10 1016@j Plipres 2017 09 003 en Es

El progreso en Lipid Research 68 (2017) 37-56
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Avances en la Investigación de Lípidos
revista Página de inicio: www.elsevier.com/locate/plipres
revisión
Aplicaciones de la resonancia magnética nuclear en lípidos análisis: Una herramienta poderosa para los estudios
emergentes lipidomics
Jingbo Li un , • , Thomas Vosegaard segundo , Zheng Guo un , •

un Departamento de Ingeniería, Facultad de Ciencias, Universidad de Aarhus, Gustav Wieds Vej 10, 8000 Aarhus C, Dinamarca
segundo Centro Danés de ultra alta campo espectroscopía de RMN, Centro Interdisciplinario de Nanociencia y el Departamento de Química de la Universidad de Aarhus, Gustav Wieds Vej 14, 8000 Aarhus C, Dinamarca
INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO ABSTRACTO
palabras clave: El papel de los lípidos en las células, tejidos, órganos y la fisiología es crucial; como muchas enfermedades, incluyendo cáncer, diabetes, enfermedades
La resonancia magnética nuclear de Enfermedades neurodegenerativas, y enfermedades infecciosas, están estrechamente relacionadas con la absorción y el metabolismo de los lípidos. Espectrometría de masas
análisis (RMN) lipidómica Lipid (MS) son los métodos basados en las poderosas herramientas más desarrollados para el estudio de las vías de síntesis y redes metabólicas de lípidos celulares
en los sistemas biológicos; conduciendo al nacimiento de un sujeto lipidomics emergente, que ha sido revisado extensamente. resonancia magnética nuclear
(RMN), otra herramienta de análisis de gran alcance, que permite la visualización de átomos y moléculas, está recibiendo una atención creciente en lipidomics
Los metabolitos de adulteración
analiza. Sin embargo, muy poco trabajo se centra en los estudios de RMN utilizando lipidomic ha sido revisado críticamente. Este artículo presenta una fi resumen
de alimentos
exhaustivo de primera aplicación de 1 MARIDO, 13 DO& 31 P RMN en lípidos y lipidomics analiza. el científico fi c bases, principios y picos de diagnóstico característica
asignados a especí fi átomos de C / se presentan estructuras moleculares de los lípidos. Aplicaciones de la RMN 2D en el mapeo y monitoreo de los componentes
y sus cambios en los sistemas lípidos complejos, así como la alteración de pro lípidos fi ling sobre el desarrollo de la enfermedad también se revisan. Las
aplicaciones de lipidomics de RMN en el diagnóstico de enfermedades y la adulteración de alimentos se ejemplifican fi ed.
1. Introducción ser aceptado, así dentro de la biología fi ELD ( http://omics.org/ index.php / Omes_and_Omics ). “ lipidomics
” es uno de los conceptos. Sobre la base de la historia y des fi nición de “- ómicas ”, lipidomics es el
el Do FFI X “- om- ” se originó como una formación anterior de “ genoma ”. estudio de la estructura y función del conjunto completo de los lípidos (la lipidome) producido en una
Porque “ genoma ” se refiere a la composición genética completa de un organismo, la gente ha hecho célula u organismo dado, así como sus interacciones con otros lípidos, proteínas y metabolitos ( http://www.nature.c
la conclusión de que existe alguna raíz, sujetos / lipidomics ). A través de la cuantificación detallada fi cación de lipidome de una célula, la
“- OME ”, de origen griego se refiere a integridad o para terminación, pero tales raíz es desconocido cinética de metabolismo de los lípidos, y las interacciones de los lípidos con las proteínas celulares,
para la mayoría o todos los estudiosos. Debido al éxito de los proyectos de biología cuantitativa a gran lipidomics ya ha proporcionado nuevos conocimientos sobre la salud y la enfermedad. Sin embargo,
escala, tales como la secuenciación del genoma, el Do FFI X “- om- ” ha migrado a una serie de otros el verdadero poder y la promesa de lipidomics está sólo empezando a hacerse realidad [1] . Las
contextos. A medida que los investigadores buscaban integrar cada vez más la biología con la ciencia técnicas cuantitativas son esenciales para los lipidomics. Tanto normal e invertida sistemas de fase
de la información, ellos tomaron el uso de ómicas. Para los biólogos, -ómicas fácil de transmitir un de alto rendimiento de cromatografía (HPLC) se han desarrollado desde 1970 para los lípidos cuanti fi
concepto clave, las implicaciones de un enfoque de sistemas complejos, un enfoque que está catión
estrechamente ligada al estudio de las redes, las propiedades emergentes y conceptos de
encapsulación de la informática teórica.
“ proteómica ” ha sido bien aceptado como un término para el estudio del proteoma. A partir de [2 - 5] . Sin embargo, estos procedimientos no podrían cumplir con los requisitos para la aplicación de
entonces, los científicos han propuesto otra “- ómicas ” que son lipidomics al estudio de enfermedades humanas, porque
abreviaturas: MS, espectrometría de masas; RMN, resonancia magnética nuclear; HPLC, cromatografía de alto rendimiento; PC, fosfatidilcolina; PE, fosfatidiletanolamina; PI, fosfatidilinositol; PG, fosfatidilglicerol; PS, fosfatidilserina; PA, ácido
fosfatídico; SM, esfingomielina; LC-NMR, cromatografía de líquidos TMN; SPE, extracción en fase sólida; TOCSY, espectroscopia de correlación total; TAG, triglicéridos; DHA, ácido docosahexaenoico; NOE, Overhauser nuclear e ff ect; EPA,
ácido eicosapentaenoico; GC, cromatografía de gases; HSQC, 1 MARIDO,
13 C heteronuclear simple coherencia cuántica; TLC, de capa-cromatografía fina; PLs, fosfolípidos; CAD, enfermedad de la arteria coronaria; AD, la enfermedad de Alzheimer; PUFAs, los ácidos grasos poliinsaturados; FTIR, transformada de Fourier
espectroscopia infrarroja; EDTA, ácido etilendiaminotetraacético; re 2 O, óxido de deuterio; CDTA, ácido tetraacético diamina ciclohexano; CDCl3, cloroformo re;
MeOH, metanol; CHCl 3, cloroformo; Cs, cesio; Cr (acac) 3, acetilacetonato de cromo (III); SDS, dodecil sulfato de sodio; HDL, lipoproteína de alta densidad; LDL, lipoproteína de baja densidad; PEE, alquilo fosfatidiletanolamina unido a éter; DHSM,
dihydrosphingomyelin
• los autores correspondientes.
Correos electrónicos: jingboli@eng.au.dk , jingboli@jnu.edu.cn (J. Li), tv@chem.au.dk (T. Vosegaard), guo@eng.au.dk , guo@mb.au.dk (Z. Guo).
http://dx.doi.org/10.1016/j.plipres.2017.09.003
Recibido el 1 de de junio de 2017. Recibido en forma 25 de agosto 2017 revisado; Aceptado 11 de septiembre de 2017
Disponible en línea el 11 de septiembre de 2017
0163-7827 / © 2017 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

J. Li et al. El progreso en Lipid Research 68 (2017) 37-56
que estaban plagados de errores acumulativos de procedimientos cromatográficos de varios pasos [1] métodos tienen sus propias ventajas en comparación con los métodos basados en MS. En
. Por otra parte, lipidomics basado HPLC no es muy informativo, ya que sólo pueden ser limitados tabla 1 Se indican una comparación entre los métodos lipidomics NMR y MS. Las principales ventajas
lípidos cuanti fi Ed de una carrera individual. de los métodos basados en RMN son: 1) no destrucción de la muestra; 2) la reproducibilidad analítica
alta; 3) identi fácil fi cación de restos moleculares; 4) alta robustez de instrumentos;
Espectrometría de masas (MS) es una herramienta sensible extraordinaria para la detección de
diversas clases, subclases y especies moleculares individuales de lípidos en una muestra biológica [1] . 5) la posibilidad de obtener información dinámica molecular; y 6) dirigir la información cuantitativa.
lipidomics MS-basada ha sido ampliamente estudiado y revisado por muchos científicos [6 - 9] . Las Con estas ventajas, los métodos basados en RMN tienen el potencial como una herramienta
limitaciones de los métodos lipidomic más basados en MS incluyen la di ff Ering capacidades de poderosa para el análisis lipidomics.
especies de lípidos para formar los iones y por lo tanto, variando la intensidad de señal, así como los Miles de especies moleculares de lípidos individuales están presentes en las células. Esta
fenómenos de iones de enfriamiento, en el que la señal de pobres lípidos ionizantes se inactiva por complejidad implica que ninguna técnica puede enviar un e ff caz estudiar todas las especies de lípidos.
especies más fácilmente ionizadas supresión de la antigua señal, que requiere la separación previa de Por lo tanto, a pesar de que el método basado en RMN no es tan sensible como MS, todavía puede
especies de lípidos para cuantificación exacta o el uso de MS especializado. Estos factores dan como servir como un método complementario de MS para obtener información adicional y fi finalmente darse
resultado una pérdida de sensibilidad de muchos de los metabolitos de lípidos no polares, como cuenta de la asignación global de la lipidoma. En especial, el desarrollo de 2D 1 MARIDO, 1 H RMN
ejemplifica fi ed en un estudio de los bacilos de la tuberculosis [10] . MS también destruye la muestra
durante el análisis y por lo tanto la muestra no se puede recuperar para otros análisis [13] , 1 MARIDO, 13 C RMN [10] y 31 PAG, 1 H RMN [14] técnicas pueden traer nueva vitalidad para RMN
complementarios. en análisis lipidomics [15] . Aunque es muy posible que los métodos basados en RMN podrían
utilizarse ampliamente en estudios lipidomics, hasta ahora los estudios pertinentes no son mucho. En
consecuencia, ninguna revisión pertinente ha sido publicado.
En comparación con el método de MS, los métodos de análisis de lípidos basada en RMN son
menos sensibles y típicamente limitado por las señales de superposición, ya sea en el 1 H RMN o 31 P En el presente trabajo, pretendemos revisar el reciente desarrollo de métodos para el análisis de
RMN, y la baja abundancia natural de 13 C para 13 C RMN [11] . Además, NMR generalmente tiene una lípidos NMRbased. especí fi camente, las aplicaciones de 1 H RMN, 13 C RMN, y 31 P RMN y
mala separación de las señales, que produce espectros llena cuando adquirió como un espectro 1D, lo combinaciones de ellos son revisadas. Los autores quieren esperar, en cierta medida, para atraer
que dificulta la discriminación de las resonancias de los diversos compuestos en mezclas complejas [12] . más atención de los lipidomics basados en RMN través de esta revisión.
restos acilo grasos saturados (tales como en PC 14: 0/16: 0 en comparación con el PC 16: 0/16: 0)
puede ser fácilmente di ff erentiated por MS, mientras que esto es muy di FFI culto por RMN. Sin
embargo, basados en RMN de la
tabla 1
Comparación de los métodos basados en RMN y EM.
RMN SRA
Los límites de detección Low-micromolar en las frecuencias típicas de observación (600 MHz), pero nanomolares usando Picomolar con técnicas estándar, pero puede ser mucho menor con técnicas especiales
criosondas para 1 H RMN. mayor cantidad de muestra (alrededor de 200 mg) para 13 C RMN. 10 mg de 31
P RMN. menores cantidades de carga de la muestra pueden ser compensadas por un mayor número
de exploraciones
Universalidad del metabolito Si metabolito contiene hidrógenos, carbonos, o fósforo, que será detectado, suponiendo que la Por lo general, necesita un enfoque más específico. No puede haber problemas con la mala
detección concentración es su FFI ciente o ninguna superposición de giros de desplazamiento químico separación cromatográfico; con la pérdida de metabolitos en volúmenes de huecos; con supresión
de iones (pero esto se reduce cuando se utiliza UPLC); falta de ionización; capacidad de ejecutar
tanto + ve y - ve detección de iones da información extra
manipulación de muestras Whole muestra analizada en una medición para 1 H RMN y 13 C RMN, mientras 31 P RMN a di ff empaquetaduras y las condiciones de di LC Erent ff clases Erent de metabolito; por lo general las
veces necesita di ff disolvente Erent; disolventes deuterados necesarios muestras tienen que ser extraído en un disolvente adecuado; Las muestras deben estar en alícuotas
pero algunos estudios recientes han evitado la necesidad de cromatografía
recuperación de la muestra No destructiva. Puede ser utilizado para otros análisis a partir de entonces destructivos cantidades pequeñas pero sólo se necesitan
reproducibilidad analítica Muy alto Justa
Muestra de pre-preparación Sencillo y rápido [37]

Facilidad de identi molecular fi catión Alta, tanto de bases de datos de material auténtico y por análisis autoconsistente de 1D y di FFI culto, a menudo sólo el ion molecular está disponible; esto debe experimentos adicionales,
2D espectros entre 1 H y 13 C, o 1 H y 31 PAG tales como tándem MS rutina; GC - MS es generalmente mejor con tiempos de retención precisos y
bases de datos completas de los espectros
Tiempo para recoger datos 1 min para 1D 1 H RMN. Alrededor de 60 min para 1D 13 C RMN. Menos de 10 min para 31 P 10 min para UPLC-MS plazo. Al menos 60 min para ESI-MS de ejecución
RMN
Robustez de los instrumentos Alto Bajo
información dinámica molecular Sí, desde la T1, T2 tiempo de relajación y di ff Coe derrame FFI cientes mediciones No
Análisis de muestras de tejido Sí, utilizando MAS RMN No

