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Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro, Calzada Antonio Narro No.1923, Col. Buenavista, C.P. 25315,
Saltillo, Coahuila. *Autor para correspondencia: abenmen@uaaan.mx
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Laboratorios Agroenzymas, S.A. de C.V., Vía Dr. Gustavo Baz 176-3, Col. San Jerónimo Tepetlacalco, C.P. 54090,
Tlalnepantla, Edo. Mex.
Resumen. El ácido salicílico (AS) es utilizado en la recientes algunos nuevos grupos de hormonas han sido
práctica agrícola por su efecto de inducción de identificados, tal es el caso de los salicilatos, que
tolerancia al estrés. Varios estudios describen los además de involucrarse en el control del crecimiento y
beneficios para los cultivos en presencia de este desarrollo de la planta, actúan también como
compuesto, pero se conoce poco acerca de la dinámica señalizadores en los procesos que dan lugar a las
de la concentración del compuesto en los tejidos respuestas adaptativas de las plantas al ambiente [1, 2].
vegetales posterior a su aplicación. El objetivo de este El ácido salicílico se encuentra de forma natural en las
estudio fue determinar el cambio en el tiempo de la plantas, juega papeles importantes en cuanto al
concentración de AS en el tejido foliar, en respuesta a la crecimiento y tolerancia al estrés [3, 4, 5], además de
aspersión de AS en concentración 10-4 M (0.0138 g L-1) participar como parte de las señales internas que
en hojas de tomate (Solanum lycopersicum L.) bajo regulan la respuesta de la defensa de las plantas contra
invernadero. Dos días después de una primera plagas y patógenos [6, 7], y abióticas [2, 4, 8]. Al
aplicación en plantas de 30 días de edad la aplicarlo en forma exógena, el ácido salicílico induce
concentración de AS foliar alcanzó un máximo de 8 µg tolerancia al estrés, mejorando la respuesta biológica de
g-1, el doble de lo observado en el testigo. Esta la planta frente a la salinidad y los extremos de
concentración disminuyó paulatinamente hasta que temperatura, modificando además las concentraciones
ocho días después igualó al testigo. Una segunda de antioxidantes, nutrientes y clorofila [9, 10].
aplicación realizada en plantas de 42 días de edad La utilización de los salicilatos en la práctica
mostró prácticamente la misma respuesta, pero con la agrícola parece tener potencial desde el punto de vista
diferencia de que la disminución del AS fue muy comercial, considerando los resultados positivos
rápida, igualando a la concentración del testigo en dos encontrados en diferentes ensayos [11, 12, 13, 14, 15,
días. La aplicación de ácido salicílico bajo las 16, 17, 18, 19]. Es cada vez más claro que el uso de
condiciones de este ensayo no presentó ningún tipo de compuestos de este tipo se torna una necesidad
beneficio al peso de raíz y tallo, aún en los momentos considerando que los estándares actuales de producción
cuando se presentó la mayor concentración en el tejido. exigen la disminución del uso de pesticidas [20]. Por un
sentido práctico, la literatura científica y los trabajos
Palabras clave: Ácido salicílico, resistencia sistémica, técnicos realizados para el desarrollo y registro legal de
inductores de tolerancia, elicitores. productos cuyos ingredientes activos contienen
compuestos inductores de tolerancia como el ácido
Introducción salicílico, describen los cambios biológicos que se
presentan en las plantas, por ejemplo los ajustes en la
Las hormonas vegetales modifican el crecimiento y actividad de enzimas, antioxidantes y otros metabolitos
desarrollo de las plantas induciendo cambios en [21, 22, 23] y las modificaciones en la tolerancia a
procesos celulares, fisiológicos y morfológicos. En años factores ambientales [19]. Menor atención a recibido el
