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MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
(CURSO 2012–2013)
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Organigrama
Cuantitativo: lectura
Cualitativo:
Identificación presuntiva de colonias
Martes
Tinción de Gram
Prueba de la oxidasa
Siembra en Agar de MacConkey
Observación de la aparición de halos
de hemólisis
Tinción de Gram a colonias aisladas en
Miércoles Agar Sangre y Agar Salino Manitol
Identificación de cocos Gram positivos
Siembra de Agar Sangre
Siembra de Agar Kligler Prueba de la catalasa Siembra de Agar Müeller-Hinton
Jueves Inoculación de API20E Inoculación de API STAPH Colocación de los discos
Inoculación de API STREP E-test
Virulencia
Disponibilidad de tratamiento
GRUPO DE
PATOGENICIDAD EJEMPLOS
RIESGO
No suelen causar enfermedad en personas Escherichia coli
1 sanas Staphylococcus epidermidis
Causan infecciones moderadas o graves Bordetella pertussis
Las infecciones suelen tener buen pronóstico Clostridium tetani
Generalmente no se transmiten por vía aérea
2 Se suelen transmitir por contacto o ingestión
Haemophilus influenzae
Candida
Es difícil su propagación en la comunidad Virus del sarampión
Existen tratamiento y profilaxis eficaces Entamoeba histolytica
Causan infecciones graves Bacillus anthracis
Algunos se transmiten por vía aérea Mycobacterium tuberculosis
3 Pueden propagarse en la comunidad Virus de la hepatitis B
La terapia es de eficacia variable Leishmania donovani
Causan infecciones graves o muy graves Virus de la viruela
Muchos se propagan por vía aérea Virus de Marburg
4 Se propagan fácilmente en la comunidad Virus Ébola
La terapia no es muy eficaz
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Introducción
TIPO DE
MICROORGANISMOS RIESGO PROVOCADO
LABORATORIO
GRUPO DE RIESGO INDIVIDUAL → BAJO BÁSICO
1 COLECTIVO → BAJO (Enseñanza)
MEDIOS DE CONTENCIÓN
Describen los métodos que hacen segura la manipulación de los agentes infecciosos en el
laboratorio.
NIVELES DE BIOSEGURIDAD
NIVEL DE
MUESTRA CLÍNICA TIPO DE
BIOSEGURIDAD
SOSPECHOSA DE LABORATORIO
QUE DEBE
CONTENER RECOMENDADO PARA
TENER EL
MICROORGANISMOS SU ESTUDIO
LABORATORIO
Líquidos infecciosos
• Deben recogerse en recipientes herméticos y esterilizados, sangre incluida, en autoclave.
• Esta práctica es también obligatoria cuando los residuos proceden de áreas de
micobacteriología y virología.
Residuos sólidos
• Muestras clínicas, medios de cultivo, depresores, tubos de plástico, tiras API, etc.
• Deben ser esterilizados en autoclave o incinerados antes de ser desechados.
PRÁCTICAS A REALIZAR
ANÁLISIS CUANTITATIVO
Se toma una cantidad conocida de orina y se siembra en un medio de cultivo específico. Se incuba 24
horas y se cuenta el número de colonias.
ANÁLISIS CUALITATIVO
Se siembran muestras de orina en diferentes medios de cultivo, tratando de obtener colonias aisladas.
Tras su estudio, se elegirá una colonia correspondiente a una enterobacteria.
ANÁLISIS CUANTITATIVO
FUNDAMENTO
METODOLOGÍA
Se hace una única estría diametral. Seguidamente, se realizan estrías en zig-zag perpendiculares a
la primera estría, tal como se esquematiza en la siguiente imagen.
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Lunes
pH: 7,3
El azul de bromotimol permite distinguir las colonias de bacterias fermentadoras de las que no lo son.
Los microorganismos fermentadores dan lugar a colonias de color amarilllo. Los no fermentadores
dan lugar a colonias de color claro o traslúcidas. La alcalinización del medio provoca la aparición de
un color azul intenso.
