19-2-2018 Consumo de oxígeno

en la respiración de
las plantas.
Practica 1.

DIVISIÓN DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS.

LICENCIATURA EN BIOLOGÍA EXPERIMENTAL
DIANA KARINA RANGEL SALAZAR
LABORATORIO DE METABOLISMO INTERMEDIARIO.

Fecha de realización: 12 de febrero de 2018

OBJETIVO
Determinar el consumo de oxigeno (velocidad de la respiración) durante la respiración de semillas de frijol.

INTRODUCCIÓN

La mayoría de los organismos sintetizan ATP por vías metabólicas donde se descomponen carbohidratos y otras
moléculas orgánicas. Algunas vías son aerobias (emplean oxígeno); mientras que otras son anaerobias (se realizan
en ausencia de oxígeno).

Las principales vías por las cuales las células obtienen energía de moléculas orgánicas se llama respiración aerobia,
y fermentación anaerobia. La mayoría de las células eucariontes emplean exclusivamente la respiración aerobia,
o la mayor parte del tiempo.

La fermentación y la respiración aerobia se inician con la misma reacción en el citoplasma. Ésta es la glucólisis,
donde se transforma una molécula de seis carbonos de glucosa en dos piruvatos, que es una molécula orgánica
con cadena principal de tres átomos de carbono. Después de la glucólisis, las vías de la fermentación y la
respiración aerobia divergen. La respiración aerobia finaliza dentro de las mitocondrias, donde el oxígeno acepta
los electrones al final de las cadenas de transferencia electrónica

La respiración aerobia es mucho más eficaz que las vías de fermentación, que termina con un rendimiento neto
de dos ATP por molécula de glucosa. La respiración aerobia da aproximadamente 36 ATP por molécula de glucosa.
El hombre y otros organismos multicelulares no podrían vivir sin este rendimiento más alto de la respiración
aerobia

CITOPLASMA: La primera etapa o glucólisis tiene lugar en el

citoplasma de la célula. Las enzimas transforman una molécula
de glucosa en 2 piruvatos con rendimiento neto de 2 ATP. En
el curso de las reacciones, 2 NAD+ recogen electrones e iones
hidrógeno, de modo que se forman 2 NADH.

MITOCONDRIA: La segunda etapa tiene lugar en las

mitocondrias. Los 2 piruvatos se transforman en acetil-CoA,
que entra al ciclo de Krebs. Se forma CO2, el cual sale de la
célula y se forman 2 ATP. En el curso de las reacciones, 8 NAD+
y 2 FAD recogen los electrones e iones hidrógeno, de modo que
también se forman 8 NADH y 2 FADH2.

En la TERCERA ETAPA, que es la final, la fosforilación con Figura 1. Generalidades de la respiración

transferencia de electrones, se verifica dentro de la aerobia. Las reacciones inician en el citoplasma
y terminan en la mitocondria.
mitocondria. 10 NADH y 2 FADH2 donan electrones e iones hidrógeno a las cadenas de transferencia de electrones.
Los electrones fluyen por las cadenas formando gradientes de H+ que impulsan la formación de ATP. El oxígeno
acepta electrones al final de las cadenas.

Generalidades de la respiración aerobia

La glucólisis es una serie de reacciones que da comienzo a las vías de

descomposición de carbohidratos en la mayoría de los tipos de células.
Las reacciones, que tienen lugar en el citoplasma, transforman la
molécula de glucosa en dos piruvatos para un rendimiento neto de dos
ATP y dos NADH. La palabra “glucólisis” (del griego gluc–, dulce; y –lisis,
aflojamiento) se refiere a la liberación química de los azúcares.
Diferentes azúcares pueden entrar a la glucólisis, pero para mayor
claridad nos concentraremos en la glucosa.

La SEGUNDA ETAPA de la respiración aerobia tiene lugar dentro de la

mitocondria, e incluye dos conjuntos de reacciones: la formación de
acetil-CoA y el ciclo de Krebs, para descomposición del piruvato
producido en la glucólisis.
Figura 2. La glucolisis ocurre en
Todos los átomos de carbono que anteriormente todo tipo de células.
eran parte de la glucosa terminan como CO2, que
sale de la célula. Sólo se forman dos ATP. La gran recompensa es la formación de muchas
coenzimas reducidas que impulsan la tercera etapa de la respiración aerobia, que es la
final.

