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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE

CHIAPAS
CENTRO DE BIOCIENCIENCIAS
CAMPUS IV

BIORREACTORES

MATERIA BIOINGENIERÍA

5º SEMESTRE DE LA CARRERA DE INGENIERO BIOTECNÓLOGO


2
INTRODUCCIÓN

Desde hace miles de años el hombre ha utilizado métodos biológicos para producir
y conservar sus alimentos, para obtener productos que ayuden a mejorar su salud o le
procuren un gusto.

En la actualidad, todos estos procesos empíricos de antaño, se realizan con


microorganismos seleccionados y mejorados, medios de cultivo que les proporcionan los
nutrientes necesarios y bajo condiciones controladas.
Fermentación es.........

LOTE

MICROORGANISMOS CONTINUA

+
NUTRIENTES AEROBIA
+
CONDICIONES

Figura 1

Un biorreactor es un aparato en el que son tratados materiales para facilitar las


transformaciones bioquímicas por la acción de las células vivas o por componentes
celulares, como enzimas, in vitro o como parte principal de cualquier proceso
biotecnológico (ver página siguiente) en el que se emplean sistemas microbianos o sistemas
celulares mamíferos o plantas para la obtención de una gran variedad de productos
biológicos útiles. (Ver página con algunos productos de la fermentación).

Aunque los sistemas basados en los cultivos de células de plantas o de animales


son normalmente mencionados en la literatura como cultivos de tejido mientras que los
basados en cultivos dispersos de microorganismos, que no forman tejidos (bacterias,
levaduras y hongos), son conocidos vagamente como reactores “microbianos”
(biorreactores o fermentadores).

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El biorreactor debe ser concebido en función del proceso que se debe realizar
además debe permitir un contacto tan bueno como sea posible entre las dos fases, biótica
abiótica del sistema propiciando de ésta manera la transferencia entre las células y el medio
de cultivo.

En el caso de los procesos aerobios, una característica muy importante del


biorreactor es su capacidad para transferir a la biomasa microbiana que contiene, la porción
de oxígeno que necesita.(Fig. 2). Únicamente el oxígeno disuelto es utilizado por las células
y debido a que este gas es poco soluble en agua hace difícil mezclar tres fases o mas: una
fase acuosa (medio de cultivo), una fase gaseosa (aire comúnmente) y la fase biótica
constituida por la biomasa microbiana.

•RECIPIENTE
•AGITADOR
•MEDIO DE CULTIVO
•MICROORGANISMOS
•AIRE

Figura 2 Biorreactor

El buen funcionamiento de un biorreactor depende de:

• Concentración de biomasa (alta)

• Condiciones estériles

• Distribución efectiva de substrato y microorganismos

• Disipación de calor

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• Condiciones adecuadas de velocidad

Aunque algunas fermentaciones se efectúan anaeróbicamente, muchos procesos son


aerobios (Fig. 3), que requieren grandes volúmenes de aire estéril, en los cuáles es el gas de
oxigenación el que crea la turbulencia que permite la suspensión homogénea de las células.

La agitación ya sea producida por un elemento externo (agitador) o no, permite


además de mejorar la transferencia de oxígeno, evitar que las células creen áreas estancadas
con bajos niveles de oxígeno y nutrientes.

TIPOS DE BIORREACTORES

Los biorreactores pueden ser más o menos complejos en su diseño, según el tipo de
cultivo al cual se destinan. Ciertas fermentaciones tradicionales, como la alcohólica, se
llevan a cabo en cubas rectangulares o cilíndricas descubiertas, donde la homogeneidad en
la cuba se obtiene por el desprendimiento gaseoso debido al proceso mismo. Aparecieron
después cubas cubiertas, que permiten la recuperación del gas y reducen los riesgos de
contaminación.

No agitados sin aereación 86%


No agitados con aereación 11%
Agitados con aereación 13%
La mayoría de los procesos de fermentación requieren de recipientes cerrados
capaces de operar en condiciones de cultivo puro.

Debido a los avances tecnológicos la geometría de la cuba ha ido evolucionando.

