resistencia, el cambio climático, la inestabilidad civil y social y displacement.

1 de la población la vía
de degradación de la hemoglobina en falciparum del Plasmodium se ha explotado con éxito como
diana terapéutica de cloroquina y otras 4-aminoquinolines. Como el parásito catabolizes
hemoglobina humana para obtener los nutrientes de aminoácidos, el producto hemo es
desintoxicado por polimerización a hemozoin.2 que cloroquina interactúa con el anillo de porfirina
de la hemo via p – p apilamiento del anillo de quinolina y electrostático las interacciones entre la
cadena lateral de amonio cargado de la droga y de la carboxylates.3 haem acumulación de la
haem:drug complejo dentro del eritrocito, en definitiva, envenena el parásito. Resistencia a este
mecanismo de acción ha demostrado ser difícil inducir. Resistencia a la cloroquina, que se
convirtió relativamente lentamente y solamente después de la exposición humana considerable,
es el resultado de mutaciones puntuales en un parásito transportador pfcrt.4 amodiaquina (ADQ,
Fig. 1) es activa contra cepas resistentes a la cloroquina de P. falciparum. Sin embargo, su uso ha
sido severamente restringida por hepatotoxicidad y agranulocitosis en humans.5,6 este parece ser
el resultado de bioactivación para formar un metabolito reactivo de quinona imina que se une
irreversiblemente a macromoléculas celulares y puede llevar a toxicidad, así como reacciones de
hipersensibilidad de cuyo. IgG se han detectado anticuerpos en pacientes con reacciones adversas
a ADQ.7,8 ADQ es un pro fármaco. Des-etilo amodiaquina (DEA, Fig. 1E) es una potente contra la
malaria y se ha demostrado para ser responsable de la mayoría de la eficacia atribuida al ADQ
therapy.9 recientemente, análogos de la ADQ se han descrito que reducen el potencial para la
formación de reactivos metabolitos a través de la vía de quinona imina conservando potente
antipalúdico activity.10 Isoquine (ISO, Fig. 1B) es un análogo ADQ isomérica, con la posición de los
40-hidroxilo y la cadena lateral de Mannich intercambian. Oxidación de la quinona imina no es
posible en esta configuración. ISO, isoquine des-etilo (DEI, Fig. 1) y N-tert-butyl isoquine (NTBI, Fig.
1A) retener potente actividad antimalárica in vitro actividad contra cepas de llevar determinantes
de resistencia a la cloroquina y similar actividad en modelos preclínicos de la malaria infección tras
la administración oral. Como parte de la optimización de plomo finales de estos análogos ADQ
prometedores, hemos estudiado su farmacocinética después de la administración intravenosa y
oral solo para el ratón, rata, perro y mono. Unión a proteínas y células sanguíneas asociación
fueron investigados en el plasma o sangre entera de especies preclínicas y humano, in vitro. Las
rutas y tasas de metabolismo fueron estudiadas en animales y microsomas hepáticos humanos y
hepatocitos. Y tiempo-dependiente de la concentración del citocromo humano P450 inhibición,
permeabilidad y transporte activo se investigan in vitro. Estos estudios han permitido la
comparación detallada del revelado de estos conductores y, en última instancia, la selección de
NTBI como el análogo más prometedor para la progresión en investigación clínica y estudios de
evaluación de seguridad definitiva. MÉTODOS químicos NTBI, ISO, DEI y DEA se sintetizaron en el
Departamento de química de la Universidad de Liverpool. Estudios seleccionados con NTBI y ISO
utilizan materiales suministrados por el desarrollo químico de GlaxoSmithKline. ADQ fue adquirido
de Sigma (St. Louis, MO). Mixta género humanos microsomas hepáticos obtenidos de XenoTech
LLC Figura 1. Estructura de N-tert-butyl isoquine (NTBI, Panel A), isoquine (ISO, Panel B), isoquine
des-etilo (DEI, Panel C), amodiaquina (ADQ, Panel D) y desethyl amodiaquina (DEA, Panel E). DOI
10.1002/jps diario de ciencias farmacéuticas, VOL. 98, núm. 1, enero de 2009 comparativa DMPK
de novela 4-AMINOQUINOLINE antipalúdicos 363 (Kansas City, KS). Hepatocitos de macho ratón
CD1, hombre rata Sprague-Dawley, hombre perro Beagle, macho monos cangrejeros y humanos
eran de Cellzdirect (Dallas, TX). Medio básico Guillermo E y balanceado sal solución (HBSS de
Hank) eran de secundaria Biosciences (Lenexa, KS). Los microsomas prepararon de linfoblasto
humano las células individuales recombinante humana CYP450 isoenzimas CYP1A2, CYP2C8,
CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, y CYP3A4 se obtuvieron de BD Gentest (Woburn, MA). Sistemas de
Transwell1 de doce multiwell (catálogo no. 3401; tamaño de poro de 0,4 mm, superficie de 1.134
cm2) se obtuvieron de Corning, Inc. (Corning, NY). GF120918A (sal de ácido clorhídrico) y
Metanosulfonato de amprenavir se prepararon en GSK. Modificado Eagle Medium (DMEM de
Dulbecco) con glutamina, suero bovino fetal 10%, 50 U/mL de penicilina y estreptomicina 50
mg/mL fueron de Invitrogen (Grand Island, NY). Amarillo Lucifer era de Sigma. Encapsin1 compró a
Cerestar USA, Inc. (Hammond, IN). Otros productos químicos y reactivos fueron de reactivo de
laboratorio estándar grado o mejor. Cría de animales y manejo en vivo estudios fueron aprobados
por el Comité de uso y cuidado institucional de los animales. Jaulas de machos Sprague-Dawley
ratas fueron obtenidas de Charles River Laboratories (Kingston, NY) y alojadas individualmente en
policarbonato en habitaciones de flujo de aire unidireccional (25

