en el péptido). Sanger soluciono este problema usando enzimas proteolíticas que
rompen enlaces peptídicos, pero no los enlaces amida de Asn y Gln, para preparar péptidos más
cortos. A continuación determino el número de grupos amino presente en cada péptido
cuantificando el NH4+ liberado cuando el péptido era sometido a hidrólisis ácida. A continuación se
muestran algunos de los resultados para la cadena A. Es posible que los péptidos no fueran
completamente puros por lo que los números eran aproximados, aunque suficientemente buenos
para el propósito de Sanger.

e. En base a estos datos, determine la secuencia de aminoácidos de la cadena A.

Explique cómo obtuvo la respuesta.