Crecimiento de

Poblaciones Celulares y
su Perturbación

Depto. Biofísica
Facultad de Medicina

ESFUNO ESCUELAS, UTI BCyT 2016

 PROLIFERACIóN CELULAR.
La proliferación celular es un evento esencial en el mantenimiento
y continuidad de la vida.

Se requiere la progresión a través de ciclos celulares sucesivos.

El ciclo celular comprende un conjunto ordenado de sucesos

que llevan al aumento de la masa celular, la replicación del ADN,
la segregación del material genético y la división en dos células
hijas.

En condiciones de perturbación (ej: exposición a agentes

genotóxicos) pueden provocarse modificaciones de importancia
biomédica como son muerte celular, mutaciones y transformación
maligna.
 El ciclo celular se divide de
manera general en dos
grandes etapas:

Interfase y Mitosis.

Fase G1: Es la fase que sucede a las division celular y la mas variable en
duración

Fase S: Es la fase donde se realiza la replicación del AND.

Fase G2: Es la fase donde se ensamblan las estructuras necesarias para la

separación de las celulas hijas.

Fase M: Es la fase donde se da propiamente la separación de las células hijas.

• Cada población celular presentará una duración del ciclo
celular diferente:
bacterias ≈ 30 min
levaduras ≈ 1.5 h
fibroblastos ≈ 24 h

• Para el estudio de la cinética de

crecimiento se puede emplear la
citometría de flujo.

• Donde la cuantificación del

contenido de ADN permite
determinar la distribución de una
población celular a lo largo de las
distintas fases del ciclo.
• Utilizando colorantes de ADN que incrementan la
fluorescencia tras su unión al ácido nucleico.

• La cantidad de colorante unido es proporcional a la

cantidad de ADN, y por tanto la luz recogida en el
citómetro es proporcional a la cantidad de ADN de cada
célula.
• Las poblaciones celulares pueden clasificarse:

a. Según las fases representadas como:

-homogéneas: donde todas las fases se encuentran

representadas.

-sincronizadas: todas las células se encuentran en la

misma fase.

b. Según la duración de sus fases como:

-ideales: todas las fases duran lo mismo.

-reales: no todas las fases duran lo mismo.

 Puntos de Control
• Las transiciones entre fases están reguladas por puntos de
restricción o control.

• En estos puntos la célula censa las condiciones externas como

internas de forma de asegurar su futura supervivencia.

• Durante la interfase existen dos puntos de control esenciales

en G1 antes de la síntesis de ADN y en G2 antes de entrar en
mitosis y en la fase de división se encuentra otro punto llamado
punto M.

La regulación se da a partir de genes que controlan la inducción y

activación de complejos ciclina-proteinquinasas dependiente
de ciclinas (cdk).
Las cdk mantienen constante su concentración durante todo el
ciclo, pero solo serán activas al unirse a las ciclinas.

Las diferentes ciclinas varían su concentración durante el ciclo

provocando de esta manera la progresión en el ciclo.
• Entonces el sistema de control del ciclo celular es un
dispositivo bioquímico compuesto por un conjunto de
proteínas reguladoras interactivas: las ciclinas y las
quinasas dependientes de ciclinas.

• Si se produjo daño en el ADN, se abre una ventana

temporal que posibilita la reparación.

• Los mecanismos se han estudiado en levaduras y

ovocitos de rana como modelos eucariotas,
encontrándose importantes homologías con las células de
mamíferos, demostrando una conservación de
mecanismos de control en la evolución.
• El cáncer puede deberse a una falla en el control y regulación
del ciclo celular, perdiéndose la normalidad en el crecimiento
celular.

• En células humanas la supresión tumoral se vincula a la

capacidad de freno en el ciclo:

Relacionándose con:

aumento de la probabilidad de reparación sin error

disminución significativa de modificaciones genómicas que

llevan al cáncer.
 Crecimiento de Poblaciones
Celulares
• Una población celular se define como un conjunto de células
de cierta línea que proviene de la división de una o más
células madres, y que tienen ciertas características en
común:

genéticas
bioquímicas
morfológicas
funcionales

• El crecimiento se caracteriza por un aumento del número

de individuos (N) bajo ciertas condiciones fisicoquímicas
del medio.
Dinámica de una Población Aislada
• A veces se recurre a aislar la especie celular en
estudio y se la mantiene viva en medios artificiales,
en cultivos de células.

• Al aislar la especie celular y mantenerla viva en

medios artificiales existe la ventaja de poder
controlar una serie de parámetros de crecimiento y la
desventaja de que no siempre los resultados son
extrapolables a lo que sucede “in vivo”.
• Si se coloca 1 célula en un medio nutritivo adecuado y
condiciones óptimas de temperatura, pH, ppO2 y ppCO2, al
cabo de cierto tiempo se habrá dividido.

