UNIVERSIDAD ANDINA NESTOR CACERES VELASQUEZ

FACULTAD DE INGENIERIAS Y CIENCIAS PURAS

CARRERA ACADÉMICA PROFESIONAL INGENIERÍA SANITARIA Y AMBIENTAL

OBSERVACION DE MICROORGANISMOS DE IMPORTANCIA AMBIENTAL

PRACTICA DE LABORATORIO N° 4
CATEDRA DE MICROBIOLOGIA SANITARIA Y AMBIENTAL
DOCENTE: Dr. Juan José Pauro Roque
RESPONSABLES:
Laura Lechuga Jordy Danny
Larico Yucra Betssy Nery
Quispe Oscalla Bertha Alejandra
Ramos Marca Luz Yodina
Uscamayta Paricela Erika Yesabella
Jara Ramos Maura
Machaca Condori Aracely Dayana
Vargas Mendoza Brígida Emperatriz
Yerva Mamani Maribel
Tapara Hacco Karen Betzabeth

SEMESTRE: SEGUNDO “D”

JULIACA –PERU
2015
 REECUENTO MICROBIANO EN MUESTRA DE SUELO
Laura Lechuga Jordy Danny Jara Ramos Maura Arminda

Larico Yucra Betssy Nery Machaca Condori Aracely Dayana

Quispe Oscalla Bertha Alejandra Vargas Mendoza Brígida Emperatriz

Ramos Marca Luz Yodina Yerva Mamani Maribel

Uscamayta Paricela Erika Yesabella Tapara Hancco Karen Betzabeth

Cátedra de Microbiología Sanitaria Ambiental

CAPISA-UANCV

RESUMEN

La práctica de recuento de microorganismos en una muestra de suelo se realizó el miércoles 24 de

mayo del 2015 en el horario de 2:00 pm. – 3:50 pm. En el laboratorio de calidad ambiental
CAPISA-UANCV. El objetivo de dicha práctica fue sembrar y aislar microorganismos, para luego
poder hacer el conteo de microorganismos, para determinar la carga microbiana de la a partir de
una muestra de suelo. La metodología aplicada fue la técnica de inmersión en placa luego de diluir
la muestra en los tubos de ensayo, a la vez se preparó el APC, luego de esterilizarlo se sembró y
después de 6 días se apreció el crecimiento microbiano para luego después comenzar con el
reconteo de colonias de microorganismos y poder determinar la carga microbiana.

Palabras clave: inmersión, diluir, crecimiento, colonias, recuento.

ABSTRAC

The practice of counting microorganisms in a soil sample on Wednesday, May 24, 2015 was held
at the time of 2:00 pm. - 3:50 pm. In the laboratory of environmental quality CAPISA-UANCV.
The purpose of this practice was to sow and isolate microorganisms, and then be able to count
microorganisms to determine the microbial load from a soil sample. The methodology used was the
immersion technique plate after diluting the sample in the test tubes while the APC was prepared
after sterilization was seeded and after 6 days microbial growth was observed and then afterwards
start with the recount of colonies of microorganisms and to determine the microbial load.

Keywords: Immersion, dilute, growth, colonies, count.

 INTRODUCCION

En todos los ambientes abiertos y en muchos lugares del cuerpo se puede encontrar una gran
cantidad de microorganismos (principalmente bacterias y virus). Estos microorganismos, si tienen a
su disposición nutrientes y condiciones ambientales adecuadas pueden crecer y multiplicarse
produciendo en su caso enfermedades infecciosas. (Garza & Valdes , 1985) El estudio de los
microorganismos edáficos está frecuentemente enfocado a las variaciones de la densidad y
diversidad de grupos funcionales implicados en ciclos biogeoquímicos del carbono, nitrógeno y
fosforo, como lo son los hongos y bacterias celulíticas, proteolíticas y ligninoliticas, bacterias
denitrificantes, bacterias fijadoras de nitrógeno y bacterias solubilizadores de fosfatos (Yanine,
2010). Las relaciones entre los vegetales y los microorganismos de la rizosfera ocurren a diferentes
niveles; los microbios pueden penetrar a la planta y producir variados efectos, desde benéficos
hasta perjudiciales. Los hongos micorrícicos, por ejemplo, son responsables del aumento en la
capacidad de exploración del suelo por la raíz e incluso sirven como órgano de absorción de la
planta. En este mismo ejemplo de interacción raíz-hongo micorrí-cico, se presenta una protección
física contra la entrada de patógenos a la raíz y por ende, a la planta. La fijación biológica aparece
únicamente en bacterias, algas cianofíceas y actinomicetos, microorganismos procariotas que
tienen la capacidad de utilizar el nitrógeno atmosférico. Entre los más de 60 géneros conocidos se
encuentran formas aerobias facultativas, anaerobias, autótrofas y heterótrofas, con hábitats muy
dispares y con requerimientos ambientales de temperatura, humedad, pH, etc. muy heterogéneos.
Los organismos responsables de la fijación de nitrógeno contienen la enzima NITROGENASA y se
llaman DIAZOTROFOS y en ellos se incluyen bacterias organotróficas, bacterias sulfurosas
fototróficas y cianobacterias. (Frioni, 2011).

