I

FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS

ESCUELA DE MEDICINA

TEMA

MÉTODOS DE DIAGNOSTICO Y FUNDAMENTOS DE ITU, ITS.

DOCENTE : AYALA RAVELO MARIA

CURSO : FUNDAMENTOS DE AYUDA DIAGNOSTICA.

ESTUDIANTE : IPANAQUE ALFARO, ANA MARIA.

CICLO : IV

TRUJILLO – PERU

2018
INFECCIÓN DEL TRACTO URINARIO

I. INTRODUCCION: En el presente informe he realizado un resumen para obtener una retroalimentación

de infecciones del tracto urinario (ITU) y las infecciones de los genitales (ITS), son patologías infecciosas
frecuentes, para ello recogí de fuentes confiables toda la información de los métodos de diagnóstico a
medida que me ha sido posible dado que se trata de un factor muy importante para mi formación
como estudiante del 4 to ciclo de medicina tener un buen diagnóstico del paciente y evitar nuevas
infecciones o complicaciones de las mismas y que son susceptibles a tratamiento médico o quirúrgico,
quisiera agradecer a los expertos docentes por su dedicación y enseñanza.Los métodos rápidos que
permiten una aproximación al diagnóstico ante una sospecha de infección urinaria realizaríamos un
urocultivo y un antibiograma, estas dos pruebas nos confirman la presencia de infección, el germen
responsable y los antibióticos eficaces , el análisis bacteriológico de las secreciones genitales nos hará
saber las bacterias responsables de infecciones genitales, así como enfermedades de transmisión sexual,
el examen microscópico de la flora es seguido la mayoría de las veces por el cultivo en búsqueda de los
gérmenes responsables. Estos análisis son completados por un antibiograma en ciertos casos.

ITU. Es la invasión, colonización y multiplicación de bacterias en el tracto urinario, que incluye riñones,
vejiga y uretra, puede estar asociado a malformaciones de la vía urinaria.

II. DIAGNÓSTICO BIOLOGICO

TOMA DE MUESTRA DE ORINA:

1. CHORRO MEDIO: En niños mayores, una muestra obtenida por micción, con la
higiene previa adecuada, sería suficiente; la contaminación es más probable en las
niñas. El primer chorro de orina se elimina obteniendo el segundo chorro para análisis
de laboratorio
SE PUEDE OBTENER MUESTRAS DE ORINA POR
PUNCIÓN SUPRAPÚBICA (PSP): Cualquier recuento de Gram negativos > 5.000 cocos Gram positivos. La
orina obtenida por PSP es la menos probable de ser contaminada, puede ser necesaria para
pretérminos y para niños que no puedan ser cateterizados (fimosis marcada, fusión labial).
CATETERISMO VESICAL TRANSURETRAL (CVT): 10.000-50.000 UFC/ml; tiene una sensibilidad del 95% y
una especificidad de 99% comparado con la PSP; la tasa de obtención de muestra es alta.
 Durante el procedimiento, se debe tener un recipiente estéril listo para recibir orina por micción.

UROCULTIVO:Quiere decir si el urocultivo es positivo puede representar contaminación de la muestra,

bacteriuria asintomática o ITU verdadera. Lo que constituye un recuento de colonias significante
depende del método de colección, el cuadro clínico del paciente y de la identificación del patógeno
aislado.Las presencia de más de 100000 colonias en forma repetida en un examen bacteriológico e orina
recogida por segundo chorro recolector, o la aparición de cualquier número de colonias en orina
obtenida por punción vesical, o cifras intermedias de cateterización uretral (> 10,000 ufc/ml de una
muestra obtenida), es la confirmación de infección urinaria..
- TIRAS REACTIVAS
La tirilla contiene un polielectrolito, el cual reacciona con la concentración iónica
de la orina y produce liberación de protones que cambia el PH y produce un
cambio de color.
Fundamento: El test registra la concentración iónica de la orina Esta prueba se
basa
en la liberación de protones de un poliácido en presencia de cationes en la muestra liquida. Esto causa
un viraje de color del indicador “azul de bromotimol” de azul hacia amarillo pasando por verde azulado.

LEUCOCITOS:Fundamento: Las esterasa de los leucocitos (íntegros o lisados)

desdoblan el indol a indoxilo, que reacciona con una sal de diazonio,
oxidándose, formando una coloración violeta.
La presencia de mas de 5 leucocitos por campo indica proceso inflamatorio
,infeccion o de una mala toma de muestra.

