INSTITUTO POLITÉCNICO

NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL
INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA
BIOTECNOLOGÍA DE CULTIVOS CELULARES

INVESTIGACIÓN PREVIA SOBRE Castilleja tenuiflora

INTEGRANTES:
Valadez Gil Juan Emanuel
GRUPO 4FV5

08 MARZO 2018
 ÍNDICE
I. Ficha técnica de la planta y usos de la especie 3

II. Usos farmacéuticos de la especie vegetal 4

III. Justificación 5

IV. Explante utilizado 5

V. Objetivo final de la obtención de callos, brotes y plantuelas 6

 Ficha técnica de la planta

 1Nombre científico: Castilleja tenuiflora Benth

 Sinónimos: Castilleja canescens Benth., C. tancitaroana Nesom.
 Nombre común: cola de borrego, garañona, hierva del cáncer (México), Calzón de indio (Colima y
Michoacán), hierba del cáncer (San Luís Potosí y Chihuahua), saca miel (Sinaloa).
 Taxonomía: Reino: Plantae; Subreino: Traqueobionta (plantas vasculares); Superdivisión:
Spermatophyta (plantas con semillas); División: Magnoliophyta (plantas con flor); Clase: Magnoliopsida
(dicotiledóneas); Subclase: Asteridae; Orden: Scrophulariales.
 Características: Hábito y forma de vida: Planta herbácea o subarbustiva (planta pequeña, que no
presenta órganos decididamente leñosos).
Tamaño: De 30 cm a 1 m de alto.
Tallo: Erecto, muy ramificado, con pelos largos y tiesos muy largos y rígidos,
que llegan a ser blancos a blanco-grisáceo.
Hojas: Sésiles (el limbo (lámina) se asienta directamente en el tallo) y al
menos levemente auriculadas (con oreja) en la base, de 1 a 4.5 cm de largo,
con tricomas suaves y largos o pelos largos y tiesos.
Inflorescencia: Racemosa, con numerosas flores, pedicelos (estructura que
une a la flor o al fruto con la rama que la sostiene) de 3 a 5 (10) mm de largo, ápice (extremo superior)
agudo, en ocasiones teñido de rojo.
Flores: Corola de 3 a 4.5 cm de largo, de color anaranjado, ocasionalmente amarilla, con pelos simples
y muy cortos, de 1.5 a 2 cm de largo; anteras de 2 a 3 mm de largo; estilo de 3 a 4 cm de largo, estigma
(parte del gineceo que recibe el polen durante la polinización) bilobulado.
Frutos y semillas: Cápsula ovoide, de 9 a 14 mm de largo; semillas elipsoides de ± 1.8 mm de largo, de
color café.

1
IIKAY ERDOGAN O. Biotechnological Production of Plant Secondary Metabolites. Edit. BenthameBooks. Pag. 91-92
 Usos farmacéuticos de la especie vegetal

Esta planta es de interés farmacéutico ya que el extracto de sus

metabolitos secundarios sirve para la formulación de
medicamentos antinflamatorios, antidepresivos y anti-
ulcerogenico, aunque también se buscan metabolitos para el
tratamiento del cáncer ya que comúnmente la medicina
tradicional Mexicana lo usa para tratar sintomatologías del cáncer.
Los estudios químicos de esta especie han demostrado la
presencia de metabolitos secundarios tales como: iridoides
glicosilados bioactivos, también se ha reportado que se
encuentran presentes los flavonoides y derivados feniletanoides.

 Flavonas: Las características antinflamatorias y

antioxidantes que contienen los flavonoides explican sus efectos de protección sobre
enfermedades como úlceras gástricas, diabetes mellitus, alergias, infecciones virales e
inflamaciones. Cuando se consumen en exceso y más de forma sintética estos pueden provocar
daños en el corazón (lesiones cardiacas), y en el embarazo pueden perjudicar el desarrollo fetal.
 Feniletanoides glicosilados: son sustancias naturales que pueden utilizarse para el tratamiento
de enfermedades crónicas (por ejemplo, cardiacas y cáncer) debido a su amplia gama de
actividades biológicas.
 Iridoides glicosilados: presentan propiedades beneficiosas sobre la función hepática y biliar.
También han mostrado actividad antiinflamatoria, antimicrobiana, antitumoral y antiviral, y se han
utilizado como antídoto en el envenenamiento producido tras el consumo de hongos venenosos
del género Amanita.
 Justificación
Castilleja tenuiflora Benth. (Familia Scrophulariaceae) es una planta mexicana medicinal,
utilizada tradicionalmente para tratar el cáncer. Esta especie se conoce comúnmente como
“hierba del cáncer”. En la parte aérea de C. tenuiflora se identifican iridoides glicosilados.
Algunos compuestos de este tipo han demostrado actividad antitumoral e inmunoestimulante.
Esta especie es demandada y recolectada de manera no sostenible para su comercialización,
provocando que sus poblaciones estén amenazadas. El cultivo in vitro de C. tenuiflora es una
alternativa biotecnológica que permite micropropagar esta especie y producir los iridoides
glicosilados bioactivos. Por lo tanto debido a la recolección no moderada de especies silvestres
de C.tenuiflora como auxiliares en la sintomatología del cáncer surge la necesidad de propagar
esta especie mediante cultivos in vitro de callos, brotes y raíces con la finalidad de reducir en
un pequeño porcentaje su recolección no moderada

