NANOPARTÍCULAS DE COBRE COMO POTENCIAL

AGENTE ANTIMICROBIANO EN LA DESINFECCIÓN DE

CANALES RADICULARES DENTALES

PROYECTO DE TESIS PARA OBTENER EL TITULO DE CIRUJANO DENTISTA

PRESENTADO POR:

RUIZ CORDOVA, ROSARIO DEL PILAR

BACHILLER EN ODONTOLOGIA

LIMA- PERU

2017
 Índice

CAPÍTULO I. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1. Descripción de la situación problemática
1.2. Formulación del problema
1.3. Objetivos de la investigación
1.3.1 objetivo general
1.3.2 objetivos específicos
1.4. Justificación de la investigación
1.4.1 importancia de la investigación
1.4.2 viabilidad de la investigación
1.5. Limitaciones del estudio
CAPÍTULO II. MARCO TEÓRICO
2.1. Antecedentes del estudio
2.2 bases teóricas
2.3. Definiciones de términos básicos
CAPÍTULO III. HIPÓTESIS
3.1. Formulación de hipótesis
3.1.1 hipótesis general
3.1.2 hipótesis especificas
3.2 variables y definición operacional
CAPITULO IV. METODOLOGÍA
4.1 diseño metodológico
4.2 diseño muestral
4.3 técnicas de recolección de datos
4.4 técnicas estadísticas para el procesamiento de la información
4.5 aspectos éticos
RECURSOS Y CRONOGRAMA
FUENTES DE INFORMACIÓN
ANEXOS
CAPITULO I. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1. Descripción de la situación problemática 1.2. Formulación del problema 1.3. Objetivos de la
investigación 1.3.1objetivo general 1.3.2 objetivos específicos 1.4. Justificación de la investigación
1.4.1 importancia de la investigación 1.4.2viabilidad de la investigación 1.5. Limitaciones del
estudio

1.1. Descripción de la situación problemática

El cobre fue registrado como el primer material antimicrobiano sólido y su

disponibilidad permite que constituya una importante opción como agente
antibacteriano. Al tamaño de nanopartícula no supera los 100 nm, lo que
permite una interacción estrecha con las membranas microbianas, potenciando
aún más su efecto. Genera radicales hidroxilos tóxicos que provocan daño en
la membrana celular de bacterias Gram negativas y Gram positivas, entre
estas últimas, Enterococcus faecalis, presente en conductos radiculares
infectados.1

La capacidad de disolución de tejido orgánico de estas soluciones, hace que

fragmentos de pulpa en estado sólido sean disueltos por la propia solución
irrigante, facilitando su remoción del interior del sistema de conductos
radiculares. La revisión de la literatura demostró que no se ha estudiado a
fondo la concentración de las soluciones de hipoclorito de sodio en su forma
comercial. 2

1.2 Formulación del problema

Actualmente en búsqueda sobre tesis en la USMP desde el año 2012 no

se han reportado estudios sobre las variables a estudiar, por lo que el
presente estudio pretende dar respuesta a la siguiente interrogante.
 ¿EXISTE RELACION ENTRE NANOPARTÍCULAS DE COBRE E
HIPOCLORITO DE SODIO COMO POTENCIAL AGENTE
ANTIMICROBIANO EN LA DESINFECCIÓN DE CANALES
RADICULARES DENTALES?

1.3 Objetivos de la investigación

1.3.1 Objetivo general

Determinar si las nanopartículas de cobre como potencial agente

antimicrobiano en la desinfección de canales radiculares dentales.

1.3.2 Objetivos específicos

1. Evaluar el potencial agente antimicrobiano en canales radiculares.

2. Determinar el potencial agente antimicrobiano de las nanoparticula de cobre
en la desinfección de conductos radiculares.
3. Determinar el potencial agente antimicrobiano del hipoclorito de sodio en la
desinfección de conductos radiculares.
4. Comparar los resultados según periodo de tiempo.

UA VI VD

Nanoparticulas Potencial
de Cobre agente
antimicrobiano

Canales
radiculares
Vi Desenlace
 Hipoclorito Potencial
de Sodio agente
antimicrobiano

1.4 Justificación de la investigación

1.4.1 Importancia de la investigación

Este trabajo se justifica debido a que tiene relevancia social porque los pacientes
tienen los conductos radiculares infectados con diferentes microorganismos, con la
utilización de las nanoparticulas de cobre tendrá mejor acción antimicrobiana, lo
cual el tratamiento será más eficaz y más corto. Además, tiene una importancia
teórica porque aportara nuevos conocimientos sobre las nanoparticulas de cobre
respecto a sus propiedades antimicrobianas que pueden ser aplicables en el
campo de la endodoncia. Así mismo tiene una importancia practica porque las
nanoparticulas de cobre pueden ser una alternativa de solución muy aparte del
hipoclorito de sodio en el manejo de desinfección de conductos radiculares.