NITRITOS Fundamento: La prueba se basa en el Test. de Griess, se deben

analizar en orinas recién emitidas ,en donde el nitrito en medio ácido reacciona
con el ácido parsalínico, o con una amina aromática ,para formar una sal de
diazonio que con una benzoquinolina produce un color rosado y demuestra la
conversión de los nitratos en nitritos por la acción bacteriana ,los nitritos no se
encuentran en la orina. Cualquier coloración rosada indica que hay bacterias
formadoras de nitritos, especialmente Gram (-),pero no todas las bacterias
patógenas, reducen los nitratos a nitritos. Por esta razón, no podemos descartar
infección si la reacción de nitritos es negativa, el Proteus reduce los nitratos a
nitritos, alcaliniza mas la orina que otra bacteria y produce peroxidasa.

PROTEÍNAS FUNDAMENTO: El test se basa en el principio de error proteico de

los indicadores de pH ,cambia de color en presencia de proteínas a un PH
constante)
que en presencia de proteínas muestra un viraje de color de amarillo a verde (o
azul sensible a la albúmina),además de investigar proteinuria por el método de la tira, debe proceder a
realizar el método de

Robert. Este método se fundamenta, en que en medio ácido precipitan las proteínas, formándose
un anillo en la zona de contacto de los dos líquidos.
1.- En medio ácido precipitan las proteínas.
2.- En medio ácido y calor los cristales se disuelven y el Calcio, Fósforo y Magnesio

En un tubo de ensayo agregamos aprox. 1-2 ml de reactivo de Robert y con una

pipeta o gotero se deja caer suavemente por las paredes del tubo, aprox. 1 ml de
orina. Produciendo una zona de contacto sin que lleguen a mezclarse.
 Resultado: si la muestra presenta albúmina, se formará un anillo blanquecino en la zona de contacto,
cualquier turbidez o ”nubosidad” fuera de esa zona se considera negativa. La lectura debe realizarse
sobre fondo negro.

GLUCOSA FUNDAMENTO: La detección de la glucosa oxidasa, cataliza la formación de ácido glucónico y

peróxido de hidrógeno a partir de la oxidación de la glucosa. Una segunda enzima, la peroxidasa actúa
sobre el peróxido, oxidando al cromógeno presente en la tira produciendo un rango de color que puede ir
del verde al marrón.

Método de Clinitest : El Hidróxido de sodio proporciona el medio alcalino a la reacción. El calor

requerido se obtiene al reaccionar el hidróxido de sodio, con el ácido cítrico y el agua. El carbonato de
sodio y el Ácido Cítrico ayudan a disolver la tableta estas sustancias reducen las sales de cobre y el
fundamento de ambas pruebas es el mismo, elevadas de proteínas, incrementan la formación de
espuma, dificultando la comparación visual.

CUERPOS CETÓNICOSFUNDAMENTO: los cuerpos cetónicos reaccionan con el

nitroprusiato de sodio y la glicina, produciendo una coloración morada).
Normalmente estos no deben estar presentes en la orina. Estos cuerpos
cetónicos son productos del metabolismo de los ácidos grasos y se en

encuentran en procesos acidósicos, por lo tanto deben cursar con orinas ácidas

M. Gerhardt:Fundamento: El ácido acetoacético en presencia del

cloruro férrico al 10% da lugar a un color carmelita oscuro.
Resultados: En los casos positivos, aparece en la orina NO
calentada, una coloración carmelita oscuro.

UROBILINÓGENO FUNDAMENTO: Esta prueba se fundamenta en la reacción de Ehrlich, en donde el

urobilinógeno en presencia de p-dimetilaminobenzaldehído, en un
medio fuertemente ácido produce un color marrón-anaranjado.
El Urobilinógeno esta normal que se encuentre en bajas
cantidades en la orina (< 1 mg/dl). Puede estar aumentado en
enfermedades hepáticas y hemolíticas. Su ausencia en orina
puede verse en cuadros cenestésicos. .
BILIRRUBINAFUNDAMENTO: El test se basa en el acoplamiento de la
bilirrubina con una sal diazonio en medio ácido para formar una
coloración que va a depender de la sal diazonio utilizada. al rojo-violeta
según la concentración de bilirrubina. .
La prueba es considerada específica para la bilirrubina en orina.no
mide biliverdina, ni bilicianina (otros pigmentos biliares).