28C, humedad relativa 50

10%, el ciclo de luz/oscuridad de 12-h). Dieta extruido #5 L 35 de Purina Mills (St. Louis,
MO) era disponible ad libitum. Ratones machos CD-1 fueron obtenidos del laboratorio
Charles River (Raleigh, Carolina del norte) y ocupa como las ratas. Certificado roedor
Chow #5001 de Purina Mills fue disponible ad libitum. Perros Beagle fueron obtenidos de
granjas Marshall (North Rose, NY) o productos de investigación de Covance (Cumberland,
Virginia), grupo ubicado hasta colocar en estudio, a continuación, alojados individualmente
en jaulas de acero inoxidable en una sala de ambiente controlada (C 18 – 298; relativa 30 –
70% de humedad, ciclo de luz/oscuridad de 12-h). Los perros recibieron 2.5 – 3 tazas
certificado canino dieta #5007 de Purina Mills una vez al día. Hombres monos cangrejeros
fueron obtenidos de primates productos Incorporated (Miami, FL) o Covance investigación
Products, Inc. (Alice, TX) y alojados individualmente en jaulas de acero inoxidable en un
ambiente controlado (18 – 298C, humedad relativa 30-70%, 12 h luz / ciclo oscuro). Cada
mono recibió 6 a 8 galletas certificado Primate Chow #5048 de Purina Mills dos veces al
día, además de dos piezas de los productos. En todos los casos, el agua del grifo filtrada fue
disponible ad libitum. En todos los estudios y para cada etapa de estudio en su caso, los
animales se mantuvieron en ayuno durante la noche (12-14 h) y el alimento fue
proporcionado postdose 4 h. Los animales se aclimataron adecuadamente al manejo de
procedimientos y sistema de seguridad para dispositivos antes de estudiar. Farmacocinética
de NTBI treinta ratones machos (30 g) recibió NTBI (6 mg/kg, 5 mL/kg) por la inyección
del bolo en la vena de la cola. Veintisiete (en ayunas) recibió NTBI (12,6 mg/kg, 10
mL/kg) por sonda oral. Terminal se recolectaron muestras de sangre (9 0.4 mL) por
punción cardiaca tras anestesia en una cámara de CO2. Tres ratas macho (300 – 360 g)
cánulas implantadas quirúrgicamente en la vena femoral y la arteria como describió
previously.11 los animales recibido NTBI (14 mg/kg, 10 mL/kg) por infusión de 60
minutos iv y 48 h más tarde recibió NTBI (27 mg/kg, 20 mL/kg) por sonda oral (en ayunas)
en un diseño de estudio cruzado. Se recolectaron muestras de sangre (14 0.15 mL) para
hasta 24 h después de la dosificación. El perro (varones n ¼ 3, 9-14 kg) y mono (n ¼ 3, 2.5-
5 kg) estudios emplearon un diseño cruzado con un período de lavado de 13 días entre
dosis. Los perros recibieron NTBI 60 min infusión en una vena cefálica (7 mg/kg, 4 mL/kg)
o por sonda oral (30 mg/kg, 6 mL/kg). Del mismo modo, los monos recibidos NTBI dosis
de 6 mg/kg iv (4 mL/kg) o 26 mg/kg por vía oral (6 mL/kg). Aceptar como se ha señalado,
todas las formulaciones para la administración iv y oral fueron 2% DMSO (v/v) y 20%
(v/v) Encapsin1 en solución salina isotónica (iv) o agua (oral). Muestras de sangre se
recolectaron en tubos con heparina y en hielo picado con prontitud después de la
recolección. Plasma fue colectado por centrifugación, snap congelados y almacenados a
unos 808C antes del análisis. Los estudios realizados para evaluar la linealidad
farmacocinética de NTBI oral, ratones machos recibieron dosis de 50, 100 o 300 mg/kg,
machos y ratas hembras recibieron dosis de 10, 50, 150 ó 300 mg/kg y 1 macho y 1 hembra
mono recibieron dosis crecientes de 60 , 90 y 180 mg/kg por sonda oral (día 1, 4 y 8). Estas
formulaciones fueron celulosa acuosa 1% (p/v) (10 mL/kg) y emplearon la sal di-HCl.
Muestras de sangre fueron tomadas para un máximo de 24 h (diseño del estudio compuesto,
n 3 ¼ por cada punto de tiempo en el ratón solamente) luego procesadas y almacenadas
como se describió anteriormente. Estudios de ISO y DEI en ratón, rata, perro o mono,
aunque no diario de ciencias farmacéuticas, VOL. 98, núm. 1, enero de 2009 DOI
10.1002/jps 364 DAVIS ET al describieron en detalle, fueron realizados utilizando modelos
animales, formulaciones y diseños de los estudios que eran en gran parte las mismas que las
descritas para el NTBI. Datos de concentración-tiempo de análisis farmacocinéticos fueron
analizados por métodos de noncompartmental utilizando el programa WinNonlin
Professional (versión 4.1) de la computadora en gran medida como la descrita
previously.11 estudio de perro en el NTBI, la fase de eliminación terminal después de iv la
administración no fue bien caracterizada debido a la sensibilidad del ensayo. Por lo tanto, la
vida media de la etapa oral se utilizó para estimar los parámetros farmacocinéticos de la iv
sesión de la dosis. Volumen y separación de la sangre se estimaron desde parámetros de
plasma con sangre del mismo animal al cociente de plasma para estudios de perro y mono
NTBI (suponiendo que la concentración y partición de sangre independientes del tiempo).
Para estimar la sangre plasmática, proporción de ex vivo, en 1 y 3 h postdose para el iv y
oral dosificación de sesiones, sangre y plasma se determinaron las concentraciones usando
curvas de calibración para la matriz correspondiente. Sangre a los cocientes de plasma
independiente en estudios in vitro fueron utilizados para estimar parámetros de PK de la
sangre de los estudios de roedores. Para predecir la sangre humana CL, Vss y t1/2,
