EXUDADO FARINGEO

Objetivos

• Identificación de los microorganismos causantes de las infecciones respiratorias más

comunes de tipo bacteriano mediante el empleo de la técnica de laboratorio conocida como
exudado faríngeo.

Introducción

El estudio del exudado faríngeo es importante para el diagnóstico de ciertas infecciones del
aparato respiratorio, no obstante el aislamiento e identificación de microorganismos
patógenos en estas regiones suele presentar algunos problemas debido a la existencia de una
flora normal abundante que incluye aproximadamente 200 especies, muchas de ellas
consideradas oportunistas con potencial patógeno e incluso patógenos definidos; por lo que
el esquema de aislamiento debe incluir tanto microorganismos gramnegativos como
grampositivos, además de hongos.

Para la obtención de buenos resultados, es recomendable la toma de muestra antes del inicio
del tratamiento antimicrobiano y es de vital importancia la adecuada toma de la misma, para
lo cual se recomienda sea de los sitios que tengan mayor afectación como los que presentan
enrojecimiento o pus (en el caso de la orofaringe), tomando precauciones como la de no
contaminar la muestra tocando lengua, labios u otro anexo de la cavidad bucal3.

La toma de muestra deberá realizarse en el laboratorio, pero si no fuera posible, entonces

deben emplearse medios de transporte como el medio Stuart, que aseguran la viabilidad de
los microorganismos hasta que sea posible la siembra en los medios adecuados.

Microorganismos que se aíslan con mayor frecuencia en la faringe de personas sanas

Streptococus beta hemolyticus del tipo A.

Streptococus alfa hemolítico.
Branhamella catarhalis.
Neisserias.
Staphylococcus epidermidis.
Staphylococcus aureus.
Haemophylus haemolyticus.
Haemophylus influenzae.
Diplococos pneumoniae.
Bacilos difteroides.
Bacilos coliformes (Gram -).
Levaduras (Cándida albicans).
Debe tenerse presente que la importancia de los microorganismos como responsables de una
infección está relacionada con su abundancia en el exudado que se estudia.

Material
Hisopos de algodón estériles
Asa bacteriológica
Mechero de Bunsen
Tubo con caldo cerebro corazón (BHI)
Placa con Agar sangre
Placa con Agar S110
Placa con Agar McConkey
Tubo con Agar Biggy

Procedimiento

Humedecer dos hisopos estériles en caldo cerebro corazón y pedir al paciente que abra la
boca.
Deprimir la lengua con un abatelenguas estéril.
Juntando ambos hisopos, proceder a la toma de muestra, realizando un raspado suave de
cualquier área que manifieste signos de inflamación, exudados o úlceras procurando no
tocar la lengua, labios ni los otros anexos de la cavidad bucal del paciente.

Con uno de los hisopos, realizar un frotis y proceder a teñirlo con la técnica de Gram.
Con el otro hisopo, realizar la descarga del inóculo en los diferentes medios de cultivo.
Con ayuda de un asa bacteriológica, realizar la distribución del inóculo empleando la técnica
de estría cruzada.
Incubar los diferentes medios por un periodo comprendido entre 24 y 48 horas a 37°C.
Es importante que las placas de agar sangre se observen a las 24 horas para observar los
patrones de hemólisis.
Reportar la morfología colonial y guardar los cultivos en refrigeración para la siguiente
sesión.

Medios de cultivo empleados en exudado faringeo

Tinción de Gram
1.- Se hace un frotis delgado del material a estudiar y se deja secar al aire.
2.- Se fija la preparación pasándola un par de veces a través de la flama del mechero. De
esta forma se evita que sea lavada durante la tinción.
3.- Cubrir la superficie del frotis con solución de cristal violeta por un lapso de un
minuto.
4.- Enjuagar con agua destilada.
5.- Cubrir la superficie del frotis con la solución de yodo de Gram, dejando que esta
actué por un lapso de un minuto.
6.- Enjuagar con agua destilada.
7.- Cubrir la superficie del frotis con la solución de alcohol- cetona por un lapso de 30
segundos.
8.- Enjuagar con agua destilada.
9.- Cubrir el frotis con la solución de safranina por 15 segundos.
10.- Enjuagar con agua destilada.
11.- Secar al aire.
12.- Observar al microscopio a 40x y 100x.

VIII.- CUESTIONARIO

1.- Definir: Microorganismos inorgánicos simples, caldo, micro aerofilas, medios

selectivos, inhibir, vacunas.
Microorganismos inorgánicos simples:

En la actualidad, se conocen conjuntamente con este nombre varios grupos de seres

microscópicos, de nivel celular -bacterias, hongos, algas microscópicas, protozoos- o
subcelular -los virus-, distintos en su forma, en su estructura y en sus sistemas
biológicos. El estudiarlos todos en una disciplina única, la Microbiología, está
condicionado por la carencia de una ordenación celular de tejidos, por sus relaciones
ecológicas, por una metódica investigadora bastante semejante y, por lo que se refiere a
los virus, por su carácter microscópico.