1.4.2 Viabilidad de la investigación

El presente estudio será viable gracias al apoyo de la oficina de grados y títulos de

la facultad de odontología de la Universidad de San Martin de Porres mediante la
revisión y aprobación del proyecto, el otorgamiento de la carta de presentación a
la institución donde se realizará y la instrucción de asesores y estadísticos pa

ra el desarrollo del estudio. Además del permiso de la especialidad de endodoncia

de la clínica de la Universidad de San Martin de Porres, para la recolección de
datos.

1.5 Limitaciones del estudio

 Dificultad de obtención de nanoparticulas de cobre.

 Capacitación previa para el manejo de nanoparticulas de cobre.
 Contar con un especialista en microbiología para el estudio.
CAPÍTULO II. MARCO TEÓRICO
2.1. Antecedentes del estudio 2.2 bases teóricas 2.3. Definiciones de términos
básicos

2.1 Antecedentes del estudio

Ameer Azam (2012), es un tipo de estudio in vitro prospectivo comparativo, en el

país de Arabia Saudita. Objetivo: El CuO es uno de los óxidos de metal de
transición más importantes debido a sus cautivantes propiedades. Se utiliza en
diversas aplicaciones tecnológicas tales como alta temperatura crítica
superconductores, sensores de gas, aplicaciones fotoconductoras, etc.
Recientemente, ha sido utilizado como un agente antimicrobiano contra varias
especies bacterianas. Aquí sintetizamos diferentes y exploró la actividad
antibacteriana dependiente del tamaño de cada CuO preparación de
nanopartículas. Métodos: Las nanopartículas de CuO fueron sintetizadas usando
un método de combustión de gel. En este enfoque, trihidrato de nitrato cúprico y
ácido cítrico se disolvieron en agua destilada con una relación molar de 1: 1.
La solución resultante se agitó a 100 ° C, hasta que se formó gel. Se permitió que
el gel se quemara a 200 ° C para obtener un polvo amorfo, que se recoció
adicionalmente a diferentes temperaturas a obtener nanopartículas CuO de
diferentes tamaños. A continuación, se ensayaron las propiedades antibacterianas
utilizando la difusión de pozos, concentración inhibitoria mínima y métodos de
concentración bactericida mínimos.
Resultados: Los espectros XRD confirmaron la formación de nanopartículas CuO
monofásicas. Se encontró que el tamaño de cristalina aumentaba con un aumento
en la temperatura de difusión atómica Se observó un tamaño de cristalito mínimo
de 20 nm en el caso de CuO nanopartículas recocidas a 400 ° C. Los resultados
de la microscopía electrónica de transmisión corroboran así con los resultados
XRD. Todas las nanopartículas de CuO exhibieron efectos inhibitorios contra
ambos
Gram-positivas y negativas. El tamaño de las partículas se correlacionó con su
Actividad antibacteriana.
Conclusión: Se encontró que la actividad antibacteriana de las nanopartículas de
CuO era dependiente del tamaño. Además, las nanopartículas de óxido de cobre
monodispersadas de tamaño mínimo, altamente estables, sintetizadas durante
este estudio demostraron un aumento significativo de las actividades
antibacterianas contra tanto bacterianas Gram positivas como negativas.

Cárdenas-Bahena(2012), es un tipo de estudio de opinión elaborado en México. El

objetivo es determinar la concentración de hipoclorito de las soluciones utilizadas
para el riego del conducto y compararlas con concentraciones consideradas
«ideales» en la literatura científica (5,25 y 2,5% (p / v)). Métodos: Estudio de
opinión entre especialistas endodónticos para determinar la marca comercial de
hipoclorito sódico más utilizada en el riego de los canales radiculares. Titulación
yodométrica para determinar las concentraciones de la solución. Clorox Regular
Bleach (Oakland, California) marca comercial más citada en la literatura.
Comparación media de diferentes marcas comerciales y lotes. Las
concentraciones se consideraron ideales 5,25 y 2,5% (p / v). Resultados: Las
marcas comerciales de hipoclorito de sodio más utilizadas por 192 especialistas
en endodoncia fueron: Cloralex (43,2%), Concentrado Clorox (30,2%), Viarzoni-t
(16,7%), Gran Valor (1,0%), «Los Patitos» 0,5%) y otras marcas (8,3%).
Concentración Clorox (5,43%, 5,42-5,45), Cloralex (5,40%, 5,38-5,41), Gran Valor
(6,14%, 6,32-6,23) y Clorox Regular Los Patitos (5,82%, 5,80-5,83) superaron la
concentración de hipoclorito de sodio al 5,25%. Viarzone-T (2,86%, 2,85-2,87)
clasificado por encima de la concentración de hipoclorito al 2,5%. Hubo diferencias
estadísticamente significativas (p ≤ 0,001) entre los promedios de diferentes
marcas comercialesy lotes, con respecto a las concentraciones consideradas
ideales (5,25 y 2,5% (p / v) Conclusión: Las concentraciones de hipoclorito en
productos comerciales de uso común no son las concentración recomendada en la
literatura científica (5.25 w / v y 2.5% p / v), lo que puede causar daño tisular en
los casos en que las soluciones de hipoclorito se usan indebidamente sin
aislamiento del campo.