alométricos métodos análogos a los descritos anteriormente fueron employed.11 sangre
partición la partición de sangre in vitro de NTBI se determinó en sangre fresca de ratón,
rata, perro, mono y humano (solo donante) en concentración de 1 mg/mL (final 1% (v/v) de
metanol) de objetivo. Sangre con picos muestras fueron mezcladas suavemente luego se
incubó a 378C durante 30 minutos se tomaron alícuotas de sangre, mezclado con un
volumen igual de agua, rápido congelado y almacenado a aproximadamente 808C antes del
análisis. La sangre restante se centrifugó para recolectar plasma. Proteína se precipitó con
acetonitrilo conteniendo interno estándar, sobrenadante se recoge por centrifugación,
congelada en hielo seco y a aproximadamente 308C antes del análisis. Proteína obligatoria
de la Unión a proteínas plasmáticas in vitro de NTBI, DEI y DEA fueron investigada
usando dispositivos de diálisis de equilibrio rápido (rojo) (8000 MW corte, Linden
Bioscience, Woburn, MA). Ratón congelado y plasma humano (Corporación especialidad
biológica, Colmar, PA) fueron descongelados y agregados de proteína fueron quitadas por
la filtración de vacío (los tubos de centrífuga Corning1 filtro-tapa, tamaño de poro de 0,22
mm). El plasma entonces se añadió a una concentración target de 1 mg/mL (0,2% (v/v)
final de DMSO). Se colectaron alícuotas duplicadas para verificar las concentraciones
iniciales. Plasma con picos (300 mL) se colocó en la cámara de muestras del relleno rojo y
tampón fosfato salina (500 mL), pH 7,4, en la cámara de amortiguamiento (n¼ 6 insertos y
especies). La incubación se llevó a cabo en una incubadora de dióxido de carbono 5% (v/v)
(ajuste automático de infrarrojos, NuAire, Plymouth, MN) a 378C en un agitador de placa
título orbital (instrumento de Lab-Line, Inc., Melrose Park, Il.) a 300 rpm para alícuotas
individuales 4 h. (50 mL) de muestra y tampón cámaras de cada inserto fueron quitados y
proteína se precipitó con acetonitrilo, que contiene una norma interna común (tolbutamida,
40 ng) antes del análisis por LC / proporción del área pico MS/MS. de compuesto, en
relación con el patrón interno se utilizó para estimar las concentraciones después de una
adecuada corrección para tener en cuenta la diferencia en la respuesta del analito de MS en
buffer y en plasma. Unión se calculó utilizando fórmulas estándar. Separación intrínseca en
incubaciones de hepatocitos humanos y animales se realizaron con 0,5 mM NTBI en una
suspensión 0,2 millones de células/mL en medio de William, pH 7,4. Placas se colocaron
en un C 378, incubadora de dióxido de carbono 5% (v/v) en un agitador a 40 rpm. En varios
momentos a 240 min, 50 mL alícuotas fueron quitadas y agregar a 200 mL de solución de
parada (80:20:1 (v/v/v) acetonitrilo/etanol/ácido acético) con estándar interno. Se realizó un
control positivo para la actividad y variabilidad inter-ensayo (ethoxycoumarin). Las
muestras fueron complemento congelado y almacenado a 808C hasta su análisis por
LC/MS/MS. previo al análisis, muestras fueron descongelarse a temperatura ambiente,
mezclado, luego se centrifugó y el sobrenadante tomada para el análisis. Concentraciones
de ethoxycoumarin se determinaron por HPLC. Se calculó la constante de velocidad de
eliminación de primer orden para la desaparición del compuesto del padre de la pendiente
de la curva de registro-transformada concentrationtime Grafit versión 5.0.8 (Erithacus,
Middlesex, Reino Unido). CLi se estimó mediante el volumen real de la incubación y
asumiendo DOI 10.1002/jps diario de ciencias farmacéuticas, VOL. 98, núm. 1, enero de
2009 comparativa DMPK de novela 4-AMINOQUINOLINE ANTI-hígado de 365 1.2 108
células/g de ARTEMISINA de hepatocitos (2,4 108 células/g de hepatocytes12 de perro);
espacios libres se expresaron en unidades de mL/min/g de hígado. El límite inferior de
cuantificación fue de 0,5 mL/min/hígado g y este correspondió a < disminución de 15% en
los padres de 240 min. La CLi más alto que puede ser medida con fiabilidad es 50
mL/min/hígado g; en esta situación, los padres pueden cuantificarse para los tres primeros
puntos de tiempo (hasta 45 minutos). Consideramos separación moderada en el rango de 3
– 7 mL/min/g de hígado en este ensayo. Permeabilidad y transporte activo Apical a la
basolateral (A-B) y transporte basolateral-toapical (B-a-A) de ISO, ADQ, DEI, NTBI y
amprenavir (5 mM) fueron estudiados a través de monocapas de células MDCK MDR1 en
la ausencia y presencia de GF120918 (2 mM) en HBSS. Ensayos de transporte se realizaron
con células MDCK MDR1 4 días postseeding en 12-bien Transwell1 insertos de
membrana. Las células fueron previamente incubadas en HBSS con y sin GF120918 en 378
C para 30 min Buffer fue quitado y compuesto de prueba (GF120918) se agregó a cada
compartimiento de donantes. HBSS tampón de transporte o GF120918 en HBSS fue
agregado en el compartimento receptor de cada pozo. Las células se incubaron a 378C
durante 90 minutos, bajo agitación (80 rpm) las condiciones, y se extrajeron muestras de los
compartimientos del donante y del receptor. También se tomaron muestras de las
soluciones de donantes al principio y al final del experimento para evaluar la recuperación.
Permeabilidad intrínseca evidente (Papp) y relación de emanación apical [o Papp(B-to-
A)/Papp(A-to-B)] estimaron como descrito previously.13,14 que Papp se estimó