El ciclo de Krebs En el ciclo de Krebs se descompone la acetil-CoA para dar CO2. Este ciclo
no es un objeto físico, como una rueda; es una vía, es decir, una secuencia de reacciones
mediadas enzimáticamente. Se le llama ciclo porque la última reacción de la secuencia
Figura 3. Proceso de
regenera el sustrato de la primera.
glucolisis general.
El interior de la mitocondria está dividido en dos compartimientos gracias a una membrana externa. La segunda
y tercera etapa de la respiración aerobia tiene lugar en esta membrana. La segunda etapa se inicia después de
que las proteínas de membrana transportan piruvato del citoplasma al compartimiento interno. Seis átomos de
carbono entran a estas reacciones (en dos moléculas de piruvato) y seis salen (en seis CO2). Se forman dos ATP y
se reducen diez coenzimas.

La segunda etapa de la respiración aerobia incluye la formación de acetil-CoA y el ciclo de Krebs. Las reacciones
tienen lugar en el compartimiento interno de la mitocondria.

La TERCERA ETAPA de la respiración aerobia, la fosforilación con transferencia de electrones, también tiene lugar
dentro de la mitocondria. Su nombre se refiere al flujo de electrones a través de las cadenas de transferencia de
electrones de la mitocondria dando como resultado en último término, la unión de fosfato al ADP para formar
ATP. La tercera etapa se inicia con las coenzimas NADH y FADH2, que se redujeron en las dos primeras etapas de
la respiración aerobia. Estas coenzimas donan su carga de electrones e iones hidrógeno a las cadenas de
transferencia de electrones embebidos en la membrana mitocondrial interna.

Como los electrones pasan por las cadenas, ceden energía poco a poco (sección 6.4). Algunas moléculas de las
cadenas de transferencia utilizan la energía para transportar activamente iones hidrógeno del compartimiento
mitocondrial interno al externo. Los iones se acumulan en el compartimiento externo, de modo que se forma un
gradiente de concentración de H+ a través de la membrana mitocondrial interna.

Este gradiente atrae iones hidrógeno de regreso hacia el compartimiento interno de la mitocondria. Sin embargo,
los iones hidrógeno no pueden difundirse a través de la bicapa de lípidos sin ayuda. Los iones pueden atravesar la
membrana mitocondrial interna únicamente fluyendo a través del interior de las ATP sintasa-

Figura 4. Respiración aerobia dentro de la mitocondria.

El flujo provoca que estas proteínas de transporte de membrana unan grupos fosfato al ADP, formando ATP. Al
final de las cadenas de transferencia de electrones en la mitocondria, el oxígeno acepta electrones y se combina
con H+, formando agua.

La respiración aerobia, que significa literalmente “tomar una inhalación de aire” se refiere al oxígeno como
aceptor final de electrones de la vía.

Figura 5. Fosforilación con transferencia de electrones, tercera etapa de la respiración aerobia y etapa
final.

MATERIALES REACTIVOS
1. Matraz Erlenmeyer de 125 mL (4)
2. Pipetas Pasteur 1. Solución de Rojo Congo al 2%

3. Micropipeta 2. Solución de Hidróxido de sodio (NaOH) 0.25 M

4. Tapones de hule 3. Solución de inhibidores 0.5 M

5. Tubos de vidrio doblados 90° Inhibidor 1: Azida de sodio

6. Gasas Inhibidor 2: Arsenito de sodio

7. Algodón
8. Regla
9. Plumón permanente.
PROCEDIMIENTO
PARTE I. PREPARACIÓN DE MATRACES.

Se peso cuatro porciones

de semillas de frijol
•Dichas porciones se
germinadas, de manera utilizarán en el paso
que cada una tuviera un
peso similar.

Se colocó una base de

algodon en cada uno de
los matraces Erlenmeyer.

Se humedeció el algodon
con 20 mL de hidróxido
de sodio (NaOH) de
manera que cubiera toda
la base.

