II.

RESULTADOS
Cuadro N°1: Valores de pH de la titulación del aminoácido Glicina

mL NaOH pH
0 1.60
1 1.64
2 1.68
3 1.72
4 1.76
5 1.81
6 1.84
7 1.89
8 1.98
9 2.05
10 2.12
11 2.20
12 2.29
13 2.38
14 2.52
15 2.66
16 2.85
17 3.11
18 3.87
19 8.20
20 9.08
21 9.49
22 9.75
23 10.06
24 10.43
25 10.80
26 11.55
27 11.90
28 12.05

(Fuente: Manual de Prácticas de Bioquímica)

Cuadro N°2: Valores de pH de la titulación del Ácido Fosfórico

mL NaOH pH mL NaOH pH
0 1.20 28 6.17
1 1.23 29 6.27
2 1.27 30 6.36
3 1.32 31 6.46
4 1.37 32 6.54
5 1.42 33 6.63
6 1.50 34 6.71
7 1.57 35 6.80
8 1.65 36 6.88
9 1.72 37 6.98
10 1.80 38 7.07
11 1.88 39 7.18
12 1.96 40 7.29
13 2.05 41 7.42
14 2.14 42 7.58
15 2.24 43 7.80
16 2.35 44 8.16
17 2.47 45 9.10
18 2.61 46 9.84
19 2.77 47 10.20
20 2.99 48 10.42
21 3.34 49 10.59
22 4.44 50 10.71
23 5.23 51 10.83
24 5.53 52 10.92
25 5.77 53 10.97
26 5.92 54 11.07
27 6.06 55 11.14

(Fuente: Manual de Prácticas de Bioquímica)

III. DISCUSIONES
TITULACIÓN DEL AMINOÁCIDO GLICINA

Para las titulaciones de aminoácidos, una curva de titulación consiste en graficar el pH (o el pOH)
contra los mililitros de titulante. Estas curvas son muy útiles para juzgar la factibilidad de una
titulación y para seleccionar el indicador adecuado (Day & Underwood, 1989). La curva de
titulación descrita por la Glicina, se trata de una curva sigmoidal (Voet & Voet, 2006).

La titulación de la Glicina se llevó a cabo tomando conceptos previos sobre el aminoácido. Dicho
aminoácido presenta doble disociación, al añadir Hidróxido de Sodio.
Al principio, a pH ácido, la Glicina se encuentra como un ácido diprótico, ya que tanto el grupo
amino como el carboxilo se encuentran protonados, es decir, a pH = 1, el 100% de las moléculas de
aminoácido se encuentran en forma de catión (González, 2011).

La Glicina a pH se puede observar al momento que titulamos, con un crecimiento por cada mililitro
de Hidróxido de Sodio que es añadido, entre un rango no mayor a (+0.8), lo que claramente se
puede apreciar hasta llegar al tope de 13 ml de Hidróxido de Sodio.

La diferencia para variar de pH (+0.14) al añadir el mililitro número 14 de Hidróxido de Sodio,

indica dos cosas: La primera, que teóricamente, el pKa1=2.4, se encuentra al añadir dentro del
rango [13-14 ml] de Hidróxido de Sodio; así como el momento transitorio (formación de la meseta
en la curva), lo cual no hace muy empinada por ese sector.

Cuando pH = pK1, la glicina se encuentra como 50% cation + 50% zwitterion. Por lo tanto, el par -
COOH/-COO- puede servir como un tampón amortiguador en la región de pH cerca del valor pK1
(González, 2011).

Al seguir añadiendo mililitros de Hidróxido de Sodio, ha denotar una sección donde por cada
mililitro que es añadido, el pH varia drásticamente, haciendo la curva más empinada. Este cambio
repentino de pH ha de indicar otra fase en el proceso de titulación: Aproximación al Punto
Isoeléctrico.

En el pI, prácticamente el 100% del aminoácido se encuentra como ion dipolar o zwitterion, de
forma tal que el aminoácido presenta una carga neta nula (el aminoácido es eléctricamente neutro)
(Voet & Voet, 2006).

