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ACTIVIDAD.
RECONOCIMIENTO Y USO DE MATERIAL DE LABORATORIO
OBJETIVO.
Que el alumno reconozca y aprenda a utilizar material para la medición de volumen en el laboratorio.
INTRODUCCION
Existen instrumentos de medición de volumen en los laboratorios de trabajo, los cuales deben
seleccionarse de manera adecuada para obtener resultados confiables en los ensayos que se realizan.
Estos instrumentos son utilizados para la transferencia de muestras, patrones y soluciones estándar
debido a que son materiales volumétricos con cierto grado de exactitud. También existen otros
instrumentos graduados que son utilizados para mediciones no tan exactas.
El manejo de líquidos es una aplicación central en los laboratorios de investigación biológica, química,
biotecnológica y farmacéutica. Al hablar de manejo de líquidos nos referimos a la transferencia de
líquidos de un recipiente a otro.
La habilidad de medir de manera exacta, reproducible y transferir volúmenes pequeños de líquidos son
críticos para obtener resultados útiles.
El uso de cada instrumento depende del ajuste de fábrica que se haya realizado. Existen dos tipos de
marcas que distinguen los ajustes.
“in”: la cantidad de líquido contenida correspondiente al volumen impreso sobre el instrumento, por ej.
Matraces aforados y probetas graduadas.
“ex”: la cantidad de líquido vertida correspondiente al volumen impreso sobre el instrumento, por ej.
Pipetas o buretas.
En las prácticas relacionadas con biotecnología los volúmenes de las soluciones que se necesitan medir
son del orden de microlitros (µL). Para tomar estas cantidades con exactitud y reproducibilidad se
emplean micropipetas, ya sean de volumen fijo o variable. Los errores de medida que se pueden
cometer dependen principalmente del usuario y no de la micropipeta en sí, a menos que esta no esté
bien calibrada.
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Cada micropipeta sirve para medir un determinado volumen. Las de volumen fijo miden solamente un
volumen determinado. En las de volumen variable, se puede seleccionar un volumen dentro de un
intervalo de valores determinado. En éstas, no se deben ajustar volúmenes superiores o inferiores a los
que se recomiendan para cada micropipeta.
Parte I. Uso de micropipetas. La micropipeta se agarra como si se tomara una empuñadura. La parte
superior debe de reposar sobre su dedo índice (Fig 1).
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Si antes de tomar la muestra, se lleva hasta el segundo tope, se tomará un volumen mayor al deseado,
un volumen ERRÓNEO. El segundo tope es para sacar de forma más eficiente el volumen establecido.
Tanto la presión como la liberación del émbolo de la micropipeta se debe de realizar lentamente y con
suavidad. Si se realiza bruscamente, se pueden formar burbujas dentro de la punta de la micropipeta,
que alterarían los volúmenes; así mismo se podría ensuciar la parte interna de la micropipeta.
También se pueden formar burbujas o tomar un menor volumen si la punta no está bien ajustada a la
micropipeta.
1. Seleccionar la micropipeta adecuada para medir el volumen deseado (que esté dentro del intervalo
establecido para la micropipeta).
2. El volumen requerido se fija girando el émbolo. Se debe girar suavemente (evitar estar cambiando
constantemente los volúmenes, para evitar descalibrar las micropipetas).
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3. Colocar una punta desechable en el vástago de la micropipeta; asegurando que esté bien sujeta,
ejerciendo un ligero movimiento de torsión y presionando. Tener cuidado de no presionar mucho
porque esto hace que la punta quede atorada fuertemente dificultando retirarla.
4. Tomar la muestra presionando suavemente el émbolo con el pulgar hasta el primer tope.
6. Succionar el líquido, relajando suavemente y controlando la presión con el dedo pulgar, sin permitir
que el émbolo suba por sí solo. Se espera un par de segundos con la punta introducida en el líquido.
9. Presionar el émbolo lentamente, llevándolo hasta el primer tope, continuando inmediatamente hasta
el segundo tope, para expulsar la totalidad del líquido que está en la punta.
10. Con el émbolo totalmente presionado se retira cuidadosamente la micropipeta, deslizando la punta a
lo largo de la pared del tubo.
11. Llevar el émbolo a la posición inicial, controlando con el dedo (sin permitir que el émbolo suba por
sí solo).
12. Sacar la punta de la micropipeta, presionando el expulsor de puntas o tirando de ella.
En algunos casos se puede usar la misma punta, para homogenizar la mezcla, una vez adicionado el
volumen, se introduce la punta en la mezcla y se baja y sube el embolo repetidamente sin llegar al
primer tope.
Trabajo en el laboratorio
1. Elegir la micropipeta adecuada para 20, 200 o 1000 μL. Seleccionar el volumen indicado en la tabla
correspondiente y colocar la punta adecuada.
4. Eliminar la punta en un recipiente determinado para este fin, colocando encima del recipiente la
punta y presionando el pistón ubicado en la parte inferior, atrás del pistón de succión. Cada volumen se
hará por triplicado.
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Llenar hasta que el punto más bajo del menisco este sobre la línea.
Comprobar que no haya burbujas de aire.
Descargar en posición vertical hasta el vaciado completo.
No soplar o sacudir el instrumento.
Recomendaciones de uso.
La lectura se hace en el punto más bajo del menisco. Figura 2b
a) b)
Figura 2. Lectura del menisco en la medición de volumen en a) pipetas y b) probetas.
Trabajo en el laboratorio
REFERENCIAS.
1 CECMED, 2007. Regulación No. 41-07. “Validación de Métodos Analíticos” Witham, H. F., D.
F. Blaydes, and R. M. Devlin., 1971. Experiments in Plant Physiology. Van Nostrand Reinhold
C. New York, USA. 245 p.
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