Sanchez Venegas Jaime (2016), es un tipo de estudio tipo de estudio in vitro

prospectivo comparativo, elaborado en Peru. El objetivo es reportar la actividad
inhibitoria del crecimiento bacteriano por nanopartículas de cobre cementado y de
cobre comercial. Metodos: La concentración mínima inhibitoria (CMI) de las
nanopartículas de cobre en estudio sobre las bacterias S. aureus ATCC 6538 y E.
coli ATCC 35218, se determinó por el método descrito por Sarker et al. (2007) en
placas de ELISA al cual se hizo modificaciones que se describen más adelante.
Se analizaron doce concentraciones de cada muestra de nanopartícula, las que
fueron distribuidas en placas de ELISA de 96 pocillos en forma creciente (desde
10 μg/mL hasta 120 μg/mL), las NPCu-comercial fueron distribuidos en las filas A
y B, y las NPCu-cementado en las filas C y D .Para el ensayo de la CMI, la
modificación que se realizó al método de Sarker et al. (2007), consistió en usar
como medio de cultivo para el crecimiento de bacterias, caldo nutritivo, al cual se
incorporó el indicador rojo de fenol (composición en g/L: sacarosa 10; peptona de
caseína 5.0; peptona de carne 5.0; cloruro de sodio 5.0 y rojo de fenol 0.018)
ajustado a un pH de 7.4 ± 0.2. Para realizar el inóculo bacteriano se hizo un
cálculo previo considerándose un volumen exacto en el cual se va a realizar la
inoculación, en nuestro caso fue el 10% (20 μL) del volumen total del pocillo (200
μL). Para ello, se diluyó en 1/20 la suspensión bacteriana, equivalente al patrón
0.5 de McFarland (1 x 108 UFC/mL), a fin de obtener 5 x 105 UFC/mL en cada
pocillo de la placa. La inoculación con la suspensión bacteriana estandarizada se
realizó dentro de los 15 minutos de preparada la misma, para evitar que el número
de microorganismos aumente por duplicación. Cada pocillo fue inoculado
utilizando una micropipeta automática multicanal. Para el control negativo, las
cepas bacterianas fueron cultivadas en caldo nutritivo que tiene el indicador rojo
de fenol y se agregó el antibiótico estreptomicina a una concentración de 120
μg/mL. Para el control positivo las cepas bacterianas fueron cultivadas en el
mismo medio de cultivo en ausencia de antibiótico . Concluida la inoculación
bacteriana, las placas de ELISA fueron selladas e incubadas a 37 °C por 24 horas.
El viraje del medio a rojo grosella indicó crecimiento microbiano. Resultados: Los
ensayos de la CMI de las dos muestras de nanopartículas fueron realizadas por
triplicado para cada cepa bacteriana, obteniéndose los mismos resultados. Una
vez transcurrido el periodo de incubación a 37 °C de las placas de ELISA se
observaron cambios en la coloración de los pocillos detectados a simple vista. Se
consideró como crecimiento bacteriano todo cambio de color en el medio de
cultivo de amarillo a rojo grosella, dado que se realizaron tres replicas el estado de
positivo o negativo fue determinado según el estado más frecuente dentro de las
réplicas. Se observó inhibición del crecimiento de S. aureus ATCC 6538 por la
NPCu-comercial con 2.5 horas de molido a partir de la concentración de 20 μg/mL
(Fig. 5). No se observó ninguna inhibición de crecimiento de E. coliATCC 35218
con las nanopartículas estudiadas (Fig. 6). En la Tabla 1 se resume los resultados
obtenidos de la CMI de los dos tipos de nanopartículas (cobre comercial y cobre
cementado) frente a las dos cepas bacterianas usadas para el ensayo.
Conclusion: En el presente trabajo se realizó un estudio de la actividad inhibitoria
del crecimiento bacteriano por nanopartículas de cobre cementado comparando
con las de cobre comercial. Los resultados obtenidos muestran que las
nanopartículas de cobre comercial, a una concentración de 20 μg/mL, inhibe el
crecimiento de la bacteria Gram positiva S. aureus ATCC 6538 y no así en la
Gram negativa E. coli ATCC 35218, mientras que las nanopartículas de cobre
cementado no mostró ningún efecto inhibitorio en las dos cepas estudiadas. Para
tales resultados, utilizamos muestras de cobre nanoestructuradas obtenidas a
partir de los minerales de cabeza del Complejo Marañon que presentan
características claramente diferentes a aquellas obtenidas del cobre comercial. Si
bien es cierto que ambas nanopartículas muestran la presencia de cobre de cierta
pureza, el grado de contaminación en el cemento de cobre es mayor por la
presencia de fases espurias, formación de óxidos, además de la contaminación
natural del proceso de molienda que es igual en ambos tipos de cobre (comercial y
cemento). Por tanto, la contaminación de las nanoestructuras influye en el efecto
inhibitorio del crecimiento de las bacterias tal como fue reportado en varios
trabajos de investigación que utilizaron métodos diferentes al nuestro para obtener
diferentes tipos y tamaños de nanoestructuras de metales como el Cu y Ag
(Chatterjee et al. 2014, Leyva 2013, Chatterjee et al. 2012, Monge 2009, Nanda &
Saravanan 2009) y nanoparticulas de óxidos de metales como CuO, NiO, ZnO,
Sb2O3, Fe2O3 (Azam et al. 2012a y 2012b, Baek & An 2011, Jadhav et al. 2011).