De ser así, el punto Isoeléctrico de la Glicina se encontraría al momento de añadir un rango entre
[18-19 ml] de Hidróxido de Sodio. También debemos considerar, factores externos, como el estado
de la Glicina del Laboratorio, que se encontraba muy gastado. Razón por la cual también pudo
haber influido en el cambio brusco de pH.

La glicina a pH básico, si se siguen añadiendo equivalentes de base, el grupo amino (-NH3+) se

disocia también, obteniéndose la forma totalmente desprotonada de la glicina; este equilibrio está
definido por el pK2. Cuando pH = pK2 la glicina se encuentra como 50% zwitterion + 50% anión.
Por lo tanto, el par -NH3 +/-NH2 puede actuar como un sistema tampón o disolución amortiguadora
en la región de pH cerca del pK2 (González, 2011).
El pKa Teórico que hallamos es 9.8, razón por la cual ha de determinar que se encuentra en el rango
de Hidróxido de Sodio entre [22-23] ml.

Y finalmente, a un pH mayor al pKa2, el 100% de las moléculas de aminoácido se encuentran en

forma de ion negativo o anión (González, 2011).

TITULACIÓN DEL ÁCIDO FOSFÓRICO

El ácido fosfórico puede seguir tres ionizaciones, por lo tanto tiene tres valores de pKa. El ácido
fosfórico como grupo fosfato tiene gran importancia biológica debido a su papel en DNA/RNA, en
moléculas energéticas como el ATP, en la fosforilación de proteínas, etc. A la forma química del
H3PO4, una vez que el primer H+ se ha liberado totalmente, se tiene H2PO4-. Pero como en esta
reacción también se libera Na+ (al combinarse el OH- y el H+ para producir agua), podemos poner
que los iones en la disolución están como Na+H2PO4-, o simplemente NaH2PO4 (dihidrógeno
fosfato de sodio). Así, esta primera ionización se escribe como sigue:

NaOH + H3PO4 → H2O + NaH2PO4

La curva se puede resumir en:

 Etapa inicial: la solución contiene un ácido débil, el pH depende del pKa del ácido.
 Segunda etapa: La base añadida reacciona con igual número de moles de ácido, solo
reacciona un protón por molécula de ácido. El pH queda determinado a partir de la solución
amortiguadora que se forma.
 Tercera etapa: Se alcanza el punto de equivalencia, la concentración de protones queda
determinada por la raíz cuadrada del producto de Ka1.Ka2
 Cuarta etapa: Luego del primer punto de equivalencia se forma un buffer y el pH depende
de él.
  Quinta etapa: Segundo punto de equivalencia, la solución contiene la sal formada, la cual
contiene el anión del ácido débil, este anión reacción con el agua para producir OH-, el pH
depende de Kb.
 Sexta etapa: La base titulante estará en exceso y se determina [OH-] en la solución.

En la curva se puede apreciar aproximadamente los puntos de equivalencia, esta curva es casi
idéntica a los modelos teóricos.
Se observó una variación creciente de pH, debido a la adición de NaOH 1M. Esto se debe a que a
medida que ingresan los iones OH- y entran en contacto con el H3PO4 los iones H+ del mismo
reaccionan estabilizando la concentración por lo cual el número de H+ disminuye y el pH aumenta.
El primer compuesto obtenido se define como fosfato primario, cuando se cambia otro H+ por otro
Na se llama secundario y por último del mismo modo el terciario. Así, NaH2PO4, con un átomo de
hidrógeno sustituido, se denomina fosfato primario de sodio, y Na3PO4, con tres átomos de
hidrógeno sustituidos, fosfato terciario de sodio.
Según Lehninger (1978), la segunda zona de amortiguación se encuentra en el intervalo de 6.36 a
7.36 de pH, el cual corrobora el dato obtenido de la titulación del buffer fosfato; también menciona
que los pares ácido-base conjugados son tampones efectivos entre aproximadamente 25% y 75% de
neutralización de la especie dadora de protones.