.SEDIMENTO URINARIO:La última parte del análisis rutinario de orina es

el examen microscópico. El propósito es identificar elementos formados o insolubles en la orina, y que pueden
provenir de la sangre, el riñón, las vías urinarias más bajas y de la contaminación externa. Otros Pruebas de
CATALASA
Si el microorganismo tiene el enzima catalasa y se pone en contacto con H2O2 => se descompone en H2O +
O2; aplicación => diferenciación de Streptococcus(-) de Staphylococcus (+) y Micrococcus (+);
Resultados => catalasa+ forma burbujas de O2 inmediatamente; catalasa- no aparecen burbujas; se podrán
observar falsos positivos si se utilizaran medios de cultivo agar sangreo otros que lleven hematíes (los hematíes
contiene catalasa).

PRUEBAS DE NITRATO REDUCTASA O NITRATASA

resultados => hay 2 posibilidades de que sean Nitratasa+ (Haemophilus y
Branhamella Catarallis): cuando aparece color rojo o rosado fuerte al
añadir el reactivo A y B que indica la reducción de nitratos a nitritos; al
añadir polvo de zink no se desarrolla color indica formación de otros
productos nitrogenados; Nitratasa- => cuando se forma color rojo o rosado
al añadir polvo de zinc en menos de 30 segundos.

PRUEBA DE COAGULASA .Observar la coagulacion del plasma en forma de grumos o precipitación al ponerse en
contacto el microorganismo con el reactivo (si se utiliza el plasma en la
prueba); la coagulasa es un enzima producido por microorganismos capaz de
coagular en plasma; aplicación => diferenciar Staphylococcus aureus (coco
Gram+, catalasa+, beta hemolítico + y coagulasa+) de otro Staphylococcus;
esta prueba solo se hace si el germen es coco Gram+, catalasa+, beta
hemolítico +; técnica => (usando el kit comercial /prueba de látex) seguir la
instrucción de la casa comercial que hacen el
reactivo; resultados => coagulasa+ se observa en forma de grumos (si se
utiliza un plasma como reactivo => se observara la formación de un hilo de
fibrina en la reacción) y en coagulasa- no se forma grumos.

PRUEBA DE TRIPTÓFANO DESAMINASA (TDA) - se basa en la capacidad que tienen algunas bacterias de
desaminar el triptófano por la acción de TDA, produciendo => acido indol pirúvico que reacciona con citrato
férrico amoniacal y el cloruro férrico que lleva el medio produciendo un color marrón (determina la presencia de
la enzima TDA); resultado => el color marrón/café indica la presencia de TDA+y sera negativo si no hay cambio
de color; los géneros que tienen TDA+ => Proteus, Providencia y Morganella.

OTROS ESTUDIOS DE LABORATORIOHemograma, PCR (>30 μg/ml) y hemocultivo deben ser realizados en
lactantes y niños de corta edad con fiebre, si existe afectación del estado general y para establecer un
diagnóstico de localización fiable e iniciar una pauta de tratamiento más segura.

El antibiograma vemos la ensibilidad a los antibióticos del germen causante y va a determinar el tratamiento
posterior.

LAS ITS MÁS FRECUENTES

Diagnóstico de las ITS

GONORREA Es causada por la bacteria Gramnegativa

Pruebas oxidasa - esta denominación se le da de forma genérica al enzima
citocromo oxidasa que participa en la transferencia de electrones en la cadena
respiratoria hacia el oxigeno .
Resultados => oxidasa+ aparece un color purpureo en el papel, si se
desarrolla el color a los 10-60" se considera oxidasa retardado positivo,
después de 60" es negativo; oxidasa- no se produce color.
TSI (Triple Sugar Iron) - identificación de Yersinia enterocolitica como sacarolítica
(también Proteus, Lactobacillus y Clostridium), ya que el medio lleva el 3er hidrato de carbono (sacarosa al 1%);
los fundamentos y la interpretación de los resultados son los mismos que en el método anterior, pero es
imposible saber si el azucar utilizado es uno u otro o ambos.

Agar sulfuro-indol-motilidad/ ASIM o motility-indol-agar (MIA) - tal como indica su nombre, sirve
para determinar la motilidad de los microorganismos, la produccion de indol y la formacion de acido sulfhidrico;
la forma de realizarla es la siguiente => se siembra en picadura y se incuba a 37ºC durante 18-24 horas; la
motilidad se vera por la zona del inoculo con un zig-zag (en la picadura); la produccion de indol se vera con un
cambio de color a violeta purpura (el medio es de color violeta clarito); la produccion de SH2 se vera por un
cambio a negro.

