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Introducción a la Botánica

Reguladores auxina etileno


giberelina ácido jasmónico

químicos del
desarrollo citocininas brasinoesteroide

de las ácido salicílico

plantas ácido abscísico estrigolactona


Desarrollo post-embrionario
Las plantas crecen y se
desarrollan respondiendo
a estímulos del ambiente
en el que están inmersas

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Ese desarrollo está
determinado por la
interacción de factores plántula

Introducción a la Botánica
ambientales con factores
internos de la planta

planta adulta
Las hormonas vegetales
Los factores internos actúan
como mensajeros
auxina etileno
químicos producidos por las
ácido jasmónico
plantas frente a estímulos giberelina
ambientales o internos

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hormonas o reguladores
del crecimiento citocininas brasinoesteroide

Introducción a la Botánica
regulan y coordinan el
metabolismo, la división ácido salicílico
celular y la morfogénesis
ácido abscísico estrigolactona
 desarrollo de la planta
Santner et al. Nature Chemical Biology 2009
Las hormonas vegetales
Hormonas en los animales (ej. insulina)
• actúan en bajas concentraciones
• son sintetizadas en un órgano específico
• son transportadas por un sistema de circulación
• producen un efecto específico (estimulador o inhibitorio) en
células receptoras también específicas

Hormonas en las plantas

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• actúan en bajas concentraciones
• cualquier órgano de la planta tiene la capacidad de sintetizar hormonas
• algunas son transportadas largas distancias, otras actúan de forma local
• producen un efecto que depende de la sensibilidad de la célula receptora

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y de la presencia/ausencia y concentración de otras hormonas

En los dos sistemas:


• se sintetizan en una célula y actúan en otra
• pueden influenciar la acción de otras hormonas  interactúan con otras
hormonas (“cross talk”)
Las hormonas no funcionan aisladas
La cantidad de hormona activa en un tejido vegetal está además regulada
por el ambiente y por la presencia o ausencia de otras hormonas
Ejemplo: auxina

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Las hormonas vegetales
¿Entonces las llamamos hormonas?
Trewavas, 1980’s

Las hormonas vegetales están en bajas concentraciones en los tejidos pero no


parecen ser limitantes

Su efecto en el desarrollo está muy determinado por la sensibilidad de las


células blanco
La sensibilidad varia con el genotipo, el tejido, la fase del desarrollo de la planta,
las condiciones ambientales y la presencia (o ausencia) de otras hormonas

Reguladores del crecimiento vegetal = “hormonas” vegetales

 Sustancias orgánicas sintetizadas por las plantas que tienen la capacidad de


afectar a los procesos fisiológicos en concentraciones mucho más bajas que los
nutrientes o las vitaminas (< 1 μM = 10-6M)
El control de la respuesta hormonal se lleva a cabo a través de cambios en
la concentración y la sensibilidad de los tejidos a las hormonas
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Regulación de la concentración efectiva
de las hormonas
Varios niveles de regulación:
• velocidad de síntesis y de degradación (control
de las enzimas que intervienen)
• proporción de hormona libre/hormona
conjugada
• modificación de la velocidad y dirección del
transporte
• expresión de los receptores (modulación de la
sensibilidad de la célula blanco a la hormona)
• interacción con las otras hormonas

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Regulación de la concentración efectiva
de las hormonas
La sensibilidad a la hormona varía según el órgano/tejido
La misma
ejemplo: Auxinas Efecto sobre el alargamiento hormona
y la elongación
+ puede ser
celular
raíz estimuladora o
inhibidora de
tallo un proceso
según el
tejido/órgano
sobre el que
- actúa
10-8 10-7 10-6 10-5 10-4 10-3 10-2
Concentración de auxina (M)

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Forma activa de la hormona
Para cada hormona se establece un equilibrio entre
hormona activa (libre) y hormona inactiva (conjugada =
unida covalentemente a otra molécula)
Cada paso (síntesis, conjugación, degradación) está
controlado por enzimas
La forma conjugada de la hormona la “marca” para su
almacenamiento, transporte o degradación
Conjugación
H
H
De-conjugación