A nivel de laboratorio y de planta piloto existen muchos tipos de biorreactores, pero


a escala industrial, existen cuatro tipos principalmente para fermentaciones aerobias:

 Tanque agitado
 Columna burbujeadora
 Air-lift
 Waldhof

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Biorreactor de Tanque Agitado

Los biorreactores de tanque agitado han sido los mas estudiados y su configuración
se ha estandarizado, para que en función de sus relaciones, se lleve acabo su diseño y
escalamiento.

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Para obtener mejor contacto líquido gas se requiere frecuentemente de la agitación
mecánica, por lo que este tipo de biorreactores son muy utilizados, en fermentaciones en las
que, el esfuerzo cortante no daña la fase biótica.

Este tipo de biorreactor está equipado con un sistema de agitación central o algunas
veces en otra posición, en cuyo eje van instalados uno o más rodetes. Existen rodetes de
diferentes tipos, los cuáles generan diferentes flujos dentro de la cuba, los más utilizados en
fermentación son los de tipo turbina, que generan flujos radiales.

Debido a la forma de este tipo de biorreactor (normalmente cilíndrica), con la


agitación se provoca la formación de un vórtice, que se evita con la adaptación de
deflectores o contra-palas verticales instalados en las paredes del recipiente.

La figura anterior utiliza la siguiente nomenclatura:

Dt = Diámetro del biorreactor

Di = Diámetro del agitador

Hb = Altura del fondo al agitador

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Hl = Altura del líquido

Ab = ancho de la contrapala

Li y Ai = Ancho y alto de las paletas del rodete

El volumen de líquido ( ΠDt2 Hl)/4 o volumen de operación es igual a 0.75 a 0.60


del volumen total [Vt = (ΠDt2 Ht)/4], en una configuración estandar Dt /Hl = 1 y por lo tanto
Vl = ΠDt3/4, a medida que la escala aumenta la relación se hace mayor que 1 (aunque se
siga utilizando el mismo % del Vt).

Tipos de Agitadores

La finalidad de la agitación en un birreactor es:

1. Dispersar el aire en la solución de nutrientes


2. Obtener una temperatura y una concentración de nutrientes en todo el recipiente
3. Suspender los microorganismos y nutrientes sólidos
4. dispersar cualesquiera de los líquidos inmiscibles presentes

De acuerdo al tipo de agitador serán los flujos que se originaran dentro del biorreactor,

Los agitadores se dividen en dos clases: los que generan corrientes paralelas al eje del
agitador y los que dan origen a corrientes en dirección tangencial o radial. Los primeros se
llaman agitadores de flujo axial (ver fig.5-9) y los segundos, agitadores de flujo radial.
Los tres tipos principales de agitadores son, de hélice, de paleta, y de turbina.

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El agitador de hélice o propulsor usualmente tiene tres paletas genera un flujo axial, opera a
velocidad elevada y se emplea para líquidos poco viscosos. Las palas de la hélice cortan o
friccionan vigorosamente el líquido,
El tipo de turbina Rushton consta de varias paletas o palas sujetas a un eje central, el
diámetro de una turbina está normalmente entre 30 y 50 % del diámetro del tanque y por lo
general tiene entre cuatro y seis paletas, cuando se encuentran sólidos presentes como en
una fermentación se encuentra que es útil un componente axial para mantener los sólidos en
suspensión por lo que se usa una turbina de paletas con un ángulo de paleta de 45°.

Biorreactor de Columna Burbujeadora

Los biorreactores de columna burbujeadora o de torre son agitados


pneumáticamente. Estos pueden mostrar amplias variaciones en el comportamiento con la

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relación altura-diámetro. En este tipo de biorreactor la fase gaseosa sube a través de la fase
líquida en flujo tapón bajo la acción de la gravedad.

Han aparecido varios biorreactores de este tipo que incluyen elementos internos
para aumentar la velocidad de transferencia de masa. Estos incluyen placas perforadas,
empaques etc., instalados a lo largo de la columna.

