UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

Escuela de Ciencias Agrícolas Pecuarias y del Medio Ambiental

358010 – Microbiología Ambiental

Fase II Actividad 4 Experimentación II

Practica de microbiología

Realizado por:
Melissa Bonilla Diaz Código: 1.110549.808
Claudia Patricia Doria Capera Código: 1.013.655.299

Presentado a:
Angélica María Pérez Montaguth
Microbiología ambiental 358010A_288

Universidad Nacional Abierta y a Distancia

18 de Mayo de 2016
Ibagué- Tolima
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358010 – Microbiología Ambiental

Introducción

La realización del presente informe nos permite identificar cómo los organismos vivos requieren de ciertos
nutrientes básicos y factores para la manutención de su vida; estas necesidades varían de acuerdo al tipo de
organismo; existen técnicas de siembra al igual que de tinción que se adecuan para realizar los cultivos y
así mismo determinar los nutrientes necesarios de cada uno.

Mediante la realización de la práctica de modo presencial con asistencia al laboratorio dispuesto para ello,
partimos a realizar las actividades propuestas en la guía de laboratorio despertando interés en todo momento
por la incertidumbre de conocer con que nos vamos a encontrar.

Esta actividad se realiza para complementar los temas que estábamos tratando, en el curso de microbiología
ambiental. Por clarificar tenemos la idea principal, y el objetivo en concreto que debemos perseguir con el
ánimo de conseguir que los resultados expuestos y los procesos. Realizando cada uno de los problemas y
determinando que estuvieran correctos, gracias al acompañamiento del tutor se adquirieron los demás
conocimientos para este componente práctico.
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Practica 1

Los principios básicos, regidos por las normas de bioseguridad para la prevención y control del riesgo
biológico son los siguientes:
Bioseguridad
- La seguridad biológica o bioseguridad, es la aplicación del conocimiento, de las técnicas y de los
equipos necesarios para prevenir la exposición del personal, del área de laboratorio y del medio
ambiente a agentes potencialmente infecciosos o biopeligrosos.
Agentes Biopeligrosos
- Son todos aquellos agentes biológicos y materiales que son potencialmente peligrosos para los seres
humanos, los animales y las plantas. Entre ellos podemos citar: bacterias, virus, hongos, parásitos,
productos recombinantes, alérgenos, priones, etc.
Riesgo Microbiológico
- El Riesgo Microbiológico se encuentra presente cada vez que se realiza una actividad práctica en el
Laboratorio, donde se requiera la manipulación de cultivos de microorganismos, los cuales pueden
alcanzar concentraciones muy elevadas y pueden llegar a provocar una infección si no son
manipulados adecuadamente.

Normas de seguridad en el laboratorio de microbiología

 Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros objetos personales en el
lugar que se les indique para tal fin.
 Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe permanecer completamente
cerrada.
 Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la sesión práctica.
 Lavar las manos con agua y jabón antes de realizar las actividades programadas, antes de salir del
laboratorio y siempre después de manejar materiales que se sabe o se sospecha que son
contaminantes.
 Trabajar cerca del mesón, adoptando una buena postura y estando físicamente cómodo.
 Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela antideslizante en las áreas de
laboratorio.
 Evitar llevar en el laboratorio accesorios que podrían ser fuente de contaminación (por ejemplo
joyas).
 Recoger el cabello largo.
 No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios, aplicarse cosméticos
ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningún área del laboratorio.
 Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las actividades
indicadas en la práctica. Si usted tiene alguna duda, diríjase al tutor.
 Mantener el área de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos personales, exceptuando
aquellos equipos y materiales necesarios para la realización del trabajo práctico.
 Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.), limpios y de manera
ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la actividad. Reporte cualquier daño de los mismos
al profesor.
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 Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos para tal fin, por ejemplo:
las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri en las ollas de desecho, etc.
 Emplear la pipeta al medir líquidos. Está rigurosamente prohibido pipetear con la boca. De igual
manera las pipetas tendrán tapones de algodón para reducir la contaminación de estos dispositivos
de pipeteo.
 Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo experimentos no
autorizados.
 Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material contaminado,
heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser catalogado como menor.
 Emplear técnicas asépticas para el manejo de cultivos de microorganismos.

Practica 2
Descripción

Caja Petri o placa de Petri

Que consiste en un recipiente circular de

cristal o de plástico y con una cubierta de la
misma forma y generalmente se utiliza para el
cultivo de bacterias o microrganismos.

Laminilla

Son laminas muy finas de vidrio, con las que

se cubren las muestras que se quieren ver al
microscopio

Laminas
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Lamina de vidrio rectangular de color

transparente utilizada para almacenar
muestras y objetos con el fin de observarlas
bajo el microscopio.