Síntesis degradación
hormona
activa

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Transducción de señales a nivel celular
La señal (=estímulo) es recibida por
un receptor que puede estar
localizado en la membrana
plasmática o el citoplasma
Se dispara una cascada molecular de
transducción intracelular de la señal,
mediada por segundos mensajeros:
• AMP cíclico (cAMP)
• Calcio (Ca2+ )
• Cascadas de fosforilación
• Otros
Se produce una respuesta que puede
o no involucrar cambios de expresión
génica
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Regulación de la expresión génica
Niveles de regulación de la cantidad
de producto de un gen  regulación
de la función del gen
• ¿Cuánto ARNm se transcribe?
• ¿Cuánto dura viable ese ARNm?
• ¿Cuánto de ese ARNm se traduce a
proteína?
• ¿Dónde localiza la proteína?
(compartimiento celular)
• ¿Cuánta de esa proteína está en forma
activa? (activación, inactivación,
degradación)
• ¿Están presentes las moléculas con las
que interactúa la proteína?

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Regulación de la transcripción de un gen a nivel
del promotor

Para que se inicie la transcripción de un gen


se requiere el ensamblado secuencial y
ordenado de factores de transcripción en la
zona del promotor
•Hay factores de transcripción que se actúan
sobre todos los genes (constitutivos)
•Hay factores de transcripción específicos
• Pueden ser activadores o represores
 regulación de la transcripción Introducción a la Botánica DBBE FCEyN - UBA
Degradación controlada de proteínas
Señalización mediante la degradación controlada y selectiva de proteínas:
• Intervienen: una cadena de señalización, un sistema de marcación de la
proteína a ser degradada y un proteasoma que la degrada
• El sistema de marcación está altamente regulado  especificidad
• Cuando lo que se degrada es un factor inhibidor de la transcripción  se activa
la expresión del gen que estaba inhibido
proteína marcada
Marcación de proteasoma
proteínas
destinadas a
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degradación
Introducción a la Botánica

proteína
degradada
Jones et al. 2013 The molecular life of plants
Mutantes de Arabidopsis thaliana
Arabidopsis thaliana: genoma pequeño, el primero en ser
completamente secuenciado
Tiempo de generación corto, planta pequeña,
muchas semillas

• Mutantes espontáneos
• Mutantes generados por el investigador
Mutagénesis generalizada (al azar)
seguida de un esquema de selección del fenotipo buscado
Mutagénesis dirigida a un gen en especial  “knockouts”
“Bancos” de mutantes
• Plantas transformadas para un gen (o grupo de genes) en especial
Sobre-expresantes: más cantidad de ARNm que lo normal
Sub-expresante: de menos ARNm a nulas (sin expresión)
Con expresión ligada a un gen reportero (patrón de expresión)
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Mutantes de Arabidopsis thaliana
Ejemplos de mutagénesis generalizada (al azar)
seguida de un esquema de selección del fenotipo buscado

Mutante en la luz
no se dio cuenta
de que la luz esta
encendida
¿mutante del
fotorreceptor?

Mutante en la
oscuridad  tiene el
proceso de
fotomorfogénesis
Plántulas de Arabidopsis expuestas a la desregulado
hormona etileno. Mutante insensible  ¿mutante de la
no responde a la hormona  ¿receptor cadena de
mutado? transducción?

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Mutantes biosintéticos o de respuesta hormonal
Drástico efecto en el desarrollo

Giberelinas Auxinas Brasinosteroides


Arveja Arabidopsis Arabidopsis

Wild type Gibberellin Wild type Auxin Wild type Brassinosteroid


biosynthesis response biosynthesis
mutant mutant mutants
Lester, D.R., Ross, J.J., Davies, P.J., and Reid, J.B. (1997) Mendel’s stem length gene (Le) encodes a gibberellin 3-hydroxylase. Plant Cell 9: 1435-1443.;Gray WM
(2004) Hormonal regulation of plant growth and development. PLoS Biol 2(9): e311; Clouse SD (2002) Brassinosteroids: The Arabidopsis Book. Rockville, MD:
American Society of Plant Biologists. doi: 10.1199/tab.0009

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Receptores de señales hormonales
Una vez liberada la hormona es recibida en la célula blanco por un
receptor
El receptor puede estar ubicado:
• en la membrana plasmática
• intracelularmente (hormona liposoluble)

