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En las estructuras cristalinas del enzima libre, disponibles hasta el momento se observa un grupo
hemo (figura 1), en el cual el hierro se encuentra unido a un grupo tiol (-SH) de una cisteina y a
una molécula de agua. La estructura secundaria del P450 consiste en aproximadamente 12 alfa
hélices, de las cuales las hélices I y L, altamente conservadas, están en contacto directo con el
grupo hemo. La hélice I contiene también residuos críticos implicados en el suministro de protones
a los intermediarios hidroperoxo y peroxo del ciclo catalítico. La zona del núcleo está constituida
por cuatro hélices (aD, aE, aI y aL), hélices J y K, dos láminas b, y una espiral denominada meander
loop (serpentina) (figura 2). Abarca entre 7-10 residuos de aminoácidos y se supone que juega un
papel en la unión del grupo hemo, y en la estabilización de la estructura terciaria de la proteína.
De un modo resumido, vemos que la molécula del enzima está constituida por una combinación
de regiones a-hélice y de hojas (laminas b), fundamentalmente en la región de la proteína que
rodea al grupo hemo (figura 3), mientras que las regiones más variables son las que constituyen
los lugares de anclaje a la membrana o de unión y reconocimiento de sustratos. La alta
conservación de la región del hemo, que se corresponde con el centro catalítico del enzima, refleja
un mecanismo común de transferencia de electrones y de protones y de activación de oxígeno. El
enzima permanece anclado a la membrana a través de una hélice hidrofóbica cercana al extremo
N-terminal, por lo que la mayor parte de la proteína se sitúa en la cara citosólica de la membrana.
Esta hélice transmembrana está seguida, por regla general, por una serie de aminoácidos básicos
cuyos residuos interaccionan con las cargas negativas de los lípidos de la membrana.
Figura 2. Estructura
secundaria y terciaria de las
proteínas P450.
Representación de la cara
distal del CYP2C5. El grupo
hemo se representa en
naranja y el sustrato en
amarillo.
Figura 3. Estructura
cristalina (Rayos X) del
P450cam. En rojo se
muestra la región C
terminal, en azul la N
terminal y en fucsia el
grupo hemo.
La hemoproteína se encuentra relacionada con una segunda proteína de membrana, la NADPH-
citocromo P450 reductasa en una relación aproximada de 10:1 (10 moléculas de citocromo P450
por cada una de reductasa); esta reductasa posee el complejo FAD/FMN capaz de trasferir los
electrones necesarios para la reacción oxidativa producida en el citocromo P450, aunque estos
electrones también pueden provenir desde el citocromo b5, que facilita su trasferencia desde el
NAD (P) H.
REACCIONES
Las reacciones de hidroxilación desempeñan un papel muy importante en la síntesis del colesterol
a partir del escualeno; así como en la conversión del colesterol en sales biliares y hormonas
esteroides. Todas estas reacciones de hidroxilación requieren NADPH Y O2. El átomo de oxígeno
del grupo hidroxilo procede del O2, y no de la molécula de H2O. De los dos átomos del oxígeno
(O2), uno se incorpora en el grupo hidroxilo, y el otro se reduce hasta H2O. Las enzimas que
catalizan estas reacciones se denominan por esto mismo “oxigenasas de función mixta” o, de
modo más abreviado, “mono-oxigenasas”.
b) La flavoproteína dirige los electrones a la adrenodoxina, una proteína con un átomo de hierro
(la adrenodoxina no contiene grupo prostético hemo).
c) Uno de los electrones de la adrenodoxina reduce el hierro férrico (Fe3+) del grupo hemo del
Citocromo P450 (Fe3+ → Fe2+). Sin la adición del e-, el Citocromo P450 no se enlazaría al O2
(recordar que la mioglobina y hemoglobina solo se unen al oxígeno cuando el átomo de hierro de
su grupo hemo se halla en el estado de oxidación ferroso).