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Determinación de la concentración de ácido salicílico en hojas de tomate (Solanum lycopersicum L.) posterior a su aplicación por aspersión
tiempo de residencia del compuesto y el posteriormente iniciar una disminución en la
comportamiento de la concentración de los salicilatos concentración, siendo el tiempo de máxima
en los tejidos vegetales, así como su efecto residual acumulación similar a lo encontrado en el presente
cuando este es aplicado vía foliar. trabajo. Ello parece indicar una similitud en la dinámica
De lo anterior se desprende el presente estudio temporal del AS posterior a una aplicación exógena y a
que tuvo por objetivo determinar el comportamiento un estimulo de estrés. Del mismo modo, la inoculación
dinámico de la concentración de ácido salicílico en el de patógenos en los cotiledones de plántulas de pepino
tejido foliar, en respuesta a la aplicación exógena de (Cucumis sativus L.) con Pseudomonas [25] y con el
este compuesto en hojas de tomate (Solanum virus de la necrosis del tabaco (VNT) [26], dieron lugar
lycopersicum L.) bajo invernadero. a incrementos en la concentración de AS en las hojas de
las plántulas. El pico de máxima concentración de AS
Resultados y Discusión se encontró a las 18 hrs después de la inoculación de
Pseudomonas para decaer en adelante, mientras que
Dinámica del ácido salicílico (AS) en hojas para la inoculación con el VNT ocurrió a los cuatro días
después de la inoculación igualando la concentración de
Después de realizada la aplicación exógena de las plantas no inoculadas a los ocho días después de la
ácido salicílico (AS) la concentración alcanzó un pico al inoculación, de forma análoga a lo observado en el
transcurrir 2 días después de inicio de la aplicación presente trabajo. La dinámica descrita puede variar de
(DDIA), para posteriormente presentar una disminución acuerdo a los órganos de la planta. Por ejemplo, si la
paulatina hasta alcanzar una concentración inoculación del virus ocurre en los cotiledones de
estadísticamente igual a la del testigo 10 días después tabaco (Nicotiana tabacum L.), entonces en lugar de
de la aplicación (Figura 1). Al realizar la segunda una caída en la concentración de AS en los cotiledones
aplicación exógena de ácido salicílico, a los 14 DDIA en los tiempos mencionados anteriormente, se presenta
se observó una respuesta análoga a obtenida en la un incremento durante los diversos periodos de
primera aplicación. Sin embargo, con el propósito de evaluación. Este fenómeno se ve acompañado, sin
aumentar la información obtenida posterior a esta embargo, del mismo comportamiento ya descrito en las
segunda aplicación se colectaron tejidos foliares sin hojas, en donde la caída de la concentración del AS se
esperar a transcurrir dos días. Para ello se tomaron hace presente después de 48 hrs [27, 28, 29, 30].
muestras a las 8, 14 y 24 horas después de esta segunda Norman et al. [21] aplicaron el AS en
aplicación, encontrando una respuesta significativa a las concentraciones de 1.0, 0.1 y 0.01 mM en cultivos
24 hrs (15 DDIA). Posterior a ello se observó celulares de tabaco, determinando posteriormente la
prácticamente la misma respuesta descrita para la concentración citoplasmática del compuesto. Los
primera aplicación. autores encontraron que inclusive en esta situación el
Este comportamiento dinámico en la AS se encontraba en alta concentración en las células
concentración de ácido salicílico (AS) en hojas de durante un máximo de 24 horas al aplicar 1.0 mM,
tomate, inducido por las aplicaciones exógenas de este mientras que para las concentraciones de 0.1 y 0.01 mM
compuesto, concuerda con lo reportado por He et al. el tiempo de permanencia del compuesto en las células
[24] al aplicar el acaro Tetranichus urticae Koch en fue de solamente una hora.