promediando las permeabilidades en A-B y B a la direcciones en presencia de GF120918.
En general, un compuesto está clasificado como un substrato de P-gp, cuando la proporción
de flujo apical es > 2. Valores de PAPP > 50 nm/s se consideran en este modelo. Humana
del citocromo P450 inhibición inhibición de la actividad de la P450 se evaluó utilizando
sustratos sonda fluorescente en un 96-well platebased ensayo format.15 el CYP450
siguientes de actividades fueron monitoreadas en presencia y ausencia de aminoquinoline 4
derivados ; 7-etoxiresorufina O-dealkylation (1A2), ácido 7-methoxy-4-
trifluoromethylcoumarin-3-acetic O-dealkylation (2C 9), 3-butiril-7-methoxycourmarin O-
dealkylation 2C 19, 4-methylaminomethyl-7-methoxycoumarin O-dealkylation (2 6),
resorufin de bencilo de O-dealkylation (2 8 y 3A4), 7-[3-(4-phenylpiperazin-1-ylmethyl)
del diethoxyfluorescein] O-dealkylation (3A4). Incubación mezclas contenidas
concentraciones de la droga que van de 0 a 100 mM (siete concentraciones), sonda de
sustrato a una concentración cerca de la concentración de proteína constante de Michaelis-
Menten de 0.1 – 0.4 mg/mL y un sistema de generación de NADPH (como en el CLi
métodos, arriba, sin UDGPA) en tampón de fosfato de potasio 50 mM, pH 7,4. Miconazole
se incluyó como control positivo (isoenzimas todos). Las reacciones fueron monitoreadas
con las mediciones de fluorescencia a intervalos de 1 min por 10 min en un lector de
fluorescencia (Cytofluor serie 4000, PE Biosystems Foster City, CA) a C. 408 Porcentaje
actividad versus datos de concentración de droga fue cabido con Grafit versión 5.0.8
(Erithacus) estimación IC50s. Generalmente, consideramos IC50s < 10 mM ser de
potencial interés clínico. Inhibición dependiente del tiempo se han realizado estudios de
manera similar excepto que las medidas de fluorescencia se realizaron a intervalos de 1 min
por 30 min y la actividad de control de porcentaje versus concentración de NTBI parcelas
cada 5 minutos consecutivos (1 – 5 6 – 10 11 – 15; 16-20; 21 – 25; y 26 – 30 min) se
generaron para estimar posibles cambios en la IC50 en el tiempo. En las incubaciones
paralelo, furafylline (CYP1A2), ácido tienilic (CYP2C9), ticlopidina (CYP2C19),
metaclopromide (CYP2D6) y troleandomicina (CYP3A4) se incluyeron como controles
positivos. Otros estudios in vitro de ISO, DEI, ADQ y la DEA, aunque no se describe en
detalle, se realizaron en gran parte como se describe anteriormente para el NTBI. Donde se
presentan las comparaciones entre los análogos, compuestos estudiaron cara a cara en el
mismo ensayo en el mismo día. Rutas de biotransformación Microsomal incubaciones
fueron realizadas con el compuesto con 1,56 mg/mL de proteína microsomal, NADP 0,34
mg/mL, 1 mg/mL glucose6-fosfato 100 mM y 1.2 U/mL glucosa-6-fosfato deshidrogenasa,
4 mM UDPGA, 0,5% (v/v) de metanol en 50 mM tampón de fosfato de potasio, pH 7,4, a
378C. Reacciones procedieron por hasta 1 h a 378C y se apaga mediante la adición de un
volumen igual de 80:20:1 (v/v/v) acetonitrilo/etanol/ácido acético. Las muestras fueron
complemento congelado en 808C hasta su análisis. Antes del análisis, las muestras fueron
descongelada, mixto, entonces centrifugada y 10 mL sobrenadante diario de ciencias
farmacéuticas, VOL. 98, núm. 1, enero de 2009 DOI 10.1002/jps 366 DAVIS ET al se
inyectó en el LC/MS para la identificación de metabolitos. Esencialmente como se describe
anteriormente (CLi) con 100 mM de compuesto e incubaciones a 24 h a C 378 utilizando
células adherentes (Cedra, Austin, TX) y hasta 4 h en 378 C utilizando cultivos de células
de suspensión (0,7 106 células/mL) se realizaron estudios de hepatocitos. Para estudios con
recombinante humanos isoenzimas del CYP450, incubaciones figuran drogas de 100 mM,
isoenzima 2 – 7 mg/mL y cofactor adecuado en fosfato de potasio 50 mM, pH 7,4 y
reacciones procedieron por hasta 1 h a 378C. Reacciones se apagó con la solución de
parada y las muestras almacenados y procesados como se describe para las incubaciones
microsomales. Drogas específicas de análisis y métodos HPLC/MS/MS sensibles fueron
desarrolladas para cuantificar aminoquinoline 4 análogos en rata, ratón, perro, mono y
sangre humana (diluido a 1:1 v/v con agua) y plasma, así como en solución salina con
tampón fosfato y del dializado de la proteína estudios de la Unión. Las muestras fueron
analizadas mediante precipitación de proteínas con acetonitrilo seguido por análisis
HPLC/MS/MS con ionización química positiva-ion la presión atmosférica o Turbo
Ionspray ionización (API 4000 o API4000 QTrap, Applied Biosystems, Foster City, CA) .
Los dos métodos siguientes de la LC se utilizaron para el análisis. En el primer método la
fase móvil de LC fue acetonitrilo 63:37 (v/v): formiato de amonio de 10 mM, pH 3.0. Un
sistema de bombeo cuaternario con desgasificador (flujo instrumentos Rheos 2000,
tecnologías de salto, Carrboro, NC) fue utilizado para entregar la fase móvil a un 2,1 mm
50 mm, 5 mm, Aquasil C18 columna analítica (Thermo Electron Corporation, San José,
CA) precedido por un filtro de 0,5 mm. Velocidad de flujo fue de 550 mL/min. En el
segundo método de LC, se utilizó un sistema de flujo turbulento de TX2 (tecnologías
cohesivo, Franklin, MA) con el ciclón 0,5 50 mm, 60 mm de columna de turbulentos