El efecto inhibitorio del crecimiento microbiano que ejerce estas nanoestructuras

han sido probadas en diferentes especies Gram positivas (S. aureus, Bacillus
subtilis, Listeria monocytogenes) y Gram negativas (E. coli, Pseudomonas
aeruginosa, Salmonella typhi, Klebsiella pneumoniae). Por consiguiente, el rol del
tipo de nanoparticulas obtenidas y la sensibilidad de las bacterias no solo está
relacionado a la estructura de la pared celular de las bacterias Gram positivas y
negativas, sino que existen varios factores adicionales que influyen en la
susceptibilidad o tolerancia de las bacterias a estas nanoestructuras. Por ejemplo,
se ha determinado que E. coli es altamente susceptible a nanopartículas de CuO,
mientras que S. aureus y B. subtilis son menos susceptibles (Baek & An 2011,
Azam et al. 2012b). Si comparamos estos resultados de susceptibilidad a las
nanopartículas de CuO con nuestros resultados, usando nanopartículas de cobre
comercial, observamos resultados adversos, una alta susceptibilidad de S. aureus
y una alta tolerancia de E. coli a las concentraciones probadas (desde 10 hasta
120 μg/mL). Existen otros reportes como el de Chatterjee et al. (2012) quienes
sintetizan nanopartículas de Cu por un método distinto al nuestro y obtienen
buenos resultados de actividad antibacteriana a E. coli y S. aureus, ellos
argumentan que sus resultados se deben a la formación de iones de Cu inicial
más que a iones de Cu proveniente del CuO (Chatterjee et al. 2012, Chatterjee et
al. 2014).

Ameer Azam (2012), es un tipo comparTIVO, en el país de Arabia Saudita.

Objetivo: En este informe, demostramos la actividad antimicrobiana de las
nanopartículas de ZnO, CuO y Fe2O3 contra bacterias Gram-positivas y Gram-
negativas. Metodos: Las partículas nanométricas de tres óxidos metálicos (ZnO,
CuO y Fe2O3) se sintetizaron mediante una ruta de combustión sol-gel y se
caracterizaron por difracción de rayos X, espectroscopía infrarroja de transformada
de Fourier y técnicas de microscopía electrónica de transmisión. Los resultados de
la difracción de rayos X confirmaron la formación de una sola fase de los tres
nanomateriales. Se observó que los tamaños de partícula eran 18, 22 y 28 nm
para ZnO, CuO y Fe2O3, respectivamente. Usamos estos nanomateriales para
evaluar su actividad antibacteriana contra bacterias Gram-negativas (Escherichia
coli y Pseudomonas aeruginosa) y Gram-positivas (Staphylococcus aureus y
Bacillus subtilis). Conclusión: Entre los tres nanomateriales de óxido de metal,
ZnO mostró la mayor actividad antimicrobiana contra las bacterias Gram-positivas
y Gram-negativas utilizadas en este estudio. Se observó que las nanopartículas de
ZnO tienen un excelente potencial bactericida, mientras que las nanopartículas de
Fe2O3 exhibieron la menor actividad bactericida. Se demostró que el orden de
actividad antibacteriana era el siguiente: ZnO> CuO> Fe2O3.

2.2 Bases teóricas:

 1. Evaluar la desinfección de canales radiculares dentales según el agente
antimicrobiano.
2. Determinar el potencial agente antimicrobiano de las nanoparticula de cobre
en la desinfección de canales radiculares.
3. Determinar el potencial agente antimicrobiano del hipoclorito de sodio en la
desinfección de canales radiculares.
4. Comparar los resultados según periodo de tiempo.

Desinfección hipoclorito de sodio

canales radiculares dentales resultados
agente antimicrobiano. periodo de tiempo.
nanoparticula de cobre

2.2.1 CANALES RADICULARES DENTALES:

A. DEFINICION: Corresponden a las estructuras de la raíz dental

que incluyen a los forámenes
B. COMPOSICION:

2.2.2 AGENTES ANTIMICROBIANOS EN ENDODONCIA

A. DEFINICION: Sustancia química que impide el desarrollo o
favorece la muerte de un microorganismo.

B. TIPOS:

B.1. NANOPARTICULAS DE COBRE: Las nanopartículas de cobre son un grupo

de antimicrobianos tóxicos para la membrana celular de bacterias Gram-negativas
y Gram-positivas, por lo que podría ser una alternativa terapéutica en el futuro, ya
sea como medicación intracanal o como un irrigante para descontaminar y
desinfectar el conducto radicular.

COMPOSICION QUIMICA: El cobre tiene acción bactericida, principalmente

relacionada con su capacidad de dar y aceptar electrones en un proceso
continuo. Produce un radical hidroxilo que puede participar en una serie de
reacciones adversas a las macromoléculas celulares, como la oxidación de
proteínas y lípidos. Además, este compuesto se puede mejorar con polímeros
como quitosano, que estabiliza estas nanopartículas, aumentando su
biocompatibilidad, tiempo de liberación, reduciendo el riesgo de recolonización
bacteriana y formación de biopelículas dentro de los conductos, mejorando sus
propiedades antimicrobianas.