Nabors Introducción a la Botánica 2006

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Auxinas
Las primeras hormonas vegetales en ser identificadas
Trabajos con curvatura fototrópica del coleoptile de cereales
principio activo aislado por FW Went en 1926
Auxina: del griego auxein, aumentar, crecer
Las auxinas están implicadas en procesos del desarrollo vegetal
porque afectan a la división, el crecimiento y la diferenciación de las
células

Ácido 3-indolacético (AIA) Ácido 2,4 diclorofenoxiacético Ácido 1-naftalenoacético (ANA)


auxina natural (2,4-D)

auxinas sintéticas
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Auxinas
Sitios de síntesis:
• Zonas con activa división celular
• Meristema apical del vástago
• Hojas jóvenes (primordios foliares)
• Ápice de la raíz
• Frutos y semillas en desarrollo
Transporte: polar (unidireccional) y no polar, por vasculatura y lateralmente
La respuesta que producen:
• División y alargamiento celular
• Diferenciación celular
Los procesos en los que intervienen:
• Establecimiento de la polaridad del embrión
• Fototropismo y gravitropismo
• Dominancia apical
• Formación de raíces laterales y raíces adventicias
• Diferenciación del tejido vascular y desarrollo del cambium
• Retraso de la senescencia foliar (en cooperación con las
citocininas)
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Percepción de auxinas y señalización
Las auxinas tienen un receptor en la
superficie celular que media las respuestas
rápidas (ej: ablandamiento de la pared
celular)

Las respuestas transcripcionales de las


Ljung, K. Development 140, 943-950 (2013)

auxinas están reguladas por un receptor


presente en el núcleo:
En ausencia de auxina el complejo inhibidor
de la transcripción de genes blanco está
activo  transcripción de genes blanco
reprimida
Cuando la auxina se une al receptor el
complejo inhibidor de la transcripción se
marca para ser degradado selectivamente
por el proteosoma  se activa la
transcripción de genes blanco de la auxina

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Las auxinas estimulan el alargamiento celular
En ausencia de luz, las auxinas estimulan el alargamiento de los
coleoptiles
Taiz y Zeiger (2006) Plant Physiology

sin auxina con auxina


Bioensayo: utilizado para identificar la molécula y
luego para estimar concentraciones
la auxina natural: ácido 3-indol acético
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El fototropismo y las auxinas

Experimentos con luz


azul unilateral
Curvatura del
coleoptile de avena
Taiz y Zeiger (2006) Plant Physiology

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El fototropismo y las auxinas
Identificación de la molécula
Taiz y Zeiger (2006) Plant Physiology

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Fototropismo y movimiento lateral de auxinas
Fotorreceptor: Fototropina La estimulación con luz
Efector de la respuesta: Auxinas unilateral provoca una
redistribución lateral de la
control con inhibidor auxina, con mayor
concentración en la zona no
iluminada
luz La redistribución de auxina
produce elongación celular
diferencialmente en la zona
opuesta a la iluminada 
curvatura hacia la luz
Los inhibidores del
transporte lateral de
auxinas inhiben la curvatura

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Gravitropismo
Receptor del estímulo: estatocitos en la caliptra que contienen
estatolitos = amiloplastos con función señalizadora
Efector de la respuesta: Auxinas

Al microscopio
electrónico

raíz en posición raíz en posición


vertical horizontal
Raven Biology of Plants 2013

Al microscopio óptico, teñidos con lugol

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Gravitropismo
El reposicionamiento de los estatolitos en las células de la
columela genera redistribución de auxina que lleva a la
curvatura de la raíz por crecimiento diferencial de la cara de arriba

En la raíz, altas
concentraciones de auxina son
inhibitorias del crecimiento

En la cara superior la menor [AIA]


produce alargamiento
En la cara inferior la mayor [AIA]
inhibe la elongación celular
 curvatura hacia abajo

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Alargamiento celular en medio ácido
La auxina estimula la acidificación del apoplasto actuando sobre la
expresión del gen de una bomba de protones
Un apoplasto ácido activa las expansinas de la pared celular
 expansión