(tecnologías cohesivo) y 2,1 mm 50 mm, 5 mm, Aquasil C18 columna analítica (Thermo
Electron Corporation). La fase móvil contiene mezclas de formiato de amonio acuoso 10
mM, pH 3.0 y acetonitrilo. El método de gradiente empleado era similar a la previously.16
se describe un flujo tasa fue de 350 mL/min. El inyector automático empleado fue un CTC
Analytics HTS PAL salto tecnologías. El límite inferior de cuantificación era típicamente
10 ng/mL y los ensayos eran típicamente lineares sobre un 100-a un rango de concentración
de la 1000-fold droga dependiendo de la matriz y el rango de concentración esperado de
analito. Estudios CLi y la permeabilidad, la relación de lo analizado a área pico estándar
interno fue utilizada para estimar la concentración del fármaco relativa. Estudios de
biotransformación, el sistema HPLC analítico consistió en un sistema solvente HP-1100, un
desgasificador de 1100 HP, un detector de arreglo de diodos HP1100 (Agilent, Piscataway,
NJ) y un PAL de HTS CTC Analytics muestreadores (tecnologías de salto). Cromatografía
se realizó en 2 mm 150 mm, 3 mm, columna C18 Aqua (Phenomenex, Torrance, CA) con
una fase móvil que contiene una mezcla acuosa 0,1% (v/v) de ácido fórmico (solvente A) y
acetonitrilo (solvente B). La composición de la fase móvil inicial era 100% solvente un
(primeros 5 min) entonces el gradiente lineal progresó al 30:70 (v/v) solvente o disolvente
A B en 15 minutos. La composición de la fase móvil fue devuelto a la partida mezcla
solvente en 0,1 min y el sistema equilibrado durante aproximadamente 10 minutos entre
corridas. Se empleó un caudal de 0,2 mL/min. LC/MS/MS se realizó con un LCQ Deca XP
(Thermo Electron Corporation) equipado con una fuente de ion electrospray. El efluente de
la columna HPLC se introdujo en un detector de diodo array seguido de la fuente de
ionización atmosférica de espectrómetro de masas. La respuesta del detector diodo array
fue grabada en tiempo real por el sistema de datos de espectrómetro de masas, que
proporciona la detección simultánea de absorbancia y MS datos. La interfaz de electrospray
fue operada a 5000 V, y el espectrómetro de masas fue operado en el modo de ion positivo.
Datos se procesaron con un ordenador VX1120 Gateway software Xcalibur 1.2 (Thermo
Electron Corporation) de funcionamiento. RESULTADOS farmacocinética y repartir
sangre de NTBI tras la administración iv de NTBI al ratón, significa que las
concentraciones plasmáticas disminuyeron de forma bifásica con una vida media terminal
de 3 h (Fig. 2 y tabla 1). Tiempo de residencia media fue algo más larga (7 h). Depuración
plasmática fue de 28 mL/min/kg y el volumen de distribución en estado estacionario fue de
5 L/kg. Con una sangre al cociente de la concentración del plasma de 1.6 (tab. 4), la sangre
CL era estimada para ser 17 mL/min/kg o aproximadamente el 15% de hígado sangre
fluyan en el mouse.17 la sangre Vss, DOI 10.1002/jps diario de ciencias farmacéuticas,
VOL. 98, NO. 1 , Enero de 2009 comparativa DMPK de novela 4-AMINOQUINOLINE
antipalúdicos 367 Figura 2. Media (SD) concentración plasmática versus tiempo después iv
(*) o de administración oral (*) de NTBI a animales. Panel A: ratones machos CD-1; Panel
B: las ratas de Sprague-Dawley macho; Panel C: los perros beagle macho; Panel D: los
monos cangrejeros macho. Datos de las piernas orales fueron dosis-normalizados para la
comparación con los datos de la iv. DIARIO de ciencias farmacéuticas, VOL. 98, núm. 1,
enero de 2009 DOI 10.1002/jps 368 DAVIS ET al. estimado de la sangre y el plasma Vss y
plasma, fue de 3,1 L/kg. Este valor es 4 veces el agua corporal total en el ratón y sugiere
que hubo penetración sustancial de NTBI en los tejidos. Biodisponibilidad oral de una
formulación de solución en el ratón fue alto (100%, tabla 1). Después de la administración
oral, concentración plasmática máxima se alcanza en 20 minutos; después de eso, significa
que las concentraciones plasmáticas disminuidas bi-exponencialmente con una semivida
terminal similar a la observada tras la administración iv (3.3 vs 5,3 h). La forma de la curva
de tiempo de concentración de plasma fue generalmente similar para administración iv y
oral, la absorción fue rápida y completa (Fig. 2A). Hay evidencia de un aumento secundario
en la concentración de plasma, particularmente en el perfil de oral, en unas 8 h después de
la dosificación. La farmacocinética en la rata del mismo modo eran multi-fásicos después
de administración iv, y como en el ratón tras la administración oral, hubo un aumento
secundario de la concentración plasmática de aproximadamente 8 horas después de la
dosificación (Fig. 2B). En la rata, la vida media terminal fue similar iv siguientes y la
administración oral con valores promedio de 7.9 y 9.0 h, respectivamente. Tiempo de
residencia promedio fue un poco más largo (14 h). CL de la sangre y Vss se derivan de los
parámetros del plasma (tabla 1) y la sangre in vitro repartir datos como se describe para el
ratón. Sangre reparte en ratón y rata eran indistinguibles (B/P de 1.6, tabla 4). Separación
de la sangre de la rata era estimada para ser de 26 mL/min/kg o 50% de hígado sangre
flow.17 sangre Vss fue 21 L/kg, > 20 veces total agua del cuerpo en esta especie.
Biodisponibilidad oral fue alto (media de 89

