Bioseguridad de equipos 1

Bioseguridad e Identificación de Equipos

Andrés Octavio blanco, Guillermo Álvarez, Jorman stifen Castro

Universidad Francisco de Paula Santander

Notas del autor

Andrés Octavio blanco, Guillermo Álvarez, Jorman stifen Castro, Facultad de Ciencias

Agrarias y del Ambiente, Universidad Francisco de Paula Santander

La información correspondiente a este informe debe estar dirigida a la Facultad de Ciencias

Agrarias y del Ambiente, Universidad Francisco de Paula Santander, campus Avenida Gran

Colombia No. 12E-96 Cúcuta- Colombia

Email: guillermoat@ufps.edu.co
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INTRODUCCION

La bioseguridad es el conjunto de normas que están diseñadas para la protección del individuo, la

comunidad y el medio ambiente del contacto accidental con agentes que son potencialmente

nocivos; es de vital importancia conocerlas y practicarlas activamente en el laboratorio.

De tener una práctica segura y eficaz influye también el conocimiento que se tenga sobre los

equipos utilizados en el laboratorio.

Por tanto, la primera visita al laboratorio fue sobre un aprendizaje de la importancia de la

bioseguridad, sus normas y los equipos utilizados en el laboratorio de genética molecular.

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OBJETIVOS

 Inculcar en los estudiantes una mentalidad preventiva que minimice la probabilidad de

accidentes en el laboratorio de biología molecular. Y también disminuir riesgos derivados

de la generación de residuos peligrosos.

 Promover criterios uniformes alrededor del manejo de los riegos para la salud y

ambientales asociados con las prácticas experimentales que se realizan en los laboratorios

de la universidad.

 Concientizar en los estudiantes que se deben tener en cuenta todas las recomendaciones y

consideraciones indicadas por el docente.

 Informar y motivar a los estudiantes sobre principios y normas de bioseguridad para su

aplicación activa en el trabajo de laboratorio.

 Identificar los diferentes equipos necesarios para las prácticas a realizar en el laboratorio

de biología molecular.
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MATERIALES

Cámara fotográfica, bata y libreta de notas.

PROCEDIMIENTO

Se realizó una breve descripción de todos los equipos presentes en el laboratorio designados para

la parte de docencia, como lo son: el vortex, la microcentrifuga, el baño seco, la balanza

eléctrica, plancha de calentamiento con agitación, incubadoras, autoclave, la cámara de

electroforesis vertical y la cámara de electroforesis horizontal. Además, se habló de la

importancia que tienen las micropipetas en las prácticas de genética molecular junto con las

puntas y microtubos o balas.

Luego se realizó un pequeño recorrido por las instalaciones del laboratorio donde se observaron

los equipos designados para la parte de investigación, equipos de alta importancia y alto costo

como: el nano-drop, termociclador, chemidoc y Trans-blot Turbo.

Y finalmente se discutió sobre las diferentes normas de bioseguridad a tener en cuenta y sobre

los reactivos que representan un peligro a la hora de utilizarse, junto con los cuidados que se

debe de tener; y las diferentes experiencias vividas que hacían referencia a los errores y

descuidos que se presentaron anteriormente en el laboratorio por no seguir las reglas

establecidas.
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DATOS Y RESULTADOS

Equipos utilizados en docencia:

Vortex Balanza eléctrica Microcentrifuga

Plancha de calentamiento Baño seco Centrifuga

con agitación
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Cámara de Electroforesis Autoclave Nevera

horizontal

Cámara de Zona de Electroforesis Micropipetas y Puntas

Electroforesis vertical

Tubos o Balas Incubadora Ducha lava ojos

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Zona importante

Equipos usados para Investigación

Cabina de flujo laminar Termociclador Centrífuga

Transiluminador Real-Time PCR Gene Pulser Xcell

Detection System
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Trans-Blot Turbo Campana de Humos Chemidoc

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DISCUSIONES Y CONCLUSIONES

Equipos básicos de protección individual (EPI)

-Protectores de ojos y cara: dentro de estos se puede nombrar las máscaras y los lentes de

protección. Las lentillas o lentes de contacto no brindan ninguna protección y es preferible evitar

su uso en el laboratorio. En caso de que la persona necesitara llevarlas, deberá usar gafas de

seguridad siempre que se encuentre a un riesgo biológico o bioquímico.

