Establecimiento de organogénesis directa a

partir de hoja de Viola odorata

Andrea Aluisa1, Stefania Llumiquinga1, Bryan Mangui1, Andrea Morillo1, Santiago Salazar1
Departamento de 1Ciencias de la Vida y de la Agricultura, Ingeniería en Biotecnología, Universidad de las
Fuerzas Armadas – ESPE, Sangolquí, Ecuador
acaluisa@espe.edu.ec, msllumiquinga@espe.edu.ec, bamangui@espe.edu.ec,
aemorillo@espe.edu.ec, sasalazar7@espe.edu.ec

RESUMEN

Palabras clave:

ABSTRACT

Key words:

INTRODUCCIÓN plantas. Así mismo menciona que la

El género Viola L. originario de África y Europa,
está ampliamente distribuido en el Nuevo y Viejo
Mundo, principalmente en regiones templadas, y
son comúnmente conocidas como "Violetas"
(Sanso, Xifreda, & Colasante, 2005). Una de las
especies pertenecientes a este género es Viola
adorata, una hierba perenne con tallos aéreos no
ramificados, cortos y largos estolones. Además de
hojas orbiculares a anchamente ovadas, con una
lámina foliar de 3-4,5 cm de longitud por 3,2-5 cm
de ancho (Arango, 2004). Esta planta posee
flavonoides, aceite esencial, mucilagos, saponinas
y alcaloides que le confieren propiedades
curativas por ende sus raíces, flores y hojas son
medicinalmente utilizadas (Botero, 2011).
Dentro de las técnicas de cultivo in vitro utilizadas
se alude a la organogénesis directa e indirecta, la
embriogénesis somática directa indirecta y la
proliferación de yemas axilares. Especialmente en
la vía de la organogénesis, varios tipos de
explantes han sido utilizados para la regeneración
directa de plantas (García, Collado, Bermúdez,
Veitía, Torres, & Romero, 2008). Según Li et al.
(2015), nódulos cotiledonarios, hipocótilos, hojas,
tallos con segmentos nodales han sido reportados
como explantes efectivos para muchas especies de
organogénesis directa es la regeneración de las
plantas, excluyendo la fase de inducción del callo,
que si está presente en la indirecta. Domínguez
(2008), indica que la regeneración in vitro se ha
alcanzado a través de la obtención de brotes a
partir de meristemos auxilares localizados en el
segmento basal de las plantas, o bien a través de
organogénesis o embriogénesis somática indirecta,
es decir, a partir de tejido calloso generado
también in vitro.
El cultivo in vitro de plantas medicinales
conforman una fuente inmediata de material
vegetal uniforme y libre de contaminación
microbiana y química para la caracterización
bioquímica e identificación de compuestos
activos. Por tanto, su micropropagación vegetal ha
sido exitosamente utilizada en la conservación de
diferentes especies medicinales y en la extracción
de metabolitos secundarios para el desarrollo de
medicamentos (Cardoso, Naranjo, Atehortúa, &
Blair, 2011).
Dada la importancia medicinal que tiene el cultivo
de Viola odorata, el objetivo del presente trabajo
fue evaluar la capacidad de regeneración de brotes
del tejido diferenciado de la hoja violeta vía
organogénesis directa.

1
 MATERIALES Y MÉTODOS RESULTADOS

Preparación de la sala de siembra Una vez transcurridos los 21 días se evaluó el

La sala de siembre fue desinfectada con limpiador comportamiento del material vegetal. En la
de pisos Kalipto. Las cámaras de flujo fueron tabla 1 se tiene que los explantes expuestos a
desinfectadas con solución de alcohol al 90%. una concentración de 0.7% de NaClO por 10
Una vez fueron ingresados los materiales de minutos presentan contaminación en ambos
trabajo a las cámaras de flujo, estos fueron frascos lo que se corrobora en la figura 1, en
expuestos a luz UV durante 20min. Luego el flujo
donde no se observa cambio de coloración del
de aire de las cámaras de fue activado por 15 min.
medio.
Desinfección de las muestras
Tabla 1. Resultados de crecimiento de brotes a
Hojas jóvenes y completas de una planta de partir de hojas de violeta (Viola adorata) a
violeta (Viola odorata), fueron cortadas [NaClO] de 0.7% por 10 minutos.
incluyendo el peciolo. Las hojas fueron lavadas
Nombre: Violeta Fecha de Fecha de
con agua corriente retirando tierra e impurezas.
siembra: 16 evaluaci
Luego las hojas fueron sumergidas en solución de de junio ón: 07 de
detergente 1% durante 15 min, en agitación. Julio
Seguido por dos lavados con agua destilada y un
lavado con agua estéril. A continuación, las hojas N° Expla Contamin Parte aérea Otras
fueron sumergidas en solución con cloro 0,7% Fras nte ación caracterí
co (Hongo o N° Longi sticas
más 3 gotas con Tween 20 durante 10 min, en brot tud
bacteria) típicas
agitación. Por último, las hojas fueron ingresadas es (mm) (oxidació
a la cámara de flujo laminar donde fueron lavados n,
tres veces con agua estéril. muerte,
cambio
Siembra de los explantes de color)
Los materiales fueron desinfectados con alcohol 1 Envés No 0 - Se
90% y flameados. Los explantes se obtuvieron observó
cortando cuadrados de 1 cm de lado de tejido sano 2 Haz Hongo 0 - oxidación
de hojas de violeta, incluyendo a la nervadura en los
3 Envés No 0 -
principal. Cuatro explantes fueron sembrados en explante
4 Haz No 0 - s
cada frasco con medio de cultivo usando 20 uM
después
BAP y 0.54 uM ANA como fitoreguladores. En del día
5 Envés No 0 -
cinco frascos se sembró los explantes con el haz 15
sobre el medio de cultivo y en otros cinco frascos 6 Haz Bacteria 0 -
los explantes fueron sembrados con el envés sobre
7 Envés No 0 -
el medio de cultivo. Los frascos fueron cerrados
con láminas de plástico y ligas. Los explantes se 8 Haz Hongo 0 -
incubaron con luz y se evaluó la contaminación y
organogénesis semanalmente. 9 Envés No 0 -

10 Haz No 0 -

2

Figura 1. Explantes de hojas de violeta (Viola
adorata) tratados a [NaClO] de 0.7%.
Fotos tomada por: Andrea Morillo
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFÍA
Arango, S. (2004). Guía de plantas Medicinales
de uso común en Salento, Colombia .
U.S.A: Murray Print Shop, Inc.
Botero, H. (2011). Plantas medicinales .
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Cardoso, O., Naranjo, E., Atehortúa, L., & Blair,
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García, L., Collado, R., Bermúdez, I., Veitía, N.,
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Sanso, M., Xifreda, C., & Colasante, M. (2005).
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