MECANISMO DE ACCION: A la capacidad de la nanopartícula de unirse a la

membrana bacteriana por interacción electrostática causando despolarización y
alteración de su integridad lo que produce filamentación de la célula; y a la
introduccion de las nanopartículas a través de los poros de la membrana
bacteriana por su pequeño tamaño, produciéndose solubilidad de estas las que
generan la formación de radicales libres, esto es, las especies reactivas de
oxigeno (EROs) y peroxidación de lípidos, causando estrés oxidativo en la bacteria
por desestabilización de la composición de la membrana, interrupción del
transporte de electrones, oxidación de proteínas, degradación del DNA y
perturbación y destrucción de las mitocondrias, conduciendo a la muerte del
microorganismo

MODO DE APLICACIÓN:

TIEMPO DE DURACION DEL EFECTO:

B.2. HIPOCLORITO DE SODIO: La Asociación Americana de Endodoncia ha

definido el hipoclorito de sodio como un claro, pálido, amarillento líquido verdoso,
extremadamente alcalino, con fuerte olor al cloro. Ejerce una acción de disolución
sobre orgánica permanece así como tejido necrótico. También es un potente
agente antimicrobiano.

COMPOSICION QUIMICA: Los hipocloritos también conocidos como compuestos

halogenados están en uso desde 1792 cuando fueron producidos por primera vez
con el nombre de Agua de Javele y constituía una mezcla de hipoclorito de sodio y
de potasio.
MECANISMO DE ACCION: El hidróxido de sodio es un potente solvente orgánico
y de grasa formando jabón (saponificación). El ácido hipocloroso es, además de
un solvente de tejido, un potente antimicrobiano porque libera cloro naciente que
se combina con el grupo amina de las proteínas formando cloraminas. El ácido
hipocloroso (HOCl) sufre una descomposición por acción de la luz y del calor
liberando cloro libre y secundariamente oxígeno naciente 2HOCl -------
> O2 + OH2O + Cl2. Las acciones del ácido hipocloroso dependen de su pH.
En medio ácido o neutro predomina la forma ácida no disociada (inestable y más
activa). En medio alcalino, prevalece la forma iónica disociada (estable y menos
activa). Por ese motivo la vida de almacenaje de las soluciones de hipoclorito de
sodio con pH elevado son más estables que las de pH próximo al neutro (solución
de Dakin) que tienen una vida útil más corta. La solución de hipoclorito de sodio
tiene baja tensión superficial, menor que la del agua.

MODO DE APLICACIÓN:

TIEMPO DE DURACION DEL EFECTO: Cuando una solución de hipoclorito de

sodio presenta tenor de cloro abajo del 0,3% ella no es efectiva contra Candida
albicans y Enterococcus faecalis. En concentraciones de 0,5% ellas son efectivas
en contra esos microorganismos en un tiempo de acción de 15 segundos

2.3. Definiciones de términos básicos

CANALES RADICULARES DENTALES: Los canales radiculares corresponden a

las estructuras de la raíz dental que incluyen a los foramenes de entrada de los
canales, canales propiamente dichos que pueden ser reconocidos como
principales, y que se acompañan en la mayoría de los casos de canales
accesorios que pueden terminar o no en un foramen apical. 4

NANOPARTÍCULAS DE COBRE: El cobre es un elemento esencial para el

metabolismo de las células animales y vegetales. Es un oligoelemento presente en
la mayoría de los organismos, y hay más de 30 tipos de proteínas que lo
contienen. El cobre, junto con el oro, fueron los primeros metales utilizados por el
hombre hace más de 9000 años. Hoy en día el consumo mundial de cobre es de
alrededor de 18 millones de toneladas por año.
Su actividad antimicrobiana es reconocida mundialmente y recientemente ha sido
registrada por la Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos como el
primer material antimicrobiano sólido. Ya en 2200 aC se usaba para esterilizar
heridas y agua potable. En el siglo XIX se observó que los trabajadores del cobre
eran inmunes al cólera, y su uso se generalizó en el siglo XX.

Se han realizado estudios clínicos y de laboratorio para demostrar su eficacia. En

los últimos años, el cobre se ha utilizado como material de construcción para
hospitales y centros médicos ya que sus propiedades antimicrobianas resultaron
útiles en la lucha contra las infecciones.1

AGENTE ANTIMICROBIANO:

Los antimicrobianos se definen, como medicamentos que destruyen los

microorganismos o impiden su multiplicación o desarrollo. Estos fármacos, se
dividen en antibacterianos, antivirales, antimicóticos, antimicobacterianos,
antiparasitarios y antirretrovirales. 5

CAPÍTULO III. HIPÓTESIS

3.1. Formulación de hipótesis 3.1.1Hipótesis general 3.1.2Hipótesis especificas 3.2 Variables y

definición operacional

3.1. Formulación de hipótesis

 3.1.1 Hipótesis general

¿EXISTE RELACION ENTRE NANOPARTÍCULAS DE COBRE E

HIPOCLORITO DE SODIO COMO POTENCIAL AGENTE ANTIMICROBIANO
EN LA DESINFECCIÓN DE CANALES RADICULARES DENTALES?

