MÉTODOS DE MEDICIÓN DEL DAÑO

OXIDATIVO
MARCO TEORICO

Estrés oxidativo:
Según Clayton et al (2012) El estrés oxidativo se caracteriza por presentar un desequilibrio entre
la generación y eliminación de especies reactivas, situación que se puede derivar de; la
disminución de los niveles de las defensas antioxidantes celulares, del aumento de la velocidad
de producción de las especies reactivas, o en ciertas ocasiones puede ser resultado de estas dos
condiciones

El desbalance en la producción de especies reactivas del oxígeno (EROs) y la defensa

antioxidante provoca el "estrés oxidativo" que lleva a una variedad de cambios fisiológicos y
bioquímicos, los cuales provocan el deterioro y muerte celular.

Radicales libres:
Los radicales libres son moléculas capaces de existir de forma independiente conteniendo en su
última orbita uno o más electrones desapareados, los cuales le otorgan a estas, carácter
paramagnético que las torna muy inestables y altamente reactivas con capacidad para
combinarse inespecíficamente, con las diferentes moléculas que integran la estructura celular y
los derivados de estas, y con la capacidad de atacar cualquier tipo de biomolécula. (Pryor W.,
1976)

Una vez que estos son formados, buscan el modo de conseguir una configuración electrónica
estable, razón por la cual interactúan con otras moléculas a través de reacciones de óxido
reducción (redox). En dichas circunstancias, hay una transferencia de electrones que
necesariamente implican la reducción (ganancia de electrones) y oxidación (pérdida de
electrones) de las moléculas participantes. Dicho mecanismo genera que la producción de
radicales libres sea una reacción en cadena, ya que al reaccionar un radical libre con una molé-
cula no radical inevitablemente esta última pasa a ser un RL.

Dicha reacción en cadena solamente se detendrá cuando dos radicales libres se encuentren y
reaccionen entre sí.

a. Reacciones de iniciación:
Es la formación de un radical libre a partir de no radicales.

AB + C→ A• + D + E

b. Reacciones de propagación:
Consisten en la formación de un radical libre cuando reacciona una molécula estable con un
radical libre.

A• + CD → AC + D• 214
 c. Reacciones de terminación:
Hace referencia a la reacción química entre dos radicales libres, en donde sus electrones
desapareados son cancelados y se genera un producto estable

A• + D• → AD

Causas del estrés oxidativo:

El "estrés oxidativo" puede provenir de:

 Una deficiencia del sistema de defensa antioxidante.

 Un incremento de la formación de EROs, cuya alta reactividad puede provocar:
peroxidación lipídica, daño de la membrana celular, rotura del ADN, degradación
proteica.

Principales especies reactivas

 Anion superóxido (O2 •-)
 Peróxido de hidrógeno (H2 O2 )
 Radical Hidroxilo (OH• )
 Oxígeno Singlete (O2 1 )

Sistema de defensa
A las defensas se les denomina antioxidantes y se considera como tal a cualquier sustancia que
en concentraciones normales posea una afinidad mayor que cualquier otra molécula para
interaccionar con un radical libre. (Perez & Perez, 2007)

El antioxidante, al colisionar con un RLO le cede un electrón, que se oxida a su vez y se

transforma en un RLO débil no tóxico (la vitamina E). No todos actúan de esta forma, en el caso
de las enzimas catalizan o aceleran reacciones químicas que utilizan substratos que a su vez
reaccionan con los RLO.3,7,8 Existe una primera línea de defensa antioxidante constituida por
enzimas y scavengers o eliminadores de radicales.

a. Enzimas:
 La citocromo oxidasa está encargada de evitar la reducción univalente del oxígeno.
 La superóxido dismutasa está especializada en captar el radical anión superóxido
mediante una dismutación y así convertirlo en peróxido de hidrógeno.
 Catalasa y peroxidasas glutatión peroxidasa (GPx) y glutatión reductasa (GR) que
neutralizan al H2O2 y lo convierten en agua.

b. Scavengers o eliminadores
 La vitamina E o α tocoferol neutraliza al radical OH por su ubicación en las membranas
donde su protección es particularmente importante.
 La vitamina C, por su carácter reductor, reacciona rápidamente en el O2 .y con el. OH,
también es captor del oxígeno singlete y del ion hipoclorito.
 El glutatión (GSH), además de captar el H2 O2 como substrato de la GPx, también capta
al 1 O2 y al. OH.

La transferrina y la ceruloplasmina son transportadoras de metales de transición, hierro y cobre

respectivamente, que son generadores de RLO.
 Figura 1: Mecanismos de defensa del organismo. Fuente: Perez, L. & Perez, J. (2007)

Este sistema defensivo, que lo mismo puede estar en el citosol que en las membranas, no es
totalmente efectivo, por lo que hay involucrada una segunda línea constituida por:

 Sistemas reparadores de biomoléculas que reparan el daño producido al ADN y que

pudieran propiciar trastornos genéticos o cancerígenos.
 Sistemas eliminadores de componentes celulares oxidados como las
macroxiproteinasas y las endonucleasas.

Medición de daño oxidativo:

Un gran problema dentro del estudio de los RL y del estrés oxidativo han sido las mediciones in
vivo de los RL, debido a que estos poseen una vida media bastante corta. Sin embargo, la única
técnica que permite la medición de RL de forma directa es la electron spin resonance (ESR)
(Garcez et al, 2004)). Por esto, se han implementado otras técnicas que permiten ver el daño
causado por los RL y la actividad de ciertos parámetros dentro del estrés oxidativo como son;
evaluación de proteí- nas (técnica de Lowry y método de Bradford), quimioluminiscencia,
sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS), actividad de SOD, determinación de
catalasa, determinación de la enzima Glutation peroxidasa, medición de Glutation S-
Transferasa, medición de glutatión y determinación de nitritos y nitratos (Morgan, M ; 2003).

BIBLIOGRAFÍA

Clayton C, Barbosa A, Pontes P, et al. (2012) Oxidative Stress and Epilepsy: Literature Review.
Oxidative Medicine and Celllular Longevity;pp. 1 -12.

Pryor W. (1976) Free radicals in Biology. New York, Academy Press, Vol. 1, pp. 1- 43
Perez, L. & Perez, J. (2007) Rev Cubana Med Milit Vol. 29(3), pp. 192-198

Aruoma O (1994) Nutrition and health aspects of free radicals and antioxidants. Food Chem Tox.
Vol. 32 (7), pp. 671 – 683

Morgan – Martins M. (2003.) Reposiçao de estrogênio Dimui o daño oxidativo, aumenta a

atividade das enzimas antioxidantes e melhora a funçao cardiaca em ratas. PPG em ciencias
bioló- gicas. Fisiología. Volume Tese de Doutorados. Porto Alegre (Brasil). UFRGS.

Garcez M, Bordin D, Peres W, et al. (2004) Radicais livres e espécies reativas. En: radicais libres
a resposta celular ao estresse oxidativo. Editora da ULBRA. Canoas- RS (Brasil); pp. 13 – 31