Resultado => en indol+, aparece un anillo rojo en la superficie del

medio (E.coli); en indol-, no hay cambio de color (Klebsiella
pneumoniae)

Prueba de rojo de Metilo => muchas enterobacteriaceas con

importancia clínica (E.coli, Proteus mirabilis, Yersinia, Salmonella
typhimurium, Citrobacter freundii, Sighella, Vibrio) son anaerobios
facultativos, que para tener energía para sus reacciones metabólicas,
utilizan la fermentación acido-mixta de los hidratos de carbono
produciéndose => acido succínico, acido acético, alcohol etílico (ácidos
mixtos); en RM positivo, aparecen un color rojo fuerte en la superficie
en RM negativo, no hay cambio en la superficie del medio.
Resultados => RM+ superficie del medio rojo fuerte y RM- => color
. Diagnóstico de laboratorio de la infección por VIH – en España fundamentalmente serológico, por la
importancia y las implicaciones que conlleva; se realiza mediante técnicas de ELISA en primera instancia
(técnica de cribado), aplicando a los positivos, métodos de confirmación => Western Blot (WB),
inmunofluorescencia (IFI) o radioinmuno-precipitacion (RIPA).

**) El Western Blot es más utilizado y permite diferenciar los Acs frente a las distintas proteínas del
virus; tiene distintos criterios para la interpretación de los resultados (OMS, CDC, Cruz Roja) y los
resultados se clasifiquen en:

-Positivos => lo más aceptado es que haya bandas de envoltura (g41, gp120 y gp160) y además bandas
del core (p24, p31 y p66) o de la polimerasa o de ambos.

-Indeterminados => se detecta la presencia de alguna banda frente a alguna proteína del virus (solo
algunas proteínas del core en pacientes con lupus y factor reumatoide).

-Negativo => ausencia de banda o que no se corresponde a ninguna del virus (a estas personas se hace
un seguimiento durante 6 meses, para descartar que no sean falsos negativos).

La técnica de WB consiste básicamente en la incubación de unas tiras de nitrocelulosa en los que sean
transferido las proteínas de los virus, básicamente las estructuras con el suero del problema durante un
tiempo que oscila 2-4 horas hasta los 18 horas; tras cual se revela la presencia de Acs frente a diferente
proteínas del virus mediante diferentes técnicas inmuno-enzimáticas dependiendo del fabricante; el
resultado será la aparición de bandas coloreadas de mayor o menor intensidad en el lugar de la tira
donde están situadas las proteínas de VIH contra las cuales existen Acs en el suero del problema; la
lectura puede hacerse de manera manual, comparando las bandas con un control (+) o de manera
automatizada por densitometría; recordar en valores absolutos, la cifra de CD4 900-1500 linfocitos/m3
de sangre (en valores relativos 35-45%); las de CD8 600-900 linfocitos/m3 de sangre; cuando la cifra de
CD4 disminuye por debajo de las 200-400 linfocitos/m3 de sangre, será indicativo de SIDA.

*) Los métodos de cribado (ELISA) son más sensibles y más específicos, siendo lo más novedoso los de 3ª
generación con capacidad de detectar IgG e IgM, acortando el periodo de ventana.
*) También existen métodos rápidos, aplicables en situación de urgencia como la aglutinación con
partículas de látex o los que utilicen Ags fijados a soportes solidos o membranas (se llama Dot-Blot).

*) Las técnicas de centros especializados => cultivo y PCR; la PCR es una técnica con mucho futuro que
presenta una enorme sensibilidad y especificidad, pero no están al alcance de la mayor parte de los
laboratorios; una importancia aplicación de estas técnicas es el diagnostico de hijos y madres portadoras
del VIH.

*) Marcadores de monitorización o seguimiento de la enfermedad (detección del Ag p24); en fases

tardías, se puede observar el declinar de los Acs anti p24 que se pueden utilizar con el mismo fin.

*) De todos modos, el que más se utiliza para un diagnóstico de SIDA es el recuento celular de los
linfocitos CD4 o T4 (o el cociente respecto a los T8).

