BIOETANOL A PARTIR DE BIOMASA

LIGNOCELULÓSICA, UNA MIRADA CON FOCO EN

EL PRE TRATAMIENTO.
Carolina Restrepo Londoño
David Eduardo Tibaduiza García

Ingeniería Biológica
2016
Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Introducción
¿Por qué energías alternativas?
1.Combustibles fósiles finitos.
2.Emision de gases y calentamiento
global.
3. Incremento de precios.
Bioetanol – gasolina, alternativa?
Manufactura de vehículos mezclados de
85% etanol y 15% gasolina, mezcla que
reduce la emisión de gases.
Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Biomasa Lignocelulosica
Compuesta por : Celulosa + Hemicelulosa + Lignina
¿Problema?
La celulosa y la lignina están rígidamente asociadas,
por lo que es necesario antes de todo un proceso
fermentativo usando esta biomasa, realizar un pre
tratamiento con el fin de:
1. Romper lo enlaces de hidrogeno de la estructura
cristalina de la celulosa.
2. Romper la matriz reticulada entre la
Hemicelulosa y la lignina.
3. Hidrolisis enzimática para aumentar la porosidad
y área superficial de la celulosa.
Composición lignocelulosica
Celulosa
Cadena lineal de D-glucosa unida por enlaces β-(1,4)
glicosídicos. Insoluble en agua y en la mayoría de
solventes orgánicos.
Hemicelulosa
Biopolímeros. Pentosas ( β-D-xilosa, α-L-arabinosa),
Hexosas ( β-D-manosa, β-D-Glucosa, α-D-galactosa).
Sensible a condiciones de tiempo y temperatura.
Asociada con formación de productos inhibitorios.
Lignina
Polímero aromático.

Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Métodos físicos de pre tratamiento
Molienda Extrusión Microondas Congelación

 Reducción de tamaño de  Tratamiento termo-físico.  Es un tipo de irradiación, el calor  Incrementa la digestión

partículas de 10-30mm.  Fácil de escalar, posibilidad de se genera por la interacción de un enzimática.
 Alto requerimiento un proceso continuo, objeto calentado y un campo  Pocas investigaciones
energético. temperatura moderada, no hay electromagnético. debido a los altos costos
 Altos rendimientos de formación de compuestos  El rompimiento de la celulosa se que implican.
hidrolisis enzimática furfurales. da por la colisión molecular  No es amigable con el
luego de usar molienda.  Costos elevados de disposición debido a la polarización ambiente.
de efluentes. dieléctrica.

Investigaciones Investigaciones Ventajas

Yoo et al  Usando extrusión con

Hideno et al. Rendimientos  Proceso de corto tiempo.
condiciones de operación de
de glucosa y xilosa del 78,8%  Uniformidad y selectividad.
350rpm y 80ºC obtuvo 94,8% de
y 41,5% respectivamente,  Uso de poca energía.
glucosa luego de la hidrolisis
usando molienda de disco.
enzimática.

Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Métodos físicos de pre tratamiento

http://www.slideshare.net/alvarogonzalezfontana/most-efficient-
milling-installation-for-biomass-boiler

https://es.wikipedia.org/wiki/Extrusi%C3%B3n_de_pol%C3%
ADmero#/media/File:Disenio_de_un_extrusor.png

http://www.slideshare.net/Anoop2973/biomedical-waste-
management-42703317

Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Métodos químicos de pre tratamiento
Pre tratamiento ácido
 Acido sulfúrico, produce que los
polisacáridos sean hidrolizados a
monosacáridos, lo que da mas
facilidad al momento de la hidrolisis
enzimática.
Dos caminos
1. Acido a alta concentración y bajas
temperaturas.
2. Acido a bajas concentraciones y
altas temperaturas.
Alterativa: Ácidos diluidos
Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Pre tratamiento alcalino
 NaOH, KOH, CaOH2 y amoniaco son
los mas usados para este tipo de
pre tratamiento.
 Extracción de lignina, grupos
acetilo y diferente sustitución de
ácido urónico que inhiben la
accesibilidad de celulosa para la
sacarificación enzimática, son las
ventajas más importantes de este
pre tratamiento.
Investigaciones
Costal Bermuda  0,75% NaOH x 15 min
, y se logró la reducción de los
rendimientos de azúcar total de 71%.
Pre tratamiento líquidos iónicos (IL)
 Pueden disolver carbohidratos y lignina
simultáneamente.
 Son sales orgánicas compuestas por aniones y
cationes.
Ventajas: Las condiciones del proceso no son
peligrosas y los líquidos iónicos se pueden reciclar.
Desventajas: ILs pueden llegar a desactivar la
enzima, y la viscosidad se ve afectada por la
temperatura baja o alta.
Aplicaciones a la industria?
Es todo un reto para la industria aplicar este
método.
1. Reciclaje de los líquidos iónicos puros consume
mucha energía.
2. En el proceso la viscosidad afecta los ILs
3. Se necesita una enorme cantidad de líquidos
iónicos que actualmente son costosos.
Métodos químicos de pre tratamiento
Pre tratamiento con solventes orgánicos Ozono lisis

