UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUÍ

Facultad de Ciencias Naturales y

FacultadExactas
de Ciencias Naturales y
Exactas
Escuela de Biología
Escuela de Biología

Informe N°2 31
Informe
Calibración N°2:por el
de micropipeta de marzo
método gravimétrico 2015
Punto Isoeléctrico de
Aminoácidos y Proteínas
QM 300 3er Año 1er Sem. Tec. Médica

Preparado por:
Ayleen Caballero
Caridad Escobar
Tema:
Calibración de micropipeta
por el método gravimétrico.
Resumen:
 Desarrollar los procedimientos
En esta práctica presentamos
lo que fue la calibración de la
micropipetas de 500µL a través
de lo que es el método
gravimétrico para verificar su
correcto funcionamiento. A
través de diversos parámetros
estadísticos logramos verificar
si la calibración de las misma
se procedió correctamente
como también determinar la
precisión y el grado de errores
aleatorios como también la
exactitud y el grado de errores
sistemáticos que son comunes
en los instrumentos,
empleados para esta práctica.
Basándonos en nuestros
resultados hubo una
considerable exactitud por
parte de los instrumentos
empleados como una
significativa precisión por parte
del estudiante. Según los
parámetros obtenidos se tuvo
un % de error inferior al
estipulado (3.91%<5%). Por lo
que podemos concluir que la
variación en nuestras medidas
están influenciada en muchos
factores como es el control de
la temperatura, los errores
sistemáticos y aleatorios como
también la sensibilidad de los
instrumentos empleados para
esta práctica.
Objetivo:
gravimétricos para la
calibración y caracterización de
micropipetas para verificar su
correcto funcionamiento.
Introducción:
El método más sencillo y que
requiere de menor equipamiento
para calibrar micro pipetas es el
de gravimetría. Dicho método
consiste
en descargar con la micro pipeta
un líquido de densidad conocida
(generalmente agua destilada) en
un recipiente cuya masa es
medida antes y después de la
descarga. Conociendo la masa
del líquido y su densidad puede
calcularse el volumen
descargado.
Los factores que tienen mayor
influencia en la incertidumbre de
calibración por este método
pueden ser el tipo de construcción
del instrumento (pistón-cilindro
defectuoso, desgaste, etcétera),
el propio método (diferencias en
la presión de descarga,
variaciones en la temperatura y
otras condiciones del ensayo) y
errores sistemáticos como la
evaporación de la descarga de
agua en el recipiente de pesaje o
calibración de la balanza, entre
otros.
Para minimizar la incidencia de la
evaporación pueden utilizarse
dispositivos disponibles en el Materiales:
mercado que mantienen una Micropipetas (500µL, 100µL,
atmósfera saturada de humedad 20µL), puntas desechables,
en el recipiente de pesada o vaso para pesar.
saturar el ambiente interior de la
Equipo:
balanza donde se realiza la
Termómetro: resolución
descarga. (3)
La medida y transferencia de
(0.1°C)
volúmenes de líquido de ml y µl Balanza analítica:
(pipeteado) es una operación muy  Marca: Citizon
frecuente en el laboratorio  D=0.1mg
científico y médico, la mayor parte  Max (220g), min (0.1mg).
de estos trabajos se llevan a cabo Reactivos:
con modernas micropipetas Agua destilada (H2O d=1g/mL),
automáticas, que son el aparato
26°C.
ideal para la dosificación efectiva
de pequeñas cantidades de
líquido.
Metodología:
Debido a las exigencias Se pipeteo 5 veces la
impuestas a las pipetas en usar micropipeta (ensayo), luego se
volúmenes cada vez más midió el volumen seleccionado
pequeños la moderna gestión de de 500µL, se taro y se pesó el
calidad (normas ISO, GLP, y vaso, luego se transfirió el
GMP) exige una comprobación volumen, se anotó el peso,
periódica de aparatos de medida nuevamente se taro y se
volumétrica, entre ellos Controles procedió a repetir el mismo
gravimétricos periódicos y un
procedimiento logrando 9
ajuste de las micropipetas que
mediciones adicionales.
son requisitos fundamentales de
los modernos sistemas de
garantía de calidad. Es la
comparación de volumen real y
volumen teórico. El volumen real
se determina por vía gravimétrica.
(4) El peso obtenido se corregirá
con la densidad, dependiendo de
la temperatura. Con el peso ya
corregido se obtendrá el volumen
real. Los datos se representan
gráficamente y se obtiene el
coeficiente de correlación, que
nos indicara si la micropipeta está
correctamente calibrada a sus
distintos volúmenes. (1)
Resultados: Error relativo 19.56µL
Nota: Factor de corrección a 29°C= Exactitud 19.56 µL
1,0051 ml/g. %Error 3.91<5%
tc 3,54
Micropipeta: n° 1 X2c 13.12
Volumen medido: 500µL
Exactitud:
Tabla n°1: Corrección de Peso a
volumen (mL). %Error=3.91<5%
Peso(g) Factor(mL/g) V (mL) Tc>Tt, Ho: ≠µ
0.4676g 1.0051 mL/g 0.4699mL
0.4709g 1.0051 mL/g 0.4733mL Tc<Tt, Ha: ≈µ
0.4953g 1.0051 mL/g 0.4978mL
0.4992g 1.0051 mL/g 0.5017mL Tc=-3,54, Tt=1.83
0.4800g 1.0051 mL/g 0.4824mL
3,54<1.83; Ha: ≈µ: no se rechaza la
0.4975g 1.0051 mL/g 0.5000mL
hipótesis alterna.
0.4840g 1.0051 mL/g 0.4864mL
0.4822g 1.0051 mL/g 0.4846mL Los errores sistemáticos son
0.4514g 1.0051 mL/g 0.4537mL “estadísticamente” insignificantes. El
0.4523g 1.0051 mL/g 0.4546mL instrumento presenta buena exactitud.