En tal sentido, esta práctica tiene de mucha importancia de reconocer la evaluación de la carga
microbiana de suelos, para ello nos planteamos los siguientes objetivos:

 Evaluar la carga microbiana del suelo del jardín, aplicando el método por inmersión en
placas Petri.
 Reconocer la fertilidad del suelo de acuerdo a la carga microbiana
 MATERIALES Y METODOS

1. Materiales

 Papel kraft  Ligas

 Pipetas  Espátula
 Tubos de ensayo  Muestra de suelo
 Matraz Erlenmeyer  Mechero
 Agua destilada  Autoclave
 Placas Petri  Medio de cultivo de APC
 Probeta  Alcohol
 Balanza analítica  Plumón indeleble
 Papel de aluminio  Papel toalla

2. Zona de estudio:
Laboratorio de calidad ambiental CAPISA-UANCV Juliaca, que se encuentra sobre
3.825m.s.n.m., que se encuentra a 45 minutos de la capital del departamento de Puno.
La muestra de suelo (tierra) se obtuvo de un jardín ubicado en Jr. Cincuentenario-Juliaca
de coordenadas (-15°28´39.9”,-70°07´5.3”).

3. Metodología:
a) Se colocó 9 ml de agua destilada con la ayuda de pipeta a cada tubo de ensayo y se
cubrió con papel de aluminio.
b) Se realizaron cálculos de agar plate count en gramos para pesar en la balanza
analítica para 6 placas Petri.
19.5g 1000ml
Xg 120ml
X = 2,34g de APC.
c) se pesaron en una balanza analítica 2.34g de APC para 120 ml de agua destilada.

d) Se agregó a un matraz Erlenmeyer 2.34g de APC en 120 ml de agua destilada y se

tapó el matraz con papel de aluminio, se encendió el mechero y se dejó calentar de
1 a 2 minutos hasta hervir.

e)
f) Se empaqueto los materiales a esterilizar: 5 pipetas, 6 placas Petri, los tubos de
ensayo y la solución preparada de APC, todas envueltas por encima con ligas,
luego se colocó todos los materiales en una canastilla para luego introducir al
autoclave, durante un tiempo de 15 minutos, a una temperatura de 121°C y una
presión de 15 lb.
g) Después del tiempo transcurrido se retiró de la autoclave los materiales ya
esterilizados, y se procedió a retirar las envolturas de cada material.
h) Se etiquetó los tubos de ensayo con plumón indeleble de hasta , luego se
flameó con fuego por la ranura de las placas Petri.

i) Se procedió a preparar las disoluciones, echando de 1gr de muestra de tierra al

tubo de ensayo , se sacudió la muestra de tierra hasta disolver, luego con una
pipeta se transfirió 1ml de esa muestra al tubo de ensayo y dejar la pipeta en
la muestra anterior. De la muestra del mismo modo se transfirió 1ml de la
muestra a , dejar la pipeta en la muestra anterior, y así sucesivamente hasta
llegar a , quedando una pipeta en cada tubo de ensayo y las soluciones cada
vez más diluidas.

j) De las cinco disoluciones se trabajó con las tres intermedias es decir

, .
k) Por técnica de inversión en placa, se transportó 1ml de la solución , a dos
placas Petri y se echó por encima la solución APC, de igual manera de la solución
 se transfirió 1ml a dos placas, y de la última solución se transportó la
misma a dos placas, después de echar el agar a cada placa se dio dos vuelta
horarias y anti-horarias suavemente. Etiquetar cada placa Petri con el plumón
indeleble colocando cada factor de disolución y la fecha.

l) Concluido la técnica se esperó hasta que gelifique las soluciones preparadas en

placas Petri, para luego envolver por las ranuras con plasticwrap.
m) Finalmente se depositó a una temperatura ambiente y esperar los resultados (el
número de colonias) durante 48 horas.
 RESULTADOS Y DISCUSION

OBTENCION DE PLACAS CON UFC/ g de suelo

Fig.01 Se observa el crecimiento de colonias, en la cual se realizó el conteo en cada placa y se

tiene los siguientes datos:

NUMERO DE BACTERIAS POR GRAMO

Placa 76x UFC/g de suelo
Placa 50x UFC/g de suelo
Placa 36x UFC/g de suelo

Crecimiento de colonias bacterianas

7
X= = 36

35 37

El número de colonias contadas en la placa , fue un promedio

de 36 colonias y se multiplico por inverso de dilución, del cuadro
ya mencionado anteriormente podemos decir que se encontró el
mayor número de colonias en las placas y por tal
motivo no se consideró en los cálculos debido a que la placa
está en el rango de 30-300
y Crecimiento de hongos de la norma ya establecida.

