Infiltración al vacío

método nuevo y sencillo procedimiento para la transformación de A. taliana.

En su forma original, el método implicaba el crecimiento de arabidopsis en la etapa de floración,

desarraigo de las plantas, aplicacion de agrobacterium a las plantas enteras a traves de infiltracion
al vacío en un medio de crecimiento sucrosa/hormona, re-siembra, recolección de semilas de unas
pocas semanas más tarde, y la identificación de la progenie transformada por la seleccion en
medios que contiene antibióticos o herbicidas. La técnica que puede ser visto como una extensión
del método anterior de transformación en planta, ofreció un sustituto utilizado ampliamente en
métodos de transformación de arabidopsis que involucran el cultivo de tejidos de raiz y
regeneración de plantas.

Con la infiltración al vacío y otros en metodos de transformacion de plantas, la progenie mas

transformada son genéticamente uniformes (no-quimérico) y la variación somaclonal asociada al
cultivo de tejidos y la regeneración se reduce al mínimo. Progenie transformada son típicamente
hemicigotos para el transgen en un locus dado, lo que sugiere que la transformacion se produce
despues de la divergencia de los linajes de células de la antera y de ovario.

El método no solo puede ser ser utilizado para introducir construcciones de genes especificos en
las plantas, sino tambien como un método de mutagénesis al azar para etiquetado de genes. El
prinicipal inconveniente del método es que la aplicación exitosa solo se ha informado de una
especia de planta, A. taliana.

En los protocolos anteriores para la infiltración al vacío, las células de agrobacterium se cultivan en
un medio rico de inoculacion a pH ajustado que consiste en sales y vitaminas de Murashige y
Skoog, bencilaminopurina (BAP) y sacarosa. El uso del surfactante Silwet L-77 se a vuelto comun.
Examinamos las contribuciones relativas de estos componentes de los medios para el exito de la
transformacion usando infiltracion al vacio.

LA infiltracion al vacio se utiliza para introducir bacterias en los espacios intracelulares en el teijdo
de la planta, pero una alternativa es simplemente sumergir partes aereas arriba de la planta en
una solución de agrobacterium por unos segundos, sin vacío.

Flower dip : método de transformacion usando agrobacterium en el que las flores de una planta se
sumergen en un cultivo bacteriano.

vacuum infiltration: introduccion física de las bacterias a la flor, para esto un cultivo con A.
tumefaciens con densidad de celulas saturadas es intercambiada a un medio tamponado y es
aplicada a plantas con flores bajo un vacio debil.

Se desarrollo un protocolo sistematico refinado que elimina la necesidad de introduccion de vacio

de bacterias. Esto condujo a una sustitucion de los medios tamponados. Se encontro que la
inclusion de sacarosa en los medios tamponados era critica, pero muchos otros ingredientes
presentes en la formulacion de los medios de infiltracion al vacio podrian omitirse .