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Introduction :
Le contrôle microbiologique des viandes rouge et leurs dérivés est très important car cette
matière représente un véhicule de nombreuses maladies dangereuses pour la santé publique,
effectivement l’Algérie enregistre chaque année 6500 cas d’intoxications alimentaires dont
29% de ces accidents sont provoqués par les viandes et 24% par les produit carnées.
Ces contrôles s’appliquent également aux viandes rouge hachées ainsi qu’aux préparations de
viandes hachées fabriquées avec celles-ci, présentées à l’état cru, réfrigérées, congelées ou
surgelées.
Par définition, Les viandes hachées sont des viandes qui ont été seulement soumises à une
opération de hachage en fragments ou à un passage dans un hachoir à vis sans fin, auxquelles
a été éventuellement ajouté un maximum de 1 p. 100 de sel. Tout ajout d’eau est interdit.
Seules peuvent être utilisées pour la fabrication de viandes hachées les viandes provenant
d’animaux de boucherie d’une seule des espèces suivantes : bovine, porcine, ovine et caprine.
Les mélanges de plusieurs espèces sont dénommées préparations de viande hachée ci-après
définies.
Les viandes hachées doivent être fabriquées dans des ateliers agréés pour la mise sur le
marché communautaire. Les matières premières doivent provenir exclusivement d’ateliers de
découpe agréés pour la mise sur le marché communautaire et être utilisées dans un délai de
six jours maximum après abattage pour la viande réfrigérée, neuf jours maximum après
abattage pour la viande bovine désossée conditionnée sous vide (sous réserve d’un
conditionnement dans les quatre jours suivant l’abattage), 18 mois pour la viande bovine
congelée, 12 mois pour la viande ovine et caprine congelée, et six mois pour la viande porcine
congelée. L’utilisation de viandes congelées est interdite dans la fabrication des viandes
hachées réfrigérées ; elle est réservée à la fabrication de viande hachée surgelée ou congelée.
Germes recherchés n c m
germes aérobies à 30°C 5 2 105
coliformes fécaux 5 2 102
Escherichia coli 5 2 50
Staphylococcus aureus 5 2 102
Clostridium sulfito-réducteurs à 46°C5 2 30
Salmonella 5 0 Abs/10g
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II. Présentation de la police scientifique :
Section technique :
Incendie-Explosions :
Les scientifiques de cette section procèdent en laboratoire aux analyses des prélèvements
effectués sur les lieux de sinistre par les techniciens de l’identité judiciaire (police) ou des
brigades de recherche de la gendarmerie. Dans les cas d’incendie, l’un de leur principal
objectif est de déterminer la présence éventuelle des substances accélératrices de
combustion dans ces prélèvements.
Balistique :
Cette section étudie la signature mécanique d’une arme, détermination de trajectoires, tirs
expérimentaux, collections de référence : des éléments clés de la recherche en balistique.
Documents et écriture :
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Informatique et trace technologique :
Ce service se base sur tout ce qui est technologie et informatique tel que le montage de
photos, lettre de menace envoies par e-mail ou sms, vidéo de menace……
on peut faire réfectionner et récupérer tous les données effacées ou détractées les appels
téléphonique inconnus.
Gestion de matériels :
Section scientifique :
Toxicologie légale :
Ce service peut mettre en évidence des quantités infimes de substances toxiques des divers
milieux. Le sang et les urines sont souvent analysés mais d’autres types de prélèvement
peuvent être étudiés. Les produits à identifier peuvent être de stupéfiants, de médicament,
mais aussi d’autre substances d’origine naturelle ou synthétique.
Alcoolémie :
Ce service traite les affaires des accidents en état d’ivresse comme par exemple l’arrestation
des conducteurs en états d’ivresse. Ces analyses se font par un appareil qui analyse le sang
en se basant sur un graphe qui va donner le taux d’alcool trouvé dans le sang et le comparer
avec les normes légales.
Chimie légale :
Ce service est spécialisé dans les analyses de toutes sortes de preuves physiques (peinture,
textiles, verre, bois, etc.) retrouvés sur une scène d’accidents ou de crime. Leur travail
contribuera à résoudre une multitude d’enquêtes de toutes sortes (accidents de la route,
incendies entrés par infraction, vandalisme, homicides, etc.)
Control alimentaire :
Dans ce service, on traite des affaires qui sont du à des dépositions de plainte des citoyens
par une mauvaise production ou une mauvaise hygiène et qui va provoquer par la suite des
intoxications alimentaires qui sont parfois très graves en se basant sur des analyses
microbiologiques.
