CENTRO UNIVERSITARIO DE LOS

LAGOS

LICENCIATURA EN ING. BIOQUÍMICA

BIOLOGÍA CELULAR 2018A

PRÁCTICA: Observación de células procariotas (bacterias)

Objetivo:

Aplicar técnicas sencillas para observación e identificación de la forma de células

bacterianas.

Introducción

Las bacterias son organismos procariotas, que carecen de núcleo verdadero,

una característica que las diferencia de eucariotas, por ejemplo células vegetales
y animales. Son unicelulares, visibles sólo a través del microscopio y constituyen
uno de los tres dominios en que se dividen los seres vivos. Las bacterias son
variables en lo que se refiere a la forma de obtener energía y alimento; se
desarrollan en casi todos los ambientes, incluyendo el organismo humano.

Una forma de clasificación es según su morfología y se clasifican en:

 Coco: es un tipo morfológico de bacteria. Tiene forma más o menos

esférica (ninguna de sus dimensiones predomina claramente sobre las
otras).
 Bacilos: son bacterias que tienen forma de bastón cuando se
observan al microscopio. Los bacilos se suelen dividir en:

1. Bacilos Gram positivos: fijan el violeta de genciana (tinción

de Gram) en la pared celular porque carecen de capa de
lipopolisacáridos.

2. Bacilos Gram negativos: no fijan el violeta de genciana

porque poseen la capa de lipopolisacárido.

 Vibrio: es un género de bacterias incluidas en el grupo de las

proteobacterias. Varias de las especies de Vibrio son patógenas,
provocando enfermedades del tracto digestivo, en especial Vibrio cholerae,
el agente que provoca el cólera, y Vibrio vulnificus, que se transmite a
través de la ingesta de algunos alimentos.
  Espirilos: son bacterias flageladas de forma helicoidal o de espiral.
Se desplazan en medios viscosos. Su diámetro es pequeño, lo que hace
que puedan atravesar las mucosas; por ejemplo Treponema pallidum que
produce la sífilis en el hombre. Son más sensibles a las condiciones
ambientales que otras bacterias, por ello cuando son patógenas se
transmiten por contacto directo (vía sexual) o mediante vectores,
normalmente artrópodos hematófagos

Materiales y Método

Preparaciones permanentes de bacterias (proporcionada por el profesor)

Portaobjetos

Cubreobjetos

1 Caja de petri

Piseta con alcohol

Aceite de inmersión

Mechero

Asas de siembra

Pinzas

Microscopio óptico

Preparaciones permanentes de bacterias

Muestras por equipo:

1 Muestra de vinagre de alimentos encurtidos

Cotonetes estériles

1 Muestra de vegetal no desinfectado

Procedimiento:
 1. Se llevará a cabo la observación de preparaciones permanentes de
bacterias que serán proporcionadas por el profesor. Utilice inicialmente los
objetivos 10X y 40x; para la observación de detalles celulares agregue una
gota de aceite de inmersión sobre el cubreobjetos de la muestra y realice la
observación con el objetivo de 100X.

2. Al terminar la observación de la preparación permanente, proceda a

realizar el frotis correspondiente de cada una de las muestras, iniciando con
la muestra de vinagre de alimentos encurtidos, para ello, esterilice el asa de
siembra en el mechero, deje enfriar y con ella tome un poco de la muestra
(fondo del recipiente). Al frotis así realizado se le añade una gota de
colorante azul de metileno y una gota de etanol para evitar la saturación de
colorante o si éste está concentrado. Se coloca el cubreobjetos
correspondiente, se seca el exceso de colorante y se observa la muestra
bajo el microscopio utilizando los objetivos 10X y 40X. Para el uso del
objetivo de 100X debe utilizar aceite de inmersión).

3. Proceda a realizar los frotis correspondientes a las otras muestras.

Resultados
Anote las observaciones correspondientes para cada una de las muestras
observadas. Incluya dibujos esquemáticos o imágenes que expliquen los
resultados obtenidos.

Conclusiones Cuestionario

1.- Describe el procedimiento de tinción Gram y su importancia en el estudio de

células bacterianas.

1. Se extiende la muestra recogida (que suele ser líquida o viscosa) en un

porta de cristal, y se deja secar al aire.
2. Se aplica metanol al porta; así, las bacterias quedan pegadas en la
superficie.
3. Se añade violeta de genciana, un colorante que tiñe todas las bacterias
de color púrpura. Se debe dejar durante un minuto para que haga
efecto.
4. Se lava la muestra coloreada con agua y se añade alcohol-acetona para
desteñir las bacterias que se deben teñir con el violeta de genciana. Es
la parte más importante de la prueba, ya que si se deja demasiado
tiempo se desteñirían todas las bacterias. Después se lava de nuevo
con agua para eliminar el alcohol.
5. Se añade fucsina, otro colorante que tiñe de rosa las bacterias que no
se han teñido de color púrpura. Así se pueden observar al microscopio,
aunque serán gramnegativas.
6. El microbiólogo estudia la muestra con un microscopio e identifica
bacterias teñidas.

2.- Menciona los principales grupos de bacterias de acuerdo a su morfología.

Antes de que se comience a utilizar el secuenciamiento del ADN, las bacterias

eran clasificadas basándose en sus formas y en sus propiedades bioquímicas. Al
clasificarlas de acuerdo a su forma o a su estructura morfológica, la mayoría de
las bacterias pertenecen a las tres formas básicas y principales: barras, esferas y
espirales. Los otros dos tipos, menos comunes, son los de rickettsia y
mycoplasma.

3.- ¿Qué tipo de baterías son las que participan en la producción del vinagre?

El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la

fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación.
La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético,
principalmente Acetobacter aceti, aunque también Gluconobacter. Se trata de
bacilos rectos con flagelos polares.

4.- Describa la función de bacterias que constituyen la flora bucal bacteriana

normal y ejemplos de éstas.
La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las
condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen
abundar bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfologías:
espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.

6.- Mencione ejemplos de bacterias presentes en alimentos vegetales no

desinfectados.

Entre las bacterias alterantes más comunes de las hortalizas se

encuentran; Escherichia coli, Salmomella, Clostridium, Listeria y Bacillus
cereus.

En estas fotografías se muestran las imágenes, primero del portaobjetos con una gota
del vinagre de los alimentos encurtidos. Posteriormente se muestran las células
animales que se pudieron observar en donde es visible la estructura de la célula, se
observa la membrana plasmática y parte del núcleo de la célula.
En esta imagen se muestran estos filamentos que se encontraban también
en el vinagre los cuales, como se muestra en la imagen, también se tiñeron
del pigmento color azul.