LA CROMATOGRAFIA

La Cromatografía es una técnica de separación en la que los componentes de una

muestra se separan en dos fases: una fase estacionaria de gran área superficial, y
una fase móvil. El objetivo de la fase estacionaria es retrasar el paso de los
componentes de la muestra. Cuando los componentes pasan a través del sistema a
diferentes velocidades, estos se separan en determinados tiempos. Cada
componente tiene un tiempo de paso característico a través del sistema, llamado
tiempo de retención. La separación cromatográfica se logra cuando el tiempo de
retención del analito difiere del resto de componentes de la muestra.

La cromatografía puede ser preparativa y analítica.

 La cromatografía preparativa se refiere a la separación de los componentes

de una mezcla para su posterior procesamiento, y se puede considerar un
método de purificación.
 En la cromatografía analítica generalmente se hace con una pequeña
muestra permitiendo para cuantificar la proporción relativa de los
componentes en la mezcla.
La cromatografía es una de los principales métodos analíticos y permite la
separación y cuantificación de sustancias muy similar en estructura y propiedades
químicas. Además en el papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para
realizar unos análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica muy potente no
requiere de ningún tipo de equipamiento.

La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel filtro. La
muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la solución y
evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace
ascender por capilaridad. Luego se coloca la tira de papel verticalmente y con la
muestra de abajo dentro de un recipiente que contiene fase móvil en el fondo.

Después de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al

extremo se retira el papel y se deja secar. Si el disolvente elegido fue adecuado y
las sustancias tienen color propio se verán las manchas de distinto color separadas.
Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de
revelado.
 Hay varios factores de los cuales depende una cromolitografíe eficaz: la elección
del disolvente y la del papel de filtro.

Un ejemplo podría ser que utilices un pedazo de papel y le hagas puntos de colores
con plumones permanentes y le pongas un lapiz del lado donde no están los puntos
de colores (esto te servirá como soporte), después en un vaso pon alcohol y coloca
la tira de papel con el lapiz horizontalmente en la parte de arriba para que el papel
no caiga y tienes que esperar para que el alcohol haga efecto en el papel, lo que
sucederá es que a los puntos de colores se les harán unas pequeñas líneas hacia
arriba.

2. CROMATOGRAFIA DE LA ESPINACA

Métodos de separación de pigmentos:

a) Separación de pigmentos vegetales por separación simple.

b) Separación de pigmentos vegetales por cromatografía sobre papel.

Elementos:

Mortero - Embudo cribado -Kitasato - Papel de filtro - Tubos de ensayo - Alcohol

- Tetracloruro de carbono - Hojas de espinaca o Acelga - Bomba de vacío.

Técnica:

1. Lavar las hojas de espinacas o acelga, retirar los nervios y ponerlas en un mortero,
junto con el solvente extractante (acetona).

Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color
verde intenso. Fotografía 1.

2. Filtrar con un embudo, papel de filtro y bomba de vacío. Fotografía 2

 Fotografía 1

3. Pasar el filtrado en dos tubos de ensayo (a y b) en partes iguales. El tubo a se lo

dejará para trabajar con el espectroscopio en un lugar sombrío.

4. Al tubo b, se le agregará tetracloruro de carbono y luego se lo agitará por unos

segundos. Se lo dejará reposar en una gradilla por 10 minutos. (Fotografía 7)

5. Los pigmentos se irán separando según su adsorción o afinidad con los solventes.
(Fotografía 8)

Elementos:

Mortero- Embudo cribado -Kitasato - Papel de filtro - Tubos de ensayo - Acetona -

Éter de Petróleo - Hojas de espinaca o Acelga - Cloruro de Calcio- Bomba de vacío
- Capilar o Pipeta Pasteur - Vaso de precipitado.

Objetivo:

Extraer los pigmentos fotosintéticos y separarlos mediante una técnica compleja de

cromatografía en papel.

Técnica:

1. Lavar las hojas de espinacas o acelga, retirar los nervios y ponerlas en un mortero,
junto con el solvente extractante (acetona).

Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color
verde intenso. Fotografía 1.

2. Filtrar con un embudo, papel de filtro y bomba de vacío. Fotografía 2

 3. Pasar el filtrado en un tubo de ensayo, colocar 3 a 5 perlas de Cloruro de calcio.
Dejar reposar de 5 a 10 min.

4. Tomar con un capilar o pipeta el sobrenadante del tubo anterior. Sobre un

rectángulo de papel de filtro de unos 15 centímetros de ancho por 10 centímetros
de alto doblado en V (para que se mantenga en pie) se traza con lápiz, una línea de
siembra a 3 cm de la base. Sobre la línea se realizan de 5 a 8 pasadas con el capilar
cargado de pigmento dejando entre cada pasada que se evapore acetona.

5. Se coloca el papel ya sembrado en un vaso de precipitado que contendrá el

solvente separador (éter de petróleo), dejándolo unos 5 a 10 min. Fotografía3

6. Los pigmentos se irán separando según su adsorción o afinidad con el

solvente. Fotografía 4

Fotografía 3
Fotografía 4

Al observar el papel donde hemos

hecho la cromatografía, vemos
cuatro bandas o zonas (figura A),
que corresponden a los distintos
pigmentos fotosintéticos presentes
en las hojas de espinaca. Según su
grado de solubilidad con el éter de
petróleo se reconocen estas bandas y
en este orden:

Este es el aspecto final de la cromatografía obtenida con las hojas de espinacas o acelga
 CONCLUSION

La cromatografia es una tecnica de separacion de sustancias que se basa en las

diferentes velocidades con que son sarrastradas cada una de ellas a traves de un
medio poroso por un disolvente en movimiento. En nuestro caso, a medida que el
disolvente sube por el papel de filtro, arrastra consigo los pigmentos que contiene
la hoja de espinaca.Como no todos son arrastrados con la misma velocidad, al cabo
de unas hras se forman unas franjas de colores que corresponden a los distintos
componentes.

3. CROMATOGRAFIA DE LA TINTA DEL PLUMON