MÉTODOS DIAGNÓSTICOS EN VIROLOGÍA CLÍNICA

Objetivo de laboratorio - proporcionar el diagnóstico etiológico y orientar correctamente el tratamiento

en el menor tiempo posible; de manera simultanea se intenta practicar 2 tipos de diagnostico =>
- Dº directo (visualizar o aislar el germen mediante el cultivo e identificarlo => en virología clínica no es
posible, por las características físicas y biológicas del virus, porque se ha de hacer mediante
la detección de sus componentes, p.ej. Ags o ácidos nucleicos).
- Dº indirecto (la identificación de los componentes de la respuesta inmune especifica/ Acs generados).

Metodos de diagnostico directos:

a) Examen directo de la muestra (macroscópica /a simple vista) => aspecto purulenta (en
una infección viral nunca hay pus), presencia de sangre, moco, etc.

b) Microscópia => con la Microscópia óptica solo se puede identificar los cambios celulares (efecto
citopático) sufrido por las celulas infectadas y con la Microscópia electrónica se puede visualizar el virus
(en laboratorios de experimentación).

c) Cultivo => los virus se multiplican exclusivamente en el interior de las celulas vivas, por ello
debemos preparar previamente un soporte celular que permita su crecimiento in vitro mediante
siguientes técnicas:

- cultivo de órganos => las secciones de algunos órganos pueden ser viables varias semanas y nos
permiten cuidadosamente aislar por ej. virus sincitial respiratorio (VRS) mediante secciones de tejido
respiratorio.

- cultivo de tejidos => fragmentos de tejidos en suspensión (cultivar adenovirus en un tejido adenoideo)
- cultivos celulares => celulas aisladas obtenidas por disociación mecánica y con enzimas proteolíticas a
partir de tejidos; las celulas disociadas y separadas se colocan en un frasco de cristal o de plástico; las
celulas se adhieren a las paredes del frasco y se cubren con medios nutritivos para mantenerlas
viables; en condiciones optimas, las celulas se multiplican hasta que cubran la pared formando una capa
continua de crecimiento sobre las que se podrán replicar los virus del problema; tipos de cultivos
celulares:

*) cultivos primarios => es el primer pase in vitro, tomados directamente de un organismo vivo; las
celulas se siembran en un frasco con medio de crecimiento, conservan el numero de cromosomas,
tienen un periodo de vida corto y permiten el crecimiento de gran variedad de virus (p.ej. celulas del
riñon de conejo y mono, embrión de pollo).

*) lineas diploides => son celulas de un solo tipo (somáticas) que se pueden cultivar durante un tiempo
limitado, conservan el numero de cromosomas (46) y con ventaja de que se mantiene durante mas
tiempo que cultivo primario.

*) lineas celulares continuas => se cultivan in vitro indefinidamente y tiene un cariotipo heteroploide
(numero menor que las celulas somáticas); se originan de tejido maligno o por mutación de
una célula diploide; el cultivo se multiplican de forma indefinida y suelen presentar aberraciones en el
numero de cromosomas; estas celulas se pueden mantener a -70ºC o -90ºC indefinidamente (p.ej. lineas
celulares Hep-2 y Vero).

*) Shell-vial => es una técnica de cultivo celular que se ha desarrollado en los últimos años y que permite
obtener el crecimiento de numerosos virus y ciertas bacterias en un corto periodo de tiempo (24-48
horas); sobre un vial se coloca una mono capa de celulas con 1ml de medio de crecimiento, y sobre ello
se coloca 0,2 ml de la muestra problema; el método se basa en la centrifugación (suave) de la muestra
sobre la mono capa, y tras un corto periodo de incubación se pone de manifiesto la expresión de los Ags
virales en la mono capa mediante tinción inmunológica; la ventaja => la rapidez de obtención de
resultados en 24-48 horas, detectamos los Ags a las pocas horas de iniciarse la infección; tiene una
sensibilidad superior al cultivo celular, porque inoculamos el mismo volumen de muestra en
un área mas pequeña y mas fácil la observación al microscopio de fluorescencia.

Identificación del crecimiento en el cultivo celular - las mas frecuentes y disponibles en el laboratorio:

1). Efecto citopático - los virus al multiplicarse provocan cambios en la célula donde se replican que se
manifiesta por una modificación en la morfología celular que se pueden observar (p.ej. inclusiones
dentro de las celulas, hinchazón del citoplasma, formación de celulas gigantes multi-nucleadas) en
la célula sin teñir o teñidas (se ve mas detalladas); cada virus presenta un tipo de
efecto citopático característico que puede ser identificado en menos de 1 semana (p.ej. enterovirus,
herpesvirus, adenovirus o poxvirus tienen como efecto citopático la destrucción o lisis celular en 24-48
horas; la fusión celular/ formación de sincition son característico de herpes virus, CMV, virus
herpes zóster, etc.)