Biorreactor Air-Lift

Los biorreactores Air-lift operan con menos energía y son capaces de suministrar
más oxígeno, aunque su uso es aun limitado. Las dimensiones y las relaciones geométricas
para un fermentador tipo Air-lift son:

10
L1/D1 = 10-15

L2 L2/L1 = 0.9-0.6

L1 D1/ D2 = √2-√1.8

D2
D1

Biorreactor Waldohof

Los biorreactores Waldohof pretenden mejorar la circulación en el interior de la


cuba, para ello cuentan con un cilindro o tubo de circulación que cuenta con una turbina de
agitación colocada en la base del tubo, pero arriba del dispositivo de introducción de gas de
aireación, que rompe las burbujas, lo que provoca una disminución de la densidad aparente
del medio de fermentación en la parte periférica de la cuba. El medio de fermentación es
entonces arrastrado de abajo hacia arriba en esta parte de la cuba y cae en el cilindro. La
masa de fluido en movimiento arrastra las burbujas de gas. Esto permite aumentar el tiempo
de residencia en la masa líquida y por lo tanto mejora la transferencia de oxigeno.

Los biorreactores pueden ser utilizados en lote (un solo biorreactor) o en forma continua
(biorreactores conectados en serie). La mayoría de las fermentaciones industriales se llevan
a cabo en lote, se inocula el medio, el cultivo se multiplica, se recoge el producto y las
células se desechan al final del proceso.

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DETERMINACIÓN EXPERIMENTAL DE LA TRANSFERENCIA DE OXÍGENO
EN UN BIORREACTOR

La medición de KL a ó coeficiente volumétrico de transferencia en un biorreactor permite


evaluar su capacidad de transferencia de oxígeno o su productividad, dependiendo este
coeficiente de las características físicas y operación del biorreactor. Todos los método se
basan en un balance de oxígeno ya sea en todo el sistema o de la fermentación en particular.

dC/dt = KL a (C*- CL) - QO2X

donde:

dC/dt = Tasa de la concentración de oxígeno disuelto (mMO2/L h)

C* = Concentración de saturación de oxígeno disuelto (mMO2/L)

CL = Concentración de oxígeno disuelto en el tiempo t (mMO2/L)

KL a = Coeficiente de transferencia de masa (h-1)

QO2X = Demanda de oxígeno (mMO2/L h)

QO2 = Demanda específica de oxígeno (mMO2/g células h)

X = Concentración celular (g células/L)

MÉTODOS INDIRECTOS

Se denominan así porque se llevan acabo en sistemas donde no se esta efectuando una
fermentación: dC/dt = KL a (C*- CL)

1. Oxidación de sulfito
2. Técnica de Eliminación de gas ó método estático
3. Microbiológico
4. Glucosa-Oxidasa

MÉTODOS DIRECTOS

Se realizan con fermentaciones reales, tanto en batch ó lote como continuas, siendo un
instrumento muy útil tanto en la operación como en el escalamiento de un biorreactor.

1. Técnica Dinámica
2. Balance Gaseoso

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Métodos Indirectos

Método de Oxidación del Sulfito:

La capacidad de un biorreactor para absorber oxígeno burbujeando aire a través de una


solución acuosa de algún agente reductor como el sulfito de sodio es comúnmente utilizado
para este propósito. Como este método es una simulación y no se disuelve oxígeno sino que
reacciona (CL = 0), además de que no existen células (QO2X = 0) porque es un método
indirecto, la ecuación de flujo de oxígeno queda:

dC/dt = KL a C*
donde:
dC/dt = Velocidad de oxidación del sulfito = m A N/ Vm

m = Pendiente de la recta (mL de titulante contra tiempo) (mL de tiosulfato/h)


A = Factor de conversión 0.25 (m moles de oxígeno/m eq)
N = Normalidad del titulante (m eq./mL de tiosulfato)
Vm = Volumen de la muestra (mL)
Cu++
2 Na2SO3 + O2 → 2Na2SO4
Co++

Na2SO3 + I2 + H 2O→ Na2SO4 + 2HI


Almidón
2Na2S2O3 + I2 → Na2S4O6 + 2NaI
como catalizador

La técnica usual es la siguiente: Se coloca en el biorreactor una solución de sulfito de sodio,


entre 0.1 y 1 N, con una concentración de Cu SO4 mayor de 1 mM: se ajusta el flujo de aire
y la velocidad del impulsor y se empiezan a tomar muestras periódicamente. Las muestras
deben de guardarse en botellas llenas y bien selladas o combinarse con yodo en exceso,
titulándose el yodo en exceso con tiosulfato de sodio.