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Biologie légale :
Toute trace de matériel biologique peut faire aujourd’hui l’objet d’une étude détaillée
permettant l’exclusion ou l’identification d’un individu. La nature des traces (sang, sperme,
salive, éléments pileux,..) est d’abord déterminée par des techniques simples et rapides.
Chef de service
Secrétariat Administration
Alcoolémie Balistique
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III. Préparation de l’échantillon :
La pris d’essai :
L’arrêté ministériel du 27 mai 1998 du JORA, indique que l’échantillon destiné au laboratoire
de microbiologie doit être constitué de 5 unités correspondant à 5 portions consommateur ou à
5 prélèvements d’au moins 100 grammes du produit à analyser. Ces unités doivent être issues
d’un même lot de fabrication et prélevées stérilement au hasard si possible dans 5 cartons
différents. Elles doivent être conditionnées individuellement et transportées à température
réglementaire jusqu’à un laboratoire accrédité, en précisant le numéro de lot.
Réception au laboratoire
Analyses microbiologiques
Fig1 : le prélèvement
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IV. Analyses microbiologiques :
1. Le pré-enrichissement :
Fig2 : préparation de la DM
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1.2. Préparation des dilutions décimales :
Prendre 1ml de la dilution mère (10-1) avec une pipette graduée stérile, mettre la dans un
tube contenant 9ml du TSE ce qui fait la deuxième dilution à 10-2. Reprendre 1ml de la
dernière dilution, mettre la dans un autre tube qui contient aussi 9ml du TSE pour obtenir la
dilution 10-3 et ainsi de suite jusqu'à l’obtention de la dilution 10-6.
DM=10-1
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2. Recherche et dénombrement des Germes Aérobie Mésophile Totaux
GAMT :
Préparation du milieu :
On met le flacon contenant le milieu PCA dans le bain marie et on le laisse fondre.
Le pré-enrichissement :
Cette étape consiste à la préparation de la dilution mère et les dilutions décimales dont les étapes
sont déjà suscités (voir fig2 ; fig3).
Boite témoin
Ensemencement en masse à
Verser le milieu dans les boites partir des dilutions (10-1→10-6 )
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3. Recherche des coliformes totaux et fécaux :
Le pré-enrichissement :
Cette étape consiste à la préparation de la dilution mère et les dilutions décimales dont les étapes
sont déjà suscités (voir fig2 ; fig3).
Test de présomption
À partir des dilutions 10-1 10-2 10-3 Introduire 1ml de l’inoculum dans des tubes contenant
15ml du milieu VBL muni d’une cloche de durham (03 tubes pour chaque dilution).
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3.2 Recherche des coliformes fécaux :
Test de confirmation
Les tubes de VBL+ feront l’objet d’un repiquage à l’aide d’une pipette pasteur stérile.
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4. Recherche des Staphylococcus Aureus :
Le pré-enrichissement :
Cette étape consiste à la préparation de la dilution mère et les dilutions décimales dont les étapes
sont déjà suscités (voir fig2 ; fig3).
Ensemencement :
A partir des dilutions décimales retenues, porter aseptiquement 1ml par dilution dans un
tube à vis stérile.
Giolitti Cantonii
+ 15ml tellurite de K
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b) Méthode d’enrichissement sur milieu Chapman :
L’isolement :
Les tube Giolitti + feront l’objet d’un isolement sur gélose Chapman préalablement fondue
puis refroidie et coulée en boites et séchée.
Pour s’assurer que les colonies qui ont apparus sur les boites s’agissent bien de colonies de
Staphylococcus Auréus, effectuer sur 02 à 03 colonies de chaque boite des tests
biochimiques rapides à savoir :
Test catalase
Ensemencement sur
milieu Chapman coulé
en boite Tube Giolitti
Cantonii +
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5. Recherche des Clostridium sulfito-réducteur :
a- Préparation du milieu :
Au moment de l’emploi faire fondre un flacon de la gélose VF le refroidir dans un bain d’eau à 45°C
puis ajouter une ampoule de sulfate de sodium et alun de fer ammoniacal, mélanger soigneusement
et aseptiquement le milieu et ainsi prêt à l’emploi, mais il faut le maintenir dans une étuve ) 45°C
jusqu'à moment de l’utilisation.
b- Le pré-enrichissement :
Cette étape consiste à la préparation de la dilution mère et les dilutions décimales dont les étapes
sont déjà suscités (voir fig2 ; fig3).
c- Ensemencement :
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6. Recherche des salmonelles :
Pré-enrichissement
Enrichissement
L’enrichissement est effectuer sur le milieu sélectif SFB réparti à raison de100ml par flacon à
simple et double concentration ;
Isolement
Chaque flacon fera l’objet d’un isolement en double (02 boites pour chaque flacon) sur le
milieu gélosé Hektoen
Toutes les boites ainsi isolées seront incubés à 37°C pendant 24h.
