PRÁCTICA 2.

SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS

RESUMEN

En la presente práctica de laboratorio se colocará el material microbiológico en los diferentes medios de cultivo para
promover su crecimiento, desarrollo y posteriormente su multiplicación.

Una vez rotulado el material de trabajo, se procedió a sembrar la bacteria “Escherichia Coli” en cajas de Petri que
contenían los medios: agar nutritivo, EMB y manitol empleando un el asa redonda. Luego, se realizó la siembra de
esta bacteria en tubos de ensayo con los medios de cultivo: SIM, LIA, TSI y citrato. También se sembró el hongo
“Geotrichum sp” en el medio de cultivo PDA.

Se tuvo en cuenta el tiempo para el rápido seguimiento de los microorganismos, 1 día para la revisión de los
cultivos de bacteria y 3 días para la revisión del cultivo de hongo.

INTRODUCCIÓN

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de
iniciar un cultivo microbiano. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el
crecimiento.

Es de vital importancia que las técnicas que se empleen se realicen de manera aséptica, es decir, evitar que el
operador se contamine con microorganismos procedentes de las muestras o cultivos, al mismo tiempo, evitar la
contaminación de las muestras y cultivos con microorganismos procedentes del ambiente o del propio operador. Por
ello, se realizarán manipuleos indispensables de manera ágil y en particular, sólo se abrirán los recipientes con los
medios de cultivos listos para sembrar cuando se el instrumental a utilizar se encuentre esterilizado, se trabaje en
ausencia de corrientes de aire y se encienda el mechero.

Para realizar la inoculación de los microorganismos provenientes de una siembra primaria, es decir, los
microorganismos ya se encuentran inoculados en un recipiente; se emplean métodos generales. Para la bacteria
“Escherichia Coli” en cajas de Petri se realizará el método de agotamiento con el fin conseguir una buena
separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para la bacteria “Escherichia Coli” en tubos de ensayo se utilizará
el método de punción con el fin de estudiar la movilidad de la bacteria. Finalmente, para la inoculación del hongo
“Geotrichum sp” en caja de Petri se empleó el método de estría por agotamiento con el fin de conseguir colonias
separadas.

METODOLOGIA
Técnica de siembra en caja de Petri

En presencia del mechero se debe hacer la siembra del inoculo en la caja

de Petri, teniendo en cuenta los cuidados pertinentes para evitar
contaminación por microorganismos del ambiente.

 Siembra por agotamiento: Una vez hecho el inoculo, se puede

emplear el asa para diseminar la muestra en los cuatro cuadrantes del
agar. El propósito de éstas técnicas es diluir el inoculo sobre el agar
para poder obtener colonias aisladas. Las colonias aisladas se pueden
subcultivar individualmente transfiriéndolas a otros medios a fin de
obtener cultivos puros.

Siembra en tubo: La siembra en medios contenidos en tubos requiere mayor cuidado, ya que un solo organismo
contaminante del aire puede superar en crecimiento al organismo que se desea investigar. Por lo tanto se deben
tener en cuenta las siguientes precauciones:

 Mantener inclinado el tubo que contiene el cultivo que se va a transferir de modo que los
microorganismos del aire caigan en las paredes externas del tubo y no en la boca.
 Los tapones de los tubos deben mantenerse en la mano derecha sostenidos con el dedo meñique y el
anular y entre el dedo anular y el corazón. Nunca deben colocarse sobre la mesa de trabajo o algún
otro lugar.
 Flamear la boca del tubo.
 Quemar el asa.
 Sumergirla en el medio sin tocar las paredes del tubo.
 Enfriarla en una parte del medio
 Tomar el inoculo con el asa.
 Después de practicar la siembra, esterilizar el asa y flamear nuevamente la boca del tubo. Colocar el
tapón del tubo.
 Transferir el material al otro tubo.

 Siembra en estría: Se realiza en un tubo con medio sólido inclinado en bisel, deslizando el asa sobre la
superficie y marcando surcos o estrías.

 Siembra en picadura: Se designa con este nombre a la siembra que

se realiza con asa recta en tubos de medios sólidos o semisólidos
generalmente sin inclinar; se introduce el asa cargada con la bacteria
al medio de cultivo pro el centro de la superficie al fondo.

 Siembra mixta: Igualmente se realizan siembras mixtas en picaduras

en el fondo del tubo y luego se desliza el asa por la superficie en bisel
marcando estrías.