Se colocó una segunda

capa de algodon, de
aproximadamente 3 cm
de grosor. (Fig.6)

Figura 6. Respirometro
 PARTE II. DETERMINACIÓN DEL CONSUMO DE OXÍGENO.

Se hirvio a baño maria una de las

porciones de semillas de frijol
durante 5 minutos.

Simultaneamente al paso
anterior, se sumergieron dos de
las porciones de semillas en su
inhibidor correspondiente
duarante 2 minutos. •Inhibidor 1:
: •Inhibidor 2

Una vez pasado el tiempo

de exposición al inhibidor y
al calor, se colocaron cada
una de las porciones en sus
respectivos matraces.

Se sello el matraz con •Los matraces se rotularon de

un tapon de hule que la siguiente manera: Semillas
contenía el tubo germinadas (control),
doblado a 90°, y se semillas hervidas, semillas
puso parafil para con inh 1 y semillas con inh 2
crear un vacio.

Se colocó una gota de

rojo del congo, con
Una vez que se colocó la gota, se ayuda de la
esperaron dos minutos. micropipeta, en el
extremo del tubo de
cada matraz. (Fig. 6)

Se registro la distancia que recorrió

la gota durante 20 minutos.
 OBSERVACIONES
Figura 7. Semillas de frijol germinadas en cada
uno de los medios a los que se les expuso.
Figura 8. Adición de la gota de rojo del congo,
en el extremo del punto.
Figura 9. Desplazamiento de la gota a lo largo
del tubo.
Una vez que se colocaron cada una de las
porciones a su respectivo matraz, se observó
que inmediatamente la gota que
correspondía al matraz de las semillas sin
tratar, se comenzó a desplazar.
Las gotas de las semillas con inhibidores
también se comenzaron a desplazar sin
embargo la velocidad era menor, en
comparación con aquellas que estaban sin
tratar.
La gota de las semillas hervidas no tuvo
ningún desplazamiento.
Era necesario que el matraz presentara un
vacío, por lo que el uso del parafilm era muy
necesario. Razón por la cual al principio
ninguna gota se desplazó.
La distancia máxima que podían recorrer
eran 10 cm puesto que ese era el valor del
tubo a lo largo, antes de que esté se doblara
en 90°
Se observó que una vez que la gota de los
inhibidores llegaba a 10 cm, la gota
comenzaba a desplazarse en sentido
contrario.
 RESULTADOS

Tiempo Distancia (cm)

(minutos)
Semillas germinadas Semillas germinadas Semillas Semillas
hervidas (Control) germinadas + germinadas +
Inhibidor 1 Inhibidor 2

1 0 0.2 0 0.2
2 0 0.6 0.3 1.7
3 0 2.8 0.6 2.7
4 0 5.3 0.7 3.3
5 0 6.7 1 4.5
6 0 8 1.4 5
7 0 9.4 1.6 5.8
8 0 10 1.6 6.5
9 0 10 1.6 7.7
10 0 10 1.6 8.2
11 0 10 1.6 8.6
12 0 10 1.6 9.4
13 0 10 1.6 9.6
14 0 10 1.6 10
15 0 10 1.6 10
16 0 10 1.2 8.8
17 0 10 0.7 7
18 0 10 0.3 5.8
19 0 10 0.3 4.6
20 0 10 0.5 4.6
Tabla 1. Distancia vs Tiempo (velocidad de respiración)
 SEMILLAS GERMINADAS DE FRIJOL
Semillas germinadas hervidas Semillas germinadas (Control)
Semillas germinadas + Inhibidor 1 Semillas germinadas + Inhibidor 2
12
10 10 10 1010 10 9.6
10 10 10 10 10 10 10 10
9.4 9.4
DISTANCIA (CM)

8.6 8.8
8 8 7.7 8.2
6.7 6.5 7
6 5.8 5.8
5.3 5
4.5 4.6 4.6
4
2.8 3.3
2.7
2 1.7
1 1.4 1.6 1.6 1.6 1.6 1.6 1.6 1.6 1.6 1.6 1.2
0.6 0.6 0.7 0.7 0.3 0.3 0.5
0 0 0.3
0.2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
TIEMPO (MIN)

Gráfica 1. Distancia vs Tiempo de las semillas germinadas.