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V. Résultats :
Interprétation :
Les colonies des germes aérobies mésophiles totaux se présentent sous forme lenticulaire en
masse.
Dénombrement:
On compte les colonies ayant poussées sur les boites en prenant en considération que les
boites contenant entre 15 et 300 colonies.
On multiplie le nombre trouvé par l’inverse de sa dilution => Cn, on fait ensuite la moyenne
arithmétique des colonies entre les différentes dilutions.
∑ Cn
N=
𝑛𝑏
Où
Cn : le nombre des colonies comptées par boîte.
nb: est le nombre de boîtes ensemencées.
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Boites 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
Nbre >300
110.102 40.103 24.104 6.105 0.106
de colonies
Alors :
Les résultats ont été interprétés selon l’article p.7, JORA N °: 035 du 27-05-1998
échantillon n c m
Nombre de
bactéries 30.1014 5 2 5.105
(UFC/g)
Discussion :
Les résultats de la numération des germes aérobies mésophiles totaux révèlent une flore totale
très élevé qui dépasse le critère m et cela provient de la mal conservation de la viande ainsi au
niveau de sa préparation dont des contaminants extérieurs interviennent comme l’air, sol,
manipulateurs, outils de découpe qui ne se lavent qu’une seul fois par jour.
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2. Coliformes totaux et fécaux :
a- Test de présomption :
Pour obtenir le nombre réel, on multiplie ce nombre par l’inverse de la première dilution :
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b- Test de confirmation :
Dégagement de gaz
Trouble microbien
Anneau rouge
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La lecture finale se fait selon les prescriptions de la table de Mac Grady.
Pour obtenir le nombre réel, on multiplie ce nombre par l’inverse de la première dilution :
Echantillon m M S
Nombre de
bactéries 1.1 x102 102 103 105
(UFC/g)
Echantillon m M S
Nombre de
bactéries 2.8 x102 102 103 105
(UFC/g)
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Discussion :
Pour s’assurer qu’il s’agit bien de Staphylococcus Auréus, ces tubes feront l’objet d’un
isolement sur milieu Chapman.
Noircissement du
milieu
Les Staphylococcus Auréus se présentent sous forme de colonies de taille moyenne, lisse,
brillantes, pigmentées en jaune et pourvues d’une catalase et coagulase.
Fig11 :
Chapman
après Colonies typiques
incubation
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Identification biochimique
Discussion :
Les analyses ont montrés que notre viande est contaminée par des Staphylococcus Auréus.
Les Staphylococcus Auréus sans des indicateurs de contamination humaine, animale ou
originale mais le risque devient plus grand quand leur nombre atteint ou dépasse 10 3
germes/gramme.
Interprétation :
Après l’incubation, on ne voie aucune apparition de colonies noires dans les tubes VF, donc
on a absence des spores de clostridium sulfito-réducteur, ce qui signifie que le produit n’a pas
été contaminé.
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Fig13: Tubes VF après incubation
Discussion :
La viande hachée analysée est dépourvue de spores des clostridium sulfito-réducteur qui se
retrouvent fréquemment dans la nature en particulier dans le sol ce qui signifie que notre
échantillon n’a pas été contaminé
5. Les salmonelles :
Les salmonelles se présentent sous forme de colonies grises avec un centre noire.
Discussion :
La présence ou pas des salmonelles n’a pas été confirmé, mais on a eu des colonies
suspectes qui possèdent des caractéristiques proches à celles des Proteus. Ces deux germes
sont très dangereux et peuvent induire des toxi-infections alimentaire très graves alors soit
ces colonies s’agissent des salmonelles ou des Proteus cette viande hachée ne doit pas être
consommé.
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VI. Conclusion :
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Références bibliographiques :
Victoire N’sondé. Le corps comme un livre . Science et vie junior hors-série. Juillet
2006,n°65,p.32-37
"Police scientifique." Microsoft® Encarta® 2009 [DVD]. Microsoft Corporation,
2008.