hojas de frijol (Phaseolus vulgaris L.) y por Ogawa et La presencia del AS en concentraciones
al. [8] en Arabidopsis con la aplicación de estímulos elevadas en las hojas sujetas a estrés biótico o abiótico
mecánicos en las hojas. Los autores mencionados se atribuye a su papel como compuesto señalizador en
encontraron incrementos significativos en la la inducción de resistencia sistémica adquirida [31, 30,
concentración del AS foliar, teniendo los picos 20]. En ausencia de un estrés manifiesto que induzca la
máximos a las 24 hrs después del estímulo, para síntesis de AS, y en presencia de las aplicaciones
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Determinación de la concentración de ácido salicílico en hojas de tomate (Solanum lycopersicum L.) posterior a su aplicación por aspersión
exógenas de AS realizadas en el presente trabajo, las que este sea el caso que se observó en la segunda
concentraciones observadas podrían ser atribuidas al aplicación de este trabajo, y que conforme se presente la
balance entre la residualidad y la transformación o saturación de la respuesta más rápidamente se
degradación del AS aplicado. Se supone que la metabolice el AS en los tejidos vegetales.
concentración celular de AS debe mantenerse dentro de
ciertos márgenes, en un nivel adecuado para mantener 9 Aplicación de acido salicílico Testigo
a
la homeostasis redox celular, de acuerdo a las 8
a1
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Determinación de la concentración de ácido salicílico en hojas de tomate (Solanum lycopersicum L.) posterior a su aplicación por aspersión
veces los observados en las plantas testigo (cuyas posterior disminución, presumiblemente para
concentraciones fluctuaron de 1.39 a 4.9 µg g-1 de peso incorporarse en especies químicas conjugadas.
fresco). Los valores máximos encontrados después de
las aplicaciones (a los 2 y 15-DDIA) se asemejan a los Crecimiento de la planta
reportados por He et al. [24] sobre hojas de frijol a las
24 hrs de provocado el estimulo con Tetranichus En cuanto al crecimiento de tallos y hojas se
urticae Koch. En ese caso la presencia del ácaro dio encontraron algunas diferencias a los 4, 12 y 15 DDIA
lugar a una concentración máxima de AS de 12 µg g-1 (Figura 2), pero al concluir el ensayo los valores fueron
de peso fresco, valor que rebasa al aquí obtenido con similares. En ausencia de estrés el efecto del ácido
aplicación exógena del AS como aspersión foliar. Con salicílico dependerá de la concentración con que se
otro modelo biológico, con la infección con virus del aplique y de la especie vegetal en donde se haga,
mosaico del tabaco (VMT), Enyedi et al. [27] encontrándose en ocasiones ausencia de efectos [44,
encontraron que las células infectadas alcanzaban de 3.5 45]. En general, el uso de AS en forma de aspersión
a 6.0 µg g-1 después de 144 horas de aplicar el AS en el foliar muestra beneficios sobre el crecimiento de la
medio de cultivo en concentración de 25 y 100 µM de partes aéreas de las plantas en situaciones en ocurre
AS. Malamy et al. [41] encontraron aumento a 3 µg g-1 algún factor causante de estrés [11, 46, 47, 16, 19, 45].
a las 60 hrs después de someter plantas de tabaco a altas 12 30
AS tallo Testigo tallo
temperaturas, mientras que Shulaev et al. [28] en tabaco a a a
AS raíz Testigo raíz Aplicación
infectado con VMT determinaron concentraciones 10
de AS a
a
a
a 25
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Determinación de la concentración de ácido salicílico en hojas de tomate (Solanum lycopersicum L.) posterior a su aplicación por aspersión
raíz en algunas de las concentraciones de AS aplicado, contenedor. La fertilización se realizó a partir de los 12
indicando los autores como causa probable del días después de la germinación utilizando una solución
resultado una mayor derivación del presupuesto Steiner al 25%. Inicialmente se aplicaron 30 ml de
energético de la raíz a respuestas de defensa inducidas solución por cada plántula por día, transcurridos 30 días
por el AS. después de la germinación la cantidad de solución
nutritiva se elevó a 50 ml por plántula por día. Las
Conclusiones plantas crecieron bajo invernadero.