2). Formación de cuerpos de inclusión - son cambios histológicos que se producen en las celulas por los
componentes virales o por variaciones en las estructuras celulares; pueden localizarse en el núcleo, en el
citoplasma o en ambos y se clasifican según su tinción en eosinófilos o basófilos; cada virus produce
unos cuerpos de inclusiones característicos.
3). Hem-adsorción - es la capacidad que adquieren las celulas infectadas por un virus para adherir a su
superficie los hematíes de diversas especies (p.ej.aves, carnero).

4). Hem-aglutinación - la capacidad que adquieren las celulas infectadas por el virus de aglutinar
diversos tipos de hematíes, por la formación en su membrana de este tipo de proteínas, las
hemaglutininas.

5). Detección mediante metodos inmuno-enzimáticos o por inmunofluorescencia, de los Ags virales
mediante Acs específicos para los cuerpos de inclusión celular.

Las muestras para el aislamiento de virus se deben recoger lo antes posible, no después de los 3-7
primeros días del inicio de la enfermedad; se pueden conservar a 4ºC durante 24 horas y si no, se deben
congelar a -70ºC porque muchos virus son lábiles a -20ºC; las muestras que se utilizan con mayor
frecuencia son secreciones nasales, frotis faríngeo, exudado conjuntival, líquidos vesiculares, raspados
de piel, heces, orina, LCR, etc.

d) Detección de los componentes estructurales virales - las técnicas mas usadas que permiten detectar
Ags en suero y líquidos orgánicos (cuando existe una alta concentración viral, sera fácil detectarlos) son:

- Aglutinación en látex => a las moleculas de látex se les une varias moléculas de Acs conocidos y cuando
se pone en contacto con una solución que contiene el Ag (la muestra problema) se origina
una aglutinación que puede visualizarse; es una técnica sencilla, sensible, re-producible y barata. Su
sensibilidad dependerá de la pureza del Ac utilizado.

- Contra-inmunoelectroforesis => esta basada en el principio de que los Ags virales (o bacterianos en su
caso) suelen tener carga (-) y los Acs (+), en medio alcalino; con este fundamento se colocan las
soluciones de Acs conocidos y del Ag problema en unas cavidades realizadas en un gel de agarosa de tal
manera que puedan difundir libremente; se colocan unas mechas en los extremos de la capa de agarosa,
que conectan con unas cubetas que contienen un buffer con una composicion diferente dependiendo
del sistema Ag-Ac; cuando se aplica una corriente eléctrica, las moléculas de Ags con carga (-) migran
hacia el ánodo que esta en el extremo opuesto de la placa; los Acs son arrastrados por el buffer
levemente alcalino y, en el punto en que ambas lineas se encuentran, se forma una banda
de precipitación visible; es una técnica de alta sensibilidad pero laboriosa, que precisa una
alta concentración de Ag y Ac.

- Enzimoinmunoensayo => se basa en la detección de Ags mediante el empleo de un Ac unido a una

enzima, que mantiene la capacidad de canalizar la reacción Ag-Ac; el enzima utilizado puede ser
peoxidasa de rabano, Beta-galactosidasa o fosfatasa alcalina; la presencia del inmuno-complejo es
detectada por una reacción coloreada que se produce al añadir el sustrato; el empleo de enzimas tiene
una serie de ventajas:

*) el enzima se une al Ac pero deja libre los lugares de unión al Ag

*) el enzima no se modifica con la reacción Ag-Ac y queda unido al inmuno-complejo junto con el
sustrato amplificando la reacción y aumentando la posibilidad de detección

*) los conjugados con enzimas son muy estables

 *) la lectura de la reacción se realiza en un espectrofotómetro y la cantidad de sustrato liberado es
directamente proporcional a la cantidad de Ag fijado en la reacción

*) la lectura también puede hacerse cualitativamente de forma manual, "de visu".

La reacción tiene lugar en 2 fases => en la 1ª- en unos pocillos sobre los que se ha fijado un Ac
especifico; al agregarle la muestra que puede contener los Ags, se unen formando el complejo Ag-Ac;
posteriormente se hace un lavado para eliminar el resto de Ags no unidos a los Acs de la placa y
otras partículas que pudieran interferir, en la 2ª- se agrega un Ac marcado con un enzima que se une a
los sitios de unión del Ag y al añadirse un sustrato, da lugar a una reacción coloreada, que procederemos
a medir en un espectrofotómetro; es una técnica que necesita varias horas para su realización.