12%, tabla 1). En el perro, tras la administración iv, las concentraciones plasmáticas
disminuyeron de manera multi-fásicos (Fig. 2). Depuración plasmática es alta y variable
entre animales (45.6
28,9 mL/min/kg, tabla 1). En los estudios de perro, muestras de sangre y plasma se tomaron
para estimar repartir sangre por cada animal vivo ex. Entonces para cada animal individual,
los parámetros farmacocinéticos de plasma y sangre animal cada partición de datos
utilizaron para estimar la sangre CL y sangre VSS. Particionado en estos animales fue alta y
oscilaron del 4.5 al 10.4. El animal con la mayor separación de plasma tenía la sangre más
alta al cociente del plasma. Significa separación de sangre fue 6,3 mL/min/kg (tabla 1) o
alrededor del 20% del flujo sanguíneo hepático en la sangre de media dog.17 Vss fue 30
L/kg (tabla 1), 50 veces del total de agua corporal en esta especie. Biodisponibilidad oral en
el perro otra vez fue alta (68

18%, tabla 1). Con la dosis más alta empleada en la etapa oral, las concentraciones
plasmáticas fueron cuantificables para un substancialmente más de largo período de tiempo
en comparación con la etapa iv y la fase terminal mucho más completamente caracterizada.
El t1/2 terminal media tras la administración oral fue 49 h. Tras la administración iv para el
mono, las concentraciones plasmáticas disminuyeron de una manera multi-fásica con una
semivida terminal de 11 h tabla 1. Farmacocinética del 4-Aminoquinolines después de iv
sola o la administración Oral a animales conducen especies CLp (mL/min/kg) b CLB
(mL/min/kg) c Vp ss (L/kg) b VB ss (L/kg) c t1/2 (h) F (%) NTBI Mousea 28 17 5,1 3.1
3,3 100 rata 42