La disponibilidad de bases de datos Todavía no ha sido completa, sino aumentar; varios están disponibles libremente en la web; También Bases de datos completas de impacto electrónico MS permiten comparaciones espectrales; Para ionización
existen algunos productos comerciales por electrospray, como es habitual en LC-MS, solamente los valores de masa se pueden comparar
Fiable y reproducible Sí No fidedigno. di ff fosfolípidos Erent tienen bastante di ff factores de respuesta en Erent fuente de ESI y
datos cuantitativos de los una comparación directa entre todas estas clases suele verse obstaculizado por varios otros factores.
fosfolípidos lípidos de membrana Neutral (PC, PPC, CPE, SM) son generalmente detectados y cuanti fi ed en ESI
ion-modo positivo, mientras que los lípidos de membrana aniónicos (PE, PS, PG, PI, CL) requieren
ESI condiciones en modo de iones negativos. No es una desventaja importante con modernos
dispositivos de MS que cambian muy rápidamente entre polaridad positiva y negativa
Resolución de la misma clase de Débiles. Casi lo mismo 1 H y / o 31 P espectros de RMN con independencia de la longitud de la Alto
lípidos [37] cadena acilo, número y posición de insaturación
derivación necesaria No Sí. para GC - SRA
38
MARIDO MARIDO
MARIDO MARIDO O MARIDO MARIDO
HO R O
MARIDO 2MARIDO 2
O O CO do do R1
MARIDO 2MARIDO 2
R3 do do do O
MARIDO 2MARIDO 2
C2 C1
O do do do R2
Figura 1. Estructura química de colesteroles y sus ésteres, triglicéridos.
2. Breve clasificación fi cación de lípidos Figura 2 GRAMO - H. ramnolípidos contiene resto ramnosa (IES), carbonilo y grupos carboxílicos como
sus marcadores para RMN. Los esfingolípidos contienen una cadena principal de esfingosina. Los
Los lípidos pueden ser más o menos clasificadas fi ed en 3 grupos, a saber, los lípidos no polares, los esfingolípidos se pueden clasificar fi ed basado en el sustituto de X en Fig. 3 en la esfingomielina
lípidos polares, y metabolitos basado en sus polaridades relativas de las regiones de grupo de cabeza [9] . (SM), cerebrósido, glucosilceramida, lactosyleramide, sulfatida, y otros glicoesfingolípidos que
En cada clase de lípidos, los lípidos tienen características estructurales comunes, mientras que también contienen múltiples anillos de azúcar. SM también se pueden identificar fi ed y cuanti fi ed por 31 P RMN
contienen especificidad fi grupos c. estos di ff erences pueden servir como marcadores para la identi fi cación debido al átomo de fósforo en la molécula. Los glicolípidos incluyen glicoesfingolípidos y
por RMN. Para aclarar esto, las estructuras químicas de la di ff lípidos Erent se muestran a continuación glicoglicerolípidos en el que el núcleo hidrófilo es mono o múltiples sacáridos, que también muestran
para mayor discusión. especí fi resonancias de C en 1 H y 13 C RMN y se puede utilizar para el diagnóstico estructural.
2.1. lípidos no polares
lípidos no polares incluyen predominantemente colesterol y sus ésteres, y los triglicéridos [9] . Una 2.3. metabolitos
región hidrófoba grande y una pequeña parte neutral o menos polar se presentan en todos los miembros
de esta clase de lípidos ( Figura 1 ). De acuerdo con el di ff estructuras Erent incluyendo la columna Los metabolitos se derivan de ' padre ' lípidos o sus precursores por reacciones enzimáticas. No
vertebral y sucursales cadenas, di ff lípidos Erent pantalla especí fi los desplazamientos químicos c RMN. se encuentran en una gran cantidad, sino mensajeros secundarios importantes activos. metabolitos
Por ejemplo, una muestra de lípidos dado puede clasificarse fi ed ya sea como esteroles o triglicéridos por comunes incluyen acylCoAs de cadena larga, acilcarnitinas de cadena larga, nonesteri fi ed ácidos
su especificidad fi c señales backbone RMN. Dentro de la misma clase, una muestra dada de lípidos puede grasos, ésteres de ácidos grasos, anamide acilo, ceramidas, lisolípidos, eicosanoides, diglicéridos, y
ser catalogado más por cualquiera de di ff longitudes de cadena Erent R (R y R1 - R3 se refiere a las esfingosina-3-fosfato, etc. [9] .
cadenas de alquilo en las estructuras en
RMN se ha explotado en gran detalle para los estudios de metabolómica
Figura 1 ) O por dobles enlaces, etc. en subclases. Los detalles serán discutidos en el siguiente [dieciséis] , Como RMN proporciona único fi las huellas digitales de di ff metabolitos Erent en función de
contexto. su di ff erences en la estructura química y el ambiente químico de los átomos individuales. Por lo
tanto, la importancia de comprender la estructura química no puede enfatizarse lo suficiente. Varios
recursos en línea, los mapas de lípidos (metabolitos de los lípidos y las vías de Estrategia; http://www.lipidmaps.org
2.2. lípidos polares
), Lípidos Biblioteca ( http: // lipidlibrary.co.uk ), Lípidos Bank ( http://lipidbank.jp ), LIPIDAT ( http: //
www.lipidat.chemistry.ohio-state.edu ), y Cyberlipids ( http: // www. cyberlipid.org ), Están disponibles
Los lípidos polares incluyen principalmente fosfolípidos, esfingolípidos, ramnolípidos, y
para clasificación de lípidos fi cationes, estructuras, e incluso espectros de RMN.
glicolípidos etc. La característica obvia de los fosfolípidos es la presencia de al menos un grupo
fosfato a la sn 3 posición del esqueleto de glicerol ( Figura 2 UN - F). Los fosfolípidos pueden ser más
classi fi ed en varias clases basadas en los grupos de fosfato tales como fosfatidilcolina (PC),
fosfatidiletanolamina (PE), fosfatidilinositol (PI), fosfatidilglicerol (PG), fosfatidilserina (PS), y ácido
fosfatídico (PA), etc. Cuando R1 o R2 ( Figura 2 UN - F) es un átomo de H, se forman los
correspondientes liso-fosfolípidos. Es evidente que el átomo de fósforo en cada di ff Erent clase de 3. espectroscopia de resonancia magnética nuclear
fosfolípidos tiene di ff ambientes químicos Erent, que son útiles en 31 P RMN para di ff erentiating
fosfolípidos basado en di ff grupos fosfato Erent. Ramnolípidos son una clase de glicolípidos la magnetización nuclear se genera por la interacción de espines nucleares con una magnética fi
producidos por microorganismos y de las estructuras representativas de ramnolípidos mono- y vejez. Sólo algunos isótopos, determinados por el número de protones y neutrones, poseen una
di-ramnolıpidos se muestran en la propiedad llamada ' girar ', haciéndolos ' RMN activo ', incluyendo, por ejemplo 1 MARIDO, 13 C, y 31 P.
Hemos preparado una representación especial de la tabla periódica destacando las propiedades de
espín nuclear de la di ff isótopos Erent ( http: //periodic.pastis.
39
UN segundo
O O
R1 PAG R1 P
O O O O O O
-
O N+ HO NUEVA HAMPSHIRE 2
HO HO
R2 R2
EDUCACIÓN FÍSICA
ordenador personal
re
do
O
O O
R1
MARIDO HO MARIDO
P OH R1 P
O O O O O O OH
HO NUEVA HAMPSHIRE 2
HO
HO HO
R2
R2
PD PG
F
mi
O
O
OH OH
R1 HO OH R1
P
O O O O O OH
OH P HO
HO
HO HO
R2 R2
Pi Pensilvania
GRAMO MARIDO
O O OH
O O OH
HO O HO
O O
O
HO
HO
O O
O
HO O HO
HO
O
3-OAL-ramnopiranosil-3- ácido
3-O- (2-O- (2E-decenoyl) -aL-rhamnopyranosyl- (1-2) -A-
hidroxidecanoil-3-hidroxidecanoico
L-ramnopiranosil) -3-hidroxidecanoico
Figura 2. Estructura química de fosfolípidos y glicolípidos. R 1 y R 2 son o bien ácidos grasos o átomos de hidrógeno.
NH-COR dk ). Lo que hace RMN una herramienta importante para la química, la biología estructural, la
metabolómica, y lipidomics es el hecho de que el entorno inmediato de los núcleos de correo ff ect del
(CH 2) 12 CH 3
espín nuclear y por lo tanto puede ser explotada por RMN [17] . El más importante e física ff ECTS,
XO
llamados interacciones espín nuclear, son el blindaje del magnética fi ámbito regulado por los
OH electrones que rodean cada núcleo y los acoplamientos entre espines nucleares cercanas. El blindaje
crea una separación de las resonancias de la di ff grupos químicos Erent en una molécula, y los
X Clase de esfingolípidos
acoplamientos informan sobre conectividades entre estos grupos. En conjunto, esto proporciona
ceramida información detallada sobre la estructura molecular, se pueden obtener por RMN tanto para
MARIDO
compuestos puros y en mezclas complejas. La información obtenida se puede interpretar en di ff niveles
Erent: Sin hacer demasiado cualquier análisis de la estructura molecular, el hecho de que cada tipo
de molécula proporciona un único fi huella digital en el espectro de RMN se puede utilizar para la
correos O N+
esfingomielina
detección de metabolitos. Análisis más detallados pueden proporcionar una visión detallada de la
estructura de una molécula, sin embargo típicamente requieren muestras del compuesto puro.
O-
Fig. 3. Estructura química de los esfingolípidos y sus derivados.
40
Con el fin de determinar la estructura tridimensional de una molécula por RMN, se utiliza el corriente 500 MHz RMN necesita 20 h o más [25] . Esto permitirá el análisis de trazas de lípidos y
hecho de que la interacción dipolo-dipolo entre giros cercanos es proporcional a la inversa metabolitos relacionados en forma fácil y rápida. Otro ejemplo de nuestro propio laboratorio era un
internuclear en cubos distancia. En el estado líquido, interacciones dipolo-dipolo son típicamente estudio de los compuestos para inhibir el crecimiento de células cancerosas, que sólo estaban
sondearon a través de la Nuclear Overhauser E ff ect (NOE) [18,19] . Una propiedad atractiva y disponibles en pequeñas cantidades. El uso de un espectrómetro de 950 MHz con una sonda
intrínseca de RMN es el hecho de que la intensidad de señal de cada uno de resonancia en el criogénica, hemos sido capaces de grabar natural abundancia 13 Los espectros de RMN de C en 15
espectro de RMN es directamente proporcional al número de giros asociados con la resonancia min, mientras que el uso de un espectrómetro de 400 MHz sin una sonda criogénica no mostró
particular. Esto implica que la RMN es cuantitativo. La combinación que la RMN es capaz de ningún pico durante un experimento durante la noche
identificar y cuantificar di ff especies Erent en mezclas líquidas hace RMN muy atractivo para la
metabolómica y estudios lipidomics. [27] . Siguiendo el cálculo anterior, el alto fi instrumento campo debe proporcionar ca 15 veces mejor
sensibilidad que se traduce en un factor de 225 (15 2) en el tiempo experimento, lo que implica que se
tardaría más de dos días para obtener la misma sensibilidad en el instrumento de 400 MHz.
Con el fin de cuantificar las especies por RMN, se deben cumplir ciertas precauciones [20] . En
general, es sencillo obtener información acerca de las abundancias relativas de di ff especies Erent en La sensibilidad de RMN también depende de la relación giromagnética, γ, del isótopo investigado. La
una mezcla, y si se dirige la concentración absoluta de un compuesto, se pueden añadir estándar relación de giromagnetica fi nes la frecuencia de resonancia, ω 0, de un núcleo en una especí fi c magnética fi intensidad
interno de concentración conocida. Las señales de RMN de la norma interna seleccionada no deben de campo, segundo 0, como
interferir los dirigidos queridos. Cabe señalar que la cuanti fi catión es posible sólo para picos aislados ω 0 = γ segundo 0. La relación giromagnética más alto, la mayor sensibilidad. Para explotar este correo ff ect,
sin superposición de señales. Se han propuesto métodos alternativos basándose únicamente en el Socalled inverso de detección experimentos de RMN se han desarrollado [28] . Estas técnicas
hardware RMN, sin embargo requiere alguna configuración más elaborada de los experimentos [21] . aprovechan los alrededores químicas de los núcleos de baja sensibilidad como 13 C o 15 N, transferir la
magnetización a la vecina 1 núcleos H y detectar a alta sensibilidad en 1 H, que tiene la mayor relación
giromagnética. Los principales inconvenientes de la detección inversa es que tales técnicas no son
cuantitativos, ya que dependen de acoplamientos entre 1 H y el otro núcleo, que puede variar a través
Finalmente, RMN es sensible a la dinámica molecular de todas las escalas de tiempo de de una molécula. Para la detección inversa de 13 C, esto implica, por ejemplo, que los carbonos
pico-segundo a segundo [22] , Que ha sido utilizado para proporcionar información importante sobre la cuaternarios como grupos carbonilo están no se detecta, ya que carecen de átomos de hidrógeno
función de las proteínas, por ejemplo, mediante investigación de la dinámica de plegamiento de las unidos directamente.
proteínas, los movimientos de dominio, o dinámica de sitios de unión. A través de di ff usion ordenó
espectroscopia (DOSY) [23] , Es posible señales separadas de acuerdo a su di ff Coe derrame FFI coeficientes,
que añade capacidades de cromatografía similar a RMN [13] . Dinámica y di ff derrame no se abordará En LC-RMN, incluso elegimos disolventes que no se superponen directamente las señales del
más adelante en esta revisión. compuesto objetivo, el rango dinámico de disolventes alta proporción hacer la cantidad de trazas de
componentes indetectables. En este caso, la supresión de disolvente en RMN será muy útil. Con el
Centrándose en lípidos, NMR se puede usar para interrogar a alteraciones en la estructura de los desarrollo de técnica de supresión de disolventes, que facilita la utilización tanto de fase normal e
lípidos y la dinámica en el funcionamiento bioquímicamente células debido a su propiedad no invertida CL de fase [25] . Esto sería una muy buena herramienta tanto para el análisis de lípidos
destructiva. Sin embargo, la supresión de la agregación de lípidos es crucial para obtener (más o polares y neutros simultáneamente.
menos) espectros de alta resolución. La mayoría de los estudios de RMN de lípidos se llevan a cabo
con posterioridad a la extracción de las muestras con disolventes orgánicos. Este procedimiento
elimina las interferencias de otros compuestos orgánicos como hidratos de carbono y proteínas. Cabe La baja sensibilidad de RMN también se puede compensar por la alta carga de muestra. Por lo
señalar que los procedimientos de extracción de lípidos pueden conducir a la pérdida de los lípidos, tanto, algunas de las técnicas en relación dando muestra mayor detectable a la RMN Florida ow
especialmente los polares. mi FFI métodos de extracción ciente deben desarrollarse para di ff muestras células se desarrollan. La aplicación de semi-micro columnas de LC disminuye la anchura del pico de
Erent. Si las mezclas no fraccionadas se someten a RMN, la asignación de las resonancias en el - CH 2 / - CH un compuesto de manera que todo el compuesto eluido se puede detectar en el
3
Florida ow-célula [25] . Sin embargo, la carga de la muestra tiene que ser disminuido para llegar a la
región únicamente sobre la base del desplazamiento químico de lípidos debe ser tomado con cautela, misma separación e FFI ciencia como columnas normales. También disminuye la cantidad de compuesto
ya que otras especies macromoleculares como las proteínas y péptidos muestran la 1 señales de RMN en el Florida ow-célula. LC-sólido extracción en fase (SPE) es otra herramienta para obtener compuestos
H en las mismas regiones espectrales [24] . RMN como un método de detección es, en principio, de alta concentración para otros análisis de RMN [29] . Los compuestos después de la concentración por
capaz de ser acoplada con cualquier etapas de separación anteriores. Por ejemplo, en capa SPE puede ser o bien analizaron directamente mediante RMN o se almacenan para acumular más para
fina-cromatografía y Florida cromatografía de cenizas se utilizan comúnmente para puri fi cación de otros análisis [25] . atrapamiento columna en línea es otro método para la concentración pico para
compuestos deseados y luego los compuestos se recuperó y se sometió a análisis de RMN. Del LC-NMR. El pico individual después de una separación de columna convencional se concentra en una
mismo modo, cromatografía de TMN líquido (LC-RMN) que incluye alto rendimiento LC-RMN y columna de trampa, y la muestra se separa de nuevo por la columna semi-micro para los análisis de
preparativa LC-RMN son buenas herramientas para la separación y elucidación estructural RMN
subsiguiente. Técnicas combinadas se conectan cromatógrafos y espectrómetros en línea. Es capaz
de separar mezclas y proporcionar espectros de los diversos componentes al mismo tiempo [25] . [25] . Todas estas técnicas están disponibles como operación automática mediante el control de
Después de la separación, el componente individual de una mezcla de Florida OWS a través de la software [25] . El objetivo es aumentar la concentración de la muestra en el Florida ow de células de
sonda de RMN, que puede resolver el problema de las superposiciones de señales [25] . RMN.
Aunque uno de los principales inconvenientes, señales superpuestas o de hacinamiento, se
pueden resolver mediante la técnica LC-RMN, ningún estudio lipidomics disponible utiliza LC-NMR.
Sin embargo, las aplicaciones de la herramienta para los productos naturales identi fi cación de oxyacantha
RMN es una técnica espectroscópica comparativamente insensible y la relación señal a ruido es Carthamus [ 30] , phospholipidomics [31] , Metabolitos de acetaminofeno en la orina [32] , extractos de
proporcional a la magnética fi intensidad de campo a la potencia de 3/2 [25] a 7/4 [26] . Esto implica, aceite de sésamo [33] , y metabolitos secundarios de Streptomyces violaceoruber
por ejemplo, que la sensibilidad obtenida a una fi intensidad de campo de 800 MHz (18,8 T) es ca 3
veces mayor que en 400 MHz (9,4 T). Por lo tanto, la mejora de las magnética fi intensidad de campo TU22 [34] puede ser encontrado. No vamos a entrar en los detalles sobre LC-RMN, pero RMN en
es el foco en la mejora de la sensibilidad de RMN de 800 MHz y LC-RMN ha estado disponible [25,26] lipidomics debido a la falta de estudios publicados pertinentes.
. mejora la sensibilidad de la sonda también ha sido muy prometedores. sonda criogénica ha dado
cuenta de una mejora de hasta cuatro veces e ff ect de la sensibilidad [25] . Un LCNMR 800 MHz 3.1. 1 lipidomics basados H RMN
equipado con una sonda criogénica es capaz de adquirir 1 espectro de H RMN de aproximadamente 1 μ
g de muestra dentro de los 30 min, mientras que la Los cambios en los lípidos y la composición de lípidos debido a enfermedades, la inducción de
veneno, o trastorno, etc., pueden introducir cambios observables en el 1 señales H RMN. En
consecuencia, Fernando et al. [35] han empleado 1 H RMN
41
Tabla 2
Asignación de los contenedores de desplazamiento químico de 1 H RMN a metabolitos. un
contenedores de desplazamiento químico (ppm) metabolitos contenedores de desplazamiento químico (ppm) metabolitos
0.68 1 do MARIDO 3 unido a C13 (C18H 3) en el 1.61 - 1.62 3 do MARIDO 2 en C3 acilo (saturado de cadena) o COCH 2 do MARIDO 2 3
colesterol 1
0,67 s 2 Colesterol (C18) 2 2.30 1 mi do MARIDO 2 CO - en cadena de acilo graso 1
0,83 d, 0,85 d 2 Colesterol (C26, C27) 2 2.24 - 2,26, 2,27, 2,28, 2,29, cadena de acilo graso mi COC MARIDO 2 - 3
2.31 - 2,32, 2,33 3