Factores que afectan esta medición:

1. Pureza y [ ] del sulfito


2. Catalizador y su [ ]
3. El pH
4. Tipo de equipo utilizado

Desventajas

Los valores obtenidos por esta técnica son en general mayores que los medidos por otros
métodos.
Costos muy altos para biorreactores grandes

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Técnica de Eliminación de gas ó método estático

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T DO2 T DO2 T DO2 T DO2 T DO2
(°C) (PPM) (°C) (PPM) (°C) (PPM) (°C) (PPM) (°C) (PPM)
0 14.57
1 14.17 11 10.99 21 8.88 31 7.42 41 6.32
2 13.79 12 10.74 22 8.71 32 7.30 42 6.22
3 13.43 13 10.50 23 8.55 33 7.18 43 6.13
4 13.08 14 10.27 24 8.39 34 7.07 44 6.03
5 12.74 15 10.05 25 8.24 35 6.95 45 5.94
6 12.42 16 9.83 26 8.09 36 6.84 46 5.84
7 12.11 17 9.63 27 7.95 37 6.73 47 5.75
8 11.81 18 9.43 28 7.81 38 6.63 48 5.66
9 11.53 19 9.24 29 7.68 39 6.52 49 5.57
10 11.26 20 9.06 30 7.55 40 6.42 50 5.48

Tabla 1. Correspondiente a la cantidad de oxígeno disuelto en agua (DO2 (PPM) ó


mg/L) al 100 % de saturación a diferentes temperaturas.

Ha x 10-4, atm/fracción molar


T (°C) O2 CO H2 NO N2 CO2 Aire
0 2.55 3.52 5.79 1.69 5.29 0.0728 4.32
10 3.27 4.42 6.36 2.18 6.68 0.104 5,49
20 4.01 5.36 6.83 2.64 8.04 0.142 6.64
30 4.75 6.20 7.29 3.10 9.24 0.186 7.71
40 5.35 6.96 7.51 3.52 10.4 0.233 8.70
50 5.88 7.61 7.65 3.90 11.3 0.283 9.46
60 6.29 8.21 7.65 4.18 12.0 0.341 10.1
70 6.63 8.45 7.61 4.38 12.5 10.5
80 6.87 8.45 7.55 4.48 12.6 10.7
90 6.99 8.46 7.51 4.52 12.6 10.8
100 7.01 8.46 7.45 4.54 12.6 10.7

Tabla 2 Constantes de la Ley de Henry para varios gases en el agua


Pa = Ha Xa en donde:

Pa = Presión parcial de soluto “a” en la fase gaseosa en atm


Xa = Fracción molar del soluto “a” en la fase líquida
Ha = Constante de la ley de Henry atm/fracción molar

PROBLEMARIO DE BIOINGENIERÍA

Biorreactores de tanque agitado

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1.- Un tanque de 1.2 m de diámetro y 1.8 m de altura se llena a una altura de 1.2 m con un
medio de cultivo que tiene una viscosidad de 1000 cp y una densidad de 750 kg/m 3 . El
tanque no posee placas deflectoras. Se instala en el mismo un rodete de 30 cm de diámetro
de tres palas y a una distancia de 30 cm del fondo. El paso de hélice es 1:1 (paso de hélice
igual al diámetro). El motor de que se dispone desarrolla una potencia de 10 hp.

a) Determinar si este motor es adecuado para accionar el agitador con una velocidad
de giro de 1000 rpm.
b) Calcular la velocidad máxima de giro con que puede accionarse el agitador, si el
líquido se remplaza por otro que tiene una viscosidad de 100 cp y la misma
densidad.
c) Calcular la potencia necesaria para la operación de mezcla, si se utiliza un rodete de
30 cm de diámetro con un paso de hélice 2:1 (paso de hélice igual a dos veces el
diámetro) y se instalan cuatro placas deflectoras, cada una de 12 cm de ancho.
d) Si se sustituye el agitador de hélice por una turbina de 6 palas, y el líquido que se ha
de agitar es un líquido pseudoplástico que sigue la ley de la potencia cuya
viscosidad aparente es de 1500 cp cuando el gradiente de velocidad es de 10 s -1.
Calcular la velocidad de giro de la turbina de forma que suministre 5 hp por cada
4000 L de líquido.