- Radioinmunoanalisis => tiene el mismo fundamento que el ELISA, pero en vez de unir un enzima al Ac,
se le une un radioisótopo, y lo que se mide en ultima instancia es
la radiactividad que estará en proporción directa a la cantidad de Ag que había en la muestra problema;
es una técnica con la misma sensibilidad que el ELISA, pero es mas costosa y se necesita trabajar con
material radioactivo, lo que plantea problemas en cuanto al personal y las instalaciones; esta técnica se
utilizo por primera vez para detectar el Ag de superficie del virus de la hepatitis B.

Chlamydia trachomatis Chlamydia trachomatis es una bacteria gramnegativa intracelular, su ciclo de

multiplicación es único entre las bacterias, lo que determina que constituyan su propio orden Chlamydiales.

Diagnóstico Definitivo

1) Identificación, aislamiento y confirmación de la bacteria en secreción cervical, rectal o uretral por medio
de técnicas de laboratorio.

2) Identificación de C. trachomatis según método a escoger:

A) Por medio de inmunofluorescencia directa (IFD). *

B) Detección de antígeno por medio del inmunoensayo enzimático (EIA).

C) Detección por medio de probos de ácidos nucleicos.

TRICOMONOSIS VAGINAL La tricomonosis es causada por Trichomonas vaginalis, protozoario flagelado, que
produce vaginitis en la mujer y uretritis en el hombre donde puede presenta un curso asintomático. Durante
el embarazo puede asociarse con ruptura prematura de membranas y/o parto pretérmino, entre otros.

Diagnóstico Se establece por el cuadro clínico y los hallazgos a la exploración física. Si se cuenta con el
recurso de laboratorio, puede realizarse una toma directa de la secreción en solución salina T. vaginalis en un
examen directo al microscopio, la presencia del protozoario da el diagnóstico.

TRICOMONOSIS . El agente etiológico es la Trichomonas vaginalis.

Método de laboratorio: examen directo en solución salina, presencia del protozoario. Complicaciones:
ruptura prematura de membranas y /o parto prematuro

VAGINOSIS BACTERIANA Esta es la causa más común de secreción anormal en la mujer con vida sexual activa
y que organismos relacionados a la vaginosis bacteriana, especialmente la G. vaginalis. Se ha encontrado en
las parejas hombres de mujeres con la ITS. Es el resultado del reemplazo del pH normal de la vagina, que
producen los lactobacillus spp. (bacilos de Döderlein) en la vagina por una alta concentración de bacterias
anaeróbicas, como G. vaginalis y Mycoplasma hominis, Mobilunco sp. y anaerobios y otras. La causa de la
alteración microbiana es el desarrollo de bacterias catalasa negativas Gardnerella vaginalis, Mobiluncos y
otros anaerobios como Bacteroides bovius, B. intermedius y Peptoestreptococcus,.

Diagnóstico Se realiza por el cuadro clínico y los hallazgos a la exploración física, secreción vaginal grisácea,
homogénea, adherida a las paredes vaginales y maloliente. Con el recurso de laboratorio, puede realizarse
una toma directa de la secreción y aplicar los criterios de Amsel: presencia de secreción abundante blanca-
grisácea, pH vaginal >4.5, prueba positiva con KOH al 10% o el “olor a pescado” (prueba de olor) y presencia
de células claves al microscopio

VAGINOSIS BACTERIANA Es la causa más común de secreción anormal en la mujer por bacterias anaeróbicas,
como Gardnerella vaginalis, Mycoplasma hominis y otras.

Síntomas: secreción vaginal abundante, mal olor (olor a pescado), sin prurito o irritación. Examen físico:
secreción vaginal blanquecina, no viscosa, uniformemente adherida a las paredes vaginales, a menudo visible
en los labios.

Diagnóstico Se realiza por el cuadro clínico y los hallazgos a la exploración física, caracterizados por la
presencia de la secreción antes referida. Si cuenta con el recurso de laboratorio, la visualización de levaduras
o pseudohifas, por medio de la prueba con KOH al 10%. (ver laboratorio)

CANDIDOSIS VAGINAL . Causada por la levadura dimórfica Candida albicans en la mayoría de los casos.