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Determinación de la concentración de ácido salicílico en hojas de tomate (Solanum lycopersicum L.) posterior a su aplicación por aspersión
el extracto obtenido. Para la preparación de las muestras Determinación de peso de raíz y parte aérea
de extracción se recongeló el material vegetativo
recolectado con nitrógeno liquido para posteriormente Se determinó el peso de raíz y peso de la parte
molerlo y pesar 0.05 g colocando dicha cantidad en un aérea de las plantas tomando al azar tres plantas por
tubo ependorf de 1.5 ml, al que se le agregó 1 ml de la tratamiento. Para el caso de la raíz se desprendió el
solución de extracción (10% de metanol: 1% de ácido sustrato mediante agua corriente hasta eliminar las
acético: 89% agua destilada) utilizando para tal fin una partículas adheridas y se peso mediante balanza
pipeta automática (Accumax PRO 100-1000 µL). Con granataria. Una vez obtenido el peso fresco, la muestra
el objetivo de conseguir contacto de la solución de se secó a 60 °C en una estufa desecante. Para el caso de
extracción y la totalidad de la muestra, el tubo ependorf peso de parte aérea se realizó el conteo de forma directa
se sometió a vibración por 20 segundos en un agitador sobre balanza de tres pesas (Ohaus, 2620 g).
vortex (Scientific products S.A.), para posteriormente
desgasificarlo durante 5 minutos en un desgasificador Diseño experimental y Análisis de datos
(Bronsom S.A.) y centrifugar durante 10 minutos a
10000 G en una centrifuga spectrofuge (Labnet Se aplicó un diseño completamente al azar,
International, Inc.). Después de este proceso se recuperó manejando como unidad experimental una planta en un
el sobrenadante traslúcido con pipeta manual, para contenedor, y tomando para la determinación del ácido
colocarlo en un tubo ependorf nuevo y etiquetado. A los salicílico 2 plantas por tratamiento por evaluación y tres
tubos ependorf con la muestra vegetal se les agregaron plantas para la determinación de peso de raíz y parte
nuevamente 0.5 ml de la solución de extracción para aérea por tratamiento por evaluación. Cada tratamiento
repetir todo el procedimiento y nuevamente retirar el consto de 80 repeticiones. Los datos obtenidos del
sobrenadante traslucido y agregarlo al ependorf nuevo y análisis de las muestras fueron sometidos a un análisis
etiquetado, obteniendo así, un aproximado de 1.5 ml de de varianza, realizando una comparación de medias
solución, la cual se hizo pasar a través de filtros tipo mediante la prueba de Tukey (α=0.05). Se utilizó el
pirinola de 0.45 µm (siringe-driven filter unit, marca programa computacional SAS para Windows.
Millipore). Sobre el filtrado se realizó la determinación
del ácido salicílico utilizando un cromatógrafo LC LITERATURA CITADA
marca Agilent modelo 1120 manejado bajo el programa
computacional EZChrom Elite Compact versión 3.3.0B 1. Browse, J. Annu. Rev. Plant Biol. 2009, 60, 183-
(Agilent 2005-2008MR) con las siguientes condiciones: 205.
2. Ashraf, M., Akram, N. A., Arteca, R. N. and
la separación del cromatógrafo fue realizada en una
Foolad, M. R. Critical Reviews in Plant Sciences.
columna Phenomenex Luna C18 de 100x20 mm a 35 2010, 29 (3), 162-190.
°C, manejando dos gradientes de solventes 100% A 3. Noreen, S., Ashraf, M., Hussain, M., and Jamil, A.
(94.9% H2O: 5% CH3CN: 0.1% CHOOH) a 100% B Pakistan Journal Botanic. 2009, 41 (1), 473-479.