• Con estas condiciones una población celular presentara un

ciclo de crecimiento reproducible in vitro.

n= t/TGC

Luego de n generaciones
celulares, se obtendrán:
0
0 TGC 1 2 3 4 N=2n
t
• Previo a la 1ra división celular ocurre un retardo en el
crecimiento propio de la “adaptación al medio”.

• Pasada la fase lag o de retardo, el crecimiento se produce

de acuerdo al Modelo Malthusiano o exponencial donde la
tasa de crecimiento es constante.

• Este modelo explica sólo la fase de crecimiento exponencial

• En un cultivo de células en medio líquido llega un momento

en que el número N de individuos se estabiliza. Un número
igual de células se dividen y mueren, alcanzando la fase
estacionaria.

• Ahora el crecimiento se dará de a cuerdo al Modelo

Verhultsiano o logístico, el cual define tanto la fase
exponencial como la estacionaria.
• El crecimiento exponencial se ajusta a un modelo tipo
exponencial:

N = No . ekt donde k = ln 2 / TGC

• El modelo logístico (Verhultsiano) permite el estudio de

las fases exponencial y estacionaria de crecimiento,
considerando variaciones en la velocidad de crecimiento
debido a la competencia.

a = ln 2/ TGC

N= N max
− a ( t −t 1 / 2 )
1 +e Cuando t→∞,N(t) →Nmax
Fases de la Curva de Crecimiento

40

ESTACIONARIA
30
Nº. de individuos

20 EXPONENCIAL

10

LAG

0
0 5 10 15 20 25 30 35

Tiempo (hs).
 Parámetros de Crecimiento

100
90
80
70
60
50
ESTACIONARIA
Nmax40
30
Nº. de individuos x 106

20
N17.5
1/2

10
9
8
7 EXPONENCIAL
6
5
4

N0 2

TLAG
1

0 5 10 T1/2 15 20 25 30 35
TGC Tiempo (hs).
 Perturbación de la Proliferación

• Diversos agentes físicos y químicos pueden alterar la

proliferación celular, por sus efectos sobre el ADN,
enzimas y membranas.

• Agentes físicos: radiaciones ionizantes (RX y Rγ)

no ionizantes (UV)
temperatura

• Agentes químicos: drogas radiomiméticas

• Agentes biológicos: virus

La etapa física de la acción biológica de las radiaciones
ionizantes consta de una:

Acción directa: consecuencia de

ionizaciones que se producen en
los átomos que forman la
molécula del ADN.

Acción indirecta: interacción del

haz de radiación con otros
átomos y moléculas de la célula
como el agua, produciéndose
radicales libres que al difundir
hasta la molécula de ADN, la
dañan de manera indirecta.
• Las lesiones más frecuentes producidas por
radiaciones ionizantes son:
• Radicales libres: son átomos o moléculas con uno o más
electrones no apareados. Pueden generarse por:
Absorción de radiación a nivel celular
Efecto de drogas (radiomiméticas)
Procesos metabólicos de óxido-reducción espontáneos

• Debido a que las células están constituidas por un alto

porcentaje de agua, muchas acciones nocivas de las RI
involucran especies reactivas del oxigeno (ROS). Que se
producen a través de la radiólisis del agua.

• La bleomicina es un antibiótico tumoral que se intercala en el

ADN. Por reacciones de óxido-reducción con iones metálicos
se activa y genera radicales libres.
• Los radicales libre producen reacciones de óxido-
reducción en cadena llevando a la formación de
productos tóxicos (por ejemplo: H2O2).

• Se ha demostrado una correlación entre la

concentración de H2O2 y la producción de aberraciones
cromosómicas y recombinaciones intergénicas.

• La acumulación de lesiones por radicales libres lleva a:

envejecimiento celular
otras patologías incluido el cáncer
• Las células contienen ciertas enzimas capaces de
procesar los radicales libres.

• Las superóxido dismutasas (SOD), procesan el radical

superóxido ( ), dando lugar a la formación de H2O2 y
O2.

• Otras enzimas como las peroxidasas y catalasas son

capaces de procesar el H2O2.

• Las vitaminas C y E, los fenoles y el glutatión son

capaces de interrumpir las reacciones en cadena de los
radicales libres.
• La fuente más importante de radiación ultravioleta es
la luz solar. Se la clasifica en 3 clases: UVA, UVB y
UVC, de acuerdo a la longitud de onda.

• La radiación UV produce dímeros particularmente de

timina. Estas lesiones son potencialmente letales,
mutagénicas y cancerígenas.

• El benzopireno, producto de combustión del

combustible y cigarrillos, al metabolizarse se fija en
forma de diolepóxido al ADN. Agente cancerígeno muy
poderoso.