 Metanol, etanol, acetona, etilenglicol entre otros
son usados. Con o sin agentes catalizadores.
 Capacidad de romper la estructura interna de la
lignina y los enlaces de la Hemicelulosa.
Desventajas: Bajos puntos de ebullición, altas presiones
de operación, muy volátiles
 Uso del ozono para romper la lignina y la Hemicelulosa y así
incrementar la biodegradabilidad de la celulosa.
 Ozono : Gas con gran poder oxidante, soluble en agua.
Ventaja : Ausencia de productos que inhiben la hidrolisis
enzimática posterior.
Desventaja: Altos costos del gas.

Investigaciones Investigaciones
Pinus radiata fue expuesto a acetona-
García – cubero et al  Rendimientos de
agua con una relación molar 1:1, a 195ºC,
hidrolisis enzimática luego de este pre
pH 2,0 x 5 min y el rendimiento de etanol
tratamiento fue de 88,6%.
fue el 99,5%.

Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Métodos físico-químicos de pre tratamiento
Explosión de Vapor
 Método termo-mecánico-químico, en donde se
desglosan los componentes estructurales de la
lignocelulosa debido a:
1. Vapor de calentamiento (parte térmica).
2. Fuerzas de cizallamiento (parte mecánica)
3. Auto hidrólisis en los enlaces glicosídicos (parte
química)
Proceso
Las partículas de biomasa se calientan con vapor de
agua a 20 a 50 bar y 160 a 270ºC, luego de varios
minutos se libera la presión a la atmosférica, la
humedad condensada se evapora y la matriz
lignocelulosica es segregada.
Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Ammonia fiber explosión (AFEX)
 Basado en la explosión de vapor el método una
amoniaco, y esta basado en 4 parámetros para
una optimización:
1. Carga de amoniaco
2. Carga de agua
3. Reacción de temperatura
4. Tiempo de residencia
Proceso
Presiones altas de 1,72 a 2,06 MPa, temperaturas
moderadas de 60 a 120ºC x 30 minutos. La rápida
expansión del amoniaco provoca la escisión del
complejo lignina – carbohidratos, lo que se aprovecha
para una mejor digestibilidad de la biomasa.
Métodos físico-químicos de pre tratamiento
Explosión de CO2
 Tiene componentes entre la
explosión de vapor y AFEX. El CO2
tiene la capacidad de penetrar los
poros del material lignocelulósico.
 El proceso no es toxico ni inflamable.
Proceso
Tc de 31ºC y Pc de 7,4MPa. Proceso auto
catalizador con la formación de acido
carbónico que ayuda a que halla menos
corrosividad.
Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Liquid hot water (LHW)
 No se requiere rápida descompresión
o expansión a diferencia de la
explosión de vapor o AFEX.
 Capacidad de solubilizar la mayor
parte de las hemicelulosas.
 Evita la formación de inhibidores.
Proceso
Temperaturas de 160 a 220ºC, presiones
altas, para mantener el agua en estado
liquido. Tiempo de residencia 15 min, sin
adición de catalizadores. Control de pH de
2a7
Oxidación húmeda (WO)
 Eficiente para solubilización e
hidrolisis de hemicelulosas.
 Deslignificación producto de la
formación de ácidos orgánicos y
reacciones oxidativas durante el
proceso.
Proceso
Temperaturas por encima de los 120ºC,
presiones entre 0,5 y 2MPa, durante
aproximadamente 30 minutos.
Pre tratamiento biológico

Phanerochaete
 Utilización de microorganismos, especialmente chrysosporium
hongos degradadores de lignina.
 Proceso requiere gran cantidad de capital
operacional.
 Amigable con el ambiente. http://gydb.org/index.php/Element:pCretro3

 Tiempos muy largos de degradación y monitoreo

constante del crecimiento microbiano.
 Investigaciones alrededor de Phanerochaete Aspergillus niger
chrysosporium, Aspergillus niger, entre otros.