Caldo de cultivo:

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de
10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de
oxígenos adecuados, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas
requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del
cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de
extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.

Micro aerofilas:

Son aquellas que necesitan oxigeno para desarrollarse.

Medios selectivos:

Favorecen el aislamiento de un determinado grupo de microorganismos mediante la

obtención de colonias (cepas puras).

Inhibir:
Detener o restringir el curso de algo o un proceso.

Vacunas:
Las vacunas son productos biológicos obtenidos a partir de gérmenes que pueden
producir enfermedades (bacterias o virus). Están compuestas por esos mismos gérmenes
vivos pero atenuados (debilitados), muertos o por algunas partes de ellos. Además
pueden contener otros componentes químicos o biológicos que faciliten su conservación
o aumenten su eficacia. En niños sanos no producen enfermedad, sino que estimulan sus
defensas naturales para protegerles de la infección.

2.- ¿Cómo deben almacenarse los medios de cultivo?

En medios de cultivos deshidratados deberán conservarse en lugar seco, protegidos
contra la luz, a una temperatura de 15º C hasta los 30ºC y envases siempre bien
cerrados.

3.- ¿Cuáles son las condiciones físicas que se deben tener en cuenta para la preparación
de medio de cultivo con la finalidad del crecimiento de microorganismos?
A la hora de diseñar un medio de cultivo no sólo hay que tener en cuenta los nutrientes
sino también las condiciones físicas que permitan el crecimiento de los
microorganismos.

1.- Aporte de nutrientes

La cantidad y naturaleza de los nutrientes en un medio de cultivo viene determinada por
el rendimiento de un producto en especial además de los requerimientos nutricionales
del microorganismo.
2.- pH
Un microorganismo puede alterar el pH del medio de cultivo como resultado de las
sustancias producidas por el propio microorganismo; por ejemplo:
Utilización de carbohidratos ----> Producción de ácidos orgánicos ----> Acidificación

Catabolismo de proteínas ----> Producción de materiales nitrogenados ---->

Alcalinización

Estos cambios pueden llegar a ser tan grandes que inhiban el crecimiento del
microorganismo. Estos cambios se pueden prevenir controlando el pH mediante sistemas
tampón. Uno de los más utilizados en microbiología es la combinación de KH2PO4 y
K2HPO4 tamponando el medio a un pH de aproximadamente 6,8.

3.- Necesidades de gases

Los gases principales que afectan al desarrollo microbiano son el oxígeno y el dióxido
de carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxígeno libre
clasificándose en cuatro grupos:
i.- Aerobias: bacterias que se desarrollan en presencia de oxígeno libre.
Ii.- Anaerobias: bacterias que se desarrollan en ausencia de oxígeno libre.
Iii.- Anaerobias facultativas: bacterias que se desarrollan tanto en presencia como en
ausencia de oxígeno libre.
Iv.- Microaerófilas: bacterias que crecen en presencia de pequeñas cantidades de oxígeno
libre.

Para desarrollar bacterias aerobias se incuban los medios de cultivo en agitación

constante o introduciendo aire estéril en el medio.

Los anaerobios estrictos son muy sensibles al O2 por lo que se debe evitar la exposición
de estos microorganismos al O2. Se puede obtener un ambiente de anaerobiosis por los
siguientes métodos:

A.- Agregando al medio de cultivo un compuesto reductor, como es el tioglicolato

sódico, para disminuir el contenido de O2.

B.- Quitando el O2 por procedimientos mecánicos y reemplazándolo por N2 o CO2.

C.- Mediante reacciones químicas dentro del recipiente que contiene el medio de cultivo
inoculado para combinar el oxígeno libre con otro compuesto. Por ejemplo: al encender
una vela se transforma el oxígeno en dióxido de carbono.

4.- Suministro de luz

Los organismos fotosintéticos deberán ser expuestos a una fuente de iluminación ya que
la luz es su fuente de energía. Esta fuente de iluminación no debe plantear problemas de
variación de temperatura, por lo que suelen usarse lámparas fluorescentes con un
desprendimiento mínimo de calor.

5.- Control de la temperatura

El desarrollo de las bacterias depende de reacciones químicas, y la velocidad con que se

efectúan estas reacciones está influída por la temperatura, por lo que la temperatura
puede en parte determinar la velocidad de crecimiento de los microorganismos. Cada
especie microbiana posee una temperatura óptima de crecimiento clasificándose según
esto en los siguientes grupos:

i.- Psicrófilas: capaces de desarrollarse a 0° C o menos. Su temperatura óptima es

alrededor de los 15° C.
ii.- Mesó filas: crecen mejor entre 25 y 40° C.
iii.- Termófilas: crecen mejor entre 45 y 60° C.
6.- Otros requerimientos
Halófilas: bacterias que para su crecimiento requieren altas concentraciones de sal (10 -
15%). Son aquellas bacterias aisladas del mar y ciertos alimentos.

Otras bacterias, como las aisladas en las fosas marinas, requieren presiones superiores a
las normales.

BIBLIOGRAFÍA

http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html

http://www.mailxmail.com/curso-analisis-clinicos/medios-cultivo