Velocidades calculadas

Tiempo Velocidad con Velocidad con

velocidad de Velocidad de
Inh 2 Inh 1 semillas hervidas semillas control
1 0.2 0 0 0.2
2 0.85 0.15 0 0.3
3 0.9 0.2 0 0.93
4 0.825 0.175 0 1.325
5 0.9 0.2 0 1.34
6 0.83 0.23 0 1.34
7 0.82 0.23 0 1.342
8 0.81 0.2 0 1.25
9 0.85 0.17 0 1.11
10 0.82 0.16 0 1
11 0.781 0.14 0 0.9
12 0.783 0.13 0 0.83
13 0.738 0.12 0 0.76
14 0.714 0.11 0 0.71
15 0.66 0.1 0 0.66
16 0.55 0.075 0 0.62
17 0.411 0.04 0 0.58
18 0.32 0.016 0 0.55
19 0.24 0.015 0 0.52
20 0.23 0.025 0 0.5
Tabla 2. Velocidades calculadas de cada una de las porciones de semillas.
 Velocidad vs Tiempo de semillas germinadas de
frijol
1.6
1.4
1.325 1.34 1.34 1.342
1.2 1.25
1.11
1 1
Velocidad

0.93
0.8 0.85 0.9 0.825 0.9 0.83 0.82 0.81 0.85 0.82 0.9 0.83
0.7810.7830.738
0.76 0.714
0.71 0.66
0.6 0.62 0.58
0.55 0.55 0.52 0.5
0.4 0.411
0.3 0.32
0.2 0.2 0.15 0.2 0.175 0.2 0.23 0.23 0.2 0.17 0.16 0.24 0.23
0.14 0.13 0.12 0.11 0.1
0.075 0.04
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.025
0 0.0160.015 0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Tiempo (min)

Velocidad con Inh 2 Velocidad con Inh 1

velocidad de semillas hervidas Velocidad de semillas control

Gráfica 2. Velocidad vs Tiempo.

DISCUSIÓN

Es necesario que las semillas de frijol estén germinadas, puesto que una semilla no requiere oxígeno a menos que se
encuentre creciendo. En la práctica se observó que las semillas germinadas hervidas no presentaron ningún
movimiento, por lo tanto ninguna velocidad. Esto sucedió ya que se supone que las semillas estaban muertas, en mal
estado y por ello la gota no se desplazó.

La gota se desplaza hacia el interior del matraz Erlenmeyer, es decir, se aproxima hacia las semillas de frijol y no al
revés, porque las semillas obtienen el oxígeno del ambiente necesario para sus procesos metabólicos, por lo tanto, al
colocar el algodón con la solución, el dióxido de carbono producido es absorbido. Esto es posible a causa del hidróxido
de sodio, el cual se encuentra debajo de las semillas.

El hidróxido de sodio en conjunto con el dióxido de carbono produce carbonato de sodio o bicarbonato de sodio, lo que
hace posible que el dióxido de carbono se produzca. En la gráfica se puede observar que a partir del minuto 16, la gota
de las semillas germinadas con inhibidor 2 comenzó a desplazarse hacia atrás, esto es a causa de que se produjo una
mayor cantidad de moléculas de dióxido de carbono, por lo que la presión interior del matraz, forzó a la gota a
desplazarse en dirección contraria.
SEMILAS DE FRIJOL CON INHIBIDORES
En el caso de los inhibidores, el arsenito de potasio o cianuro es un inhibidor de la cadena respiratoria puesto que
detienen el paso de electrones de algún componente específico del sistema de transporte hacia el siguiente. El cianuro
tiene la propiedad de combinarse con el fierro que tiene uno de los citocromos: el citocromo oxidasa que se encuentra
formando el complejo IV, del sistema de transporte de electrones, y cuando se une, el fierro ya no puede donar ni
recibir electrones a través de la oxidación o reducción.

La azida es un inhibidor de la citocromo oxidasa, sobre

el [Ca+2] en mitocondrias cargadas con Ca+2 La Azida
de sodio afecta a la cadena respiratoria de una forma
muy similar al cianuro, inhibiendo a los grupos Hemo
de los citocromos en la Citocromo Oxidasa, causando
asfixia química en las célula, por lo que la respiración
celular ceso sin embargo no se detuvo, razón por la
cual podíamos observar a la gota desplazarse
Figura 11. Cadena transportadora de electrones.
lentamente.