Microscopio

Principal instrumento que permite observar

las imágenes u objetos no perceptibles al ojo
humano.

Pipetas

La pipeta graduada es un tubo de vidrio de

sección uniforme, con un estrechamiento en su
parte inferior. Presentan una graduación, o
escala de divisiones, en 1.0 ml, 0.1 ml o 0.01
ml dependiendo de la capacidad de la pipeta.

Practica 3
Parte B
Muestra del suelo
El suelo es una mezcla heterogénea y contiene una gran variedad de bacterias que pueden aparecer en una
muestra de suelo que es prácticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas,
incluso, desconocidas.

 Para la muestra del suelo tomamos dos granos de una muestra de tierra de un campo.
 Luego se extiende la muestra en el portaobjetos y
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 Se observa bajo el lente del microscopio.

Resultados
Se observaron pequeñas partículas de forma redonda con un fondo negro y dentro de esta pequeños orificios
blancos que sobre salían.

Muestra de agua residual de un canal de santa cruz Ibagué.

Las aguas residuales proporcionan un ambiente ideal para una gran variedad de mohos, virus y materia
orgánica e inorgánica y sobre todo bacterias.
 Con la ayuda de una pipeta tomamos una pequeña gota
 Extendemos la muestra en el porta objetos
 Teñimos con una azul metileno y situamos la laminilla y
 Se observa bajo el lente del microscopio.
Resultados:
Dentro de una muestra de agua residual pudimos observar la presencia y formación de algunas bacterias.
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Practica 4
La tinción de Gram es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios donde se manejan
pruebas microbiológicas. Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica
a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.

Tinción de Gram.
Tinción empleada en microbiología para la visualización de bacterias en muestras. También se emplea como
primer paso en la diferenciación bacteriana. El examen con microscopio óptico de preparación con tinción
de Gram se emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. Las formas comunes son cocos
(esféricas), bacilos (alargadas) y formas espiraladas.
Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos. Los microorganismos Gram positivos se
tiñen de azul, mientras que aproximadamente un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los
organismos espira lados se tiñen de rojo y se dice que son Gram negativos.
Las aplicaciones más comunes de la coloración de Gram son las siguientes:
La presencia de cocos Gram positivos agrupados sugiere estafilococos; en cadenas sugiere estreptococos;
en forma de lanceta a los diplococos
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- La presencia de diplococos Gram negativos es una característica de especies de Neisseria

- Los bacilos Gram positivos grandes sugieren especies de Bacillus o clostridium, los bacilos Gram.
Los positivos pequeños sugieren especies de Listeria o una de las corineiformes (difteroides)
- Los bacilos Gram Negativos son las bacterias más comunes halladas en los laboratorios e incluyen
a Enterobacteria, bacilos no fermentados y especies de Haemophilus.
El valor diagnóstico de esta tinción es variable; normalmente permite una buena orientación al microbiólogo
para seleccionar las técnicas de cultivo más adecuadas y también tiene valor en orientar hacia un diagnóstico
etiológico, en especial para instaurar un tratamiento inicial.
La importancia de teñir las muestras bacterianas, la tinción bacteriana tiene dos propósitos fundamentales:
 Identificar la bacteria (Gram positiva o Gran negativa).
 Con base en la identificación, indicar el tratamiento correcto (los antibióticos no funcionan por igual
para bacterias Gram positivas que Gram negativas).
Además Tincionar las bacterias es importante para poder verlas en el microscopio, dependiendo el tipo de
bacterias se tinciona de cierta manera siguiendo un protocolo.

Tinción de Azul de Lactofenol para hongos.

El azul de lacto fenol tiene tres funciones importantes a la hora
de observar hongos del tipo mohos obtenidos por aislamiento
de medios inoculados. El fenol destruye la flora acompañante.
El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas al provocar
un cambio de gradiente osmótico con relación al interior del
fúngico generando una película por así llamarlo protectora.
Es útil para realizar el examen directo de cultivos, ya que es
una técnica rápida que permite visualizar perfectamente las
estructuras fúngicas. El colorante es fuertemente ácido y se
usa para la tinción directa de micelio micólico, el cual toma un
delicado color azul claro.
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Observacion de dos hongos comunes:

Aspergillus Penicillium

La identificación de los hongos está primariamente basada en las diferencias morfológicas de las estructuras
reproductivas y la forma en que las esporas o conidios se producen en células especializadas.
Aunque las bacterias no aparecen en diferentes medio que las rodea, difieren mucho químicamente esta
diferencia química es los que permite distinguir las bacterias por Tinción, pues generalmente, el colorante
reacciona con la célula bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior.
Debido a eso la Tinción es importante para la microbiología debido a que:
- Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea, permitiendo diferenciar
varios tipos morfológicos.
- Permite el estudio de las estructuras internas de la célula bacteriana, tales como paredes celulares,
vacuolas o cuerpos celulares.
- Permite el empleo de mayores amplificaciones.