0.92 - 0.94 1 do MARIDO 3 unido a C21 (C20H 3) en el 3,67, 3,68 3 mi O mi do MARIDO 3 en éster metílico 3
colesterol 1
0,89 d 2 Colesterol (C21) 2 2.07 1 CH] CH mi do MARIDO 2 - alílico 1
0.99 s 2 Colesterol (C19) 2 2.08, 2.10, 2.11 - 2.13 1 mi do MARIDO 2 mi CH] CH en cadena de acilo graso 1
1.02 1 do MARIDO 3 unido a C10 (C19H 3) en la esterificación fi colesterol ed 1 2.80 - 2,83, 2,84, 2,85 3 Diallylic = CH mi do MARIDO 2 mi CH] 3
4,60, 4,61 - 4.62 3 C3 MARIDO de esterificación fi colesterol ed 3 5.33 - 5.37 1 do MARIDO] do MARIDO en cadena de acilo graso (ácido graso insaturado) 1
2.01 - 2.02 3 acetato de colesterol 3 5.33 - 5.35 3 do MARIDO] do MARIDO en cadena de acilo graso (residuos acilo grasos insaturados) 3
1.56 1 Colesterol 1 5,35 m 2 residuos grasos de acilo ( mi CH] CH) en los triglicéridos, fosfolípidos y colesterol 2
1.10 2 Colesterol 2 4.14 - 4.16, 4.17 3 Triacyglyceride-C1 MARIDO 2
en esqueleto de glicerol 3
1.84 - 1.87 1 colesterol ( - C] C mi do MARIDO 2 mi) 1 4.14 - 4.16, 4.17 3 Triacilglicéridos-C3 MARIDO 2 en esqueleto de glicerol 3
2,26, 2,27 1 C4 colesterol /- do MARIDO 2 COOH - en cadena de acilo graso 1 5.27 3 Triacilglicérido-C2 MARIDO en esqueleto de glicerol 3
0.88 1 Terminal C MARIDO 3 grupos en la cadena de acilo graso 1 3.73 1 mi do MARIDO mi OH en glicerol C2 1
0.86, 0.87, 0.91, 0.92 3 Terminal C MARIDO 3 3.64, 3.65, 3.66 1 O mi do MARIDO 3 éster metílico alifático 1
grupo en la cadena de acilo graso 3
0,88 s 2 FA (terminal C MARIDO 3; TG, fosfolípidos) 2 3,96, 3,97 1 mi do MARIDO 2 mi O mi P en PE / LPE y / o POCH en PS 1
1.26, 1.27, 1.29 1 do MARIDO 2 en cadena de acilo graso (C4 y más allá saturada) 1 3.95 - 3.97 3 mi CH2 mi O mi PAG mi en PS / PI-C3H2 en glicerol columna vertebral fosfolípido 3
1,18, 1,19 1 mi do MARIDO 2 - en cadena de acilo 1 4.08 - 4.12 3 mi C1 MARIDO 2 en el backbone fosfolípido glicerol 3
1,27 s 2 FA (C MARIDO 2; TG, fosfolípidos) 2 5.22 - 5.23 3 mi C2 MARIDO de columna vertebral glicerofosfolípido 3
1,50 m, 1,80 d, 2,00 m, Colesterol + FA (C MARIDO 2; TG, 5,20 m 2 Plasmalógenos, esfingolípidos ( - CH mi DO) 2
fosfolípidos) 2
2,27 t 2
1.34 - 1,37, 1,38 3 Fatty acilo de cadena-COCH 2 CH 2 do MARIDO 2 - 3 4.33. 4.34 1 Glicerol columna vertebral de triglicéridos (TGA) 1
1.28 - 1.31 3 mi CH 2 - en graso de cadena C4 acilo y más allá 3 4.20 wrm 2 Los triglicéridos de glicerol 2
1,59, 1,60 1 do MARIDO 2 en C3 acilo (saturado de cadena) o COCH 2 do MARIDO 5.40 1 C2-OH en liso-PC y / o C MARIDO] do MARIDO de la cadena de acilo en PC 1
21
un Las muestras se disolvieron en CDCl 3. S, singlete; d, doblete; t, triplete; m, multiplete; sa, singlete ancho; bm, multiplete ancho; bt, triplete ancho; wrm, multiplete bien resuelto. FA: acilo graso
residuo.
1 [ 35] .
2[ 48] .
3[ 36] .
Tabla 3 a metabolitos fueron dados como bien (resumidos en Tabla 2 ). A pesar de que algunas de las
Asignación de los contenedores de desplazamiento químico de 1 RMN H a los lípidos polares. un asignaciones no son consistentes entre los dos estudios, la mayoría de ellos están de acuerdo
también. di ff tipos Erent de lípidos tales como colesterol, triglicéridos, fosfolípidos, y dobles enlaces
contenedores de fosfolípidos contenedores de fosfolípidos
puede ser fácilmente identi fi ed. Cuando los tejidos o células biológicas son alteradas por cualquier
desplazamiento químico (ppm) desplazamiento químico (ppm)
estímulo externo o interno, el 1 señales H RMN demostraron ser una herramienta simple y fácil de
3.22 s 1 ordenador personal 3,20 t 1 Pi dilucidar el di ff rencia entre las muestras. Estrés inducido por hipoxia en las células de cáncer de
3.30 s 2 ordenador personal 0,72 s, 1,02 s 1 grupos metilo angular en
cuello uterino derivados conduce a signi fi cambios de peralte en la composición lipídica de la
colesterol
membrana y los cambios fueron aclarados por mediciones de RMN de alta resolución [37] , en donde 1
3,16 m 1 EDUCACIÓN FÍSICA 3,96 m, 4,05 m Glicerol de los
ancho, 4,40 2
fosfolípidos H RMN también se utilizó para identi fi cación de los principales fosfolípidos de acuerdo con el
3,20 Bs 2 EDUCACIÓN FÍSICA 3.91 - 3,93, do MARIDO 3 en esqueleto desplazamiento químico ( Tabla 3 ). En su trabajo, la relación molar era cuanti fi ed por la intensidad
3.94 3 de glicerol de PC
correspondiente de la señal en δ = 0,72 (señal característica de la - CH 3 grupo) para el colesterol con
5,96 d, 4,43 q 1 Plasmenyl PC y / o 3.88 3 do MARIDO 2 N + (CH 3) 3 en PC / LPC
respecto a la intensidad de la señal en δ = 3,32 para PC + SM, haciendo hincapié en la naturaleza
plasmenyl PE
cuantitativa de 1 H RMN. Más reciente, 1 Se encontró análisis lipidomic basado en RMN H de
5,71 dt, 5,45 d 1 esfingomielina
lipoproteínas de alta densidad que es particularmente útil, ya que proporciona información detallada
sobre las características moleculares y ayuda en la caracterización de la función ateroprotectora de
un Disuelto en CD 3 SOBREDOSIS.
lipoproteínas de alta densidad y en el identi fi cación de nuevos biomarcadores de un estado de
1 De [37] .
2 De [48] . enfermedad y monitorización de la terapia [38] . los 1 H pico de los hidrógenos del grupo metilo C-18 en
3 De [35] . el colesterol en 0,68 ppmwas utilizados para cuantificar colesteroles totales, mientras que otros
grupos funcionales tales como alquenos, grupo metilo en colina, alcanos, y ω- restos acilo grasos 3,
para estudiar los lipidomics de hígado graso inducido por etanol. signi fi diferencia no puede en metaboloma de
etc. podrían ser claramente identi fi ed, así [38] . 1 H RMN de los extractos de lípidos de solamente
lípidos entre las ratas alimentadas con etanol y de control se encuentra a través de análisis de
células HeLa o lipoproteínas de alta densidad permite que el correo ff ectivenees del método debido a
conglomerados y análisis de componentes principales de 1 datos H RMN de los extractos de lípidos.

las señales no demasiado lleno en los espectros. 1 H RMN también puede di ff erentiate altamente
Adicionalmente, 1 datos H de RMN de plasma y el hígado también re Florida varios cambios ejadas. Además, el
nivel del cambio es cuanti fi poder. Más tarde, un estudio subcrónica dependiente de la dosis de pro hepática
de lípidos fi ling de ciervos etanol alimentado ratones se llevó a cabo usando 1 H y 31 P RMN [36] . asignaciones
muy detalladas de los contenedores de desplazamiento químico
42
insaturados restos acilo grasos procedentes de otros restos acilo grasos. Por ejemplo, en restos acilo sencilla y precisa de acuerdo con la siguiente fórmula ( Recuadro 3 ). En comparación con cuanti fi cación
grasos altamente insaturados (con insaturado γ- de éster metílico, cuanti fi cación de éster etílico es más complicado porque la resonancia de protones
carbono) los protones en α y β átomos de carbono en relación con el grupo carbonilo dan una señal etoxi se solapa, en cierta medida, con el de la columna vertebral glicérido sn 1 hidrógenos. Tres
de cerca de 2,38 ppm que está ausente en oliva, sol Florida ower, y aceites de soja 1 H espectros de métodos de cálculo ( Recuadro 4 ) Se han comparado con el propósito de cuantificar éster etílico del
RMN [39] . Esta propiedad puede ser aplicado para el estudio de la asignación y bio-función de los ácido graso en transesterificación fi sistema de cationes [45] . Los resultados obtenidos a partir de 1 H
residuos acilo grasos poliinsaturados en las células o tejidos. Determinación del grado de RMN se compararon con la de HPLC y la ecuación ( Recuadro 4 ) Se consideró como muy bien.
insaturación también es precisa mediante el uso de 1 H RMN [39] , Que hace que el control de los También señalaron que la conversión incompleta de triglicéridos en éster etílico de ácido graso
residuos acilo grasos insaturados de oxidación más e FFI ciente y también podrían usarse para el causado interferencia fuerte porque las señales de monoglicérido y diglicérido solapan. Un estudio
diagnóstico de enfermedades rápidos que resultan de grado lípidos insaturación. Sin embargo, anterior [46] mezclas utilizadas de éster etílico del ácido graso y aceite de soja para verificar el 1 método
cuando la composición de la muestra es muy complejo, se convierte en di FFI culto para obtener la H RMN, y una correlación lineal se observó obviamente entre el contenido de éster etílico en
información, como la 1 H RMN señales de di ff moléculas Erent tienden a superponerse. Para hacer mezclas de aceite / éster de composición conocida y el determinado experimentalmente obtenidos
frente a la superposición total de señales de metileno a ca 1,3 ppm, se ha desarrollado la longitud de con 1 espectroscopia H RMN.
la cadena alifática técnica de RMN apodado por mezcla isotrópica (Alchim). Esta técnica excita
selectivamente el H β- átomos y utilizan una técnica total de espectroscopía de correlación (TOCSY)
para transferir la magnetización a través de la cadena alifática al grupo metilo terminal. Usando este
enfoque, Sachleben et al. [40] demostró que existe una relación lineal entre en Florida punto de
reflexión en la acumulación de intensidad a aumentar mezclando TOCSY tiempo y el número de
carbonos en la cadena alifática. Esta técnica se aplicó a las mezclas naturales complejos para la 3.2. 13 lipidomics basados C RMN
identi fi cación y cuanti fi cación de los residuos acilo grasos constituyentes y representa una forma
inteligente para obtener información detallada sobre la cadena alifática aunque sus señales de RMN Debido a la baja abundancia natural de 13 DO, 13 C RMN no es tan sensible como 1 H y 31 PAG [10] .
se superponen completamente. El método se ha aplicado a los adipocitos enteros que demuestran Por lo tanto, se solicita una mayor cantidad de muestra de la hora de distinguir di ff clases Erent de
que será de gran utilidad en estudios de tejidos completos [40] . Cierto es que, 1 H RMN tiene algunos lípidos mediante el uso de 13 C RMN. La ingesta de 13 sustrato C marcado es otra manera de enriquecer
inconvenientes tales como la superposición de la señal y la discriminación de las resonancias de la abundancia de 13 C en los lípidos y sus metabolitos, pero mientras que este procedimiento se utiliza
muestras complejas. Así, según los estudios publicados, se propone que un aislamiento y ampliamente para enriquecer las proteínas para estudios estructurales [47] , A nuestro conocimiento no
purificación fi cación de lípidos se debe realizar antes de la 1 H RMN. Por ejemplo, ejecute 1 H RMN de ha sido perseguido por lipidomics. De hecho, muchos estudios no se han aplicado 13 C RMN en
fosfolípidos y lípidos neutros individualmente y fi finalmente ellos se combinan para obtener todo el lipidomics hasta ahora. Sin embargo, algunas aplicaciones de 13 C RMN para el análisis de lípidos de
mapa lipidomics. relevancia para ' lipidomics '
son revisados aquí.