(5% H2O: 94.9% CH3CN: 0.1% CHOOH) por 10 min. 4. Khan, N., Syeed, S., Masood, N., Nazar, R., and
El solvente B se inyecto en los últimos minutos para Iqbal, N. International Journal of Plant Biology.
posteriormente inyectar nuevamente solvente A y 2010, 1 (1), DOI: 10.4081/pb.2010.e1
5. Purcarea, C. and Cachita-Cosma, D. Studia
realizar la limpia del sistema para la posterior inyección
Universitatis, “Vasile Goldis” Seria Stiintele Vietii.
de una nueva solución de extracción. La inyección del 2010, 20 (1), 63-68.
la solución de extracción constó de 20 µl. Cada muestra 6. Girling, R., Madison, R., Hassall, M., Poppy, G.,
de hoja fue analizada por duplicado. Los resultados and Turner. J. Journal of Experimental Botany.
obtenidos mediante el cromatógrafo en mg L-1 de AS 2008, 59 (11), 3077-3085.
fueron convertidos a µg de AS por g de peso fresco. 7. Zhang, Z., Li, Q., Li, Z., Staswick, P., Wang, M.,
Zhu, Y., and He, Z. Plant Physiology. 2009, 145,
450–464.
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Determinación de la concentración de ácido salicílico en hojas de tomate (Solanum lycopersicum L.) posterior a su aplicación por aspersión
8. Ogawa, T., Ara, T., Aoki, K., Suzuki, H., and 28. Shulaev, V., León, J. and Raskin, I. The Plant Cell.
Shibata, D. Plant Biotechnology. 2010, 27, 205– 1995, 7, 1691-1701.
209. 29. Seskar, M., Shulaev, V. and Raskin, I. Plant
9. Benavides-Mendoza, A., Salazar-Torres, A., Physiology. 1998, 166, 387-392.
Raírez-Godina, F., Robledo-Torres, V., Ramírez- 30. Park, S., Kaimoyo, E., Kumar, D., Mosher, S. and
Rodríguez, H. y Maiti., R. Terra Latinoamericana. Klessig, F. Science. 2007, 318, 113-116.
2004, 22 (1), 41-47. 31. Prithiviraj, B., Bais, H., Weir, T., Suresh, B.,
10. Noreen, S. and Ashraf, M. Journal of Botany. 2008, Najarro, E., Dayacar, B., Swheizer, H. and
40 (4), 1657-1663. Vivanco, J. Infection and Inmunity. 2005, 73 (9),
11. Khodary, S.E.A. International Journal of 5319-5328.
Agriculture and Biology 2004, 6 (1), 5-8. 32. Mateo, A., Funck, D, Mühlenbock, P. Kular, B.,
12. Gemes, K., Poor, P., Sulyok, Z., Szepesi, A., Szabo, Mullineaux, P., and Karpinski, S. Journal of
M. and Tari, I. Acta Biologica Szegediensis. 2008, Experimental Botany. 2006, 57 (8), 1795-1807.
52 (1), 161-162. 33. Genoud, T., Buchala, A.J., Chua, N.H., M´etraux
13. Noreen, S. and Ashraf, M. Journal of Plant J.P. Plant Journal. 2002, 31 (1), 87-95.
Physiology. 2009. doi:10.1016/j.jplph.2009.05.005. 34. Klämbt, H.D. Nature. 1962, 196, 491.
14. Azooz, M. International Journal of Agriculture and 35. Yalpani, N., Silverman, P., Wilson, T., Kleier, D.
Biology. 2009, 11 (4), 343-350. and Raskin, I. The Plant Cell. 1991, 3, 809-818.
15. Jabbarzadeh, Z., Khosh-Khui, M. and Salehi, H. 36. Wildermuth, M.C. Current Opinion in Plant
Australian Journal of Basic and Applied Sciences. Biology. 2006, 9, 288-296.
2009, 3 (4), 4693-4696. 37. Mustafa, N., Kin, H., Choi, Y. and Vepoorte, R.