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Lunes
ANÁLISIS CUALITATIVO
FUNDAMENTO
METODOLOGÍA
Dada la posible escasez de microorganismos presentes en orina, debe utilizarse un método de siembra
que pueda descargar un inóculo denso.
Con un asa de 10 µL se realizarán tres descargas (30 µL en total) en estrías paralelas en el sector 1.
Los sectores 2 al 7 se sembrarán arrastrando inóculo del sector anterior tal como se esquematiza en la
siguiente imagen.
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Lunes
1 3
6
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Lunes
AGAR CROMOGÉNICO
Alumno A Alumno B
AGAR DE MACCONKEY
Fermentador
de lactosa
Peptona 20 g/L
Lactosa 10 g/L
Sales biliares 1,5 g/L
Cloruro sódico 5 g/L
Rojo neutro 0,030 g/L
Cristal violeta 0,001 g/L
Agar 15 g/L
Agua destilada 1L
pH: 7,1
No fermentador
Fermentador
fuerte de lactosa
Las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas
Gram negativas exigentes. La lactosa es el único carbohidrato. Las bacterias fermentadoras de
lactosa formas colonias de diferentes tonos de rojo debido al viraje del indicador rojo neutro (rojo
a pH menor de 6,8) por la producción de ácidos mixtos. Las bacterias que no fermentan la lactosa
forman colonias incoloras o transparentes.
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Lunes
En el tracto respiratorio existe una abundante microbiota que se establece, normalmente, sin causar
daños al hospedador.
El objetivo de la práctica consiste en tomar una muestra del tracto respiratorio superior (faringe)
para tratar de identificar cocos Gram positivos.
METODOLOGÍA
Tomar una muestra de faringe con un hisopo estéril y la ayuda de un depresor también estéril.
Sembrar la muestra en dos placas (nº1 y nº2) de agar sangre y en una de agar salino manitol:
Placa nº 1 de Agar Sangre: se descarga el hisopo en una zona próxima al borde (zona densa) y se
siembra el resto de la placa por estrías continuas. Incubar 48 horas a
37ºC.
Placa nº 2 de Agar Sangre: con un asa estéril se toma un inóculo de la zona densa de la placa nº 1
y se siembra la placa por estrías continuas. Incubar 48 horas a 37ºC.
Placa de Agar Salino Manitol: sembrar por estrías continuas con el mismo hisopo que se ha
sembrado la placa nº 1. Incubar 48 horas a 37º C.
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Lunes
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Lunes
AGAR SANGRE
Es una combinación de agar base, generalmente agar nutritivo, y sangre. Se puede utilizar sangre de
oveja, de otros animales e incluso humana.
Es un medio rico que aporta muchos factores de crecimiento para microorganismos exigentes.
Se utiliza también para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos, por lo que se
considera un medio diferencial. Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se
determina el tipo de hemólisis que poseen: alfa, beta o gamma.
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Lunes
Peptona 5 g/L
Tripteína 12 g/L
Extracto de levadura 3 g/L
Extracto de corazón (buey) 3 g/L
Almidón soluble 1 g/L
Cloruro sódico 5 g/L
Agar 15 g/L
Agua destilada 1L
pH: 7,3
El agar base de Columbia es uno de los muchos medios de cultivo a los que se les puede adicionar
sangre para preparar agar sangre o agar chocolate.
Una vez preparado el medio de cultivo, se enfría hasta 45ºC y se le añade la sangre.
Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013) Lunes
pH: 7,0
La mayoría de los microorganismos no crecen a una concentración de cloruro sódico del 7,5%,
mientras que los estafilococos patógenos sí lo hacen.
La presencia de manitol permite detectar a los estafilococos fermentadores del mismo que producen
colonias amarillas debido al viraje de color del rojo fenol. Los estafilococos no patógenos no lo
fermentan y producen colonias de color rosa.