2.- Diseñe un fermentador piloto de 550 L para los siguientes requerimientos:

Viscosidad de 0.01 a 100 cp


Densidad de 50 a 75 lb/ft3
Geometría estándar
20% de pérdida de potencia del motor en sellos, conexiones, etc.
El motor deberá operar de 0 a 300 rpm
Volumen de operación, aproximadamente 70%

Indique las relaciones geométricas y el tamaño del motor eléctrico requerido.

3.- Un tanque de 100 000 L (volumen total) con un motor de 200 kW opera a 76 rpm, se
desea emplear inicialmente un sustrato cuya viscosidad es 100 000 cp; el motor no es de
velocidad variable. ¿Es posible emplearlo? ¿Por qué? ¿Qué cambios pueden sugerirse para
que sirva?

4.- Se desea agitar un líquido que tiene una viscosidad de 1.5 X 10 -3 Pa.s y densidad de 969
kg/m3 en un tanque de 0.91 m de diámetro. El agitador será una turbina abierta de seis aspas
con un diámetro de 0.305 m, que opera a 180 rpm. El tanque tiene cuatro deflectores
verticales, todos ellos con una anchura J = 0.076 m. Calcúlense los kW necesarios.

5.- En un tanque agitado se instala un agitador de turbina de aspas planas. El diámetro del
tanque mide 1.83 m el diámetro de la turbina 0.61 m, y el ancho del aspa de 0.112 m. El
tanque tiene cuatro deflectores, todos ellos con un ancho w = 0.15 m. La turbina opera a 90
rpm y el líquido en el tanque tiene una viscosidad de 10 cp y densidad de 929 kg/m3.
a) Calcúlense los kW requeridos para el mezclador

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b) Con las mismas condiciones(excepto que la solución tiene ahora una viscosidad de
100 000 cp), vuélvase a calcular la potencia requerida.

6.- Un fermentador de 30 000 L (volumen de operación 20 000 L) se emplea para la


producción de levadura. El sistema tiene dos impulsores, y la relación altura/diámetro del
tanque es 2. Se usan turbinas de seis aspas planas con relaciones estándar. Los agitadores
operan a 50, 70 y 85 rpm y las velocidades de aireación son 200 y 300 m3/h.

a) Calcule la potencia (sin aireación) requerida a diferentes velocidades de agitación.


Exprese su respuesta en hp/1000 galones, y diga cuál es el tamaño de motor
requerido.
b) Calcule la potencia con aireación usando la correlación del número de aireación,
Na, así como la de Michel y Miller. ¿Cuál puede ser una causa de las diferencias?

7.- En un biorreactor de tanque agitado de 1.83 m de diámetro se instala un agitador de


turbina de disco con seis aspas de 0.61 m de diámetro y 0.122 m de ancho de aspa (w). El
tanque tiene cuatro deflectores, todos ellos con un ancho de J = 0.15 m. La turbina opera a
90 rpm y el líquido en el tanque tiene una viscosidad de 10 cp y densidad de 929 Kg/m3.

a) Calcúlense los Kw. requeridos para el mezclador


b) Con las mismas condiciones (excepto que la solución tiene ahora una viscosidad de
100 000 cp), vuélvase a calcular la potencia requerida.

8.- Se desea agitar un líquido que tiene una viscosidad de 1.5 Pa s y densidad de 969 Kg/m 3
en un tanque de 0.91 m de diámetro. El agitador será una turbina abierta de seis aspas con
un diámetro de 0,305 m. que opera 180 rpm.
El tanque tiene 4 deflectores verticales, todos ellos con una anchura de 0.076 m. Calcula los
kw necesarios. (Np = 2.5, potencia = 0.17 kw o 0.23 hp)

9.- Se considera un tanque de fermentación de un metro de diámetro, equipado con una


turbina de disco. El tanque dispone de pantallas deflectoras y las proporciones geométricas
son los estándares. Para un proceso concreto se establece la utilización de un medio de
cultivo con una densidad de 1100 Kg. /m 3, y una viscosidad de 0.01 Kg. /m s. Las
condiciones de operación vienen fijadas por un caudal de aeración de 0.7 vvm y una
velocidad de agitación de 250 rpm. Calcular los requerimientos de potencia del sistema sin
aeración, la potencia para el sistema con aire y la retención de gas (εg).

