CAPITULO Prueba de movilidad 1. PRINCIPIO. A B. Determinar si un microorganismo es mévil 0 inm6\ ‘Las bacterias son méviles por medio de flagelos. Los flagelos aparecen sobre todo entre los bacilos (bacterias con forma de bastoncillo); sin embargo, unas pocas formas cocoides son mOviles (2, 13) ‘Las bacterias méviles pueden contener un nico flagelo o muchos flagelos y su ubicacién varia segin las especies bacterianas y las condiciones de cultivo (11). En ocasiones, las bacterias méviles produ- cen variantes inméviles que parecen estables y en raras oportunidades revierten a las formas méviles (2). Los microorganismos inméviles carecen de flagelos. OBJETIVO F (Véanse también caps. 43.45) A. Incabacién: 37°C B. 1. Ayudar a a diferenciacién entre géneros a. Enterobacter (V, variable, por lo comin +) de Klebsiella (-). ». Vibrio (¥, por lo comiin +) de Actinobacillus (-). «. Aeromonas media (-) y Aeromonas salmonicida (~) de otras especies de Aeromonas y Plesio- ‘monas shigelloides (+). : 2. Ayudar ala diferenciacién de especies a. Bscherichia coli acrégena (+) de la variedad aneerégena (inactiva) de E. coli (~). La antes de- xnominada Alkalescens-Disparen la actualidad se clasfica como E. coli anserégena (no produc~ tora de gas). . Bacillus anthracis (~) y B. mycoides (~) de otras especies de Bacillus (V, por lo comtin +) ©. Bordetella bronchiseptica (+) y B. avium (+) de B. parapertussis (-) y B. pertussis (-). 4. Legionella oakridgenus (~) de otras especies de Legionella (+) aisladas con frecuencia de in- fecciones humanas. . Edwardsiellaictaluri (~) de E. tarda (+), E. tarda biogrupo 1 (+) y E. hoshinae £ Enterobacter asburiae ), E dssolvens(~)y E: hormacchei (V) de otras especies de Enterobacter (+). Incubacién: 22-25°C (temperatura ambiente) 1. Ayudar a la diferenciacién'entre géneros: Listeria monocytogenes (+) de especies de Corynebac- terium (V, por lo comiin ~) 2. Ayudar a ia diferenciacién de especies a. Corynebacterium aquaticum (+) y C. matruchotii (+) de otras especies de Corynebacterium (va- riable, por lo comin -). b. Yersinia enterocolitica (+) de otras especies de Yersinia (-). MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS: . MEDIO PARA LA PRUEBA DE MOVILIDAD (SEMISOLIDO) A, Dos variantes 1. Ingredientes, pH 73 (1); frmula de Edwards y Ewing (7)Prueba de movitidad 307 Extracto de came 35 Pepiona 10g Cloruro de sodio (NaC) 55 ‘Agar 4g ‘Agua destilada 1.000 mL 2. Ingredientes, pH 7,2 (6) Triptosa 10g CCloruro de sodio (NaC) 5 Agar 55 ‘Agua destilada 1.000 mL B. Se dispone de productos comerciales. C. Método de preparacién 1. Pesala catia exacta compo india el ro. Los producto de las diferentes compafias pueden presentar leves variaciones. 2. Rehidratar con agua destilada o desmineratizada, 3. Calentar con suavidad la solucién, 4, Fraccionar alrededor de 5 mL por tubo (13 x 100 mm). D. Método de esterilizacin: autoclave, 121°C, 15 Ib, 15 min. E, Dejar que el medio se enfrie en posicién vertical y efrigerar para la conservacién (4-10°C), F Inoculacion 1, Crecimiento proveniente de un cultivo puro de 18-24 h en agar con hierro de Kligler (KIA) u otro medio apropiado, 2. Punzar el centro del medio con una aguja de inoculaci6n a una profundidad de 1,25 em. G. Incubacién 1. 35°C, 2, 24-48 hi sies negativo, incubar a 21-25°C durante 5 dias (1, 7). La temperatura de incubacién es extremadamente critica, debido a que muchos microorganismos mé- viles son méviles a 15-25°C pero inméviles a 37°C, la que es su temperatura Sptima de crecimiento. Si se sospecha que un microorganismo puede exhibir movilidad a una temperatura mas baja, inocula dos tu- bbos de manera simulténea; incubar uno a 35°C y el olro a temperatura ambiente (22-25°C). H. Si se desea, utilizar sales de tetrazolio en el medio para movilidad; sin embargo, este reactive inhibe ciertos microorganismos. 