Tugnoli et al. [48] usado 13 C RMN para pro fi Le los tejidos renales humanas. Colesterol, restos
acilo graso, de PC, y triglicéridos puede ser claramente identi fi ed a partir del espectro ( Fig. 5 y Tabla
4 ). Típicamente, hay cuatro grupos de resonancias en una 13 espectro de RMN de C correspondiente
a di ff tipos Erent de átomos de carbono ( Fig. 6 ). los fi clúster primera es de 14 a 35 ppm
La composición de los residuos acilo grasos insaturados en el aceite de aceite de colza y de correspondiente al terminal
soja se determinó por 1 H RMN y los resultados fueron comparables con los de cromatografía de
gases [41] . Varios métodos de cálculo diferentes se han desarrollado y todos los resultados fueron - CH 3 y - CH 2 - grupos en colesterol, TAG, diglicérido, monoglicérido, fosfolípidos, etc. Estos picos se
precisa en comparación con los datos de cromatografía de gases. El método de cálculo para 1 espectroscopia
pueden asignar más a los carbonos individuales si no superposición potencial de resonancias tales
de H RMN se muestra a continuación (Cuadro 1) . La idea clave de este cálculo es que cada protón como
en el mismo análisis muestra la misma intensidad y la intensidad de cada especí fi pico c - CH 2 - en los residuos de colesterol y acilo graso. Por ejemplo, el 13 C desplazamiento químico de
correspondiente bien a n-3 y n-6 residuos acilo grasos poliinsaturados o a restos acilo grasos C-16 de metileno de restos de cadena de acilo de glicéridos es de entre 31,4 y 31,9 ppm, dentro del
monoinsaturados se utiliza para el cálculo ( Recuadro 1 ). Una metodología nueva y muy simple fue cual el C-16 de saturado (31,86 ppm), oleato de (31,84 ppm), vacunar (31,72 ppm) y linoleato (31,45
desarrollado para los triglicéridos, en el que no hay ecuaciones son necesarias basado en el hecho ppm) las cadenas pueden ser resueltos línea de base [49] . otro estudio [50]
de que el contenido de cada residuo de acilo graso se puede extraer directamente de la 1 H espectros
de RMN [43] . La composición de ácidos grasos se puede determinar a través de la relación entre las investigado las regiones de frecuencia donde el metilo ( ω 1) y los carbonos de metileno ( ω 2, ω 3)
intensidades de las señales características de cada cadena de acilo graso y uno de los de la cadena resonar, mostró que las resonancias de
principal de glicerol en el 1 Los espectros de H RMN. Por ejemplo, el terminal - do MARIDO 3 de ácido ω 1, ω 2, y ω 3 carbonos de las cadenas de oleato y eicosenoate solapan en
linolénico muestra resonancia única a 0,98 ppm (pico I en Fig. 4 a) que se puede utilizar directamente 14.080, 22.693, y 31.932 ppm, respectivamente. Cabe señalar que ese alto fi RMN de campo ayuda a
para el cálculo del contenido de ácido linolénico. El pico a minimizar los problemas con la superposición de señales. Mientras tanto, el ω 1, ω 2, y ω 3 carbonos
de oleato y cadenas eicosenoate cada resuenan como dos picos, separados por 0.008, 0.024,
0,12 ppm, respectivamente. La razón podría ser a la vez las cadenas están ω 9 cadenas, a diferencia
de la ω 7 cadena vaccenate cuyas resonancias fueron desplazado constantemente hacia una
2,74 ppm (c pico en Fig. 4 a) es la resonancia de] CH mi do MARIDO 2 mi CH], que está presente tanto en frecuencia más baja de la ω cadena 9 oleato [50] . Los carbonos de metileno C-4 a C-7 y C-12 a C-15
los ácidos linolénico y linoleico y se utiliza para calcular el contenido de ácido linoleico. Un pico a de la cadena de oleato se pueden asignar de acuerdo tanto con la integración de picos y las
2,02 ppm que corresponde a la resonancia de] CH mi do MARIDO 2 mi CH 2 ácidos oleico existente en mediciones de T 1 tiempos de relajación, que a su cadena larga restos acilo graso aumentan
linolénico, linoleico, y se emplea para calcular el contenido de ácido oleico. La resonancia de α- do MARIDO regularmente de la cadena principal de glicerol hasta el extremo de la cadena de metilo [50] . Se indica
2a 2,28 ppm se utiliza entonces para calcular todos los demás restos de acilo graso de contenido que la 13 técnica C RMN es una herramienta versátil para la caracterización de los lípidos.
restando el contenido de linolénico, linoleico y oleico. Este método no utiliza fórmulas matemáticas.
Sin embargo, Coe corrección FFI ciente se requiere con el fin de normalizar los resultados ( Recuadro
2 ). El segundo grupo es de 50 a 75 ppm donde la resonancia de C-
14, C-17 y C-3 en colesterol, - ( CH 3) 3 en PC, los residuos de glicerilo en triglicérido, diglicérido y
monoglicérido, y carbonos de éster de metilo o etilo se pueden observar [48,49] . Fig. 7 espectáculos 13
transesterificación fi cación de triglicéridos con metanol también puede ser fácilmente cuanti fi ed C Los espectros de RMN de sustrato ( Fig. 7 C) y su monoglicérido preparada enzimáticamente ( Fig. 7 A,
por 1 H RMN [44] . La resonancia de los grupos metoxi y los protones de metileno está completamente B) por las enzimas. La 1 (3) -monoglyceride, 2-monoglicérido,
resuelto por 1 H RMN como se muestra en
Fig. 4 segundo. Por lo tanto, la cuanti fi cación de transesterificación fi catión es muy 1,2-diglicérido, y TAG se resuelven claramente dentro de la resonancia de
43
Recuadro 1
Cálculo de la composición de ácidos grasos en los lípidos [41] .
re 6 (marido yo)
= ••4 +
La intensidad de protones por U 1 3 segundo + + ••
9 (1)
yo 3
n 3-contenido de ácidos grasos poliinsaturados (%) V = × 100%

T3
(2)
c2 2i 3
n 6-contenido de ácidos grasos poliinsaturados (%) W =-× 100%

U3
(3)
12
(Ab -4)
contenido de ácido graso monoinsaturado (%) = × 100%
T3
- (2V 3W)
+ de protones olefínicos (4)
e4U
× 100% (VW)
- + de protones alílicos
3 (5)
donde las asignaciones de a, b, c, d, e, f, i, y h se encuentran en Fig. 4 a. Como se indica en Fig. 4 a, pico a es de resonancia de - do MARIDO] do MARIDO mi,
pico b es de resonancia de C MARIDO 2 glicérido, el pico c es de resonancia de] CH mi do MARIDO 2 mi CH], pico d es de resonancia de α- do MARIDO 2 ( Fig. 4 ), Pico e es de resonancia de] CH mi do MARIDO
2, pico f es de resonancia de β- do MARIDO 2 ( Fig. 4 , [42] ), Pico i es de resonancia de la terminal C MARIDO 3 en n-3 residuos acilo grasos poliinsaturados, y el pico de h es la resonancia de la terminal
C MARIDO 3 de otros restos acilo grasos. Para pico b, hay 4 protones de C MARIDO 2 glicérido, por lo tanto, b se divide por 4. Para pico d, hay 6 protones de α- do MARIDO 2 ( cada residuo de acilo
graso ha 2), por lo tanto, D es dividido por 6. Para pico i y h, hay 9 protones de la terminal de - do MARIDO 3, por lo tanto, están divididas por 9 en la ecuación. (1) . Por favor fi nd el ejemplo de [41] para
un mejor entendimiento.
triglicéridos se investigó por 13 C RMN y asignaciones muy detallados para glicerol y C1 fueron dadas
68 - 76 ppm ( Fig. 7 ) [51,52] , Que puede ser usado para una rápida determinación de la especificidad fi ciudades
de di ff lipasas Erent. Sacchi et al. [53] han resumido la 13 C desplazamiento químico de carbonos de y se muestran en Tabla 5 [54] . En general, la 13 C resonancia del carbono cerca del extremo carbonilo
glicerilo en di ff glicéridos Erent, de donde también podían obtener una distinción clara de di ff Erent en triglicéridos y fosfolípidos está en Florida influenciadas por esterificación fi catión del resto de
tipos de glicéridos. En línea con esta obra [53] , Se encontró que la simétrica de 1,3-diglicérido y glicerol, con dos señales separadas para el carbono C1 y C2 en la cadena de acilo, dependiendo de
triglicérido dan 2 señales para el resto de glicerol con una relación de intensidad de 1: 2, la asimétrico si la cadena está presente en el α- o β-
1 (3) -monoglyceride y 1,2-diglicérido dan 3 señales con intensidades en una proporción 1: 1: 1 [49] .
Los C-2 señales de glicerol resuenan siempre hacia abajo fi ELD en comparación con C-1 y C-3 de posición. Las señales de carbonilo en triglicéridos aparecen en 173,6 y
cadena principal de glicerol [49] . éster de metilo y señal de visualización de éster de etilo a 51,44 172,1 ppm de que el cambio más alto está asociado con el sn 1 (3) cadenas ( Tabla 5 ). di ff fuentes
ppm y 60,13 ppm, respectivamente, que se puede también utilizar, por ejemplo en la síntesis de Erent de aceite pueden tener el mismo residuo de acilo graso en sn 1 posición pero con un di ff Erent
biodiesel, Florida descubrimiento Avor, y farmacéutica. acilo graso residuo sobre sn 2 posición, lo que da como resultado la forma dependiente entre 13 desplazamiento
químico C y fuentes de muestras. Los desplazamientos químicos de disminución C1 con el grado de
insaturación de los triglicéridos como el residuo de acilo graso doble enlace se coloca más cerca al
carbono del carbonilo. Esta tendencia es apoyada por otros estudios, así [55,56] . Una asignación muy
El tercer grupo es 120 a 135 ppm que corresponde a los carbonos insaturados [50] . Fig. 8 Muestra detallada de los picos se da en La Fig. 10 [55] . carbonos de carbonilo de sn 1,3 y sn 2 cadenas de acilo
un 13 espectro de RMN de C de una mezcla estándar de trioleína, trieicosenoin, y trivaccenin. Las se separaron por un desplazamiento sistemático de aproximadamente 0,4 ppm de formación de
resonancias de C9 y C-10 de cadena de oleato en 1 (3) -positions son 129.655 y grupos de sn 1,3 y sn 2 picos. Además, carbonilo desplazamientos químicos de cadenas insaturadas
mostraron una dependencia marcada en la proximidad a la fi rst doble enlace, cambiará al frecuencias
129.959 ppm, mientras que son 129,629 y 129,972 ppm en la posición 2. Las señales de C-11 y C-12 más bajas como el fi doble enlace primera movido más cerca del centro carbonilo. El carbono del
de cadena vaccenate en 1 (3) -positions son carbonilo ligado con ácido docosahexaenoico (DHA) mostró frecuencias incluso más bajo que todos
129.777 y 129.877 ppm, mientras que en la posición 2 que are129.760 y los otros carbonos de carbonilo enlaces con otros restos acilo graso. Esto es principalmente porque
129.885 ppm. Los desplazamientos químicos de C-11 y C-12 de cadena are129.773 eicosenoate y DHA es una Δ 4 residuos de acilo graso. Parece que la dependencia de carbonilo desplazamientos
129.881 ppm en 1 (3) -positions y are129.754 y 129.889 ppm en la posición 2 [50] . Se indica que el químicos de cadenas insaturadas en la proximidad a la fi doble enlace primera es más dramático que
desplazamiento químico disminuye para C9 o C11 (cerca grupo carbonilo) a partir de sn 1 (3) a sn 2, el de sn 1,3 o sn 2 posiciones.
mientras que aumentó de C10 o C12 (cerca de la terminal - CH 3) de sn 1 (3) a
sn 2. A excepción de los átomos de carbono asociados con dobles enlaces en las cadenas de acilo
graso residuos, C-5 y C-6 unidos por dobles enlaces en el colesterol también dar resonancias a 121,70
y 140,90 ppm ( Fig. 5 ). Se indica que este grupo corresponde principalmente a los carbonos con dobles El desplazamiento químico de carbonos en 13 Se encontró C espectros de RMN de triglicéridos
enlaces. para ser concentración de la muestra depende, entre las que el desplazamiento químico en carbonilo
El cuarto grupo es 170 a 180 ppm, donde el carbonilo y carboxílicos carbonos resuenan y fue la más obvia [57] . El desplazamiento químico del carbono del carbonilo disminuye con la
representa di ff cadenas Erent glicérido acilo ( Fig. 9 ). Las resonancias de cadenas de acilo saturado a concentración creciente de la muestra para ambos sn 1,3 y sn 2 posiciones. También se dio Una
173.336 ppm, vaccenate en 173.322 y 172.909 ppm, y oleato en 173.303 y ecuación para expresar la correlación entre el desplazamiento químico de carbonilo y la
concentración. Otro estudio también encontró la tendencia similar para el desplazamiento químico de
173.891 ppm de 1 (3) - se asignaron y 2-glicerol posiciones [50] . La distribución posicional de ω 3 carbono del carbonilo en triglicérido, diglicérido y monoglicérido [49] .
residuos acilo grasos en lípidos marinos
44
Sin embargo, el desplazamiento químico del carbono del carbonilo aumentó con la concentración de
la muestra superior. Esto implica que cuando uno quiere grabar o comparar la di ff rencia entre dos
muestras de lípidos por 13 C RMN de la misma carga de la muestra es importante para obtener
resultados comparables. Esto también trae el mensaje de que la dependencia de la concentración se
puede utilizar para identi fi cación de algunos compuestos desconocidos.
Debido a la baja sensibilidad de la RMN, el espectro se obtiene mediante la acumulación de