Cálculo de KLa

1.- En un fermentador de 5 L se hizo la prueba del sulfito para determinar el K la. El


experimento se realizó a las siguientes condiciones:

Temperatura del aire 29 ˚C


Temperatura del agua del fermentador 30 ˚C
Flujo de aire 1 VVM
Volumen del líquido 3L
Velocidad de agitación 300 rpm

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Normalidad del tiosulfato usado 0.5 N
En la titulación

Las muestras se tomaron de 5 mL cada 5 minutos, y se obtuvieron los siguientes resultados:

Muestra número 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
tiosulfato usado mL 21 20.7 20.35 20 19.7 19.3 19.0 18.7 18.7 18.7

¿Cuál es el valor de KLa?

2.- Usando un electrodo de oxígeno disuelto en un fermentador con levadura, se obtuvieron


los siguientes resultados con la técnica dinámica:

t(s) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160


O2 5.2 5.2 5.2 5.2^ 4.7 4.2 3.7 3.1 2.6 2.0 1.5 0.9^^ 2.8 3.8 4.2 4.4 4.5
disuelto
(PPM)
 ^ Se cortó aire
 ^^ Se reinició la aireación
Encuentre usted: KLa, QO2 X, Cg*

3.- Se carga un fermentador de 500 L con un medio de cultivo y se le empieza a introducir


aire; la temperatura es de 30 ˚C y el pH de 5. Para determinar K La se emplea la técnica de
eliminación de gas con nitrógeno, en donde se obtuvieron los siguientes resultados:

t (s) 0 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190
O2 3.7 3.7 3.7 3.7 3.7 3.7^ 3.2 1.8 0.8 0.15^^ 1.7 2.41 2.9 3.2 3.3 3.41 3.52 3.59 3.61
disuelto(PPM)
 ^ Se cierra aire y se abre N2
 ^^ Se cierra N2 y se abre aire nuevamente
¿Cuál es el KLa?
4.- Usando el método del balance de O2 en un fermentador de 9 L, a 29 ˚C que opera a 120
rpm se obtuvieron los siguientes para 0.5 VVM.

Tiempo de 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
fermentación
Oxígeno - 5.90 5.85 5.70 5.42 5.00 4.40 3.72 2.80 1.65 1.28 1.35 1.92
disuelto ppm
O2 en el aire 21 20.95 20.90 20.85 20.70 20.55 20.40 20.10 19.60 18.90 18.50 18.70 19.3
de salida

Determine el valor de kL.a.

18
5.- Las dimensiones de un fermentador equipado con 2 juegos de turbina de 6 palas planas
y con 4 pantallas deflectoras son:

 Diámetro del fermentador: 3 m


 Diámetro del agitador: 1.5 m
 Anchura de pantalla: 0.3 m
 Altura de líquido: 5 m

La densidad y viscosidad del medio de fermentación son las siguientes:

 ρ: 1200 Kg./m3
 μ: 0.02 kg/m s

La velocidad de agitación es de 60 rpm y el caudal de aeración es de 14.1 m3/min.


Para un agitador de estas características se cumple la ecuación:

KLa = 20 256 (Pg/V) 0.95 vs0.47

Pg es la potencia en kw
V es el volumen en m3
vs es la velocidad superficial del gas en m/s
KLa se expresa en kmoles/m3 h atm

Calcular:

a) La potencia para el sistema sin aeración


b) La potencia para el sistema con aire
c) El coeficiente de transferencia de oxígeno

BIBLIOGRAFÍA

Atkinson, B. and Mavituna, F. 1983. Biochemical engineering and biotechnology


Handbook. The Nature Press. New York.
Bu’lock, J., B. Kristiansen. 1991. Biotecnología básica. Editorial Acribia S. A. Zaragoza,
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