8 26

5 34

6 21

48

4 89

Perro 12 46

29 6.3

1.6 210

125 30

12 49

68 3D

18 mono 87
30 14,5

0.7 59

26 11

5 11

3e DEI 100 ratón 40 44 11,8 12,8 6,1 100 rata 180

63 62

22 35

8 12

3 de 3

2 60

Perro 26 39

9 12

3 27

8 de 13

4 12

5 NEf mono 92

5 49

3 25

12 13

5 de 6

1 40

14 ISOh ratón 224 219 6,3 6,2 0,4 rata 21 178

9 89

4 11

15

1 1.4

0.1 17

Perro 4 448

70 151

24 31

5 10

2 1.0

0.2 NQg media y la desviación estándar (n ¼ 3) parámetro reportaron en su caso. una para
estudios con ratones compuesto, variabilidad de los parámetros no se ha estimado. b CLp y
Vicepresidente ss se derivaron del análisis de los datos de tiempo de concentración de
plasma. c ss CLB y VB se calcularon utilizando el parámetro de plasma individuales y
cualquier individuo significa perro o mono B/P valores o los valores medios de B/P de
ratón o rata de estudios in vitro. d período estimado de pierna oral. e N ¼ 2. f NE indica no
Estimado (emesis observada en la etapa oral). g NQ indica nonquantifiable (dosis de la
solución de 3 mg/kg). h que no fueron realizados estudios para ISO en el mono dado
resultados en otras especies. DOI 10.1002/jps diario de ciencias farmacéuticas, VOL. 98,
núm. 1, enero de 2009 comparativa DMPK de novela 4-AMINOQUINOLINE
antipalúdicos 369 (Fig. 2D y Tab. 1). Como se observa en otras especies, hubo un aumento
secundario en la concentración plasmática de aproximadamente 8 horas después de la
dosificación. Como se señaló en el perro, Vss y plasma CL fueron alta (tab. 1) y células
sanguíneas asociación era substancial (B/P desde 4.2 hasta 7,9). Como se observa en el
perro, el mono con el plasma mayor CL tenía el mayor grado de Asociación de células de la
sangre. Significa la separación de la sangre de 15 mL/min/kg fue bajo (aproximadamente el
30% del flujo sanguíneo hepático) y muy similares entre animales (< 5% coeficiente de
variación respecto a la separación del plasma, donde el coeficiente de variación fue del
35%). Biodisponibilidad oral en el mono fue alto (100%) y la absorción es relativamente
rápida (máxima concentración observado 3 h después de la dosificación). La vida media
terminal fue un poco más larga que la observada tras la administración iv (24 vs 11 h).
Repartir de NTBI en células de sangre de perro y el mono también fue estudiado in vitro y
aquí también, asociación con células de la sangre fue sustancial. Debido a las diferencias
observadas entre animales ex vivo, en estudios in vitro fueron realizados con dos donantes
animales individuales. Para el perro, quiere decir sangre plasma se observaron proporciones
de 16 y 4.5 para los dos animales a una concentración de 1 mg/mL (tabla 4). Para el mono,
significa sangre plasma se observaron proporciones de 3.9 y 3.7 para los dos animales (tab.
4). In vitro, repartir de NTBI en sangre humana normal fue mucho menor que en todas las
otras especies estudiadas e indistinguibles de la compartimentación de la sangre del DEA
(1.3, tabla 4). DEI tenía la sangre humana más bajo cociente del plasma y una asociación de
células de la sangre mayor cuatro veces en el perro comparado con humanos (tab. 4). Se
realizaron estudios farmacocinéticos linealidad de NTBI en ratón, rata y mono tras la
administración oral de dosis hasta 300 mg/kg. Figura 3 compara el dosis normalizada de
plasma AUC versus dosis para estos estudios. No había más que un cambio doble en el
AUC normalizada de dosis en el rango de dosis para cada especie y el sexo. Dado que
diferentes grupos de animales fueron estudiados en cada caso, concluimos que la
farmacocinética son en gran parte doseproportional sobre el rango de dosis de 25 a 30 veces
en los roedores y el rango de dosis de 7-fold en el mono. Generalmente no hubo diferencias
sustanciales entre hombres y mujeres animales estudiados. Una dosis para la base de dosis,
exposición de ratón (plasma AUC) superó al observado en todas las demás especies por
aproximadamente tres veces. Estudios de linealidad farmacocinética en el perro se
confunden por falta de tolerabilidad en esta especie. Efectos agudos sobre el sistema
nervioso central eran evidentes con variada frecuencia después de dosis orales tan bajas
como 30 mg/kg en el perro. Una dosis oral de 30 mg/kg cloroquina producen signos
clínicos similares, sugiriendo que esta especie es particularmente sensible a la 4-
aminoquinolines (datos no mostrados). Predicción de la farmacocinética humana por
alometría cuatro métodos diferentes utilizados para escalamiento alométrico de los datos
farmacocinéticos animal de NTBI Figura 3. Linealidad de la farmacocinética oral de NTBI
en ratón (cuadrados), rata (círculos) y mono (triángulos). Significa que AUC oral dosis-
normalizados se compara dosis y especies. Símbolos rellenos representan los animales
femeninos. Exposiciones roedores representan datos media (n ¼ 3) o se derivaron de
diseños de estudio compuesto. Exposiciones de mono son de animales individuales (1M,
grupo 1F). DIARIO de ciencias farmacéuticas, VOL. 98, núm. 1, enero de 2009 DOI
10.1002/jps 370 DAVIS ET a los seres humanos como previously.11 se describe la tabla 3
resume los resultados de estos análisis. El R2 más alto (0.991) y p-valor más bajo (0.008,
que representa el significado de la pendiente de cero) se obtuvieron usando el método en
que CL se escala utilizando una contabilidad de factor para las diferencias de especies de
vida media y flow.18 de bilis, sangre CL fue predicho para ser baja (2,5 mL/min/kg, 12%
hígado sangre flow17) usando este método, aunque los cuatro métodos predijeron humana
CL que >< 35% del flujo sanguíneo hepático. Sangre humana Vss fue predicho para ser 46
L/kg (p >< 0.05) de NTBI (9 L/kg para la DEI, p < 0.05) con un peso estándar escala de
enfoque. Sangre humana t1/2 efectiva de NTBI fue predicho para ser 21 h (0.693/CL/Vss).
Sangre prevista CL para DEI fue aproximadamente dos veces mayor que el NTBI para cada
uno de los cuatro métodos (datos no mostrados). Esto fue similar a las diferencias de sangre
CL entre NTBI y DEI observada en las especies preclínicas (tab. 1). Farmacocinética
comparada de Aminoquinoline 4 análogos la farmacocinética de ISO y DEI fueron
estudiados tras la administración iv y oral en ratón, rata, perro y mono. Por analogía con el
ADQ, que pasa por N-dealkylation oxidativa para formar un metabolito activo en humanos,
postulamos que ISO podría formar el metabolito análogo en vivo y así actuar como una
droga Pro. También consideramos la posibilidad que DEI podría tener propiedades
convenientes para el desarrollo en su propio derecho. Tabla 1 se incluye un resumen de la
farmacocinética de la DEI y la ISO junto con los de NTBI. CL de la ISO de sangre era muy
alta, superior a la tasa del flujo de sangre al hígado en ratón, rata y perro. Biodisponibilidad
oral media de ISO en los roedores fue de 20%. En el perro, concentraciones de ISO fueron
nonquantifiable después de una dosis oral de 3 mg/kg (CII de 10 ng/mL). DEI tenía sangre
inferior CL comparado con ISO en ratón, rata y sobre todo perros (p < 0.001, t-test). En el
perro, limpieza de sangre de DEI fue 2 mayor que el de NTBI (p < 0.05, prueba de t). En el
mono, era sangre CL del DEI > 3-fold superior de sangre CL de NTBI (p < 0.001, t-test).
Biodisponibilidad oral de DEI fue del 40% en mono y en roedores. Emesis en el estudio del
perro imposibilitó una estimación de la biodisponibilidad oral en esta especie. Se realizaron
estudios farmacocinéticos tras la administración oral de ISO en ratón, rata y perro para
confirmar que en realidad ISO se comporta como una droga Pro como ADQ. ISO y DEI se
cuantificaron en estos estudios y el cociente metabólico se estimó comparando AUC(0-t)
para padres y metabolitos. En las tres especies, la exposición de DEI excedió la exposición
de la ISO de 6 a 14 veces (tab. 2). Unión a proteína de unión a proteínas plasmáticas fue
similar para el NTBI, DEI y DEA en plasma humano (86-92%, tabla 4). Unión a proteínas
del ratón fue menor de DEA (74%) en comparación con el NTBI (93%) y DEI (93%).
NTBI y ADQ tienen ED50s similares contra Plasmodium yoelii en un modelo murino de
infección y sangre total similar AUC (DEA después de la administración de ADQ) cuando
se administra la misma dosis en este modelo (datos no mostrados). Esto sugiere que las
diferencias en la Unión a proteínas del ratón no son importantes farmacológicamente en
este modelo de roedor. CLi de separación intrínseca de NTBI y derivados relacionados con
4-aminoquinoline se comparó en los hepatocitos de animales y humanos in vitro. Los
resultados se resumen en la tabla 5. Como era de esperar de este Pro-drug, ADQ tenía alta
CLi en ratón, rata, perro, mono y hepatocitos humanos. ISO tenía alta CLi en ratón, rata,
perro y de los hepatocitos de mono pero moderada CLi en los hepatocitos humanos. Los
principales metabolitos de ADQ y ISO, el resultado de N-dealkylation, tenían menor CLi
en comparación con las drogas de los padres en todas las especies. NTBI tenía menor CLi
en ratón, rata y perro tabla 2. La exposición sistémica de Isoquine y Des-etil Isoquine tras la
administración Oral de Isoquine a animales especie dosis (mg/kg) ISO, AUCa (mg h/mL)
DEI, AUC (mg h/mL) DEI: ISO, relación de AUC ratón 10 0,14 1,42 10.1 rata 12 0.17

2.5 0,03

0.4 perro de 14.4 100 1.3

0.8 8.0

1.7 6.0 un Plasma AUC de tiempo 0 a la última concentración de drogas cuantificables.