Hi: La desinfección de canales radiculares dentales es dependiente del uso de

las nanoparticulas de cobre e hipoclorito de sodio
Ho: La desinfección de canales radiculares dentales es independiente del uso
de las nanoparticulas de cobre e hipoclorito de sodio

3.1.2 Hipótesis especificas

1. Evaluar el potencial agente antimicrobiano en canales radiculares.

2. Determinar el potencial agente antimicrobiano de las nanoparticulas de
cobre en la desinfección de conductos radiculares.
3. Determinar el potencial agente antimicrobiano del hipoclorito de sodio en la
desinfección de conductos radiculares.
4. Comparar los resultados según periodo de tiempo.

1.
Hi1: Los agentes antimicrobianos presentan mayor potencial frente a los
canales radiculares
Ho1: Los agentes antimicrobianos presentan menor potencial frente a los
canales radiculares

2.
Hi2: La desinfección de conductos radiculares depende del potencial de las
nanoparticulas de cobre
Ho2: La desinfección de conductos radiculares no depende del potencial
de las nanoparticulas de cobre
 3.
Hi3: El hipoclorito de sodio presenta mayor potencial como agente
antimicrobiano en la desinfección de conductos radiculares.
Ho3: El hipoclorito de sodio presenta menor potencial como agente
antimicrobiano en la desinfección de conductos radiculares.

4.
Hi4: Las nanoparticulas de cobre según su periodo de tiempo es de 2.5 a 5
horas presentando menor efecto antimicrobiano que el hipoclorito de sodio
que tiene un perido de tiempo de 15- 20 min.
Ho.4: El hipoclorito de sodio según su periodo de tiempo es de 15 – 20 min
presentando mayor efecto antimicrobiano que las nanoparticulas de cobre
que tiene un periodo de tiempo de 2.5 a 5 horas.

3.2 Variables y definición operacional

V.INDEPENDIENTE:
- Nanoparticulas de Cobre: CUALITATIVA, DICOTOMICA, NOMINAL
- Hipoclorito de sodio: CUALITATIVA, DICOTOMICA, NOMINAL

V.DEPENDIENTE:
- Potencial agente antimicrobiana: CUANTITATIVA

V. INTERVINIENTES:

-Tipos de conductos radiculares: CUALITATIVA, POLITOMICA, NOMINAL

OPERACIONALIDAD DE VARIABLES

INSTRUMENTO DE RECOLECCION DE DATOS:

FICHA Nº

NANOPARTICULAS DE COBRE

1. APLICACIÓN

2. NO APLICACIÓN

HIPOCLORITO DE SODIO

1. APLICACIÓN

2. NO APLICACIÓN
POTENCIAL AGENTE ANTIMICROBIANO

1. Escherichia coli 14 – 20 mm

2. Pseudomonas aeuruginosa 10 – 21 mm

3. Bacillus subtilis 15 – 24 mm

4. Staphylococcus aereus 12 – 22 mm

TIPOS DE CONDUCTOS RADICULARES

1. C. principal

2. C. colateral

3. C. Lateral

4. C. accesorio

5. C. Interconducto

6. C. recurrente

7. Delta apical

8. C. Cavo interradiculara
 CAPITULO IV. METODOLOGÍA

4.1 Diseño metodológico 4.2 Diseño muestral 4.3Técnicas de recolección de datos

4.4 Estadísticas para el procesamiento de la información 4.5 Aspectos éticos

4.1 Diseño metodológico

Estudio Invitro

Según periodo de Según número de Según número de Según intervención del

recolección de datos evaluaciones muestra o investigador
población
Prospectivo Transversal Comparativo Observacional
Se necesita un tiempo de Se evaluará una En este estudio Solo esperamos y
espera de 2.5 horas sola vez la acción serán analizados observamos cuanto mide
desde que los agentes antimicrobiana de las nanoparticulas cada halo inhibitorio de cada
antimicrobianos ejercen los agentes. de cobre y el una de las bacterias después
su acción sobre las hipoclorito de de la palciacion de los
bacterias en las placas sodio. agentes antimicrobianos.
Petri.

4.2 Diseño muestral

4.2.1 Población:
La población será constituida por dientes anteriores monoradiculares
4.2.2 Muestra:
La muestra será constituida por Incisivos centrales superiores
4.2.3 Tipo de población:
Heterogénea por la variación de los tamaños de los conductos, forma
4.2.4 Tipo de muestreo:
No probabilístico por conveniencia
 4.2.5 Tamaño de muestra

4.2.6 Criterios de selección:

A. INCLUSION
 A las bacterias Escherichia coli, Pseudomonas aeuruginosa
, Bacillus subtilis, Staphylococcus aereus de conductos
principales.
 Personas entre las edades de 25 – 69 años

B. EXCLUSION
 A dientes con dislaceracion radicular
 Dientes en estado necrótico.

4.3 Técnicas de recolección de datos

1. Técnicas de investigación:
En el presente estudio se aplicará la observación directa para
evaluar las nanoparticulas de cobre y el hipoclorito de sodio en los
dientes anteriores monorradiculares y la observación indirecta a
través del halo inhibitorio para determinar el potencial agente
antimicrobiano de los agentes en la desinfección de conductos
radiculares.

