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8. ANTIBIOGRAMA
El antibiograma por el método de difusión en agar es una de las pruebas utilizadas para
determinar la sensibilidad de un microorganismo frente a un antibiótico. En esta prueba se
enfrenta la bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar a una solución
antibiótica absorbida en discos de papel de filtro o en pastillas.
Procedimiento:
4. Inocular la superficie de una placa de agar Müeller Hinton con el hisopo pasándolo
uniformemente por toda la superficie en tres direcciones. Por ultimo, pasar el hisopo
por el reborde de la placa.
5. Dejar secar 10 min con la tapa algo abierta (junto al mechero).
6. Preparación de los discos con antibiótico. Disolver una cápsula, comprimido,
gragea o vial de antibiótico en agua destilada; elegir una presentación de antibiótico
fácilmente soluble (Calcular el volumen de dilución que precisa cada tipo de
antibiótico, según la tabla 8.1).
7. Preparar un banco de diluciones (-1, -2) con agua destilada.
8. Con micropipeta Pasteur impregnar los discos para antibiograma con 1 gota de
micropipeta (32 l) de las disoluciones de antibiótico (se puede utilizar la misma
pipeta si se realiza de menor a mayor concentración). Anotar la concentración y el
volumen de antibiótico añadido en cada disco.
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9. Colocar el disco de antibiótico (con pinzas estériles) sobre la superficie del agar y
apretarlo suavemente sobre la superficie del medio. Los discos no deben estar a
menos de 15 mm de los bordes de la placa y a unos 20 mm uno de otro para que no se
superpongan las zonas de inhibición. (No mover los discos una vez implantados).
10. Realizar la operación con:
a. Placa 1 (Staphilococcus):3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Amoxicilina.
b. Placa 2 (Staphylococcus):3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Penicilina G
c. Placa 3 (E.coli): 3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Amoxicilina,
3 discos con las diluciones (1,-1, -2 ) de Penicilina G.
1. Marcar placas y dejarlas 15' a temperatura ambiente para que difunda el antibiótico.
2. Anotar las concentraciones y el tipo de antibiótico sembrado en cada disco.
3. Incubar la placa en posición invertida a 37 ºC durante 24 h.
4. Medir los diámetros de las zonas de inhibición con una regla.
5. Interpretación: Atendiendo a los resultados obtenidos con los criterios de inhibición
aceptables indicados en la tabla 7.1., clasificar los microorganismos investigados
como S, I, R. Determinar la C.M.I.
Los agentes terapéuticos que afecten específicamente sólo a la pared celular bacteriana y a su
síntesis, deben ser inocuos para el organismo superior hospedador.
1.1 Penicilinas
1
Mureína: Heteropolímero formado por cadenas en las que se alternan N-acetilglucosamina
(G) y el ácido N-acetilmurámico (M), unidos mediante enlaces -1,4 glucosídicos. Entre los
aminoácidos de estas cadenas rectas, se forman enlaces peptídicos.
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Penicilinas naturales:
1.2 Cefalosporinas
2
Penicinilasas: Enzimas producidas por ciertas cepas bacterianas resistentes a las penicilinas
mediante la destrucción del anillo beta-lactámico (beta-lactamasas).
Porcentaje de cepas S.aureus resistentes a penicilina G: 1940- 3%, 1948-58%, 1990->90%
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Los organismos animales no son capaces de sintetizar ácido fólico, así que toman la
coenzima (vitamina) completa en los alimentos.
3
Estos antibióticos actúan también sobre los ribosomas (70 S) de las mitocondrias y
cloroplastos de las eucariotas. Pero ya que la membrana externa de las mitocondrias, es muy
poco permeable a las moléculas de antibiótico, apenas tienen efecto sobre las células
eucariotas, a las bajas concentraciones en que se utilizan con los procariotas.
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Cuestionario
a. Los hongos
b. Los micoplasmas
c. Los virus
5. Clasifica los antibióticos citados en este capítulo, según sean naturales, de síntesis o
semisintéticos.