varios espectros (scans) para promediar el ruido. Para obtener espectros de RMN cuantitativa, es
esencial que los espines nucleares se les permite relajarse de nuevo a su equilibrio entre cada
exploración. Si el sistema no ha regresado al equilibrio antes de una exploración, la intensidad será
menor en este análisis. El di ff rencia depende del tiempo de relajación longitudinal ( T 1), que es di ff Erent
para cada carbono en el espectro. Con el fin de obtener RMN cuantitativa, el tiempo de repetición
entre las exploraciones debe ser lo suficientemente largo como para asegurar la completa relajación
de todos los núcleos. Típicamente, esto se logra mediante la espera de 5 veces el más largos T 1 ( a 5
veces
T 1 aproximadamente 99,3% del valor de equilibrio se restablece) entre dos exploraciones [58] . Por
otra parte, cuando se graba cuantitativa 13 C espectros de RMN, uno debe asegurarse de que la
Overhauser nuclear e ff ect (NOE) mejora de la cercana 1 átomos de H se elimina. Si bien este correo ff ect
es generalmente apreciable, ya que puede proporcionar mejoras de señal de los débiles 13 señales C
por hasta un factor de 3, la potenciación NOE depende de la distancia entre el 1 H y 13 C núcleos, y
por lo tanto es de ninguna manera cuantitativa. Para evitar la potenciación NOE, llamada inversa de
desacoplamiento puede ser utilizado [59] . Inversa desacoplamiento cerrada es una técnica estándar,
en la que el desacoplador se activa solamente durante la adquisición para mantener el tiempo de
desacoplamiento Do FFI suficientemente corto para evitar la acumulación de NOE.
tiempos de relajación longitudinal ( T 1) de sn 1,3 y sn 2 picos de carbonilo de ácido

eicosapentaenoico (EPA) y DHA se determinaron para una muestra de anchoa naturales / 2009TAG
sardina fi aceite sh (la fi dos primeros dígitos se refieren al contenido de EPA y los dos últimos dígitos
se refieren al contenido de DHA, tanto en la cromatografía de gas porcentajes (GC) de área de pico).
Estas mediciones revelaron que para el EPA, el sn 2 carbonilo está representada ya T 1
(2.835 s) que la sn 1,3 carbonilo (2.437 s) por un factor de casi 16%. Los tiempos de relajación de sn 1,3
y sn 2 DHA carbonilos di ff Ered solamente por 2% (3.231 y 3.303 s, respectivamente), pero eran
sustancialmente más largo que para la EPA. Estos valores sugieren que el tiempo de repetición
adecuado para la cuantificación simultánea fi cación de carbonilos de EPA y DHA se debe establecer
en
16,5 s, correspondiente a fi cinco veces el más largo T 1 ( 3.303 s) [55] . Tales estudios hacen hincapié
en la importancia de medir T 1 antes de utilizar RMN para cuanti fi catión. reproducibilidad de 13 C RMN
cuanti fi catión ha sido probado [60] . El diminuto di ff rencia de 1 - 2% en moles en los valores medios de
la composición de ácidos grasos principales se observó de forma reproducible tanto de cromatografía
de espectroscopia y gas RMN de aceites muestra recogida de di ff partes geográficas Erent de Grecia [60]
. El di ff erences observado en este estudio se pensaba que ser razonable como atribuye a 1) GC
necesita derivación química antes de los análisis; 2) di FFI cultad en RMN se encuentra con el pico
Fig. 4. Asignación de picos de triglicérido típico, ácido graso libre, y ésteres metílicos de ácidos grasos de 1 H RMN.
que aparece entre el graso saturado
reproducido de [42] con permiso.
Recuadro 2
Cálculo de la composición de ácidos grasos en los triglicéridos.
residuos grasos de acilo (éster) Desplazamiento químico (ppm) ( Fig. La intensidad relativa del pico de glicérido Sustracción
4 un)
linolénico i, 0.98 4 un -
linoleico c, 2,74 6 segundo 2 × [linolénico] do
oleico E, 2,02 3 re [Linolénico] + [linoleico]
Saturado d, 2,28 6 mi [Linolénico] + [linoleico] + [ácido oleico]
un Dos hidrógenos de glicerol [C1 (3)] para nueve hidrógenos de ácido linolénico metílicos.
segundo Dos α hidrógenos de glicerol [C1 (3)] para seis posibles hidrógenos metileno entre ole fi ns desde el linoleico y linolénico.
do El ácido linolénico contiene dos veces más hidrógenos metileno entre ole fi ns que el ácido linoleico.
re Dos α hidrógenos de glicerol [C1 (3)] a doce posible α viejo fi n hidrógenos.
mi Dos α hidrógenos de glicerol [C1 (3)] para seis α hidrógenos carbonilo.
45
Recuadro 3
Cálculo de éster metílico de ácido graso de los triglicéridos.
éster metílico de ácidos grasos (%) = (2A 1 / 3A 2) × 100, donde A 1 y A 2 son las áreas de los grupos metoxi y los protones de metileno. especí fi camente, A 1
y A 2 indicar el área del pico en 3,7 ppm y 2,3 ppm, respectivamente ( Fig. 4 segundo)
Recuadro 4
di ff métodos de cálculo Erent de éster etílico del ácido graso en los triglicéridos.
( yo
EE TAG
+ - IIαCH ) 100
• •• ×
Y (%) =•
•• TAG 2 (1)
donde TAG + EE denota el área de la señal del cuarteto en el intervalo de 4,05 - 4,25 ppm correspondiente a los dos hidrógenos del
- O mi do MARIDO 2 mi CH 3 grupo, que sólo está presente en los productos de éster etílico y en los triglicéridos sin reaccionar. yo ETIQUETA denota el área de las señales de doble doblete en el intervalo
de 4,25 - 4,4 ppm, que se atribuyen al glicerol - do MARIDO 2 hidrógenos en los triglicéridos (TAG). yo α CH2 es el área de la señal correspondiente a los dos carbonilo α (hidrógenos - do MARIDO 2 mi COOR).
yo TAG + EE es el área de la señal de los hidrógenos en el
- O mi do MARIDO 2 mi grupo CH3, que sólo está presente en los productos de éster etílico y en las etiquetas que no han reaccionado
residuos de acilo y O1 α [ 60] . La conclusión fue que RMN basa-cuanti fi catión es tan precisa como los asignaciones aquí son los mismos que los mencionados en 1D 1 H RMN. Sin embargo, mucha más
métodos de CG y repetible ya que las muestras de la misma área dieron repetidamente los mismos información se podría ganar aquí porque las señales de 1 H se dispersan adicionalmente de acuerdo
resultados en un período de 3 años [60] . con 13 resonancias C. Sobre la base de las resonancias de 1 H y 13 C, las moléculas individuales
pueden ser precisión identi fi ed. Tabla 8 resume algunos representante solapado 1 resonancias H pero
con totalmente di ff Erent 13 resonancias C, lo que indica claramente la ventaja de la 2D HSQC RMN.
Este método demostró ser e ff reflexivo en estudios lipidomics de cambios adaptativos, la función de
3.3. 1 MARIDO, 13 C heteronuclear coherencia cuántica única (HSQC) para lipidomics genes, nuevas especies de micobacterias, y los factores de virulencia. Este método también se usó
para pro fosfolípido fi ling de termófilo Geobacillus sp. cepa GWE1 aislado de horno de esterilización [61]
Como se menciona en 1 H RMN y 13 secciones C RMN, el principal inconveniente de 1 H RMN y 13 C . Las asignaciones de 1 H y 13 C en
RMN es las señales superpuestas que hacen las asignaciones muy di FFI culto. Por lo tanto, los
experimentos de RMN multidimensionales se utilizan comúnmente para la asignación de señal en
varios fi campos de RMN, ya que proporcionan una mejor dispersión de la señal. especí fi camente, 1 MARIDO-sn 1 de esqueleto de glicerol y - CH 2 CH 2 NUEVA HAMPSHIRE 2 en el grupo de cabeza puede ser aún
13 C HSQC RMN se ha aplicado para pro lípidos fi abadejo. Este método proporciona un espectro de más con fi confirmada por la RMN 2D. El 2D HSQC RMN no es cuantitativo como la transferencia
RMN bidimensional que correlaciona la 13 C resonancias al directamente unido 1 átomos de H. De esta coherencia entre 1 H y 13 C se basa en la suposición de que el escalar de un solo enlace ( 1 J HC) acoplamiento
manera, el experimento puede dispersar las señales en dos dimensiones, proporcionando una pro tiene un cierto valor, pero en la práctica puede Florida uctuar. Markley y colaboradores desarrollaron
lípidos 2D rico en información fi Le mapa en el que los picos de biomarcadores únicas claves se pueden una secuencia de impulsos (HSQC 0) que compensa el problema y proporciona información
resolver y se utilizan para diagnosticar y cuantificar la presencia de ciertas especies de lípidos cuantitativa [62] . técnicas de RMN multidimensionales darnos una oportunidad única para llevar a
cabo lipidomics cualitativa y cuantitativamente, mínima manipulación de la muestra, y el tiempo de
experimento relativamente corto, pero el potencial aún tiene que ser explorado.
[10] . Como se muestra en La Fig. 16 , Las señales en el espectro HSQC son bien dispersa y pueden ser
clasificados fi ed en tres regiones principales: 1) la más actualizada
fi región de campo ( δ ( 1 H) = 0,5 - 3,0 ppm), lo que representa la cadena alifática de los lípidos; 2) el
extremo hacia abajo fi región de campo ( δ ( 1 H) = 5,2 - 8,5 ppm), lo que representa subestructuras
insaturados y aromáticos; y 3) la región media ( δ ( 1 H) = 3,2 - 5,4 ppm), lo que representa azúcares en
glicolípidos. los
Fig. 5. los 13 espectro C RMN de la fracción lipídica total de un riñón normal.

46
Tabla 4
Asignación de los contenedores de desplazamiento químico de 13 C RMN a los lípidos.
contenedores de desplazamiento químico (ppm) Compuestos contenedores de desplazamiento químico (ppm) Compuestos
11.90 un C-18, el colesterol 31.97 un C-7, C-8, el colesterol

14.15 un ácido graso / terminal de acilo - CH 3 35.84 un C-20, el colesterol
18.76 un C-21, el colesterol 36.25 un C-22, el colesterol
22.74 un C-17, ácido graso / acilo 39.83 un C-16, el colesterol
22.86 un C-27, el colesterol 42.37 un C-4, C-13, el colesterol
23.90 un C-23, el colesterol 50.20 un C-9, colesterol
24.33 un C-15, el colesterol 54.60 un ( - CH 3) 3, ordenador personal

27.27 un C-8, ácido graso / acilo 62.15 un C-1, C-3, los residuos de glicerilo
28.06 un C-25, el colesterol 68.95 un C-2, residuos de glicerilo

29.17 - 29.78 un - CH 2-, ácido graso / acilo 121.70 un C-6, el colesterol
31.56 un C-16, ácido graso / acilo 127.4 - 130,42 a, b ácido graso / acilo, insaturación
31.73 un C-2, el colesterol 172.87 - 173,54 a, b Grasos carbonilos de éster de ácido
un [ 48] .
segundo [ 60].
3.4. 31 P RMN para lipidomics Como se explica por 13 C, para obtener los espectros de RMN cuantitativa, es im-
portante para aplicar un su FFI retardo de repetición suficientemente largo entre cada exploración. Dado que
31 P tiene 100% de abundancia natural, mientras 1 H y 13 C tiene abundancias naturales de 99,86%
las fósforo T 1 tiempos de relajación de los fosfolípidos están en el intervalo de aproximadamente 1,5 - 3,3 s ( Tabla
y 1,11%, respectivamente. La sensibilidad relativa de 31 P es 377 en relación con 13 C, mientras que la
6 y [64] ), retrasos de repetición de 15 - 20 s (5 x T 1) normalmente se requieren [63] . Se ha sugerido que, dado
de 1 H es 5680. La alta sensibilidad y una buena dispersión del desplazamiento químico del fósforo
que todos
son elementos clave de éxito 31 P RMN [63] . Puede ser interesante para grabar 31 Los espectros de P 31 núcleos P en los fosfolípidos poseen comparable T 1 tiempos de relajación, todas las intensidades
sin 1 H desacoplamiento, como acoplamientos de 1 H a 31 P en el mi CH X mi O mi PAG mi fracción de son una ff ected en la misma medida al acortar el tiempo de repetición [63] . Es importante utilizar la
fosfolípidos son típicamente en el rango susceptible 4 J HP ≈ 0 - 10 Hz ( 4 J HP es una notación abreviada misma configuración experimental (tiempo de repetición, sistema de disolvente, temperatura, etc)
para una J acoplamiento entre 1 H y 31 P separadas por cuatro enlaces covalentes). Como se muestra para obtener espectros reproducible, como el 31 P interacciones espín nuclear dependen de las
en La Fig. 11 , 31 espectro P RMN sin desacoplamiento de protones proporciona multipletes para cada variaciones en el entorno químicos altamente.
resonancia, que pueden potencialmente informar sobre el número de hidrógenos cercanas. Sin
embargo, el espectro es más complicado y las resonancias se resuelven mal ( La Fig. 11 resonancias Además, a diferencia 13 C RMN y 1 H RMN, mezcla de disolventes en 31 P RMN es mucho más
a) mientras que los desacoplamiento de protones displays espectro altamente resuelto ( La Fig. 11 segundo).crítico para la obtención de un espectro bien resuelto. Como puede verse en La Fig. 12 , CDCl 3 solo
no es en absoluto adecuado para cuanti fi cación de fosfolípidos, mientras que una mezcla de CDCl 3, MeOD,
y D 2 O-EDTA da un espectro bien resuelto. Cabe señalar que los fosfolípidos contienen grupo de
cabeza polar y no polar de acilo graso
Fig. 6. 13 espectro C RMN del sol Florida ower éster de ácido de aceite y ácidos grasos.
47
Fig. 8. Viejo fi región de carbono nic del 500 MHz 13 espectro de RMN de C de una mezcla estándar de triglicéridos
trioleína, trieicosenoin, y trivaccenin. Las resonancias de C-9 y C-10 de cadena de oleato en 1 (3) -positions (129.655
y 129.959 ppm), y 2 posiciones (129.628 y
129.973 ppm) se indican. Las señales de C-11 y C-12 de cadena vaccenate en 1 (3) posiciones (129.777 y 129.877
ppm) y 2 posiciones (129.759 y 129.885 ppm), y de eicosenoate cadena en 1 (3) -positions (129.771 y 129.881 ppm) y
2 posiciones (129.754 y 129.889 ppm), se muestran. reproducido de [50] con permiso.
Fig. 7. Los monoglicéridos producidos por A-lipasa de Candida antarctica ( superior) y Lipozyme ® TL IM (medio), y
sustrato (parte inferior). reproducido de [91] con permiso.
residuos. Así, los fosfolípidos forman bicapas en un entorno acuoso y ' inverso ' micelas en un
disolvente orgánico que se caracterizan por tanto considerable ampliación de la línea [sesenta y
cinco] . Cuando una mezcla de disolventes contiene disolventes no polares y polares, se forman
micelas estables. Para facilitar el montaje experimental para la 31 P RMN de las muestras de
fosfolípidos desconocidos, que tenemos en Tabla 7 enumerado los tiempos de repetición, sistemas
Fig. 9. región de carbono del carbonilo de la 500 MHz 13 espectro de RMN de C de Moringa oleifera petróleo. Las
de disolventes, y las temperaturas de muestra utilizados en una serie de artículos. Como se puede
resonancias de saturado (173,336 ppm), vaccenate (173.322 - 172.909 ppm), y oleato de (173.303 - 172.891 ppm)
ver, no todos los estudios informaron los parámetros utilizados, posiblemente debido a la falta de
Cadenas esterificación fi ed en 1 (3) - y las posiciones 2-glicerol, respectivamente, están indicados. reproducido de [50] con
conciencia de su importancia. Aparte de alta resolución (liquidstate) 31 P RMN, en estado sólido 31 P permiso.
RMN es capaz de dar información estructural sobre la fase de muestra y morfología [66] , Que, sin
embargo, no es el foco de la revisión actual.
detergentes, que permiten el análisis cuantitativo de los fosfolípidos en una mezcla compleja, incluso a la
relativamente baja magnética fi intensidad de campo. Los autores atribuyeron las anchuras de línea
estrechos a la dirección FFI ciente de promediado de la anisotropía de desplazamiento químico y de las
3.4.1. disolventes a base de detergentes