Precisión:

C.V=3.62%<5%
Tabla n°2: Cálculos base.
V(µL) xi (xi- ) (xi- )2 X2c>X2t; Ho: X1≠X2≠X3...Xn
469.9µL -10.54µL 111.09µL
473.3 µL -7.14 µL 50.97 µL X2c<X2t; Ha: X1≈X2≈X3...Xn
497.8 µL 17.36 µL 301.36 µL
X2c=13.12, X2t=18.3070
501.7 µL 21.26 µL 451.98 µL
482.4 µL 1.96 µL 3.84 µL 13.12<18.3070; Ha: X1≈X2≈X3...Xn:
500.0 µL 19.56 µL 382.59 µL no se rechaza la hipótesis alterna.
486.4 µL 5.96 µL 35.52 µL
484.6 µL 4.16 µL 17.30 µL Los errores aleatorios son
453.7 µL -26.74 µL 715.02 µL “estadísticamente” insignificantes. Por
454.6 µL -25.84 µL 667.70 µL lo que el personal quien manejó el
∑=4804.4µL ∑=2737.37µL instrumento tuvo una precisión
=480.44µL considerable.

Tabla n°3: Cálculo de Parámetros.

Parámetros: Resultados:
S 17.43 µL
C.V 3.62%<5%
Conclusión: p/INNOTEC/article/viewFile/
55/46
Es necesario disminuir los 4- T. S. A, L (2010). Calibración
errores aleatorios ya que ellos de micropipetas. Consulta:
podrían afectar grandemente a 22 de abril del 2014. URL:
la calibración de las http://nitsac.com/wp/?p=460
micropipetas. 5-
El control de la temperatura del
agua es un factor de gran
importancia para la calibración
del instrumento ya que una
temperatura adecuada permite o
contribuye a una buena
calibración.
Es importante y necesario una
balanza con la sensibilidad
adecuada de acuerdo con el
volumen que se empleara para
la calibración.

Bibliografía:

1- Colomatania, (2012).
Calibración de micropipetas.
Consulta: 22 de abril del
2015. URL:
http://www.buenastareas.co
m/perfil/colomatania-
27024909/
2- Leomere, (2012).
Calibración de micropipetas.
[en línea] consultada: 22 de
abril del 2015. URL:
http://www.buenastareas.co
m/ensayos/Calibracion-De-
Pipetas/3963809.html
3- Sica, A. (2009). Evaluación
del método gravimétrico de
calibración de micro pipetas.
Consulta: 22 de abril del
2015. URL:
http://ojs.latu.org.uy/index.ph