-protectores de manos: los guantes son de vital importancia, exclusivamente los guantes de

nitrilo, y aún más si se va a manipular el bromuro de etidio. Además hay que seguir unas

precauciones cuando se usan guantes como no hacer uso del teléfono y o abrir puertas ya que

estos pueden estar contaminados; además sé que se deben lavar las manos después de quitarse

los guantes.

-protectores de las vías respiratorias: las mascarillas en general son muy útiles, además

también está el tapabocas que es de uso obligatorio en el laboratorio.

-protectores de todo el cuerpo: se refiere a las batas de laboratorio, preferiblemente abrochadas

a la espalda y con los puños elásticos, en ocasiones es conveniente utilizar cubre zapatos.

Recomendación a tener en cuentas es que este vestuario que usamos en el laboratorio no se debe

llevar a sitio fuera de este como la cafetería, la biblioteca entre otros.

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Equipos básicos del laboratorio de genética molecular.

-Nevera o Refrigerador: mantienen un ambiente controlado que garantiza la conservación de

distintos fluidos y sustancias.

-Congelador: la congelación es un proceso que mantiene la viabilidad de muchas muestras de

ADN, de ahí un potencial de riesgo.

-Incubadoras: es un dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbiológicos

o cultivos celulares. Su función es mantener las condiciones óptimas y regular los factores

viables para el crecimiento celular.

-Termociclador: es una máquina de PCR o reciclador térmico de PCR que permite realizar los

ciclos de temperaturas necesarios para una reacción en cadena de la polimerasa de amplificación

de ADN o para reacciones de secuencia con el método de sanger.

-Microcentrifuga: es una máquina que pone en rotación una muestra más pequeña para separar

por fuerza rotatoria sus componentes o fases, en función de su densidad.

-Vortex: es un mezclador de vórtice, se usa para agitar pequeños tubos o frascos de líquido.

- Microtubos o Balas: son utilizados para verter la muestra y los reactivos de carga para su

posterior electroforesis o migración de ADN. Los más usados son de 1500 µl.

-Transiluminador: sirve para la observación de ADN después de la migración en el gel, debido

a los rayos UV que emite hace que se detalle bien las franjas del ADN migrado.

-Autoclave: es un dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor

de agua a alta presión.

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-Cámaras de Electroforesis y fuente de poder: la electroforesis es un método básico en el

campo de la biología molecular que consiste en la migración de las moléculas a través de un gel

u otro tipo de matriz de naturaleza porosa, en el que, por acción de un campo eléctrico, serán

separadas de acuerdo a su tamaño o peso molecular.

Existen dos tipos de electroforesis: electroforesis vertical y electroforesis horizontal.

Cámara de Electroforesis horizontal: es utilizada para la migración especialmente del ADN en

gel de agarosa.

Cámara de Electroforesis vertical: se usa para la migración de ADN y proteínas, se utiliza gel

de poliacrilamida.

-Cabina de flujo laminar: se utiliza para trabajar con cultivos celulares o cualquier otro sistema

de deba mantenerse limpio y deba evitarse la contaminación con partículas minúsculas.

-Micropipetas: es uno de los equipos o materiales más importantes, se debe usar con su

respectiva punta para una toma correcta de muestra o reactivo, la punta debe corresponder al

rango de la micropipeta.

Existen muchos rangos en la escala de 1µl a 1000 µl:

 Micropipeta Blanca: 0,5 µl a 10 µl. le corresponde la punta blanca. Es la de menor rango.

 Micropipeta Amarilla: 10 µl a 100 µl. Le corresponde la punta de color amarillo.

 Micropipeta Azul: 100 µl a 1000 µl. Le corresponde la punta de color azul y es la de

mayor rango.

Estas varias dependiendo de la marca y modelo.