2. Instrumento de recolección de datos:

Los espectros FTIR de las muestras se obtuvieron utilizando un espectrofotómetro

PerkinElmer FTIR (PerkinElmer Inc, Waltham, MA). La Determinación de la
actividad antimicrobiana por el método de difusión de pozos Se determinaron las
actividades antimicrobianas de las nanopartículas de CuO sintetizadas de
diferentes tamaños utilizando bacterias Gram-negativas (E. coli y P. aeruginosa) y
bacterias Gram-positivas (B. subtilis y S. aureus) siguiendo un método de difusión
de disco Kirby Bauer modificado. En resumen, las bacterias se cultivaron en caldo
Müller-Hinton a 35 ° C ± 2 ° C en una incubadora de sacudimiento orbital (Remi,
India) a 160 rpm. Se preparó un césped de cultivo bacteriano extendiendo 100 μl
de caldo de cultivo, que tenía 106 CFU / ml de cada organismo de ensayo en
placas de agar nutriente sólido. Las placas se dejaron reposar durante 10-15
minutos. para permitir la absorción del cultivo. Los pocillos de 8 mm de tamaño se
perforaron en el agar con la cabeza de las puntas de las micropipetas estériles.
Los pocillos se sellaron con una gota de agar fundido (0,8% de agar nutriente)
para evitar fugas desde el fondo de la placa. Utilizando una micropipeta, se
vertieron 100 μL (50 μg) de la muestra de la solución de nanopartículas en cada
uno de los cinco pocillos en todas las placas. Después de la incubación a 35 ° C ±
2 ° C durante 24 horas, se midió el tamaño de la zona de inhibición. Se ejecutó un
blanco de disolvente como control negativo mientras que el antibiótico (tetraciclina)
se usó como control positivo. Determinación de concentraciones inhibitorias /
bactericidas mínimas (MIC / MBC) Las concentraciones mínimas inhibitorias (MIC)
y las concentraciones bactericidas mínimas (MBC) de nanopartículas de CuO se
determinaron mediante el método de dilución de caldo que se ajustaba a los
estándares recomendados del Comité Nacional de Estándares de Laboratorio
Clínico ( NCCLS, ahora renombrado Instituto de Estándares Clínicos y de
Laboratorio, CLSI, 2000). La tetraciclina se usó como control positivo. Se preparó
una serie de dilución con 10 ml de medio de caldo nutriente que contenía 10-100
μg / ml de nanopartículas de óxido de cobre.

Cada conjunto se inoculó asépticamente con 50 μL de la suspensión bacteriana

respectiva (aproximadamente 106 UFC / mL). Las bacterias se sembraron en
placas de agar nutriente sólido. La concentración más baja que inhibe el
crecimiento bacteriano se definió como la CIM. Por el contrario, la concentración
mínima que inhibió completamente el crecimiento bacteriano se definió como la
concentración bactericida mínima (MBC) .24 Cada experimento se repitió tres
veces, y el crecimiento bacteriano resultante en tres placas correspondientes a
una muestra particular se promedió y se informó.

4.4 técnicas estadísticas para el procesamiento de la información

Procesamiento:
 Procesador/ ordenador Intel Core i3 y utilizaremos el programa
estadístico Excel, Spss v 22.0.
Los resultados serán expresados en tablas y gráficos.

Técnicas
Se evaluará las siguientes variables

V.INDEPENDIENTE:
- Nanoparticulas de Cobre: CUALITATIVA
- Hipoclorito de sodio: CUALITATIVA

V.DEPENDIENTE:
- Potencial agente antimicrobiana: CUANTITATIVA

V. INTERVINIENTES:

-Tipos de conductos radiculares: CUALITATIVA

Las muestras de estudios de mis variables independientes intervinientes son

cualitativa y de mis variable dependiente es cuantitativa

1. Evaluar el potencial agente antimicrobiano en canales radiculares

x D.S
Escherichia coli
Pseudomonas
aeuruginosa

2. Determinar el potencial agente antimicrobiano de las nanoparticula de cobre

en la desinfección de conductos radiculares.

Nanoparticulas de cobre
X D.S
Conducto principal
 Conducto colateral
Conducto lateral
Conducto accesorio
Conducto
interconducto
Conducto recurrente
Conducto delta
apical
Conducto cavo
interradicular

3. Determinar el potencial agente antimicrobiano del hipoclorito de sodio en la

desinfección de conductos radiculares.

Hipoclorito de sodio
X D.S
Conducto principal
Conducto colateral
Conducto lateral
Conducto accesorio
Conducto
interconducto
Conducto recurrente
Conducto delta
apical
Conducto cavo
interradicular
4. Comparar los resultados según periodo de tiempo.