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Annexes
Milieu Schubert :
Peptone……………………………………………………………10g
Tryptone…………………………………………………………..10g
Acide glutamique…………………………………………………0,2g
Tryptophane………………………………………………………0,2g
Sulfate de magnésium………………………………………...0,7g
Sulfate d’ammonium……………………………………………0,4g
Citrate de sodium…………………………………………………0,5g
Chlorure de sodium……………………………………………..2g
Mannitol…………………………………………………………..7,5g
Milieu Chapman :
Peptone :..................................................................................10,0 g
Extrait de viande de bœuf :.......................................................1,0 g
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Chlorure de sodium :................................................................75,0 g
Mannitol :.................................................................................10,0 g
Rouge de phénol :....................................................................0,025 g
Agar-Agar :..............................................................................15,0 g
Eau distillée :........................................................................qsp 1 Litre
pH = 7,4
Gélose Hektoen :
protéose-peptone:.................................................................12,0 g
extrait de levure : facteur de croissance................................3,0 g
lactose : critère de differenciation........................................12,0 g
saccharose : critere de differenciation..................................12,0 g
salicine : critere de differenciation.......................................2,0 g
citrate de fer III et d'ammonium revelateur d'H2S.................1,5 g
sels biliaires : inhibiteur.........................................................9,0 g
fuchsine acide : inhibiteur......................................................0,1 g
bleu de bromothymol : indicateur de pH.............................0,065 g
chlorure de sodium : maintien de la pression osmotique.........5,0 g
thiosulfate de sodium : précurseur d'H2S...............................5,0 g
agar........................................................................................14,0 g
pH = 7,6
Pépton viand-foie 20
Glucose 0,75
Amidon soluble 0,75
Sulfite de soduim 1,20
Citrate ferrique 0,50 ammoniacal
Agar 11
Réactif de KOVACS :
Para-dimethyl-amino-benzaldhydehyde
Alcool isoamylique
Acide chlorhydrique
Tryptone..............................................................10,0 g
Chlorure de sodium................................................5,0 g
Eau.....................................................................1000ml
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ANNEXE 2 : Tableau NPP :
Pos* MPN Pos* MPN Pos* MPN Pos* MPN Pos* MPN Pos*
10;1;0,1 10;1;0,1 10;1;0,1 10;1;0,1 10;1;0,1 10;1;0,1
000 <1,8 100 2 200 4,5 300 7,8 400 13 500
001 1,8 101 4 201 6,8 301 11 401 17 501
002 3,6 102 6 202 9,1 302 13 402 21 502
003 5,4 103 8 203 12 303 16 403 25 503
004 7,2 104 10 204 14 304 20 404 30 504
005 9 105 12 205 16 305 23 405 36 505
010 1,8 110 4 210 6,8 310 11 410 17 510
011 3,6 111 6,1 211 9,2 311 14 411 21 511
012 5,5 112 8,1 212 12 312 17 412 26 512
013 7,3 113 10 213 14 313 20 413 31 513
014 9,1 114 12 214 17 314 23 414 36 514
015 11 115 14 215 19 315 27 415 42 515
020 3,7 120 6,1 220 9,3 320 14 420 22 520
021 5,5 121 8,2 221 12 321 17 421 26 521
022 7,4 122 10 222 14 322 20 422 32 522
023 9,2 123 12 223 17 323 24 423 38 523
024 11 124 15 224 19 324 27 424 44 524
025 13 125 17 225 22 325 31 425 50 525
030 5,6 130 8,3 230 12 330 17 430 27 530
031 7,4 131 10 231 14 331 21 431 33 531
032 9,3 132 13 232 17 332 24 432 39 532
033 11 133 15 233 20 333 28 433 45 533
034 13 134 17 234 22 334 31 434 52 534
035 15 135 19 235 25 335 35 435 59 535
040 7,5 140 11 240 15 340 21 440 34 540
041 9,4 141 13 241 17 341 24 441 40 541
042 11 142 15 242 20 342 28 442 47 542
043 13 143 17 243 23 343 32 443 54 543
044 15 144 19 244 25 344 36 444 62 544
045 17 145 22 245 28 345 40 445 69 545
050 9,4 150 13 250 17 350 25 450 41 550
051 11 151 15 251 20 351 29 451 48 551
052 13 152 17 252 17 352 32 452 56 552
053 15 153 19 253 26 353 37 453 64 553
054 17 154 22 254 20 354 41 454 72 554
055 19 155 24 255 32 355 45 455 81 555
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