Practica 5: INDICADORES DE CONTAMINACION DE AGUAS POTABLES

Estos indicadores ponen en manifiesto la presencia de contaminación en las aguas, es decir, deficiencia de
la calidad microbiológica del agua
MICROORGANISMOS RECOMENDADOS COMO INDICADORES DE LA CALIDAD
DEL AGUA POTABLE
A continuación, se describen algunos grupos de microorganismos recomendados en guías y estándares como
indicadores de la calidad del agua potable, importantes para su valoración en términos sanitarios.

Bacterias

Coliformes totales

Pertenecen a la familia Enterobacteriacea, son bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos, no

esporulados, fermentadores de lactosa a 35 °C con producción de gas y ácido láctico de 24 a 48 h de
incubación y pueden presentar actividad de la enzima β-galactosidasa. Constituyen aproximadamente el
10% de los microorganismos intestinales de los seres humanos y otros animales.
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Se encuentran en grandes cantidades en el ambiente (fuentes de agua, vegetación y suelos), no están

asociados necesariamente con la contaminación fecal y no plantean ni representan necesariamente un riesgo
evidente para la salud. Son considerados indicadores de degradación de los cuerpos de agua. En aguas
tratadas estas bacterias funcionan como una alerta de que ocurrió contaminación, sin identificar el origen,
indican que hubo fallas en el tratamiento, en la distribución o en las propias fuentes.

Coliformes fecales o termotolerantes

Subgrupo de las bacterias del grupo coliforme, presentes en el intestino de animales de sangre caliente y
humanos. Su origen es esencialmente fecal, tienen la capacidad de fermentar la lactosa, con producción de
ácido y gas a (44,0 ± 0,2) ºC en 24 h de incubación. Incluye a Escherichia y en menor grado las especies de
los géneros de Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter; estas últimas tienen una importante función
secundaria como indicadoras de la eficacia de los procesos de tratamiento del agua para eliminar las
bacterias fecales.11 Indican la calidad del agua tratada y la posible presencia de contaminación fecal.
Escherichia coli
Es una bacteria estrictamente intestinal, indicadora específica de contaminación fecal, se caracteriza por la
producción de indol a partir de triptófano, oxidasa negativa, no hidroliza la urea y presenta actividad de las
enzimas β-galactosidasa y β-glucoronidasa. Estudios efectuados han demostrado que está presente en las
heces de humanos y animales de sangre caliente en concentraciones entre 108 y 109 Unidades formadoras
de colonias (UFC)/g de heces. E. coli es considerada un habitante normal de la microbiota intestinal de los
seres humanos, sin embargo, puede estar asociada a diversas condiciones patológicas. Las diferentes cepas
patógenas de E. coli muestran especificidad de huésped y poseen atributos de virulencia distintos. Cuando
ocurren aumentos repentinos de la concentración de patógenos, aumenta de forma considerable el riesgo o
se desencadenan brotes de enfermedades

Microorganismos heterótrofos

Las bacterias heterótrofas abundan en el agua, incluidas el agua tratada y del grifo; poseen gran capacidad
de adaptación, pueden tolerar condiciones adversas de suministro de oxígeno y permanecer más tiempo que
otros microorganismos en el agua. Es un indicador de la carga total bacteriana, que favorece el recuento de
bacterias viables a 37 °C en 48 h de incubación; sus resultados se expresan en UFC de los microorganismos
existentes. Mediante este indicador se obtiene información útil que se estudia junto con el índice de
coliformes, para controlar un determinado proceso o para verificar la calidad del tratamiento, desinfección
o descontaminación. Se ha comprobado que el conteo total de microorganismos heterótrofos es uno de los
indicadores más confiables y sensibles del tratamiento o del fracaso de la desinfección.

Clostridium perfringens

Su origen no es exclusivamente fecal, se encuentra en suelos y aguas contaminadas. Por ser una bacteria
esporulada tolera condiciones adversas tales como: elevadas temperaturas, desecación, pH extremos, falta
de nutrientes, entre otras. Cuando está presente en el agua potabilizada y desinfectada indica fallos en el
tratamiento o en la desinfección. La detección de este microorganismo en el agua inmediatamente después
de su tratamiento, constituye un indicador de alerta sobre el funcionamiento de la planta de filtración.
Debido a su elevada resistencia, las esporas pueden indicar, de forma indirecta, la presencia de quistes de
protozoarios.
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Virus