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CUESTIONARIO

a) Consultar otras sustancias toxicas que se utilicen en el laboratorio de biología molecular.

R/ Dietil piro carbonato

Formaldehido

Solventes orgánicos

Trizol

Acido cacodílico

Ferrocianuro de potasio en solución

b) Consultar el uso de los siguientes equipos y menciónelos: termociclador de tiempo real,

foto documentador de geles, secuenciador automático y macroarrays (microarreglos).

R/ -Termociclador de tiempo real: La PCR a tiempo real permite cuantificar de

forma relativa la expresión de nuestro gen de interés en determinadas condiciones.

Su principio es: utilizar un gen de referencia cuya expresión es constante durante las

condiciones del experimento (gen constitutivo). El proceso consta de dos partes:

La expresión del gen de interés será normalizada con la expresión del gen constitutivo.

La expresión del gen de interés en las condiciones experimentales será relativizada con la

expresión del mismo gen en las condiciones control.

-foto documentadora de geles: se usa para visualizar las bandas de ácidos nucleicos

luego de la electroforesis y poder obtener unas imágenes de él.

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-secuenciador automático:

Secuenciadores automáticos capilares: Existen instrumentos de electroforesis capilar

que proporcionan una alternativa clara al sistema basado en geles de

acrilamida/bisacrilamida donde este soporte ha sido sustituido por un polímero que se

inyecta de forma automática en un capilar antes de cargar la muestra de secuenciación;

las muestras se van analizando una a una. Este tipo de secuenciadores se utiliza para

lecturas no superiores a unos 450pb.

Secuenciación automática en geles desnaturalizantes de acrilamida/bisacrilamida:

La secuenciación automática mediante geles desnaturalizantes, se realiza polimerizando

un gel de acrilamida/bisacrilamida entre dos cristales montados adecuadamente sobre el

cassette que sirve de soporte para los mismos y que posteriormente se acoplará en el

secuenciador automático para proceder a la carga de la muestras.

-macroarrays (microarreglos): Los microarrays constituyen la última línea de

técnicas basadas en la interacción de cadenas complementarias de ADN. Este tipo de

técnicas introducen básicamente dos nuevas innovaciones: el empleo de soportes sólidos

no porosos tales como cristal que facilitan la miniaturización y la detección basada en

fluorescencia y el desarrollo de métodos de síntesis in situ de oligonucleótidos a altas

densidades sobre el soporte sólido.

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c) Consultar acerca de las señales que se deben tener en el laboratorio de genética y biología

molecular.

R/ Deberá señalizarse la zona de trabajo cuando los productos utilizados sean altamente

tóxicos. En este caso se utilizará la señal de advertencia general y/o con la correspondiente a la

actividad que se realiza (p. ej. Uso de isótopos radiactivos).

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BIBLIOGRAFIA

-Universidad Colegio mayor de Cundinamarca, 2013, Biología celular y molecular,

recuperadode:https://biologiamolecularinteractiva.files.wordpress.com/2013/01/laboratorio-no-1-

bioseguridad.pdf

- García Miguel (2014). Aplicaciones de la PCR a tiempo real con el termociclador Mx3005p y

MxPRO. Granada-España: centro Pfizer-universidad de Granada. Recuperado

de:http://www.agilent.com/cs/library/slidepresentation/Public/Aplicaciones_de_la_PCR_a_tiemp

o_real_con_el_termociclador_Mx3005P_y_MxPRO.pdf

-María Rodríguez Calatayud (7,enero,2016), Documentador de Geles. Recuperado de:

https://prezi.com/pjv89fcplgu1/documentador-de-geles/

- Rodríguez y Santiago (2015), Secuenciación automática de ADN. Recuperado de:

http://www2.iib.uam.es/seq/tecnicas/biomed1.htm#tipos

- Baelo et al. (2013) manual de seguridad y buenas prácticas en el laboratorio. Recuperado de:

http://servicios.unileon.es/gestionderesiduos/wpcontent/blogs.dir/34/files/2014/03/guia-de-

seguridad-y-buenas-practicas-en-el-laboratorio.pdf