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La auxina

Introducción a la Botánica
aumenta la
extensibilidad de
la pared
primaria
Transporte polar de las auxinas
Transporte polar: en dirección vertical
basípeto: del ápice hacia la base
acrópeto: de la base hacia el ápice

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Introducción a la Botánica
En el tallo, el transporte de
AIA es polar, basípeto pero
no simplemente por acción
de la gravedad
Requiere energía
Transporte basípeto y acrópeto
Transporte polar: en dirección vertical
basípeto: desde el ápice hacia la base
de un órgano
acrópeto: desde la base hacia el ápice
de un órgano

La dirección del transporte polar de


auxinas es siempre desde el ápice del

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tallo hacia la raíz
Lo llamamos acrópeto o basípeto
dependiendo del órgano por el que se
esté transportando

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En el tallo el transporte polar de auxina
es basípeto
En la raíz el transporte polar de auxina
es acrópeto
Transporte polar de las auxinas
Es la única hormona que se transporta polarmente
A través del parénquima vascular Mecanismo quimiosmótico que mantiene
Requiere energía 2-20 cm/h la auxina protonada (neutra) en el
apoplasto y desprotonada (carga (-)) en el
citosol
La hipótesis postula la localización polar
de los transportadores: AUX1 en el lado
apical y PIN1 en el basal

Localización basal de PIN1: facilitador


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del transporte polar de auxinas,


interactúa con otros transportadores
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Raven Biology of Plants 2013


Las auxinas y la dominancia apical
yema apical intacta yema apical removida (planta decapitada)

yemas
laterales
activas

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auxina agregada a zona de decapitación

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yemas laterales “dormidas”
Las auxinas y la regeneración de tejidos
vasculares
Se forman nuevos elementos conductores a partir de células del
parénquima vascular: diferenciación
Requiere el transporte basípeto de auxinas:
•si se remueve el ápice no ocurre
•si se agrega una fuente de auxinas que reemplace al ápice
ocurre

Raven Biology of Plants 2013


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Las auxinas y el desarrollo de los frutos
El fruto no se desarrolla si no hubo polinización y fertilización
El caso de la frutilla (un polifruto) y las auxinas

testigo o control se quitan los frutos se quitan los frutos en


(aquenios) en toda una zona solamente
la frutilla en
desarrollo
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Citocininas
Citoquininas=citocininas (citoquinesis  división celular)
Un derivado de la adenina

Sitios de síntesis: principalmente ápices de


las raíces, también embrión en desarrollo,
hojas jóvenes, frutos
Transporte: por el xilema
La respuesta que producen:
Promoción de la división celular
Mantenimiento de la actividad metabólica
Procesos en que intervienen: adenina
Retraso de la senescencia foliar
Ruptura de la dormición de las yemas
Formación de brotes del tallo en cultivo de
tejidos Zeatina la primera CK
Interacción con auxinas natural en ser descubierta

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Citocininas
Descubiertas durante la búsqueda de factores que estimularan la
división celular en experimentos de cultivo de tejidos vegetales
diferenciación de órganos
Aisladas por callo de células en cultivo en medio sólido
indiferenciadas en
primera vez de la cultivo en medio sólido
leche de coco

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(endosperma

http://www.ejpau.media.pl/volume13/issue4/art-09.html
líquido)

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callos un poco más diferenciados
Las CKs estimulan el desarrollo del vástago
Plantas transgénicas de tabaco que expresan una oxidasa de CKs que
baja la [CK activa]
[CK] normal

[CK] normal
baja [CK]

Al bajar la [CKs] en el tallo poniendo una enzima que


degrada la CK se observa un menor desarrollo del baja [CK]
vástago debido a un menor tamaño del meristema apical
En condiciones normales las CKs actuarían como
inductoras de la división celular en el meristema apical
del tallo Introducción a la Botánica DBBE FCEyN - UBA
Las CKs son represoras del desarrollo de la raíz
Plantas transgénicas de tabaco que expresan una oxidasa de CKs que
baja la [CK activa]

[CK] normal

[CK] normal baja [CK]


baja [CK]

