UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

DATOS INFORMATIVOS
Carrera: Ingeniería en Alimentos
Ciclo Académico: Octubre 2015 – Marzo 2016
Asignatura: Biología General
Nivel: Segundo “Único”
Profesor: Ing. Franklin Villafuerte
Practica de Laboratorio N° 5
Fecha de Realización: 17 de Diciembre del 2015
Fecha de Presentación: 21 de Diciembre del 2015

TEMA:
“VÌAS METABÒLICAS”
OBJETIVO GENERAL

 Analizar las reacciones que ocurren en la glucolisis

OBJETIVO ESPECÍFICO

 Demostrar donde hay mayor producción de ATP: durante la producción de lactato o durante la de
etanol y CO2.
 Determinar papel desempeña el NAD+ y el NADH durante las fermentaciones láctica y alcohólica
RESULTADOS Y DISCUSIÒN:

TABLA Nª 1 DETECCIÓN DEL PIRUVATO EN LA GLUCÓLISIS

TUBO A TUBO B
Suspensión de levadura en solución de Na2HPO4 Suspensión de levadura en solución de KH2PO4
En la practica de laboratorio se desarrolló en dos fases; La primera se caracteriza ser la formación de piruvato
a partir de glucosa, en la que se procede utilizando solución de glucosa y suspensión de levadura en dos
condiciones (alcalina y acida).Esta prueba requirió 1 hora. La segunda trata de la detección del piruvato en la
que se toman los tubos de ensayo con las sustancias utilizadas en el primer proceso y se agrega
una sustancia que permite, por medio dela reacción expresada en el cambio de la coloración, detectar la
cantidad de piruvato. Al crear la solución de glucosa y levadura ligeramente alcalina o acida en el tubo A y B
respectivamente, y al incubarlos durante una hora a 37ºC se observo que las soluciones seguían siendo
transparentes sin ningún otro cambio.

Se llevaron los tubos a la incubadora para proporcionarles el medio en el que se efectuaran lasreacciones
referentes al proceso de la glucolisis. Posteriormente se agitaron las sustancias contenidas en los tubos y se
nivelo el volumen de sustancia para que fuera igual en los dos sacando unos mililitros y depositándolos
en otros tubos de ensayo. El proceso que se lleva a cabo en esta práctica se llama fermentación. Este se
efectúa partiendo de la glucolisis que consiste en una serie de reacciones en la que se involucran varios
intermediarios. La reacción completa de una molécula de glucosa produce dos moléculas de piruvato, dos
moléculas de ATP y dos moléculas de NADH. Este último es un cofactor que se encuentra en cantidades
catalíticas (es necesario reoxidarlo para que no se suspenda el proceso), y es utilizado por la cadena
respiratoria para la obtención del ATP produciendo de esta forma NAD+.

La glucolisis proporciona una cantidad de piruvato que puede tomar dos rutasmetabolicas anaerobias, eso
depende del tipo de células que intervengan. Para este caso de la práctica de laboratorio, se utilizaron
soluciones alcalinas y acida de levadura respectivamente las cuales a causa de su pH determinaron la cantidad
de productos que se obtuvieron. En este caso se presenta un proceso de fermentación el cual se caracteriza
por ser una reacción de obtención de energía en ausencia de oxígeno en el que el reactivo inicial es la glucosa
y se obtienen como productos una cantidad de piruvato y otra cantidad de etanol que se deriva de la reacción
del ácido pirúvico reducido a acetaldehído y que finalmente produce este alcohol.

En la detección de piruvato de igual forma se utilizaron los tubos de ensayo A y B cada una
con las respectivas sustancias. Seguidamente se agregó 1ml de 2,4-dinitrofenilhidrazina mezclándose
fuertemente. Posteriormente se añadió a cada tubo un 1ml de NaOH y se observó una coloración naranja en
cada tubo seguida de turbidez y una precipitación que se dio minutos más tarde cuando esto se encontraba en
reposo. En el tubo A que contenía la levadura en condiciones acidas se precipito el piruvato que poseía un
color naranja oscuro quedando el etanol en gran proporción con un color naranja muy tenue. En el tubo B que
contenía la levadura en condición básica o alcalina el piruvato se precipito en mayor cantidad, presentado un
color naranja oscuro (marrón) y el etanol se presentó en la superficie en una cantidad menor en comparación
a la primera sustancia con una coloración naranja muy tenue. En este proceso es claro que la identificación
de la acumulación de piruvato se hace por medio de una prueba cualitativa de color. Las observaciones
anteriores se deben a que los intermediarios metabólicos como el piruvato se encuentra presentes en
bajas concentraciones, por lo tanto para demostrar su existencia como intermediarios en el proceso
metabólico es necesario que se impida que sean transformados en otros compuestos.