16. Najafian, S., Khoshkhui, M., Tavallali, V., and Biotechnol Lett. 2009, 31, 1967–1974.
Saharkhiz, M. Australian Journal of Basic and 38. Panina, Y., Gerasimova, N., Chalenko, G.,
Applied Sciences. 2009, 3 (3), 2620-2626. Vasyokuva, N., Oseretskovskaya, O. Russian
17. El-Khallal, S., Hathout, T., Ahsour, A. and Kerrit, Journal of Plant Physiology. 2005, 52 (4), 511-515.
A. Research Journal of Agriculture and Biological 39. Tao, Y., Xie, Z., Chen, W., Glazebrook, J., Chang,
Science. 2009, 5 (4), 391-402. H.S., Han, B., Zhu, T., Zou, G., Katagiriet, F. Plant
18. Villanueva-Couoh, E., Alcantar-González, G., Cell. 2003, 15 (2), 317-330.
Sánchez-García, P., Soria-Fregoso, M. and Larque- 40. Abreu, M. and Munne-Bosch, S. Journal of
Saavedra, A. Revista Chapingo, Serie Horticultura. Experimental Botany. 2009, 60 (4), 1261-1271.
2009, 15(2), 25-31. 41. Malamy, J., Hennig, J. and Klessig, D. The Plant
19. Azooz, M., and Youseef, M. American Journal of Cell. 1992, 4, 359-366.
Plant Physiology. 2010, 5 (2), 56-70. 42. Barbaus-Larson, R. and Jacobsen, B. Journal of
20. Esmailzadeh, M., Soleimani, M. and Rouhani, H. Sugarbeet Research. 2007, 44 (1-2), 17-35.
Journal of Biological Science. 2008, 8 (6), 1039- 43. Iwai, T., Seo, S., Mitsuhara, I. and Ohashi, K. Plant
1044. Cell Physiology. 2007, 48 (7), 915-924.
21. Norman, C., Howell, K., Millar, A., Whelan, J. and 44. Lian, B., Zhou, X. and Mirasari, D. L. Journal of
Day, D. Plant Physiology. 2004, 134, 492-501. Agronomy and Crop Science. 2000, 185 (3), 187-
22. Kaydan, D., Yagmur, M. and Okut, N. Tarim 192.
Bilimleri Dergis. 2007, 13 (2), 114-119. 45. Wang, L., Fan, L., Loescher, W., Duan, W., Liu,
23. Khalili, M., Hasanloo, T., Kasemi-Tabar, S. and G.,Cheng, J., Luo, H. and Li, S. Plant Biology.
Sepehrifar R. Journal of Medicinal Plants. 2010, 9 2010, 10, 34.
(35), 51-61. 46. Chandra, A., Anand, A. and Dubey, A. Journal of
24. He, W., Li, H., Li, X., Li, M. Chen, Y. Pesticide Environment Biology. 2007, 28 (2), 193-196.
Biochemistry and Physiology. 2007, 88 (1), 78-81. 47. Karlidag, H., Yildirim, E., and Turan, M. Science
25. Rasmussen, J., Hammerschmidt, R. and Zook, M. Agriculture (Piracicaba, Braz.). 2009, 66 (2), 180-
Plant Physiology. 1991, 97, 1342-1347. 187.
26. Molders, W., Buchala, A. and Metraux, J. Plant 48. Tuna, A., Kaya, C., Dikilitas, M., Yokas, I., Burum,
Physiology. 1996, 112, 787-792. B. and Altunlu, H. Pakistan Journal of Botany.
27. Enyedi, A., Nalpani, N., Silverman, P. and Raskin, 2007, 39 (3), 787-798.
I. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992, 89, 2480-2484.
8
Determinación de la concentración de ácido salicílico en hojas de tomate (Solanum lycopersicum L.) posterior a su aplicación por aspersión
49. Umebese, C., Olatimilehin, T. and Ogonsusi, T.
American Journal of Agricultural and Biological
Sciences. 2009, 4 (3), 224-229.