Como resultado de la acción de cualquiera de estos

inhibidores, se detienen las reacciones redox de la
cadena respiratoria, no se libera energía, las bombas
de protones no funcionan, por lo que no hay
protones que regresen a través del complejo V (Fig.
11 y 12), y la producción de ATP cesa.

Una vez que la producción de ATP cesa, y es entonces

donde la glucolisis y el ciclo de Krebs se ven afectados. Si no hay ATP, no hay proceso de inversión en la glucolisis, por
lo que la célula dirige su energía a otras rutas en vez de descomponer glucosa. Esta es la razón por la cual la gota avanza
lentamente.

SEMILLA GERMINADA SIN TRATAMIENTO

Figura 12.
Sin embargo la semilla germinada, sin ningún tratamiento, se Cadena transportadora
pudo observar de electrones.
que obtenía del ambiente oxigeno
necesario para sus reacciones catalíticas. Esta fue la semilla que recorrió la mayor distancia en el menor tiempo. Aquí
logramos observar la respiración normal de una semilla de frijol germinada.

SEMILLA GERMINADA HERVIDA.

Esta semilla no tuvo ningún desplazamiento, por las razones ya dichas anteriormente, sin embargo lo que se esperaba
era que la gota de rojo del Congo se desplazará inmediatamente hacia el otro extremo del tubo, puesto que al estar
caliente dicha semilla, ésta aún realizaba procesos de evaporación mientras se enfriaba, por lo que consumía oxígeno,
hasta que la semilla muriera. Como se ha dicho, es posible que en el matraz no hubiera un vacío o que las semillas ya
estuvieran muertas puesto que el tiempo de exposición al calor fue demasiado para éstas.
OPINIONES

El experimento de las semillas hervidas se tuvo que repetir dos veces, en donde la segunda vez se colocaron semillas
nuevas y parafilm, sin embargo en ambas la gota permanecía inmóvil. Una de las posibles causas por las cuales, la gota
no se desplazó inmediatamente hacia el fondo del tubo fue porque el tapón que se utilizó presentaba un pequeño
agujero, que aunque parecía tapado, era posible que era la vía de salida de gases. O en todo caso, las semillas germinadas
aún no estaban listas.

Este experimento es muy útil para comprobar la respiración celular, siempre y cuando se tomen las medidas necesarias
para crear la presión dentro del matraz.

CONCLUSIÓN:

Las plantas son organismos que realizan la fotosíntesis por la cual nos brindan el oxígeno, pero así mismo estas mismas
realizan su propia respiración. Las semillas de frijol realizan el proceso de respiración, en donde al exponerlas ante
inhibidores el consumo de oxígeno cesará, mientras que las semillas germinadas sin ningún tratamiento consumirán el
oxígeno normalmente. Aquellas que fueron hervidas consumirán el oxígeno en grandes cantidades para la
sobrevivencia de sus células que fueron dañadas tras la exposición al calor. Los cambios de presión, a causa de los gases
que se fueron acumulando en el matraz posibilitaron que la gota se moviera a lo largo del tubo.

Los inhibidores son sustancias químicas que nos permiten observar la importancia de la cadena respiratoria en el
proceso de respiración, por lo cual al inhibirla afectamos procesos como el ciclo de Krebs, la glucolisis, etc.

La respiración de los animales y las plantas es muy semejante, sin embargo hemos de aclarar que la planta madura
realiza fotosíntesis, donde produce oxígeno, el cual será utilizado para la producción de glucosa. Este proceso es de
suma importancia para la sobrevivencia de cada uno de los seres vivos, puesto que sin oxígeno nuestras actividades
metabólicas no serían posible.

BIBLIOGRAFÍA

Cecie Starr, Ralph Taggart, Christine Evers y Lisa Starr. 2009. Biología. La unidad y la diversidad de la vida. Editorial
Cengage. 12ª edición. Páginas 115-135.
Neil A. Campbell. 2005. Biología. Editorial Panamericana. Septima Edición. Páginas 178-185