Explante utilizado

Rosas et. Al (2014), reporta que se deben de emplear hojas colectadas del espécimen en
cuestión de 0.8 cm de largo , las cuales deben de ser lavadas con detergente comercial durante
5 minutos y enjuague con agua desionizada, las cuales después deben de ser sumergidas a
una solución de hipoclorito de sodio al 1% y Tween 80 al 0.01% durante 5 minutos y se lavan
3 veces con agua desionizada estéril, como último proceso, las hojas deben de ser sumergidas
en etanol al 70 % y benomilo 1 g/L durante 30 segundos.

Siembra

El mismo autor señala que los explantes deben ser sembrados en frascos con 30 mL del medio
de cultivo Murashige y Skoog complementado con 3% de sacarosa y 0.2 % de fitagel. El pH del
medio debe de ser ajustado a 5.8 antes de esterilizar. Se colocan 5 explantes distantes entre
sí, utilizando las auxinas: ácido 2,4 diclorofenoxiacetico (2,4-D) y ácido α-naftalenacetico (ANA)
y las citocininas : cinetina (CK) y 6-bencilaminopurina (6-BAP) en una concetracion de 10 µM .
Las condiciones de incubación óptimas reportdas son mantener el cultivo en un fotoperiodo de
16 horas de luz (150-200 µmol/m2s).
 Establecimiento y mantenimiento de raíces in vitro

Los autores señalan que las raíces obtenidas a partir del paso anterior se trasfieren a frascos
de boca ancha de 6 cm de diámetro y con volumen nominal de 200 mL , cubiertos con tapa de
rosca de plástico , a las cuales se les debe de adicionar 30 mL del medio Ms liquido sin
reguladores de crecimiento vegetal y 3% de sacarosa . EL pH debe de ser ajustado a 5.8 antes
de esterilizar. Las raíces se cultivan en agitación orbital a 100 r.p.m, iluminación continua (150-
200 µmol/m2s). Los autores obtuvieron resultados a los 20 días , cambiando ¼ del medio
agotados cada dos días por medio fresco.

Cultivo de brotes y plantulas

En la metodología descrita por los autores señalan que los brotes obtenidos en el paso anterior
se deben de trasnferir a frascos de boca ancha de 6 cm de diámetro y con un volumen
nominal de 200 mL , cubiertos con tapa rosca de plástico , a las cuales se le adicionan 30 mL
del médio MS liquido sin reguladores de crecimiento vegetal y 3% de sacarosa , los brotes
deben de ser cultivados en agitación orbital d e100 r.p.m. bajos las mismas condiciones del
paso anterior.

Las plantulas generada a partir de los brotes deben de ser resembradas cada 20 días en medio
MS con 3 % de sacarosa y 0.2% de fitagel y sin reguladores de crecimiento, pH de 5.8 antes
de esterilziar , bajo las ocndicones de iluminación iguales a los pasos anteriores.

Objetivo final de la obtención de raíces y plantulas

En el trabajo citado, el material vegetal fue secado bajo condiciones de obscuridad a

temperatura ambiente. El material vegetal seco fue molido por separado y almacenado. Con la
finalidad de realizar una extracción de ambas partes de la planta. Se obtuvo el extracto acuoso,
metanoico y acético, empleando rotavapor al vacío. Con la finalidad de realizar el
fraccionamiento de los extractos y analizarlos por cromatografía en capa fina , posteriormente
el extracto fraccionado fue analizado mediante cromatografía en HPLC con la finalidad de
probar la presencia de compuestos que le confieren la actividad farmacológica descrita.