https://www.inspq.qc.ca/en/moulds/fact-
sheets/aspergillus-niger

Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Combinación de métodos de pre tratamiento
Acido Diluido + Alcalino
Acido: Des lignifica e incrementa el
área superficial de la fibra de celulosa
Alcalino: Adecuado para
Deslignificación
1. Pre tratamiento alcalino NaOH
(10%) con relación 3:1 liquido-
solido 90 °C por 1.5H
2. Ácido Paracetico (10%) 75°C por
2.5H
Rendimiento 92.04%
CO2 supercrítico + explosión de vapor
Alinia et al.
1. Inyección de vapor (200°C por
15min).
2. Explosión CO2 ( 12MPa 190°C 30
min).
Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
Alcalino + ILs
Ngueyn et al.
Paja de Arroz: Amoniaco y LI
la (1ethyl-3-methyllimidazolium-
acetate)
Amoniaco: Des lignificación
IL: Solubilización
Incrementa la conversión a
glucosa y la recuperación de
celulosa.
Acido Diluido + Explosión de vapor
Acido: Hidroliza para maximizar la
conversión de xilosa
Explosión de vapor: Romper la
estructura de la lignocelulosa
Incrementa la obtención de xilosa
y reduce los inhibidores.
SO + Trat. Biológico
Monrroy et al.
1. Gloephyllum trabeum 3 semanas
2. Solvente orgánico( mezcla entre
etanol y agua)
Mismos rendimientos en la obtención
de etanol, sin embargo el tiempo de
tratamiento con solventes orgánicos se
redujo de 32 min a 200°C  18 min
185°C.
Trat. Biológico + Acido diluido
Acido: Disolver Hemicelulosa
Tratamiento Biológico : Quebrar la
envoltura de la lignina-hemicelulosa
Fuying et al . Echinodontium taxoddi y
H2SO4 logro mejorar la hidrolisis altos
niveles de azucares reducidos y el
rendimiento del etanol
Trat. Biológico + Explosión de Vapor
Taniguchi et al.
P. ostreatus (60 días) en
combinación con la explosión de
vapor (1.5MPa 1min).
Se redujo el tiempo de pre
tratamiento de 60 días: 36 días
manteniendo los rendimientos
obtenidos
Acido diluido + Microondas
10g Bagazo : 200ml H2SO4 (1,56%
wt%) Calentado a 130º 160º 190°C
Con 190°C Se obtuvo la mayor
fragmentación de Biomasa y
completa degradación de
Hemicelulosa
Futuro prospectivo del pre tratamiento:
Manipulación genética de cultivos energéticos.
Incremento
de la
Avances en ingeniera genética y composición
metabólica buscan dar de la
herramientas para facilitar el pre celulosa
Modificación
http://kerchak.com/ingenieria- tratamiento de los residuos de la lignina
genetica-alimentos-transgenicos/ lignocelulósicos, pues un 18-20% Reducir la
del costo total de un proceso de cristalinidad
de la
producción de bioetanol se va celulosa Alteración
únicamente en el pre de la pared
tratamiento. celular
vegetal
Producción
de hidrolasas
http://www.uchile.cl/carreras/497
0/ingenieria-civil-en-biotecnologia en plantas

Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
 La búsqueda de genes relacionados con la biosíntesis de la celulosa ha sido exitosa y se tienen dos
Incremento grandes familias de genes mas tres independientes:
de la 1. cesA y csl : Hallados en arroz, maíz y otros cultivos
composición 2. Korrigan, Cobra y Kobito : Participan directamente en la síntesis de la pared celular,
de la celulosa una modificación directa sobre ellos podría representar cambios en toda la
composición de la pared.

Reducir la  Fry et al : Con la sobre expresión de los genes cslF y cslH, logra reducir la capacidad
cristalinidad recalcitrante de la pared aumentando la relación de β1,3-β-1,4-glucano.
de la celulosa  La celobiosa deshidrogenasa en una mezcla bruta de celulosas que podrían aumentar
y la pared solubilidad de celulosa cristalina, por lo que una expresión en estos genes seria un
recalcitrante paso a una posible solución.

Enzima E1 originalmente obtenida en Acidothermus cellulyticus se ha producido en arroz

Producción
alcanzando un 5% del total de las proteínas solubles de la planta, esos niveles tienen que
de hidrolasas
subir al 10% TSP para una hidrolisis completa, sin la necesidad de añadir endoglucanasa
en plantas
de origen microbiano.

Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
  Selección de genes precursores de la lignina, con la finalidad de silenciarlos por
Modificación tecnología de interferencia de RNA.
de la lignina  Regulación de enzimas claves en el metabolismo de la lignina reducirían
considerablemente el contenido de ella en un planta.

Alteración de  Proteinas como “expancins y swollenin” tienen la capacidad de irrumpir en sustratos

la pared de la pared celular, aumentando capacidad de entrada de hidrolasas al sistema.
celular Especialmente “swollenin” por tener un dominio de unión a la celulosa tiene un efecto
vegetal desestabilizante de la estructura cristalina.

Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín
CONCLUSIONES
 La biomasa lignocelulosica a tomado gran
impulso como una fuente económica de
producción de biocombustibles, aunque tiene un
talón de Aquiles, y esto radica en los costos del
pre tratamiento. Actualmente cuatro líneas son
investigadas pero los costos y la formación de
productos inhibitorios representan un alto en el
camino y una invitación a seguir investigando
acerca del tema.
 Las áreas de ingeniería genética y metabólica
son una alternativa a tratar de solucionar el
problema de raíz, es decir, modificando
directamente sobre las plantas sus paredes
celulares, para que componentes de la biomasa
se presten a un pre tratamiento menos complejo
y por supuesto mas económico y accesible para
la industria.
 Referencias
1. Hideno A, Inoue H, Tsukahara K, Fujimoto S, Minowa T, Inoue S, Endo T, Sawayama S. Wet disk milling pretreatment without sulfuric acid
for enzymatic hydrolysis of rice straw. Bioresource Technology 2009;100:2706–11.
2. Yoo J, Alavi S, Vadlani P, Amanor-Boadu V. Thermo-mechanical extrusión pretreatment for conversion of soybean hulls to fermentable
sugars. Bioresource Technology 2011;102:7583–90.
3. Wang Z, Keshwani DR, Redding AP, Cheng JJ, Jay J. Cheng. Sodium hydroxide pretreatment and enzymatic hydrolysis of coastal Bermuda
grass. Bioresource Technology 2010;101:3583–5.
4. Koo BW, Kim HY, Park N, Lee SM, Yeo H, Choi IG. Organosolv pretreatment of Liriodendron tulipifera and simultaneous saccharification
and fermentation for bioethanol production. Biomass and Bioenergy 2011;35:1833–40.
5. Garcia-Cubero MT, González-Benito G, Indacoechea I, Coca M, Bolado S. Effect of ozonolysis pretreatment on enzymatic digestibility of
wheat and ryestraw. Bioresource Technology 2009;100:1608–13.
6. Nguyen TA, Kim KR, Han SJ, Cho HY, Kim JW, Park SM, JCh Park, Sim SJ. Pretreatment of rice straw with ammonia and ionic liquid for
lignocelluloses conversion to fermentable sugars. Bioresource Technology 2010;101:7432–8
7. Alinia R, Zabihi S, Esmaeilzadeh F, Kalajahi FJ. Pretreatment of wheat Straw by supercritical CO2 and its enzymatic hydrolysis for sugar
production. Biosystems Engineering 2010;107:61–6
8. Monrroy M, Ibanez J, Melin V, Baeza J, Mendonca RT, Contreras D, Freer J. Bioorganosolv pretreatments of P. radiata by a brown rot
fungus (Gloephyllum trabeum) and ethanolysis. Enzyme and Microbial Technology 2010;47:11–6.
9. Fuying Ma Na, Yang Chunyan, Xu Hongbo, Yu Jianguo, Wu Xiaoyu Zhang. Combination of biological pretreatment with mild acid
pretreatment for enzymatic hydrolysis and ethanol production from water hyacinth. Bioresource Technology 2010;101:9600–4.
10. Taniguchi M, Takahashi D, Watanabe D, Sakai K, Hoshino K, Kouya T, Tanaka T. Effect of steam explosion pretreatment on treatment with
Pleurotus ostreatus for the enzymatic hydrolysis of rice straw. Journal of Bioscience and Bioengineering 2010;110:449–52
11. Fry SC, Mohler KE, Nesselrode BH, Frankov´a L. Mixed linkage beta-glucan: xyloglucan endotransglucosylase, a novel wall-remodelling
enzyme from equisetum (horsetails) and charophytic algae. Plant Journal 2008;55:240–52.

Escuela de Biociencias
Facultad de Ciencias
Sede Medellín