Además se observó el crecimiento de algunos hongos la cual muestra que el suelo contienes estos
microorganismos.

 Numero de UFC en placa: 36

 Dilución de la muestra:
 Recuento: 36x UFC/g de suelo.
DISCUSION

Este trabajo ha permitido valorar la influencia que distintos usos del territorio han tenido en la
conservación de ciertas funciones que desempeñan el suelo de los ambientes. Entre estas funciones
destacan la conservación de materia orgánica de nutrientes, el mantenimiento de la biodiversidad.

El análisis de las poblaciones microbianas presentes en la rizófora puede reflejar las condiciones
del cultivo y la diversidad microbiana encontrada refleja la salud de un ecosistema. Las
características fisicoquímicas de las dos regiones muestreadas indican que la región de Puno se
caracteriza por poseer suelos Franco-arenosos mientras que los campos de la región de
Huancavelica son Francos. Los valores de pH en promedio para los campos de Puno son mayores
que los encontrados en Huancavelica. En cuanto al contenido de materia orgánica y otros nutrientes
según el Ministerio de Agricultura y Alimentación (1978), la materia orgánica en los suelos de
Puno presenta valores medios mientras que los de Huancavelica son valores considerados como
altos; el contenido de potasio en el suelo de Puno se considera como medio mientras que para
Huancavelica es bajo y en el caso del fósforo su presencia es alta en Puno y media en Huancavelica
(Pamela Calvo Vélez1, 2008). En un gramo de suelo puede encontrarse 4,000-10,000 especies
diferentes de microorganismos, muchos de ellos no conocidos debido a que no pueden ser
cultivados (90%).
En general, en un 1 g de suelo seco es posible encontrar:

 - bacterias
 - 7 actinomicetos
 – hongos
 Algas -
 Protozoos -
 Nematodos -
Según el resultado obtenido la carga microbiana en el jardín, se puede decir que existe la presencia
de microorganismos que favorecen el crecimiento de las plantas.
 CONCLUSIONES

Terminado dicha práctica de recuento microbiano concluimos con lo siguiente:

 Se logró evaluar la carga microbiana de la muestra de suelo del jardín que resultó ser
36x UFC/ g de suelo, además se alcanzó la habilidad de aplicar el método de
inmersión en placa; a través de las diluciones y gelificacion del APC en las que se
consiguió el crecimiento y cuantificación de colonias.
 En la práctica se observó, además reconocer la fertilidad del suelo de acuerdo a la
carga microbiana, esto nos indica que hay la presencia de microorganismos que ayudan
en el desarrollo de la planta.

BIBLIOGRAFÍA
Frioni, L. (2011). microbiologia: basica, ambiental y agricola . Buenos Aires : Orientacion Grafica
Editora.

Garza, F., & Valdes , M. (1985). tamaño de la poblacion microbiana del suelo. unidad academica
multidisciplinaria agronomica y ciencias , 446-447.

Pamela Calvo Vélez1, L. R. (2008). ESTUDIO DE LAS POBLACIONES MICROBIANAS DE LA RIZÓSFERA

DEL CULTIVO DE PAPA( solanum tuberosum) EN LAS ZONAS ALTO ANDINAS .
Departamento Académico de Biología, Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima –
Perú.

Vélez1, P. C. (s.f.).

Yanine, F. (2010). evaluacion de las bacterias degradadoras de hidrocarburos aisladas de suelos .

bacterias degradadoras , 16-18.

Pamela Calvo Vélez1, L. R. (2008). ESTUDIO DE LAS POBLACIONES MICROBIANAS DE LA RIZÓSFERA

DEL CULTIVO DE PAPA( solanum tuberosum) EN LAS ZONAS ALTO ANDINAS .
Departamento Académico de Biología, Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima –
Perú.

Vélez1, P. C. (s.f.).
 ANEXOS

Fig.1 Envolviendo las pipetas para Fig.2 Midiendo la cantidad de volumen

esterilizar. para preparar la solución APC.

Fig.3 Trasfiriendo 1ml de disolución. Fig.4 Se transfirió 1ml a las placas Petri
y se echó la solución APC.

Fig.5 Se depositó a una temperatura Fig.6 Conteo de las colonias.

ambiente.