interacciones dipolares en pequeñas micelas. HDL (lipoproteína de alta densidad) y LDL (lipoproteína de
Detergentes incluyendo colato de potasio, desoxicolato, SDS, y Triton X-100 se utilizaron para 31 baja densidad) se analizaron por 31 P RMN usando el detergente (colato de sodio) a base de disolvente y
estudios P RMN de fosfolípidos [67] . No se observaron resonancias agudas en todos los disolventes los espectros bien resueltos se obtuvieron con observación clara de
con di ff Erent
48
Tabla 5 Detergentes, estructuralmente como fosfolípidos, contienen uno polar y un resto y de forma no
13 cambio C químico (ppm) y las asignaciones de glicerol, C1 y C2 átomos de carbono en ω 3 residuos acilo grasos
polares vesículas cuando se disuelven en agua. Muy pequeñas micelas consta de sólo pocas
muestras enriquecidas [54] .
moléculas en rentabilidad altamente resueltos espectros de RMN. Los fosfolípidos entran entonces
salmón del Atlántico aceite de hígado de bacalao aceite de foca arpa Asignación
en estas micelas en una relación de lípido / detergente apropiado y por lo tanto la formación de los
grandes fosfolípidos vesículas en agua se suprime, lo que resulta en alta resolución. El
Glicerol 69.11 69.08 69.11 22: 6 β comportamiento de agregación del detergente aplica también fuertemente en Florida uye en la
69.02 68.99 69.03 20: 5 β
resolución espectral [63] . Como se resume en la Ref. [63] , El número de agregación del ácido cólico
68.96 68.94 - ββ
es la más pequeña que la de los otros detergentes, lo que conduce a una resolución mejorada. El
68.60 68.86 68.89
62.26 62.20 62.26 22: 6 α inconveniente más serio de la utilización de detergentes es que las muestras se utilizan
62.18 62,12 62.19 αα exclusivamente para
62.09 62,03 62.10
62,03 61.96 - 31 análisis P RMN porque las resonancias detergentes intensos cubrirán las resonancias de
C1 173.52 - - Desconocido
fosfolípidos en 1 H y 13 C RMN [63] . Además, la recuperación de fosfolípidos para experimentos
- - 173.25 αα
173.23 173.15 173.23 adicionales es prácticamente imposible después de la mezcla con detergentes [70] .
173.16 173.06 173,19 20: 4 n-3 α
173,12 173.00 173.15 22: 5 α
173,07 172.88 173.06 18: 4 α
3.4.2. CDCl 3, disolvente basado MeOH, y EDTA o CDTA sal
172.98 172,83 173.00 20: 5 α
172.95 - - 20: 5 α Además del sistema disolvente detergente acuoso, otro disolvente es la mezcla de CDCl 3 y
172,84 172.69 172.86 ββ MeOH. fosfolípidos de huevo se analizaron por 31 P RMN usando CDCl 3: MeOH (2: 1) como disolvente
172.81 172.67 172.82
y el espectro resultante podría resolver completamente fosfato de trietilo, PC, liso-PC, SM, PE,
- 172,66 172.78 20: 4 n-3 β
cardiolipina, liso-PE, y PA [71] . Bajo esta condición, un espectro obtenido a 40 ° C mostró una mejor
172.68 - 172,76 22: 5 β
172.63 172.50 172,66 18: 4 β
resolución de PE y PI en comparación con la obtenida a 25 ° C. La derivación estándar de química
172,59 172.45 172,60 20: 5 β desplaza menos del 1% se observó a ambas temperaturas para el estudio de reproducibilidad [71] .
172.51 172,36 172.53 22: 6 α También encontraron que la adición de ácido hizo la superposición más pronunciada mientras que la
172,48 - - 22: 6 α
adición de base como trimetilamina dio señales más nítidas pero la señal de solapamiento y la
172.11 171.98 172,13 22: 6 β
hidrólisis de la muestra limita su uso. PC y SM son bases débiles, mientras que PE, PS y PA son
C2 34.83 - - Desconocido
34.20 34.14 34.21 β ácidos débiles, lo que son muy sensibles a los cambios de pH en su ambiente químico. Las
- - 34.20 proporciones de fosfolípidos también una ff reflejado los desplazamientos químicos, lo que sugiere
34.11 33.96 34.05 α proporciones idénticas de fosfolípidos deben estar presentes para la obtención de los
34.04 - 34,01
desplazamientos químicos comparables. En otro estudio, CHCl 3: MeOH (2: 1) se utilizó como
- - 33.97 22: 6 α
33.73 - - Desconocido
fosfolípidos disolvente y principales de las membranas del cerebro, es decir, PC, PE, PS, PI, SM, y
33.57 33.49 33.58 20: 5 β liso-PE podría ser claramente resuelto por 31 P RMN [72] . También se empleó este sistema disolvente
- - 33.44 Desconocido para analizar fosfolípidos en pro fi etanol ling lipídica de ratones de los ciervos alimentado [35,36,73] .
33.39 33.31 33.40 20: 5 α
A partir de estos informes, parece que este sistema de disolventes es su FFI ciente para identificar
muchas especies de fosfolípidos. Sin embargo, en algunos casos, este sistema disolvente no es un
α: sn 1; β: sn 2. C1 representa los carbonos de carbonilo y C2 indica los carbonos de metileno. Por favor refiérase a Figura
1 para α, β, C1, y C2.
buen candidato para alta resolución. Por ejemplo, clara di ff erences pueden observarse desde La Fig.
13
PC, PI, PS, PE, y SM. fosfolípidos lácteos se analizaron como bien mediante el uso del detergente a
base de disolvente y se obtuvieron espectros resueltas muy bien en la que PC, PI, PS, 2LPC, PE,
SM, DHSM, y 2LPE puede ser cuanti fi ed [68] . El detergente sistema de disolvente de base es versátil
para di ff Erent fuentes de la muestra.
que la CHCl 3: MeOH (2: 1) sistema de disolvente es de resolución más baja que CHCl 3: MeOH:
Los desplazamientos químicos de las especies de fosfolípidos son di ff Erent en di ff detergentes Cs-EDTA (0,2 M en D 2 O, 2: 1: 0,25) disolvente [74] . CHCl 3: MeOH: Cs-EDTA (o Cs-CDTA) sistema
Erent. El enlace de hidrógeno, de contacto dieléctrico, o de anillo cambios actuales en el entorno de la disolvente es el más ampliamente utilizado en 31 análisis P RMN para fosfolípidos cuanti fi catión
átomo de fósforo son la esencial e ff ECTS, e incluso la concentración de detergente o de fosfolípido

también puede introducir desplazamiento químico Florida fluctuaciones [67] . Se subraya la importancia [69,75 - 79] . La adición de agente quelante (CDTA o EDTA) a los extractos sirve para “ máscara ” divalente
de llevar a cabo todos los análisis en las mismas condiciones con fines comparativos. y, en menor grado, cationes de metales trivalentes mediante la formación de quelatos catión-CDTA
estables. cationes paramagnéticos Unmasked ampliarían fosfolípidos 31 resonancias P, fosfolípidos
También se encontró que la 31 desplazamiento químico P era dependiente del pH, que fue empeorando así Resolución de la señal. CDTA es preferible sobre el EDTA se usa más comúnmente
sugerido para ser utilizado en la determinación de la pag Ka de un grupo ionizable en un fosfolípido [67] porque constantes de estabilidad de complejos de CDTA binarios son mayores en comparación con
. Además, esta propiedad se puede utilizar para la resolución de dos resonancias idénticos los complejos de EDTA
cambiando el pH, que se piensa que es una ventaja importante de los disolventes a base de
detergente más de disolvente orgánico [67] . dos di ff valores de pH Erent, 7.1 y 9.5, se utilizaron en los [75] . Aunque estos informes que se utilizan CHCl 3: MeOH: Cs-EDTA (o Cs-CDTA), las proporciones
disolventes a base de detergente para 31 análisis P RMN y los resultados de 31 P RMN se comparó relativas de estos disolventes varían signi fi cativamente. En consecuencia, algunas de las mezclas de
con la de 2D - TLC [68] . El contenido de PE obtenido a pH 7,1 mostró mayor di ff rencia entre RMN y disolventes forman dos fases, mientras que otros forman una sola fase cuando los disolventes se
TLC, que era probablemente debido a la superposición parcial de los picos de PE y SM. Cuando el mezclan. Aunque las dos fases formadas, siendo una predominantemente no polar (CHCl 3 y MeOH)
pH se ajustó a 9,5, se le dio un pico PE bien resuelto. pH una ff ECTS los fosfolípidos 31 desplazamiento y la otra predominantemente polar (MeOH y agua), podría proporcionar una buena resolución de la
químico P RMN a través de tres di ff mecanismos Erent: (1) directamente, a través de la protonación señal, pueden ser una fuente de error ya que el volumen de la fase no polar después de la
de la fracción fosfato PL; (2) indirectamente, a través de la protonación de los compuestos que separación no se puede medir con precisión [69] . Por lo tanto, el sistema de disolvente de una sola
interactúan con los iones que potencialmente complejo con el resto de fosfolípidos fosfato. Además, fase (CDCl 3: MeOH: CsCDTA (acuoso), 5: 4: 1) se desarrolló e investigó sistemáticamente. El e ff Se
(3) e indirecta ff ECTS del pH sobre la estructura de las agrupaciones similares a micelas no pueden discutieron ECTS de temperatura, concentración de lípidos, la concentración de CDTA, y el valor de
ser excluidas [69] . pH en el desplazamiento químico, separación de la señal, el ancho de línea, y la resolución espectral [69,75]
. En general, el desplazamiento químico se incrementó con el aumento de la temperatura para PC,
alquilo-acil-
49
Fig. 10. región de carbonilo de la banda ancha desacoplada 13 espectro de RMN de C de: a, mezcla de ocho normas homo-TAG; b, anchoa naturales / sardina fi sh 2009TAG aceite; c, reconstituido 2009TAG obtiene al glicerolisis de 2009FFA. La
asignación de sn 1,3 y sn 2 picos regioisoméricos a ácidos grasos individuales está anotado. reproducido de [55] con permiso.
era verificable fi ed mediante el uso de PC [80] y este método fue utilizado con éxito para cuanti fi cación
PC, plasmalógeno PC, PI, difosfato de PI, PS, liso-PC, PG, alquilo-acil-PE, y SM, pero ya sea con di ff laderas
Erent o di ff Erent modales. El desplazamiento químico de PC disminuyó moderadamente como la de especies fosfolípidos en colza originó lecitinas
concentración del extracto se incrementó. Sin embargo, la dependencia de desplazamiento químico [81] .
de la concentración de extracto fue menos pronunciada como la temperatura de la muestra se redujo A pesar de los informes de investigación sistemática del correo ff ECTS de diferentes factores
y la concentración CDTA aumentó. El desplazamiento químico PC disminuyó moderadamente y casi sobre la fi resultados nales [69,75] , Las asignaciones de algunos picos no son ni seguro ni se haya
linealmente con el logaritmo de la concentración de CDTA a pH 7,4, para todas las concentraciones llevado a cabo. Este problema siempre confunde a la gente cuando sólo el 1D 31 P RMN se lleva a
de extracto y temperaturas. La dependencia del pH de los desplazamientos químicos de los análogos cabo. dos dimensiones 31 PAG, 1 espectroscopia H RMN es entonces una herramienta más poderosa
de PC y SM refleja esencialmente la de PC, pero PIP2 exhibió virtualmente ninguna dependencia del para abordar el problema de las asignaciones [14,82 - 84] . el 2D 31 PAG, 1 H RMN no sólo proporciona
pH. Es un sistema complicado y hay algunas anomalías entre todas las disposiciones de carácter una mejor 31 Resolución P, sino también una buena sensibilidad. La ganancia en la sensibilidad se
general. Los trabajos [69,75] también sugieren que las condiciones óptimas para 31 P RMN fosfolípidos consigue mediante la correlación del núcleo fósforo grupo de cabeza con su entorno de protones
espectros puede cambiar en gran medida para las muestras de di ff Erent fuentes. Se pueden separados por hasta tres enlaces. Tanto la cadena principal de glicerol y la cadena lateral de los
necesitar pruebas más completas de optimización para di ff propósitos Erent y muestras. Además, la protones grupo polar principal generado di ff Erent 31 PAG- 1 picos cruzados H a causa de su ambiente
optimización también se decide por la información que se necesita. Por ejemplo, si sólo se necesitan químico desigual [14] . Por lo tanto, la identi fi cación de fosfolípidos en el 2D 31 PAG,
las especies de fosfolípidos en lugar de cantidades absolutas precisas, las concentraciones más
altas y menos tiempo de adquisición son su FFI ciente. Si una especificación fi c es necesaria especies
1 H espectros de RMN se basó en tanto 31 P y 1 H desplazamientos químicos a lo largo con la característica 31 PAG,
de fosfolípidos, uno debe centrarse en la optimización de la mejor separación de señales para las
regiones pertinentes del espectro. La exactitud y la precisión de este método 1 acoplamientos H a través de tres enlaces visibles en el
1 dimensión H ( La Fig. 14 ) [14] . Más recientemente, un método totalmente automático, AUTOP, para
identi fi cación y cuanti fi cación de lípidos en mezclas de lípidos complejos a partir de 1D 31 P y 2D 1 MARIDO-
31 P espectros de RMN fue desarrollado [82] . En su estudio, un algoritmo de pico-picking que se ha
desarrollado
50
LPE
LPC
Tabla 6
permiso.
J. Li et al.
Especies
segundo De
Pensilvania
un De [67] .
[71] .
-: no especi fi ed.
esfingomielina
ordenador personal
EDUCACIÓN FÍSICA

3.3 un
T 1 ( s)
2.1 segundo
1.8 segundo
2.9 segundo
espectros se hace referencia a externa 85% H 3 correos 4.

