PRÁCTICA NO.

2 MICROSCOPIO

Introducción

El microscopio es un instrumento que permite observar microorganismos imposibles de ver a simple

vista. A mediados del siglo XVII el holandés, Antony van Leeuwenhoek, utilizando microscopios
simples de fabricación propia, describió por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y
glóbulos rojos. Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecánicos que
aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso. Carl Zeiss, mejoró la microscopía de inmersión
sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000 veces. El
microscopio óptico es un instrumento que contiene una o varias lentes que permiten obtener una
imagen aumentada del objeto y que funciona por refracción. El microscopio óptico puede ser
monocular, consta de un solo tubo y para la observación se utiliza un solo ojo. El binocular es cuando
posee dos tubos y la observación se hace con los dos ojos. El microscopio óptico está conformado
por tres sistemas:

a) El sistema mecánico constituido por una serie de piezas que permiten el movimiento para el
enfoque del objeto: brazo, base o pie, platina, pinzas de sujeción, tornillo macrométrico, tornillo
micrométrico y tubo.

b) El sistema óptico comprende el conjunto de lentes que permiten el aumento de las imágenes que
se observan a través de ellas formado por el ocular y objetivos.

c) El sistema de iluminación comprende una lámpara incandescente de tungsteno sobrevoltada, el

espejo, el diafragma y el condensador; dispuestos de tal manera que ilumine la preparación u objeto
que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada.

La observación por microscopio es el método más común utilizado tanto para la detección directa
de microorganismos en las muestras médicas como para la caracterización de microorganismos
desarrollados en los cultivos. La microscopía se define como el empleo de un microscopio para
aumentar de tamaño objetos demasiado pequeños que no se pueden observar a simple vista, de
modo que puedan verse con facilidad.

El método empleado para procesar las muestras del paciente está determinado por el tipo y la
fuente corporal de la muestra. Las coloraciones o los colorantes específicos aplicados a las muestras,
combinados con determinados métodos de microscopía, pueden ayudar a detectar los agentes
etiológicos de una manera rápida. La microscopia también desempeña un papel clave en la
caracterización de microorganismos cultivados en el laboratorio.

Las células teñidas que se van a observar en el microscopio deben parecerse lo más posible a las
células vivas. La fijación es el procedimiento que permite que las células se conserven y además
permite que se fijen firmemente al portaobjetos, esto se puede lograr con calor o con algún alcohol
dependiendo de la naturaleza de la muestra.

Los microorganismos se pueden teñir satisfactoriamente con un solo colorante, esto es tinción
simple, o bien utilizando tinciones diferenciales que permiten clasificar a las bacterias según sus
propiedades de tinción.
Objetivos

a) Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales.

b) Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra.

c) Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersión.

Material

Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental, suelo, etc. Colorantes para
tinción: Cristal violeta Safranina Azul de metileno

Microscopio y aceite de inmersión

Desarrollo

Bacterias del yogurt

1.Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua.

2.Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa.

3. Teñir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos.

4.Observar al máximo aumento del microscopio.

Bacterias del sarro dental

1.Con un palillo tomar una pequeña porción de sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre
el portaobjetos.

2.Dejar secar y fijar con calor.

3.Teñir 2-3 min, lavar el exceso de colorante y secar.

Bacterias del suelo

1.Dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta

2.Después de varios días, las bacterias se habrán adherido al vidrio y sólo habrá que fijarlas por calor
y teñirlas con un colorante cualquiera. Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos, así
como la parte que no se va a teñir.