1. Preparar una solucién acuosa al 1,0% de cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC). 2. Dos métodos de esterilzacién a. Filtros (1) Filtro Seitz ) Filto de membrane Millipore, 0,45 um de diémetro de poro. G) Demanera aséptica, agregar 5 mL de TTC al 1% estéril por ltro de medio estéril para de- terminar movilidad. ’, Antes de a estetlizaci6n en autoclave, agregar 0,05 g de TTC por litro de medio para movi- Jidad 0 5 mL de una soluci6n al 1% (1, 9). Kelly y Fulton (9) recomiendan el agregado de sal de tetrazolio al 0,005% para ayudar a detectar la movilidad, en particular cuando es diffi la interpretaciGn. Estos autores establecen que el empleo de TTC minimiza ervores y elimina la necesidad de una comparacién con un tubo para movilidad no inoculado. Las sales de tetra- zolio son incoloras, pero cuando el microorganismo crece, el colorante es incorporado en el interior de las células bacterianas donde es reducido a un pigmento rojo insoluble, el forma- in ()- El eolor rojo se forma solo en Ia 20na del medio de cultivo donde crecen las Bacte- rias (9). Las sales de tetrazolio son monotetrazoles (4) que contienen dos grupos"base azo (R-N=N-OH), El ‘grupo azo (-N=N) es un cromeforo basico que imparte color al compuesto en el cual se encuentra (4). EL tetrazolio es una sal de una base coloreada, por lo comiin cloruro (4).308 Pruebas bioquimicas individuales Si Pare NA ED Gnupo azo EL TTC posee un anillo benceno adherido a los étomos de nitrégeno, Benceno (CMe) Gloruro de 29,5. tetrazolio (TTC) ELTTC puede actuar como un aceptor artificial de electrones para las enzimss ligadas al nucleétido piridina, es decir, succfnico deshidrogenasa, citocromo oxidasa, NAD (DPN) y NADP (TPN) (3), en la cadena biolégica oxidativa (3, 4). La sal es reducida por el citocromo b o por el ¢ 0 puede competir por los electrones de la citocromo oxidasa (3). La oxidacién es mediada por la reducciGn de deshidrogenasas especificas por el sistema de transporte de electrones. El tetrazolio ¢s un compuesto incoloro, soluble, que es captado por las células bacterianas y reducido en el sitio de las oxidaciones enzimsticas (4) con la liberaci6n del écido formazén, un compuesto insolu- ble altamente pigmentado (rojo). o, 6% CO,, 88% No; 18 y 42 h. 6. Interpretacién a. Leer sélo la formacién del enjambre, no los microorganismes. ». Formas espiraladas tipicas de las campilobacterias observadas exclusivamente. Los equipos co- merciales estén disponibles por medio del Institut Virion AG, Zurich, Suiza. C. Combinacién de medios (véase cap. 42, Sistemas de pruebas miitiples) 1. MILMILS: movilidad-indol-lisina-(HS,) 2. MIO: movilidad-indol-omitina 3. Medio para movilidad-nitrato (medios para movilidad)310 Pruebas bioquimicas individuales 4, Medio para movilidad-sulfuro 5. Medio para movilidad-sulfuro-indol (SIM) Vill, PRECAUCIONES: t A. Generales 1. El 6rgano de locomocién, el flagelo, es una proteina y es pasible de desnaturalizacién por el calor ‘excesivo (13). Un cultivo calentado con anterioridad a la comprobacién de la movilidad brind un resultado falso negativo. 2. Los resultados de la movilidad son dificiles de determinar en las bacterias anaerobias. S6lo un re- sultado positivo (mévil) tiene algtin significado (5) 3. Los flagelos pueden destrurse o romperse por la agitacién violenta de un tubo de cultivo bacteris- no (11), lo cual puede producir una movilidad positiva débil 0 un resultado falso negativo, 4, Los microorganismos méviles que se conservan como cultivos stock en un medio artificial duran te perfodos prolongados de tiempo tienden a perder su movilidad (2) 5. Muchas bacterias son méviles a una temperatura ¢ inméviles cuando se cultivan a otra (2). Un mic ‘roorganismo que es negativo después de 48 h de incubacién a 35°C debe ser incubado a 22-25°C ‘durante 5 dias (1,7) para confirmar la falta de movilidad. La mayoria de las bacterias méviles pue- den ser probadas a 35°C; sin embargo, ¥. enterocolitica desarrolla las protesnas de los flagclos a i ‘temperatura ambiente (22-25°C), pero no a 35°C (10). L. monocytogenes también requicre une temperatura de 22-25°C (10). 