3.2 un ; 1.8 segundo
3.3 un ; 2.2 segundo
Resumen de T 1 NOE y de di ff Erent especies de fosfolípidos.
-
-
-
que una mezcla de CDCl 3, discos compactos 3 OD y D 2 O-EDTA (125: 8: 1 / v / v

50
60
60
NOE (%)
[67]
[71]
[71]
[71]
[67,71]
[67] [71]
Fig. 11. 31 Los espectros de P RMN (121,6 MHz) de los fosfolípidos. a. 0,84 g de hígado sin desacoplamiento de protones;
Referencia
v) fue usado en (a). El di ff erences en los desplazamientos químicos son causados por di ff erences en la polaridad del disolvente. Los
Fig. 12. 242,94 MHz 31 Los espectros de RMN P de un extracto grueso de cerebro bovino. (B) se registró en puro CDCl 3, mientras
añadió como estándar. AAPC, β- acil- γ- O-alkylphosphatidylcholine; Bu 3 correos 4, fosfato de tri-n-butilo. reproducido de [111] con
segundo. 0,84 g de hígado con desacoplamiento de protones; do. 0,70 g cerebro con desacoplamiento de protones. Bu 3 correos 4 se
51
Tabla 7
Resumen de sistemas de disolventes, temperaturas de la muestra, y los retrasos de repetición utilizados para 31 P Los análisis de RMN de los fosfolípidos.
Muestra Preparación de la muestra / sistema de disolvente tiempo (s) de la muestra Repetición temperatura un Referencia
fosfolípidos estándar y retículo sarcoplásmico 5% w / v detergentes, 10 - EDTA 125 mM y 25 - 75% D 2 O en un volumen total de 0,75 - 1 ml. 15 s sonicación y Temperatura 40 ° C - [67]
fosfolípidos calentamiento a 60 ° C para acelerar la solubilización
HDL y LDL humana HACER 2 que contiene colato de sodio 200 mM y 5 mM EDTA 3 [sesenta y cinco]
fosfolípidos lácteos colato de sodio-EDTA D 2 O 10: 1: 20: 80, pH 7,1 30 ° C 3.5 [68]
de hígado de rata 100 mg de fosfolípidos disueltos en 3 ml de CDCl 3- MeOH 2: 1 (v / v) que contiene la referencia interna (fosfato de trietilo) 25 ° C y 40 ° C 10 [71]
Cerebro humano CHCl 3- MeOH (2: 1) - 2.1 [72]
lipídico de ratas CDCl 3- MeOH (2: 1) 25 ° C - [35,36,73]
Esófago, tumor de esófago distal, y normal CHCl 3- benceno (d6) MeOH acuoso Cs-EDTA (0,2 M, pH 6,0) (1,9: 0,1: 0,8: 0,2) - 1.52 [74110]
estómago
Cerebro de rata y de hígado fosfolípidos 2,0 ml de solución de cloroformo de lípidos + 1,08 ml de mezcla de metanol-0,2 M Cs-EDTA (aq) 4: 1 (v / v) + 0,40 ml de Cr 87 mM (acac) 3 en CDCl 3 + (V / v) 4% - 34 ° C o 38 ° C 9 [111]
TMS. Después de agitar, la fase inferior contiene aproximadamente Cr mM 10,5 (acac) 3, y una relación de CHCl 3- MeOH-agua (51,1: 34,5: 14,4)
cerebro de rata Los extractos de lípidos se lavaron previamente con K-EDTA. CDCl 3- MeOH-0,2 M K-EDTA (pH 6,0, acuosa) o Cs-EDTA (pH 6,0, acuoso) 100,0: 29,9: 5,2 (v / v / 25 ° C 1 o 12 [112]
v) se usó disolvente para 31 P RMN
membrana púrpura de halobacterias MARIDO 2 O que contiene 3% deuterado-SDS completamente con la adición de EDTA o en CHCl 3- MeOH-H 2 O (10: 4: 1, v / v / v) con la adición de Cs-EDTA 27 ° C 30 [76]
Los fosfolípidos en la soja CDCl 3- MeOH-Cs-EDTA (0,2 M, pH 8,5) 1: 1: 1 (v / v / v), después de agitación vigorosa, se analizó fase inferior 29 ° C 11.2 [78]
Los lípidos en los cerebros de ratas Lewis CDCl 3- MeOH-Cs-CDTA (acuoso) 5: 4: 1 5 - 25 ° C 18.165 [69,75]
EDTA: ácido etilendiaminotetraacético. re 2 O: óxido de deuterio. CDCl 3: Cloroformo- re. MeOH: metanol. CHCl 3: Cloroformo. CS: El cesio. Cr (acac) 3: Acetilacetonato de cromo (III). SDS: dodecilsulfato de sodio. HDL: lipoproteína de alta densidad. LDL: lipoproteína de baja densidad.
El progreso en Lipid Research 68 (2017) 37-56
un Para 1D ordinario 31 P espectros de RMN, que aquí informe la suma del tiempo de adquisición y el retraso de relajación, para volver Florida ect todo el tiempo disponible para los giros a relajarse.
Tabla 8
δ 1 H y δ 13 C se desplaza para las señales seleccionadas de los lípidos de micobacterias.
molécula lipídica δ 1 MARIDO δ 13 do molécula lipídica δ 1 MARIDO δ 13 do
Triglicéridos, C2 de 5.24 69 trehalosa acilados, C1 segundo 5,05 94,3

glicerol segundo
grupo acilo, 5.32 130,1 menaquinona, cadena lateral isopreno H segundo 5,05 120
segundo
CH] CH segundo
PI, manosa, I-1 a, b 5.22 100,6 micolactona, anillo macrólido segundo 5,04 131,2
esqueleto de glicerol, 4,47, 4,22 63,78 grupo de cabeza, 4,07 63,08

C1 do - CH 2 CH 2 NUEVA HAMPSHIRE 2 do
un números romanos y números arábigos corresponden a residuos de manosa y las posiciones de los átomos de carbono en
el anillo de piranosa, respectivamente, como se describe por [113] .

segundo [ 10] .
do [ 61] .
Fig. 14. semiconstant tiempo de dos dimensiones 31 PAG, 1 H espectro de RMN COSY de los fosfolípidos (PL) en la grasa de
queso (líquido polar - fracción líquido de extracción p-pp) y el correspondiente 1D 31 espectro P RMN (derecha). protones
columna vertebral y el grupo de cabeza que dan lugar a picos cruzados que se muestran en una estructura de PC están
etiquetados. Por muy abundantes PLs, pueden observarse a veces débiles picos cruzados debido a acoplamientos de cuatro
bonos (no mostrado). PEE, alquilo fosfatidiletanolamina unido a éter; DHSM, dihydrosphingomyelin. reproducido de [14] con
permiso.
metanol / cloroformo (2: 1) o metanol / cloroformo (1: 2) se utilizó para extraer lípidos a partir de suero,
plasma o plaquetas de la sangre para una mayor 1 análisis H RMN [86 - 88] . lípidos inusuales que son
causadas por defectos en el metabolismo de lípidos se acumulan en la sangre y los tejidos. Es
esencial identificar estos lípidos inusuales para un diagnóstico correcto [87] . 1 H RMN se utilizó para
identificar simultáneamente y cuantificar los lípidos en la sangre de pacientes con di ff Erent errores
innatos del metabolismo de los lípidos [87] . cuatro di ff Erent errores innatos del metabolismo de los
lípidos se identificaron fi ed y cuanti fi ed. Veinte- fi cinco resonancias derivados de lípidos con 9 y 14
especies moleculares distintas podrían ser asignados en los espectros 1D de controles sanos y
enfermedades metabólicas, respectivamente. Un estándar interno no volátil,
octametilciclotetrasiloxano, se utilizó como desplazamiento químico y de referencia de concentración
para cuanti fi cación de especies de lípidos. Se obtuvieron buenos correlaciones con los métodos
convencionales para las concentraciones totales de colesterol y triglicéridos [87] . los 1 método H RMN
es aplicable en el diagnóstico clínico especialmente para los errores congénitos del metabolismo de
los lípidos. metabolitos de lípidos en un modelo de rata hepatocarcinogenesis fueron investigados por 1 H
RMN después de la extracción [89] . Los protones trimetil de compuestos de colina (alrededor
Fig. 13. 31 P NMR de una preparación lipídica crudo de la lombriz de tierra, Lumbricw tmestris. Top, el lípido crudo en
cloroformo-metanol 2: 1; parte inferior, el lípido crudo en el reactivo analítico Cs-que contiene (CHCl 3: MeOH: Cs-EDTA
(0,2 M en D 2 O), 2: 1: 0,25). reproducido de [74] con permiso.
3,3 ppm) sirve para cuantificar colina total, el vinilo (5,3 ppm) y el protón bisalilo (2,8 ppm)
resonancias sirve para cuantificar las concentraciones de restos acilo graso y para sondear el
identi reproducible fi ES todas las señales por encima del nivel de ruido y grupos en función de su 31 desplazamiento
número de dobles enlaces en un resto acilo graso, y los protones de metileno de la glicerol columna
químico P. Optimización de pico-picking se realizó para la agrupación precisa y señales tolerantes. vertebral (4,13 - 4,42 ppm) en PLs se utilizaron para cuantificar los PLs totales. El pro lípidos de
Las asignaciones se destacan en La Fig. 15 como bandas a través de la di ff Erent 31 P traza, con la plaquetas fi les de los pacientes Do ff Ering de enfermedad arterial coronaria (CAD) y en voluntarios
anchura de la banda que indica la tolerancia. Este método puede automáticamente y sin sanos se analizaron por 1 H RMN para explorar la posible relación entre los lípidos de plaquetas y
ambigüedades identificar y cuantificar aproximadamente el 20 di ff lípidos Erent. Este método CAD [88] . Se encontró que el colesterol
automático puede de fi infinitamente servir como una herramienta muy poderosa en específico
lipidomics fi phospholipidomics camente. aumentó en 16,5 ± 5,5% junto con
15,7 ± 2,5% y 4,7 ± 4,0% de diacylglycerophospholipids totales y la reducción de los fosfolípidos que
contienen etanolamina-, respectivamente, en las muestras con CAD. El contenido de insaturación y
linoleato de cadenas de acilo grasos se incrementaron en 0,2 ± 0,1% y 1,9 ± 0,5%, respectivamente
4. lipidomics basados en RMN para el diagnóstico de enfermedades
[88] . Estas tendencias se pueden servir como indicadores que son anteriores al desarrollo de CAD.
El diagnóstico precoz de enfermedades es un tema central en las ciencias de la salud, y por lo
Sin embargo, otro estudio que critica 1 análisis H RMN de plasma es un predictor débil de CAD [90] .
tanto hay una continua búsqueda de marcadores fiables para la aparición temprana de diversas
Las predicciones para las arterias coronarias normales y grupos CAD fueron sólo 80,3% correcto
enfermedades. procedimientos prometedores incluyen métodos metabolomicsbased que emplean
para los pacientes no tratados con estatinas y 61,3% para los pacientes tratados, en comparación
técnicas analíticas ricas en información, tales como la espectroscopía de RMN y MS [85] . Para las
con las predicciones correctas al azar de 50%. Sin embargo, atribuyen la predicción débil para la in Florida
aplicaciones de la metabolómica 1 RMN H para metabolitos hidrófilos, supresión de agua en el
influencias de muchas otras variables incluyendo el género y el tratamiento farmacológico de la
experimento de un impulso depende más críticamente de buen calce [85] . Sin embargo, cuando
composición de lípidos [90] . Esto implica que la predicción débil no es de la técnica analítica, pero los
lipidomics es de interés, el procedimiento de extracción antes eliminaría la señal ancha del agua en 1 Los
débiles
espectros de H RMN. Por ejemplo,
52
estudiados por 13 C RMN [92,93] . Fatty grado de saturación de ácido, ésteres de colesterol,
fosfolípidos, y contenidos triglicéridos se cuanti fi ed basado en la relación de las señales de carbono
únicas de cada molécula [92,93] . Se encontró correlación entre las cadenas de acilo graso
poliinsaturados disminuido y ésteres de colesterol con el aumento de la obstrucción [92] .
Phospholipidomics mediante el uso de 31 P RMN se ha empleado para demostrar alternancias en los
niveles de cerebro membrana de fosfolípidos de metabolitos en la enfermedad de Alzheimer (AD) [94]
. extracción Folch [95] se utilizó para obtener las muestras de fosfolípidos de los tejidos del cerebro,
que eliminó la interferencia de los otros que contienen fósforo metabolitos hidrófilos. Los picos de las
principales especies de fosfolípidos, incluyendo PC, PI, PS,
EDUCACIÓN FÍSICA, PE-plasmalógeno,