Este procedimiento se realiza por medio del bloqueo de la enzima que cataliza la conversión del
compuesto por medio de inhibidores como el pH. También se pueden cambiar las condiciones fisiológicas
para que la enzima funcione a baja velocidad con referencia a su actividad máxima usando un agente que
atrape el intermediario y que forme un compuesto que no pueda metabolizarse. La enzima piruvato
descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas como la de la levadura que se agregó en el
tubo A de esta manera el piruvato se acumula y su presencia se demuestra por la reacción de la2,4-
dinitrofenilhidrazina.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

 Se analizó que la glucólisis utiliza 10 reacciones para producción de piruvato, las cuales
se agrupan en dos fases: Fase1 degasto energético de hexosas, se caracteriza por ser degradativa, no
es oxidativa y tampoco se produce ATP, por el contrario se consumen dos moléculas de ATP por
cada glucosa. La fase2 de obtención de energía o fase de las triosas es una etapa oxidativa en la que
se oxida el NAD+ que se transforma en NADH, formándose de esta manera cuatro moléculas de ATP
por transferencia de grupos fosfato al ADP.
 En las dos rutas metabólicas de la fermentación se producen 2 moléculas de ATP. Lo se observa en
las reacciones globales de la refundación alcohólica y láctica respectivamente: En estas la molécula
de glucosa reacciona y como resultado se obtienen los productos entre los en que encuentran las
moléculas de ATP presentándose un rendimiento neto.
 En el proceso de conversión de lactato interviene el NADH como una coenzima la cual es un cofactor
orgánico no proteico, termoestable que unida a una enzima con su forma catalíticamente activa. De
igual forma se presenta en la fermentación alcohólica. El NAD+ se reduce a NADH cuando acepta
dos electrones agotándose la energía. Cuando el NADH libera sus electrones se recupera el NAD+,
que de nuevo puede actuar como coenzima. El NAD+ se regenera para producir NADH utilizado
en la glucolisis.
CUESTIONARIO

ELABORE UNA REPRESENTACIÓN DE LA GLUCÓLISIS.

 ELABORE UN CUADRO DE CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS ISOSTÉRICAS Y
ALOSTÉRICAS EN LA GLUCÓLISIS.
TABLA Nª2

ENZIMAS ISOSTÉRICAS ENZIMAS ALOSTÉRICAS EN LA

Los inhibidores isostéricos pueden ser de dos tipos:
Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la
enzima libre, con el complejo enzima-substrato o
con ambos.
Inhibidor irreversible: modifica químicamente a la
enzima.
ELABORADO POR: Yunapanta, R.
GLUCÓLISIS
Poseen una configuración diferente de los enzimas
“clásicos”, ya que su peso molecular es más elevado
y además del centro activo al que se fija el sustrato
poseen un centro alostérico al que se unen sustancias
moduladoras que activan o inhiben a la enzima.
Las enzimas van a ser reguladas mediante la unión
reversible que se establece de forma no covalente
con metabolistos no reguladores (efectores).

Fuente: Llata., M. (2001). Química Orgánica.

CUANTOS ATP SE PRODUCEN DURANTE LA GLUCÓLISIS.

Durante la glucólisis se producen 2 ATP: anaerobia y aerobia.

Glucólisis anaerobia 2 ATP y en la glucólisis aerobia 36 ATP por molécula (Llata., M. 2001).

BIBLIOGRAFÌA

Laguna,J. (1968). Bioquimica. 2 edición. La prensa médica Mexicana. México D.F.

Llata., M. (2001). Química Orgánica. 1era Edición. Editorial Progreso S.A de C.V. México D.F.

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