Al bajar la [CKs] en la raíz poniendo una enzima que degrada la CK se observa que
aumenta la división celular y la formación de raíces laterales
En condiciones normales las CKs actuarían como represoras de la división celular en el
meristema apical de la raíz y en el periciclo Introducción a la Botánica DBBE FCEyN - UBA
Las citocininas controlan la senescencia foliar
Senescencia = envejecimiento programado en el desarrollo
Sobre-
expresantes
transgénicas del
gen IPT que
codifica una
enzima
importante de la
síntesis de
citocininas
 Alta
[citocininas] 
retardo de la
senescencia

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Transducción de señales mediada por CKs
La CK es percibida por un receptor
ubicado en la membrana plasmática de la
célula blanco

Se inicia una cadena de fosforilación de


proteínas señal que lleva la señal al
núcleo

Estas proteínas fosforiladas interactúan


con factores de transcripción en el núcleo

 Inducción o represión de la
transcripción de genes de respuesta a las
CKs

Interacción con el fitocromo

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El balance auxinas/citocininas
Experimentos de cultivo de tejidos
Para la diferenciación en órganos (raíces. tallos) existe una concentración y un balance
óptimos de hormonas
• Una [aux] > [CK] promueve el desarrollo de raíces
• Una [CK] > [aux] promueve el desarrollo de tallos
[auxina]
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auxina auxina + CK
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[CK]

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Las giberelinas
Sitios de síntesis: embriones durante la
germinación, entrenudos de los tallos de plántulas,
ápices de tallo y semillas en desarrollo
Transporte: no polar, xilema y floema
La respuesta que producen:
Estimulan la división y elongación celular
Estimulan la producción de enzimas hidrolíticas
durante la germinación
Los procesos en los que intervienen:
Elongación de los entrenudos
Floración en PDL
Inducción de la germinación (ruptura de la
dormición de las semillas)

Mutantes y variedades enanas de plantas Planta de arroz infectada con el hongo


Revolución verde Gibberella fujikuroi
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Las giberelinas
Las hormonas que controlan la altura de las plantas controlando
el largo de los entrenudos

La aplicación de GA
revierte el efecto de una
mutación causante de
enanismo en el maíz

La aplicación de GA
exógena al repollo lo hace
elongarse

Los mutantes de arveja


enana de Mendel eran
deficientes en la síntesis
de GA
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Las giberelinas y la floración
Durante exposición al fotoperíodo inductivo aumenta la concentración de GA
activa

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Las giberelinas y la floración
Arabidopsis thaliana es una PDL
El aumento de la [GA] día día día
corto corto largo
producida normalmente en + GA
la planta al alargarse los
días participa en la
inducción de la floración

El tratamiento con GA
exógena induce la floración
aún en condiciones de día
corto

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Giberelinas durante la germinación
Las giberelinas agregadas de manera exógena reemplazan al
embrión en la inducción de enzimas que degradan las sustancias
de reserva de la semilla Semillas sin embrión
Las amilasas degradan el almidón incubadas con o sin
Endosperma GA y ABA
en creciente
giberelina estado de
100 ppb degradación

[amilasas]
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Endos-
perma no
degradado
giberelina
1 ppb
Tiempo (h)

Las giberelinas (GA) y el ABA actúan de


agua
manera antagonística en la germinación
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Giberelinas durante la germinación
Las giberelinas sintetizadas por el embrión al imbibirse la semilla
inducen la síntesis de enzimas que degradan las sustancias de reserva
de la semilla y las liberan para su uso en el crecimiento de la plántula

Azcon Bieto Fundamentos de Fisiología Vegetal


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Giberelinas durante la germinación
La temperatura y la percepción de luz roja por el fitocromo regulan la
[giberelina activa]  control de la germinación

Algunas semillas
solo germinan
Azcon Bieto Fundamentos de Fisiología Vegetal

luego de un
período de
bajas
temperaturas 
vernalización

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Etileno: una hormona gaseosa
Lámparas de gas en las calles de ciudades europeas  mayor
caída de las hojas de los árboles cercanos (defoliación)

Sitio de síntesis: en toda la planta, a partir de metionina (un aminoácido),


especialmente en tejido senescente y frutos maduros
La síntesis está disparada por auxinas y por estreses ambientales (sequía,
temperaturas elevadas, anegamiento, etc.)
Transporte: por difusión, como gas
Respuesta que produce: triple respuesta durante la germinación,
promueve la expansión celular y la generación de aerénquima frente a la falta
de O2
Procesos en los que interviene: maduración de los frutos, la senescencia
de las hojas y las flores, abscisión de hojas y flores, señala la presencia de
estrés