6. Siuna prueba de movilidad es dificil de interpretar, comparar con un tubo para movilidad no inoculado. El uso de sal de tetrazolio en el medio puede ayudar a la interpretaci6n (9). Si atin existen dudas, realizar una preparacién de gota pendiente con una ansada densa de un cultivo de 18 2 24h. 7. Bnocasiones, un cultivo mévil puede ser temporariamente inm6vil, con s6lo unas pocas bacterias, j :6viles presentes. En este caso, un cultivo positivo puede exhibirssélo unos pocos ramilletes 0 r0- | setas que a menudo son pasados por alto como indicadores de movilidad (9) | 8. Laconcentracién de agar en el medio debe ser de 0.4% 0 menos; una concentracién més alta tor~ nal gel demasiado firme para permitir que los microorganismos se diseminen (10). 9. Pseudomonas aeruginosa crece bien s6lo en presencia de oxigeno (O,) y produce una pelicula so- bre la superficie del medio para movilidad debido a que no crece en la profundidad, es decir, la porciGn det tubo deficiente de oxigeno (10). 10, El medio de Edwards y Ewing (7) con agar al 4% es cristatino claro y permite el crecimiento de la \ ‘mayor parte de las bacterias con requerimientos especiales de cultivo. Este medio evita la posibi- lidad de turbidez, lo que dificult las interpretaciones de la movilidad. BB. ‘Tetrazolio: las sales de tetrazolio ayudan a la detecci6n visual de crecimiento bacteriano; sin embar- 0, las sales pueden inhibir a ciertas bacterias exigentes para su desarrollo y no pueden ser utlizadas | en todos los casos (10), C. Medio para movilidad selectivo semisdlido (SSM) 1, Los cambios en el mimero de lote del agar afectan de modo marcado la formacién de enjambres; ' la concentracién Sptima es de 0,28-0,4%, segtin el lote y la fuente comercial. Goossens y col. (8) notaron significativas variaciones entre los lotes en elcaldo de Mueller-Hinton. 2. La desventaja es que las campilobacterias inméviles podrian no ser identificadas. | REFERENCIAS 1. BBL Manual ot Products and Laboratory Procedu- 5, Cowan ST. Cowan & Stee!'s Manusl for te Identi- tes, ed 6 Cockeysville, MD: Becton Dickinson Mi- fication of Medical Bacteria, ed 2. Cambridge: 12, crobiology Systems, 1988, 2. Burrows W, Lewert RM, Rippon IW. Textbook of “Microbiology. The Pathogenic Microorganisms, ed 19. Philadelphia: WB Saunders, 1968: 44, 223, 3. Cantarow A, Schepartz B. Biochemistry, ed 3. Phi- ladelphia: WB Saunders, 1962:385-386. 4, Conn H, Lillie RD, eds H Conn’s Biological Stains, 249, Baltimore: Williams & Wilkins, 1977-24, 51, 200, 225-227 Cambridge University Press,1974-2122, Difeo Manual, ed 10. Dewoit: Difco Laborstories, 1984-184 Ewing WH, Edwards and Ewing's Identification of Encerobacteracese eda, NewYork Elsevier, 1986:523. GoossensH, ViaesL, Galandl,etal Semisolidblood- fee selective-motility medium forthe isolation of campylobacters from stool specimens. Clin Micro- biol 1989:27(5):1077-1080Prueba de movilidad 311 9, Kelly AT, Fulton M. Use of wipheny tetrazolium in Freeman, 1959-33, ‘otitytestmedium.AmClinPatho!1953:23(5):512. 12. Tinsler RP, Sandholzer LA. The use of semisolid 10. KonemanEW,AllenSD, Janda WM, etal.ColorAtlas ‘agar forthe detection of bacterial motility, Bacterial and Textbook of Diagnostic Microbiology, ed 5. 1936,31:575-580, Philadelphia: B Lippincott, 1997:188-189, 13, Wilson G, Miles A, Parker MT, eds, Topley and 11. Oginsky EL, Umbreit WW. An Introduction t0 Wilson's Principles of Bacteriology and Virology, Bacterial Physiology, ed 2. San Francisco: WH 7 Baltimore: Williams & Wilkins, 1983,