 Siembra en medio líquido: Para transferir un producto contenido en un medio líquido o sólido a otro medio
líquido se pueden usar pipetas estériles o asa; si se hace con una pipeta, unas pocas gotas (2 o 3) son
suficientes para el desarrollo bacteriano, si se practica con asa, una o dos asadas.

AGAR/TIPO DE BACTERIA U HONGO RESULTADO


Cultivo
de Geotrichum spp.Agar
Sabouraud Dextrosa.
Estado: Semisólido
Colonias blancas a beige, aterciopeladas, con el tiempo
pueden tomar un aspecto velloso, radiado, plegado
y húmeda.
Método de siembra: por estría
periodo de incubación:3 días

Sí creció.
Cultivo Escherichia Coli, Colonias verdes metálicas lo cual predice que se
agar EMB encuentra una bacteria fermentadora.
Método de siembra: agotamiento
Estado: Semisólido Periodo de incubación : 1 día

Cultivo Escherichia Coli, en
agar nutritivo
Estado: Semisólido
Sí creció.
Colonias pequeñas de color blanco lechoso, de bordes
enteros, circulares, brillantes, de aspecto húmedo.
Método de siembra: agotamiento
Periodo de incubación: 1 día

Cultivo Escherichia Coli, en agar manitol No obtuvimos resultado

Se pudo observar formación de un aro fucsia en el agar

Cultivo Escherichia Coli, en en el momento de agregar el reactivo kovack (Indicios de
agar SIM motilidad), el contenido es de aspecto translucido de un
Estado: semisólido color amarillo/beige.
Indol positivo

Método de siembra: punción

periodo de incubación : 1 día

LIA: se tornó de un color purpura aunque se nota un

degradado entre naranja opaco y purpura, se puede
Cultivo Escherichia Coli, percibir en el tubo humedad. (Viraje de pH por
en agar alcalinización (púrpura)).

 LIA TSI: se tornó de un color naranja más claro aunque en la

 TSI parte superior de torno de un color amarillo lo cual es una
 CITRATO bacteria fermentadora de lactosa (ácida).

Estado: Semisólido CITRATO: el agar permaneció de color verde, presenta

humedad el tubo de ensayo como resultado la bacteria no
consume citrato como fuente de carbono.

RESULTADO Y DISCUSION

¿Qué es un cultivo puro y que es un cultivo mixto?

CULTIVO PURO: Son aquellos que contienen un solo tipo de microorganismo. El modo de obtener estos cultivos
consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola célula (son clones). El problema de separar una
especie microbiana de las otras, de tal manera que pueda crecer en cultivo puro.

CULTIVO MIXTO: Consiste en plantar diversas variedades, este cultivo permite que las cualidades naturales de las
diferentes especies se complementen, la aplicación de este procedimiento facilita el estudio, caracterización y control
de microorganismo. Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de este en
condiciones favorables y controladas de laboratorio.

¿Qué ocurrió con el agar antes de hacer la inoculación y como se tornó éste después de cumplido el periodo
de incubación?

Se puedo observar que los agares se encontraban antes de la

inoculación de microorganismo, solidos, translucidos con su
respectivo color inicial, sin presencia de humedad.

Se puedo observar que después de la inoculación se formaron

colonias de microorganismos en el caso de las cajas de Petri, y
en los tubos presenciamos cambio de color, humedad,
formación de anillos.

¿Cómo se comportaron las bacterias en el caso de los tubos de agar?

El comportamiento de las bacterias en los tubos fue un crecimiento libre, dependiendo de la consistencia del cultivo.

¿Qué errores siente usted que cometió su grupo o usted en el momento de hacer los procedimientos?, ¿qué
puede hacer para corregirlos?

Los errores que se cometieron fue cultivar un poco fuera del rango de la llama, también aplicar mucha fuerza al
momento de inocular la bacteria y/o hongo y con esto dañar el medio de cultivo. Esto se puede corregir con la
práctica en el laboratorio.

CONCLUSIONES

Se aprendió los diferentes métodos de siembra de microorganismos tanto en cajas de Petri (por agotamiento y
estría) y tubos de ensayo (estría, punción, mixto, medios líquidos)
 Se pudo concluir que la bacteria estudiada no tiene el mismo comportamiento en los medios de cultivos que
tratamos , por ejemplo, en color y el tamaño de las colonias.

Otro aspecto muy importante fue tener en cuenta el tiempo que conlleva la incubación de los microorganism. En el
caso del hongo se puedo observar que tiene una mayor tiempo de incubación (3 días) al de las bacterias (1 día)

BIBLIOGRAFIA

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