Los virus están constituidos por ácido nucleico y proteínas. El ácido nucleico es el genoma viral, ubicado
en el interior de la partícula, el cual puede ser, ácido desoxirribonucleico (ADN) o ácido ribonucleico
(ARN). Generalmente están asociados con un número pequeño de moléculas proteicas que pueden tener
actividad enzimática o cumplir alguna función estabilizadora para el plegamiento del ácido nucleico y
armado de la partícula viral. La mayoría de los virus asociados con la transmisión por el agua son los virus
entéricos, estos se multiplican en el intestino del hombre, son excretados en gran número en las heces de los
individuos infectados y pueden sobrevivir en el medio ambiente por largos periodos de tiempo. El poliovirus
es considerado un indicador viral entérico. Sin embargo, las cantidades de este virus en ambientes acuáticos
son demasiado variables como para ser considerado un buen indicador, lo que ha llevado a la búsqueda de
indicadores alternativos que sean rápida y fácilmente detectables. Estos indicadores son los fagos: colifagos
somáticos y colifagos F específicos. La propuesta está basada en que los fagos se encuentran
abundantemente tanto en agua residual como en agua contaminada, las poblaciones de colifagos son mucho
más grandes que las de los enterovirus. Los colifagos no pueden reproducirse fuera del huésped bacteriano,
se pueden aislar y contar por métodos sencillos, los resultados se obtienen más rápidamente, se relacionan
directamente con su huésped bacteriano específico (E. coli). Cuando las condiciones ambientales son
desfavorables los coliformes fecales no son buenos indicadores de contaminación fecal, ya que desaparecen
rápidamente.11 Por consiguiente, es mejor usar microorganismos más resistentes, como los colifagos que
reflejan mucho mejor los niveles de Salmonella.

CARACTERÍSTICAS MICROBIOLÓGICAS.

Las características microbiológicas del agua para consumo humano deben enmarcarse dentro de los
siguientes valores máximos aceptables desde el punto de vista microbiológico, los cuales son establecidos
teniendo en cuenta los límites de confianza del 95% y para técnicas con habilidad de detección desde 1
Unidad Formadora de Colonia (UFC) ó 1 microorganismo en 100 cm3 de muestra

 Filtración por membrana 0 UFC/100 cm3 0 UFC/100 cm3

 Enzima Sustrato < de 1 microorganismo en 100 cm3 < de 1 microorganismo en 100 cm3
 Sustrato Definido 0 microorganismo en 100 cm3 0 microorganismo en 100 cm3
 Presencia – Ausencia Ausencia en 100 cm3 Ausencia en 100 cm3

No se realizó por falta de recursos y tampoco se encontró resultados acerca de esta práctica,
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Conclusiones

 Se identificó algunos aspectos básicos de bioseguridad y reglas de trabajo generales para el

desarrollo de actividades en el laboratorio de microbiología.
 Se reconoció diferentes medios de cultivo de siembra de microorganismos para su posterior
crecimiento aplicando los conceptos básicos de nutrición.
 Se practicó diferentes técnicas de siembras para el desarrollo de los cultivos
 Se desarrollaron algunas metodologías de tinciones simples
 La realización de la práctica en el laboratorio se realizó siguiendo las indicaciones de la guía del
componente práctico y no se presentaron inconvenientes que pudieran afectar la integridad de los
estudiantes ni el resultado final de cada práctica.

Referencias

 TP- Laboratorio químico (2015) Equipo de laboratorio. Materiales e instrumentos. Portaobjetos.

Tomado de: https://www.tplaboratorioquimico.com
 TP- Laboratorio químico (2015) Equipo de laboratorio. Materiales e instrumentos. Microscopio.
Tomado de: https://www.tplaboratorioquimico.com
 Ica (2015) muestra del suelo. Clase de suelo: Eutrandept, Localidad: la Esperanza. Tomado de:
http://www.ica.csic.es
 UCV (2015) Normas de bioseguridad en el laboratorio de microbiología. [PDF] Tomado de:
http://www.ucv.ve
 William C (07/12/13) laboratorio de microbiología, tinción de Gram. [Blog] Tomado de:
http://microbiologiaulat2013.blogspot.com.co
 Medigraphic (2014) las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. [pdf] Vol. 3. N°1 pp
10-18. Tomado de: http://www.medigraphic.com
 Quistián García Hylary (25/11/14) tinción de hongos [Blog] Tomado de:
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com.co
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Anexos
Dentro de la práctica también se observaron algunas muestras de crecimiento y reproducción de células
vegetales:

Ápice foliáceo de abeto con tejido en

crecimiento

Fases de la maduración de los

espermatozoides en el testículo del ratón
(meiosis)
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Ovario de ave, con huevos en el crecimiento

y células de las yema