Nanoparticulas de cobre Hipoclorito de sodio

x/ D.S Escherichia Pseudomonas Escherichia Pseudomonas
coli aeuruginosa coli aeuruginosa
Conducto
principal
Conducto
colateral
 Conducto
lateral
Conducto
accesorio
Conducto
interconducto
Conducto
recurrente
Conducto
delta apical
Conducto
cavo
interradicular

MATRIZ DE CONSISTENCIA:

TITULO NANOPARTÍCULAS DE COBRE COMO POTENCIAL AGENTE

ANTIMICROBIANO EN LA DESINFECCIÓN DE CANALES
RADICULARES DENTALES

PROBLEMA ¿EXISTE RELACION ENTRE NANOPARTÍCULAS DE

COBRE E HIPOCLORITO DE SODIO COMO POTENCIAL
AGENTE ANTIMICROBIANO EN LA DESINFECCIÓN DE
CANALES RADICULARES DENTALES?
MARCO TEORICO
- Desinfección
- hipoclorito de sodio
- canales radiculares dentales
- resultados
- agente antimicrobiano.
- periodo de tiempo.
- nanoparticula de cobre

HIPOTESIS Hi: La desinfección de canales radiculares dentales es dependiente del

uso de las nanoparticulas de cobre e hipoclorito de sodio

DISEÑO Prospectivo, Transversal, Comparativo, Observacional

POBLACION Y Población: será constituida por dientes anteriores monoradiculares

MUESTRA Muestra:
La muestra será constituida por Incisivos centrales superiores

OPERACIONALIZACION VARIABLES INDICADOR ESCALA

DE VARIABLES VI: Nanoparticulas de - Aplicación
cobre Nominal
- No aplicación
VI: Hipoclorito de sodio - Aplicación Nominal
- No aplicación dicotomica
VD: Potencial agente - HALO INHBITORIO
antimicrobiano (mm)

intervalo

Vi: - Conducto principal,

Tipos de conductos colateral, lateral, secundario,
radiculares accesorio, interconducto,
recurrente, delta apical, cavo
interradicular
Nominal
politomica

ANALISIS DE LOS Estadística descriptivo cuantitativo, Prueba de normalidad

DATOS
4.5 Aspectos éticos

Por ser un estudio in vitro mi estudio será aceptado por el comité de ética
asimismo será aceptado y aprobado de la oficina de grado y títulos con la finalidad
de evitar copias o plagios.

RECURSOS Y CRONOGRAMA

Recursos Humanos: Costo en soles:

- Investigador -
- Asesor s/.600
- Especialista s/.600
- Estadístico s/.600

Materiales:
- Papel bond s/10
- Internet s/35
- Útiles de escritorio s/10
- Laptop s/1500
- Cámara s/350
- Alquiler de microscopio s/. 150
- Dientes s/.20
- Placas Petri s/.25
- Tubos de ensayo s/.25
- Alquiler de Incubadora s/ 40
- Agar nutrientes s/50
- Micropipetas s/.15

Cronograma:

ACTIVIDADES TIEMPO EN MESES

1. Elaboracion del proyecto 2 meses
2. Recoleccion de datos 2 meses
3. Analisis de los datos 1 mes
 4. Informe final 1 mes
TOTAL 6 meses

TIEMPO EN MESES
8

0
elaboracion recoleccion analisis de los informe final TOTAL
del proyecto de datos datos

TIEMPO EN MESES

FUENTES
DE INFORMACION
1. Sánchez G. Fuentes D. Bello H. Nanopartículas de Cobre como Potencial
Agente Antimicrobiano en la Desinfección de Canales Radiculares. Int. J.
Odontostomat. vol.10 no.3 Temuco dic. 2016.
2. Cardenas B. Sanchez S. Tinajero C. Gonzalez V. Baires L. Hipoclorito de
sodio en irrigación de conductos radiculares: Sondeo de opinión y
concentración en productos comerciales. Rev. Odont.
Mex vol.16 no.4 México oct./dic. 2012.
3. Ameer Azam. Arham S Ahmed. M Oves. MS Khan. Adnan Memic. Size-
dependent antimicrobial properties of CuO nanoparticles against Gram-
positive and -negative bacterial strains.Int.J. of nanomedicine. Arabia
Saudita. 9/jul.2012.
4. Esther Jiménez; Enrique Huitzil, Loida Castillo. Características de los
Canales Radiculares de Molares Temporales. Int. J.
Odontostomat. vol.9 no.1 Temuco abr. 2015.
5. Walther Iván Girón Matute. Antimicrobianos. Rev. Fac. Cienc. Méd. Julio -
Diciembre 2008.
 6. Sanchez Venegas J. Pillaca M. Actividad inhibitoria del crecimiento
bacteriano por cobre nanoestructurado obtenido de minerales de la región
Marañón: comparación con cobre comercial. Rev. peru
biol. vol.23 no.3 Lima set./dic. 2016
7. Ameer Azam. Arham S Ahmed. M Oves. MS Khan. Adnan Memic.
Antimicrobial activity of metal oxide nanoparticles against Gram-positive and
Gram-negative bacteria: a comparative study.Int.J. of nanomedicine. Arabia
Saudita. 4/dic.2012.

ANEXOS