DOI 10.1002/jps diario de ciencias farmacéuticas, VOL. 98, núm. 1, enero de 2009
comparativa DMPK de novela 4-AMINOQUINOLINE ANTI-ARTEMISINA hepatocitos
371 relativa a DEI, DEA, ISO y ADQ. En mono o hepatocitos humanos, CLi de NTBI, DEI
y DEA fue baja y similar. Búsqueda preliminar biotransformación A metabolitos de NTBI
y DEI se llevó a cabo después de la incubación de los compuestos con microsomas
hepáticos y de los hepatocitos de ratón, rata, perro y ser humano. Para NTBI y DEI, no
había evidencia para glutatión Conjugación o reactiva metabolismo vía el camino de
quinona imina asociado ADQ. NTBI y DEI se metabolizan por múltiples vías metabólicas
in vitro. En microsomas hepáticos del animal y origen humano, metabolitos mono-
oxigenación (M2, M3, M4), aldehído (M5), ácido carboxílico (M6) y glucuronides del
padre, M5 y M6 fueron detectados para ambos compuestos (Fig. 4). Aunque el metabolito
N-dealkylation (M1) fue detectada por el DEI, no fue detectado de NTBI en vitro.
Metabolito cetona (M7) se detectó de NTBI en todas las especies. Sin embargo, DEI no
formó M7. NTBI exhiben un pico de ión molecular (MHþ) con una masa a cargo ratio
(m/z) de 356. Colisión inducida por disociación de NTBI produjo un fragmento con m/z
283 por pérdida de la amina del N-tert-butyl. Metabolitos mono-oxigenación, M2, M3 y
M4 tenían MHþ en m/z 372. Metabolito M2 tenía un ión fragmento en m/z 283 debido a la
pérdida de la amina del N-tert-butílico de monooxygenated, mientras que los metabolitos
M3 y M4 tenía un ión fragmento en m/z 299 de la pérdida de la molécula de amina N-tert-
butyl. Esto sugiere que la oxigenación en M3 y M4 no ocurrió en este grupo. Metabolito de
ácido carboxílico y M5 a los metabolitos aldehído M6 tenía MHþ en m/z 299 y 315,
respectivamente. Ambos metabolitos M5 y M6 pierden una molécula de agua para producir
un ión fragmento en m/z 281 y 297, respectivamente. Metabolito cetona M7 tenía MHþ en
m/z 370 y un ión fragmento abundante en 316 m/z de la pérdida de la molécula de N-tert-
butyl. M7 también tenía un fragmento en m/z 272 debido a la pérdida de carbonilo y grupos
de amina N-tertbutyl. El patrón de fragmentación de los glucuronides del padre, M5 y M6
se caracterizaron por pérdida de neutro de glucurónido moiety (Da 176) y los datos de la
fragmentación característica descritos para padre, M5 y M6. El metabolito N-dealkylation
M1 tenía MHþ en m/z 300 que a su vez produce un ión fragmento en 283 m/z de la pérdida
de amoníaco. Tabla 4. Vitro células de la sangre y Unión a proteínas plasmáticas de 4-
Aminoquinolines compuesto especie sangre Plasma relación % límite NTBI ratón 1,63

0,22 92.8

1.2 rata 1,63

0.12 ND perro 15,65 (1)

5.04 ND perro 4.48 (2)

0.24 ND mono 3,92 (1)

0.20 ND mono 3.73 (2)

0.39 ND 1.27 humana

88.3 0,02

3.1 DEI ratón 0,92

93.0 0,08

1.0 rata de 2.93

0.40 ND perro 3.37

0.39 ND mono 1,87

0.18 ND 0,79 humana

91.7 0,04

1.4 DEA ratón ND 74.4

2.7 1.37 humana

85.9 0,24

2.7 ND, no hay datos. Los datos se expresan como la media

SD (n ¼ 3 para el particionado, n 6 de ¼ de unión a proteínas, 1 mg/mL de sangre nominal

o la concentración plasmática). Perro y mono de sangre fue obtenida de animales diferentes
de ésos estudiados en vivo. Tabla 3. Predicción de la farmacocinética humana del N-Tert-
Butyl Isoquine por ba de alometría exponente R2 CL humano (mL/min/kg) p-valueb
método 1 0.978 0,840 7,00 0.0195 método 2 1,265 0.985 4,94 0.0138 método 3 1,814 0.987
3,58 0.0119 método 4 1,466 0.991 2,48 0.0082 a b: pendiente de Análisis de regresión
lineal del registro de datos; transformados R2: cuadrado coeficiente de correlación; Método
1: CL b a(W) ¼, donde W ¼ de peso corporal; Método 2: CL MLP a(W) ¼ b y significa
vida (MLP en años) 185.4 ¼ (BW) 0.636 W0.225, donde peso de cerebro ¼ BW.; Método
3: BW CL ¼ a b (W); Método 4: CL/BF MLP ¼ una b (W) donde BF es un factor de
corrección del flujo biliar dependiente de la especie basado en hígado weight.18 b
significado de la pendiente de cero. DIARIO de ciencias farmacéuticas, VOL. 98, núm. 1,
enero de 2009 DOI 10.1002/jps 372 DAVIS ET AL. La posición exacta de oxigenación
para el M2, M3 y M4 no podría ser comprobada debido a la baja sensibilidad en el espectro
de MS3. También para M6, debido al muy bajo grado de formación, la naturaleza de
Glucuronido, - acil versus - hidroxilo, no podría ser determinado. La fragmentación masa
espectral de DEI y sus metabolitos fue similar a la descrita para el NTBI y NTBI
metabolitos. El metabolismo in vitro del DEI era constante con metabolitos urinarios y
biliares descrito previamente después de administración ISO pertenecen a rats.10 general,
perfiles de metabolito de hepatocitos eran similares a los observados por los microsomas
hepáticos. Todos los metabolitos observados in vitro del mismo modo fueron detectados en
el plasma y/o orina de ratones había administrado NTBI o DEI por vía oral. En contraste
con los estudios in vitro, M1 fue detectado de NTBI en vivo y la análoga M7 de DEI fue
detectado en vivo después oral de administración DEI. Para evaluar la importancia relativa
de N-dealkylation en la biotransformación in vivo de estos conductores, tras la
administración oral de NTBI o DEI al ratón, se comparó la exposición sistémica a los
metabolitos N-dealkylation (M1). AUC Dosenormalized para M1 después de la
administración de DEI fue > 1000 veces la dosis normalizada AUC para M1 después de la
administración de NTBI. Total tabla 5. Separación intrínseca de 4 Aminoquinolines en
hepatocitos humanos y animales compuesto ratón rata perro mono humano NTBI 6.4

1.0 < 0,5 2,9 0,6 2,1 0,5 >< 0,5 ISO 41 7 11 4 24 1 21 1 3,3 0,1 DEI 17 1 1,0 0,2 5,4 0,4 1,2
0,1 >< ADQ 0,5 > 50 9,9

5.3 12.4

0,5 29

1 9.8

0.2 DEA DE 11

2 1.9

0.4 4.4

0.3 1.6

0.2