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Maduración de frutos mediada por etileno
En frutos climatéricos: maduran en respuesta a un “pico” de etileno
que acelera la tasa de respiración

Frutos no climatéricos: Maduran


gradualmente y el etileno no
acelera su maduración
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El etileno es el mensajero del anegamiento
El ACC es un precursor del etileno
En condiciones de anegamiento 
anaerobiosis (o hipoxia) ACC se
acumula en la raíz
ACC viaja de la raíz al tallo por el
xilema
En el vástago: ACC  etileno que es
liberado como gas
senescencia en plantas no
tolerantes
 formación de aerénquima en
partes sumergidas de plantas
tolerantes
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El etileno y la abscisión de las hojas
La abscisión foliar está controlada por el balance
entre etileno y auxina capa de
La auxina es una represora de la respuesta al etileno, abscisión
probablemente controlando la sensibilidad de las
células de la capa de abscisión al etileno intacta rota

degradación de
la laminilla
media

Alta [auxina] baja [auxina]


alta [etileno]
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Otras respuestas del etileno
La triple respuesta de las plántulas etioladas en presencia de etileno
adicional: * hipocotile corto
* curvatura del ápice (gancho apical) exagerada
* poca elongación de la raíz
En condiciones normales
de germinación en la
control con etileno oscuridad, el etileno
promueve el
mantenimiento del gancho
apical

La luz roja percibida por el


fitocromo inhibe la síntesis
de etileno
 estiramiento del gancho
apical

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Otras respuestas del etileno
El etileno dispara la senescencia de las flores, los inhibidores de la
síntesis de etileno y los análogos del etileno (competidores por los
sitios de unión al receptor) alargan la vida de las flores

1-MCP se une al receptor del etileno e www.u.osu.edu/greenhouse/page/8/


impide la respuesta normal de la planta al
etileno Introducción a la Botánica DBBE FCEyN - UBA
Ácido abscísico
A veces es mejor para la planta no crecer…

Un inhibidor del desarrollo aislado de yemas en reposo


dormina
Una molécula con probable rol en abscisión  abscisina
la misma molécula
 Ácido abscísico = ABA
Síntesis: en plástidos (cloroplastos en la parte aérea y
leucoplastos de la raíz)
Transporte: por la vasculatura, por floema desde las hojas y
por xilema desde la raíz
Procesos en los que interviene:
• Dormición (inhibición de la germinación) de las semillas
• Respuesta al estrés (ej: cierre estomático)
Introducción a la Botánica DBBE FCEyN - UBA
El ABA es el mensajero del estrés hídrico
Respuesta inmediata: cierre de los estomas  se conserva agua
Respuesta a largo plazo: inhibición del desarrollo del vástago y
estimulación del desarrollo de la raíz
 se evita la pérdida de agua y se estimula la búsqueda de agua
control

10 uM ABA

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La [ABA] en la hoja responde al potencial hídrico

Introducción a la Botánica DBBE FCEyN - UBA


El ABA y el cierre estomático
El ABA generado en la raíz frente al estrés hídrico llega por el xilema a
las hojas, en las células oclusivas dispara el cierre de los estomas por
cambios en la distribución de iones
Unión del ABA a receptores
en células oclusivas  salida
de Cl-
Cambio del potencial de
membrana  se abren
canales de K+
Salida de K +  el agua sale
de la vacuola por ósmosis 
disminuye el volumen de la
célula oclusiva  cierre del
estoma

Introducción a la Botánica DBBE FCEyN - UBA


ABA y la dormición de las semillas
La [ABA] aumenta a medida que
la semilla madura y pierde agua
Alta [ABA] inhibe la germinación
Mutantes vivíparos del maíz:
algunos granos tienen en el
embrión mutado un gen que
responde al ABA durante la
formación de la semilla  son
insensibles al ABA
 la semilla no entra en
dormición y germina
precozmente (aún estando en
contacto con la planta madre)

Introducción a la Botánica DBBE FCEyN - UBA

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