SÍFILIS Es una infección producida por la bacteria Treponema pallidum, El Treponema pallidum penetra en el
organismo a través de lesiones de contigüidad de la piel o mucosas, que al implantarse se multiplica
localmente y pasa a los ganglios linfáticos, de ahí se distribuye a todos los tejidos del cuerpo.

TPHA (hemaglutinación) para el diagnóstico de la infección por T. pallidum ,

"No reactivo" (negativo) cuando se observa un botón compacto en el centro del pocillo, sin agujero o con un
mínimo agujero central. Si se observa botón de células no aglutinadas con un agujero central pequeño, debe
repetirse el ensayo, y si el resultado es idéntico, considerar el resultado como “No reactivo”.

“Reactivo” (positivo) cuando se observa aglutinación en todo el pocillo y también cuando se observa un
botón de células sin aglutinar formando un círculo, y células aglutinadas por fuera y por dentro del círculo. En
el pocillo control no debe de haber aglutinación. Si se observa aglutinación en el pocillo “prueba”, pero
también aglutina el pocillo “control

RPR (Rapid Plasma Reagin) para diagnóstico de infección por T. pallidum, Pueden aparecer falsos positivos en
muestras de suero o plasma de pacientes usuarios de drogas por vía parenteral, infectados por el VIH, con
mononucleosis infecciosa, con enfermedades autoinmunes como el lupus eritematoso, lepra, neumonía
vírica, hepatitis, embarazo, o que recientemente hayan recibido inmunizaciones víricas. Pueden dar
reacciones falsamente negativas en sífilis latente o tardía, así como estadios muy precoces de la infección.
Los pacientes Infectados por el VIH pueden presentar títulos bajos o resultados falsamente negativos.
Igualmente pueden presentar retraso en el descenso del título después de un tratamiento correcto y sin
existir fracaso terapéutico. Los pacientes infectados por el VIH se deben evaluar en conjunto, tanto con
pruebas no treponémicas como treponémicas. Cuando se emplea la técnica de RPR como prueba inicial de
cribado, el resultado positivo debe confirmarse con una prueba treponémica.

LINFOGRANULOMA VENÉREO (LGV) La Chlamydia trachomatis tipo L1 , L2 , L3

El diagnóstico se realiza mediante estudio histopatológico de la lesión, en donde se visualizan los cuerpos de
Donovan (presencia del microorganismo intracelular en las células del tejido infectado).

Chlamydia trachomatis mediante inmunoensayo

Clearview Chlamydia MF, una técnica rápida de inmunoensayo para la detección cualitativa directa de
antígenos de Chlamydia trachomatis.

. FUNDAMENTO para poner la muestra. La tira absorbente contiene microesferas de color marcadas con
anticuerpos monoclonales frente al lipopolisacárido género-específico de Chlamydia. El extracto moviliza las
microesferas que se desplazan hacia la cinta de prueba fijada en el soporte. Dicha cinta contiene una zona de
anticuerpos monoclonales anti-Chlamydia inmovilizados en la ventana de resultados. En el caso de que el
extracto contenga antígenos de Chlamydia, éstos se mezclarán con los anticuerpos unidos a las microesferas
de color y los anticuerpos inmovilizados en la ventana de resultados. Se observará la aparición de una línea
bajo la ventana de resultados que indica la presencia de antígenos de Chlamydia en el extracto. Si no hay
antígenos presentes, la ventana de resultados permanecerá vacía.

Cultivo de Neisseria gonorrhoeae

FUNDAMENTO El cultivo del gonococo se puede realizar:

- En medios no selectivos y no inhibitorios, como el agar chocolate enriquecido con un suplemento de

vitaminas, aminoácidos y otros factores nutritivos. -En medios selectivos que contienen antimicrobianos
como el agar Thayer-Martin, Martin-Lewis o medio New York City. El agar Thayer-Martin modificado permite
el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae a partir de muestras faríngeas, exudados genitales, y otras muestras
que contengan microbiota mixta. Este medio está compue

El cultivo permite aislar el microorganismo para la realización de pruebas adicionales. Sus inconvenientes son
la necesidad de un transporte adecuado para mantener la viabilidad del microorganismo y que requiere un
mínimo de 24-72 horas para obtener el crecimiento del gonococo.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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edición; Madrid, España. Enero de 1997.
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Bianchini H., Novillo A., Sordelli D. Asociación Argentina de Microbiología, Provincia de Entre Ríos; Facultad
de Bioquímica y Ciencias biológicas. Universidad Nacional del litoral. Curso de microbiología clínica a
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