Cátedra de Química Biológica

Facultad de Farmacia y Bioquímica

Universidad de Buenos Aires
Nombre: Fiorella Agustina Lista
Comisión: 02
Alacena: 33
Año: 2017

TRABAJO PRÁCTICO I
“Determinación de la concentración de proteínas
mediante el método colorimétrico de Biuret”

Objetivos:

 Determinar la concentración de una solución de ovoalbúmina por un

método colorimétrico y espectrofotométrico.
 Medir la concentración proteica de un homogenato de hígado de rata
mediante el método colorimétrico de Biuret.

Materiales y métodos:

Según la guía de Trabajos Prácticos - Parte I de Química Biológica 2017, páginas

11,12 y 13.

1
Cátedra de Química Biológica
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad de Buenos Aires
Nombre: Fiorella Agustina Lista
Comisión: 02
Alacena: 33
Año: 2017

Resultados:

Anexo I: Reacción colorimétrica de Biuret

Tabla I: Protocolo de trabajo a partir del cual se realiza la curva de calibración

Tubo H2 O Solución Solución de Homogenato Reactivo de

patrón de ovoalbúmina de hígado Biuret
(nº) (ml) albúmina (ml) de rata (ml)
(ml) (dil 1/5)
1-2 2,0 - - - 4,0
3-4 1,5 0,5 - - 4,0
5-6 1,0 1,0 - - 4,0
7-8 0,5 1,5 - - 4,0
9-10 - 2,0 - - 4,0
11-12 1,2 - 0,8 - 4,0
13-14 1,5 - - 0,5 4,0

Tabla II: Concentración de solución patrón de ovoalbúmina en cada tubo

Tubo Concentración
(nº) (mg/mL)
1-2 0,000
3-4 0,167
5-6 0,333
7-8 0,500
9-10 0,667

Tabla III: Masa de BSA en cada tubo

Tubo Masa
(nº) (mg)
1-2 0
3-4 1
5-6 2
7-8 3
9-10 4

2
Cátedra de Química Biológica
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad de Buenos Aires
Nombre: Fiorella Agustina Lista
Comisión: 02
Alacena: 33
Año: 2017

*Nota: la simplificación de datos puede realizarse ya que se trabaja con un mismo

volumen final en todos los tubos.

Tabla IV – Análisis espectrofotométrico: Datos de absorbancia para cada tubo

Tubo Absorbancia Tubo Absorbancia

(nº) (540 nm) (nº) (540 nm)
1 0,028 8 0,120
2 0,025 9 0,157
3 0,073 10 0,167
4 0,070 11 0,138
5 0,105 12 0,143
6 0,095 13 0,197
7 0,134 14 0,094

*Nota: El valor de absorbancia del tubo nº 13 no ha sido tenido en cuenta para los cálculos

Gráfico I: Absorbancia en función de la concentración de BSA

0.18
0.16
ABSORBANCIA (540 nm)

0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0 1 2 3 4 5
CONCENTRACION BSA (mg/mL)

Ecuación de la recta: y = 0,195x + 0,032

Regresión lineal: R² = 0,981

3
Cátedra de Química Biológica
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad de Buenos Aires
Nombre: Fiorella Agustina Lista
Comisión: 02
Alacena: 33
Año: 2017

Gráfico II: Absorbancia en función de la masa de BSA

0.18
0.16
ABSORBANCIA (540 nm)

0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0 1 2 3 4 5
MASA DE BSA (mg)

Ecuación de la recta: y = 0,032x + 0,032

Regresión lineal: R² = 0,981

Tabla V – Datos de concentración y masa hallados para cada una de las muestras
incógnitas

TUBO MUESTRA CONCENTRACIÓN MASA

(n°) INCÓGNITA (mg/mL) (mg)
11-12 Ovoalbúmina 4,17 4,24
13-14 Proteínas totales* 19,1 19,4

*En homogenato de hígado de rata

4
Cátedra de Química Biológica
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad de Buenos Aires
Nombre: Fiorella Agustina Lista
Comisión: 02
Alacena: 33
Año: 2017

Anexo II – Medición de la absorbancia a 280 nm

MUESTRA CONCENTRACIÓN
(M)
A 3,47 𝑥 10−5
B 5,81 𝑥 10−5
C 8,22 𝑥 10−5
INCÓGNITA 9,93 𝑥 10−5

Conclusiones:

Luego de establecer claramente el protocolo de trabajo que se detalla al comienzo de la

sección de resultados, se logró determinar la concentración de la solución de ovoalbúmina
y la concentración total de proteínas de una muestra de homogenato de hígado de rata.
Asimismo, pudieron determinarse las masas correspondientes a cada muestra, ya que al
trabajar con volúmenes finales iguales en los tubos, pueden simplificarse los cálculos y
efectuar una curva de calibración tanto para la determinación de la concentración de la
muestra incógnita como la de la masa.
Las determinaciones mencionadas pudieron llevarse a cabo a través de la utilización del
método colorimétrico de Biuret, en el cual se produce una reacción de iones 𝐶𝑢2+ en
medio alcalino con compuestos que poseen enlaces peptídicos o amida consecutivos o
separados por un átomo de carbono intermedio, tales como presentan la ovoalbúmina y
las proteínas del homogenato. Esta reacción, da un complejo color púrpura, donde la
intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína/as. Utilizando los
datos obtenidos de absorbancia para cada una de las diluciones de los patrones de BSA,
pudieron construirse efectivamente las curvas de calibración.
Finalmente, mediante la utilización de la Ley de Lambert y Beer, con
absorbancias medidas a 280 nm, pudieron calcularse las concentraciones para las
muestras A, B y C.
Se ha determinado que la muestra incógnita correspondía a la muestra C debido a
que es esta muestra la que mayor semejanza en concentración presenta respecto de la
calculada para la muestra incógnita.

5
Cátedra de Química Biológica
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad de Buenos Aires
Nombre: Fiorella Agustina Lista
Comisión: 02
Alacena: 33
Año: 2017

Anexo de cálculos:

6
Cátedra de Química Biológica
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad de Buenos Aires
Nombre: Fiorella Agustina Lista
Comisión: 02
Alacena: 33
Año: 2017

7
Cátedra de Química Biológica
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad de Buenos Aires
Nombre: Fiorella Agustina Lista
Comisión: 02
Alacena: 33
Año: 2017