PENSILVANIA, esfingomielina, alkylacylpho-
sphatidylcholine, y difosfatidil glicerol se observaron claramente sin superposición. Las intensidades
relativas de cada especie fueron cuanti fi ed por integración del pico de resonancia individual. Se
encontró que los niveles cerebrales de AD de PE y PI se redujeron con aumento de la esfingomielina
y PE-plasmalógeno. Pearce et al. [96] usado 31 P RMN para determinar la composición de fosfolípidos
de cerebro esquizofrénico post mortem. El sistema disolvente compuesto de CDCl 3 mi CH 3 OH mi MARIDO
2 O (10: 4: 2) y 0,2 M Cs-EDTA a pH 6,0 se utilizó para realizar la resolución de línea de base de
fosfolípidos incluyendo PC, PI, PS, PE, LPE, alquilo, acilo-PE, PEplasmalogen, esfingomielina, y
alquilo, acil-PC. cuanti fi de cationes se llevó a cabo utilizando la superficie relativa de cada pico a las
Fig. 15. Gráfico de contorno de un 2D 1 MARIDO mi 31 espectro P TOCSY de una mezcla de lípidos con la asignación de la di ff señales áreas sumadas de todas las PLs. El contenido total de grupos de cabeza de PE para esquizofrénicos
Erent. Las bandas de colores representan la identificación lípidos fi ed durante la recolección de pico, y los picos individuales se fue signi fi cativamente inferior a la de los controles o controles psiquiátricos en la corteza frontal. Sin
destacan por puntos magenta. La anchura de las bandas de colores ilustra que las posiciones de los picos puede Florida fluctuar
embargo, no signi fi no puede di ff rencia fue encontrado por cualquier PL individual entre los tres
en el 31 P dimensión debido a sus formas lineales imperfectos o se superponen con los picos vecinos. Tanto los
grupos. Estos dos ejemplos muestran los procedimientos generales para usar 31 P RMN para los
desplazamientos químicos y la distribución de intensidad en el 1 dimensión H son observables importantes para un algoritmo de
estudios lipidomics. PLs que ser extraído de las matrices biológicas por el método de Folch [95] o
pico-picking fiable. La banda marcada de interfaz de usuario (no identificado fi ed) representa señales que no coinciden con
ninguna entrada en la base de datos. (Para la interpretación de las referencias de color en este fi leyenda figura, se remite al hexano frío: isopropanol (8: 2) sistema de solventes, seguido de evaporación y redisolución en un
lector a la versión web de este artículo.) Reproducido de [82] con permiso. disolvente apropiado para el análisis de RMN. Ambos contenidos relativos y absolutos se pueden
deducir a partir de estos datos. Otra ventaja es que 31 P RMN podía distinguir LPC según la posición
de la cadena de acilo graso en cualquiera sn 1 o sn 2 posiciones ( La Fig. 15 ), Lo que sugiere que
puede ser utilizado para la detección de tipo fosfolipasa tales como la fosfolipasa A1, A2, y B, debido
correlación entre la composición de lípidos y CAD. También sugiere que precisas lípidos a la especificidad fi ciudades de la fosfolipasa individuo [97] . Cabe señalar que una migración de acilo
biomarcadores deben ser exploradas para una específica fi enfermedad c antes lipidomics se puede puede ocurrir en disolventes próticos; particularmente en presencia de un detergente. También se
utilizar como enfoque diagnóstico preciso. puede utilizar para la detección de la fosfolipasa C y D que escinden fosfolípidos justo antes del
13 C RMN podría traer información complementaria para 1 H RMN para el diagnóstico de
grupo fosfato y el grupo de cabeza polar, respectivamente. Se ha encontrado que el defecto de
enfermedades lípidos relacionados. Especialmente, carbonos esqueleto de glicerol pueden ser fosfolipasas se asocia con di ff enfermedades Erent [98] como la enfermedad cardiaca coronaria [99] y
claramente resonaban a conocer la composición de glicérido y glicérido parcial. Mientras tanto, AD [100] . 31 phospholipidomics P NMRbased pueden ser por lo tanto una buena herramienta para el
aunque 13 mediciones C RMN son bastante insensibles, ya que se realizan como se “ directo ” mediciones, diagnóstico de enfermedades relevantes.
se pueden distinguir los grupos de ácido carboxílico de otros carbonilos. Estas ventajas se aplican
ampliamente para especí lipasa fi estudios sobre la ciudad
[51,52,91] , Que se puede utilizar potencialmente para la detección de defectos del metabolismo de
lípidos causadas por lipasas y pista más a la genómica. Además, la relación entre la saturación de
residuo de acilo graso, el contenido de ésteres de colesterol y obstrucción luminal en las lesiones
ateroscleróticas humanas era
Fig. 16. 1 MARIDO, 13 C heteronuclear simple coherencia cuántica (HSQC) pro lípidos fi l de M.
tuberculosis H37Rv. 1 MARIDO, 13 espectro C HSQC del 2: 1 (v / v) CDCl 3 / discos compactos 3 extracto
de OD de M. tuberculosis
H37Rv. reproducido de [10] con permiso.
53
Técnicamente, lipidomics basados en RMN es adecuado para el diagnóstico de enfermedades como método rápido y no destructivo para la investigación lipidomics. 1 H RMN, debido a su estrecho intervalo
exempli fi ed anteriormente, aunque los fallos como se ha señalado en la ref. de desplazamiento químico, complejos resultados de las muestras de lípidos en las señales solapadas y
[90] debe ser evitado. Sin embargo, el problema real es la débil correlación entre los marcadores más hace que el identi fi catión un poco dife-
biológicos y las enfermedades en lugar de los métodos analíticos. La utilización complementaria de 1 MARIDO,
fi culto. Sin embargo, cuando se comparan las muestras de lípidos de los tejidos normales y anormales,
13 DO, 31 lipidomics basados en RMN P serían útiles para la caza de los biomarcadores relacionados signi fi no puede di ff erences todavía se pueden observar.
con los lípidos de enfermedades. Además, de acuerdo con el di ff erences del desplazamiento químico, los cambios de tipos de lípidos
puede ser aproximadamente monitoreados. En adición,
1 H RMN es un método cuantitativo si la muestra es simple; Por ejemplo, el grado de insaturación, el
contenido de éster, y así sucesivamente. 13 C RMN tiene una gran gama de desplazamiento químico,
5. Análisis de los lípidos basados en RMN en la adulteración de alimentos
por lo que es más potente que 1 H RMN en lipidomics. Se puede resolver los triglicéridos y sus
eventos adulteración de los alimentos y la contaminación con los impactos y consecuencias metabolitos tales como mono-, di-glicéridos y ácidos grasos libres con claridad. Además, colesteroles
internacionales graves han ocurrido con cierta regularidad. di ff Erent métodos analíticos tales como también se pueden identificar fi ed. restos acilo grasos con di ff Erent dobles enlaces y un número de
infrarrojo cercano, infrarrojo medio, Raman; espectroscopía de RMN, así como una serie de técnicas carbonos (C18: 3, C18: 4, C20: 3, C20: 4, C20: 5, C22: 5, C22: 6) se pueden resolver fácilmente en el
de EM se han desarrollado para detectar la adulteración de alimentos y la contaminación, el cual ha intervalo de desplazamiento químico de alrededor de 172 - 174 ppm. lípidos polares, debido a su
sido revisado extensamente [101] . Como lipidomics basados en RMN es el foco del trabajo actual, la estructura única, se pueden identificar fi ed así por 13 C RMN. Sin embargo, debido a la baja
detección de la adulteración de alimentos relacionados con los lípidos mediante RMN es exempli fi ed abundancia natural de 13 C, la resonancia de 13 C no es sensible y se requieren por lo tanto más lípidos
aquí. Adulteración de aceite de oliva con aceite de avellana se dio cuenta basa en el di ff ácido Erent para obtener una mejor relación de ruido de la señal y más resultado en buena resolución. Este
linolénico, escualeno, y el contenido de ácido palmítico [102] . resonancias de protones en 0,297, inconveniente suele limitar su utilización como un rastro, pero los lípidos importantes no se puede
0,921, 0,982, y resolver y fi finalmente ignorado.
1.626 ppm y de carbono resonancias a 173,17, 173,15, 173,14, y

31 P RMN, la herramienta más poderosa para fosfolípidos cuanti fi catiónico, a diferencia 1 H RMN y 13 C
14.13 ppm fueron seleccionados de acuerdo a la singularidad de ácido linolénico, escualeno, y las
RMN, necesita sistema de disolvente especial para conseguir resonancias altamente resueltas y
resonancias de ácido palmítico. El arti desarrollado fi red neutral cial podría detectar la presencia de
cuanti fi espectros capaces, ya que contienen ambos restos acilo graso hidrófobos y de cabeza polar
aceite de avellana en aceite de oliva en porcentajes superiores a 8%, lo que es mejor que la mayoría
hidrófila. Detergentes tales como colato de sodio, SDS, y Triton X-100 han demostrado ser potente
de otras técnicas analíticas. La aplicación de técnicas de RMN en la caracterización y la adulteración
en los aceites de oliva han sido ampliamente explorada y revisado para la obtención de picos agudos y alta resolución. EDTA o CDTA sal como quelante es crítica para
la alta resolución. El sistema disolvente más ampliamente utilizado consiste en CDCl 3, MeOH, y
[103 - 105] . La regla básica es fi nd el di ff rencia de los adulterantes que se pueden identificar fi ed por Cs-EDTA (Cs-CDTA) y la temperatura, la concentración de lípidos, el pH, y la concentración de
técnicas de RMN. Como se muestra en Higos. 7 y 10 , quelante de una ff ect el desplazamiento químico de cada especie de fosfolípidos en gran medida. Por
13 C RMN podía distinguir glicéridos parciales y di ff ácidos grasos poliinsaturados (PUFAs Erent) en di ff lo tanto, es necesaria la optimización cuando se quiere ser o ff Ered un mapa completo de fosfolípidos.
Erent posiciones glicerol de cadena principal. La distribución de ω- 3 PUFA entre el sn 1,3 y sn 2 2D desarrollado recientemente 1 MARIDO, 31 P RMN pudo identificar y cuantificar los fosfolípidos, al
posiciones de lípidos musculares de salmón del Atlántico ( Salmo salar L.), caballa ( Scomber mismo tiempo, dando lugar a un gran progreso en lipidomics NMRbased. Para una RMN cuantitativa,
scombrus) y el arenque ( Clupea harengus) se obtuvo y se encontró que signi fi cativamente di ff Erent en hay algunas reglas generales que deben seguirse. No hay reacciones químicas deben ocurrir entre el
sn posición específica fi ciudad de los restos acilo graso de 22: 6 n-3, 20: 5 n-3 y 18: 4n-3 [106] . El di ff rencia
disolvente y analitos. La relación de la señal y el ruido debe estar en un rango adecuado y los giros
de graso regiodistribution resto acilo se encontró que era suficiente para distinguir fi especies sh [106] . debe estar totalmente relajado después de cada transitorio. RMN como un método prometedor para
Sin embargo, 13 C RMN fi toma de huellas digitales muestra dife- el estudio lipidomics está empezando y todavía necesita ser explorado ampliamente.
fi cultades en la clasificación de señales importantes en un espectro complejo y esto podría ser resuelto
mediante el uso de técnicas de reconocimiento de patrones adecuados [107] . Las bases de datos de
composición se han construido hasta que comprende más de 200 muestras de aceites crudos marinos
en 2011 [107] . Las ventajas más evidentes de 13 análisis C RMN en adulteración de los alimentos son: 1) Expresiones de gratitud
que es aplicable a los lípidos intactos no destructiva; 2) que proporciona información de clases de
lípidos y regiospeci fi distribuciones c; 3) que proporciona información acerca de sn 2 posición específica fi ciudades El apoyo financiero de la Facultad de Ciencias y Tecnología (GSST), Universidad de Aarhus y
de residuos acilo grasos en los triglicéridos; 4) que no necesita ningún enzimática o manipulación DLG (Dansk Landbrugs Grovvareselskab) Petróleo por Alimentos, Dinamarca se agradece.
química durante los análisis de modo que es menos tiempo [106107] . Aparte de la adulteración directa
del producto de lípidos, algunos otros adulteraciones de alimentos pueden ser realizados por RMN,
siempre que hay di ff erences entre las especies de lípidos. Autenticación de carne de vacuno en Estafa Florida ictos de interés
comparación con la carne de caballo se ha llevado a cabo utilizando 60 MHz de sobremesa 1 H RMN
basado en el di ff ácido linolénico Erent y contenido de colesterol [108] . Tres señales más importantes, Los autores declaran no competir fi interés financiero.
incluyendo bisallylic, OLE fi nic y el terminal CH 3 No se encontraron picos que son particularmente útiles
en este caso. En comparación con el 13 C método de RMN, los métodos basados en el ADN referencias
convencionales requieren pruebas separadas y más pasos para alcanzar el objetivo. 60 MHz 1 Se
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Jingbo Li un , • , Thomas Vosegaard segundo , Zheng Guo un , •

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Disponible en línea el 11 de septiembre de 2017

0163-7827 / © 2017 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

pero algunos estudios recientes han evitado la necesidad de cromatografía

reproducibilidad analítica Muy alto Justa

Muestra de pre-preparación Sencillo y rápido [37]

Análisis de muestras de tejido Sí, utilizando MAS RMN No

MARIDO MARIDO O MARIDO MARIDO

Figura 1. Estructura química de colesteroles y sus ésteres, triglicéridos.

2.1. lípidos no polares

Fig. 3. Estructura química de los esfingolípidos y sus derivados.

0,67 s 2 Colesterol (C18) 2 2.30 1 mi do MARIDO 2 CO - en cadena de acilo graso 1

2.31 - 2,32, 2,33 3

0,89 d 2 Colesterol (C21) 2 2.07 1 CH] CH mi do MARIDO 2 - alílico 1

1.10 2 Colesterol 2 4.14 - 4.16, 4.17 3 Triacyglyceride-C1 MARIDO 2

grupo en la cadena de acilo graso 3

conglomerados y análisis de componentes principales de 1 datos H RMN de los extractos de lípidos.

muy detalladas de los contenedores de desplazamiento químico

son revisados ​aquí.

Cálculo de la composición de ácidos grasos en los lípidos [41] .

n 3-contenido de ácidos grasos poliinsaturados (%) V = × 100%

n 6-contenido de ácidos grasos poliinsaturados (%) W =-× 100%

Debido a la baja sensibilidad de la RMN, el espectro se obtiene mediante la acumulación de

tiempos de relajación longitudinal ( T 1) de sn 1,3 y sn 2 picos de carbonilo de ácido

Cálculo de la composición de ácidos grasos en los triglicéridos.

Cálculo de éster metílico de ácido graso de los triglicéridos.

Fig. 5. los 13 espectro C RMN de la fracción lipídica total de un riñón normal.

11.90 un C-18, el colesterol 31.97 un C-7, C-8, el colesterol

24.92 un C-3, ácido graso / acilo 56.23 un C-17, el colesterol

28.06 un C-25, el colesterol 68.95 un C-2, residuos de glicerilo

3.4.1. disolventes a base de detergentes

átomo de fósforo son la esencial e ff ECTS, e incluso la concentración de detergente o de fosfolípido

31 P espectros de RMN fue desarrollado [82] . En su estudio, un algoritmo de pico-picking que se ha

reproducido de [63] con permiso.

espectros se hace referencia a externa 85% H 3 correos 4.

que una mezcla de CDCl 3, discos compactos 3 OD y D 2 O-EDTA (125: 8: 1 / v / v

molécula lipídica δ 1 MARIDO δ 13 do molécula lipídica δ 1 MARIDO δ 13 do

Triglicéridos, C2 de 5.24 69 trehalosa acilados, C1 segundo 5,05 94,3

esqueleto de glicerol, 4,47, 4,22 63,78 grupo de cabeza, 4,07 63,08

el anillo de piranosa, respectivamente, como se describe por [113] .

EDUCACIÓN FÍSICA, PE-plasmalógeno,

H37Rv. reproducido de [10] con permiso.

0,921, 0,982, y resolver y fi finalmente ignorado.

1.626 ppm y de carbono resonancias a 173,17, 173,15, 173,14, y

[4] J. Nordbäck, E. Lundberg, WW Christie, la separación de clases de lípidos de marina

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son revisados aquí.