PRUEBA FUNDAMENTO
En este medio se
DESAMINACIÓN Y determina la
DESCARBOXILACIÓN descarboxilación de la Agar de hierro y lisina (LIA)
DE AMINOÁCIDOS EN lisina que se lleva a cabo
en anaerobiosis y la
MEDIO LIA.
desaminación de la lisina
que se lleva acabo en
aerobiosis.
La reacción de Voges-
Proskauer se basa en la
conversión del
acetilmetilcarbinol
(acetoína) en diacetilo por
acción del KOH al 40 % y
el oxígeno atmosférico, la
PRUEBA DE VOGES- acetoína se convierte en
PROSKAUER diacetilo el α - naftol actúa
como catalizador para
revelar un complejo de
color rojo.
PRUEBA DEL Determinar la capacidad e
CIANURO DE POTASIO un organismo de vivir y
reproducirse en un medio
que contenga cianuro de
potasio.
MEDIO INOCULACION RESULTADOS
 Inocular por Desaminación de
picadura y estría aminoácidos
un tubo con medio Positiva: La superficie del
LIA a partir de la tubo es de color rojo vino.
suspensión. Negativa: La superficie no
 Incubar el tubo a tiene cambios.
35 °C durante 24 h Descarboxilación de
aminoácidos
Positiva: El fondo del tubo
es de color púrpura.
Negativa: El fondo del
tubo es de color amarillo
 Inocular un tubo Prueba positiva: Color
que contenga caldo rojo ladrillo en la superficie
Caldo Voges Proskauer Voges Proskauer del medio de cultivo
con 0.1 ml de la (Producción de acetoina)
suspensión
 Incubar el tubo a
35°C durante 24 h.
Prueba negativa: No hay
*Después de incubar,
agregar 6 gotas de cambio en el color del
solución de alfa-naftol y 2 medio.
gotas de solución de KOH,
en ese orden estricto y
agitar suavemente, dejar
en reposo 10-15 minutos y
observar los cambios en el
medio.
 Inocular por asada Positiva: Presencia de
Caldo cianuro de potasio un tubo con caldo crecimiento (turbidez)
(KCN) cianuro de potasio
(KCN) a partir de la Negativa: Ausencia de
suspensión. crecimiento (medio claro)
 Incubar a 35 °C
durante 24 a 48 h
 REDUCCIÓN DE Capacidad de un  Inocular 0.1 ml de Positiva: Aparición de un
NITRATOS A NITRITOS organismo para reducir la suspensión a un color rojo en 30 s
nitratos a nitritos es una Caldo nitrato tubo con caldo
característica importante nitrato Negativa: Sin cambio de
utilizada para la  Después de color.
identificación y incubar, determinar
diferenciación de muchas la presencia de
especies, todas las nitritos, añadiendo
enterobacterias, excepto al tubo 3 gotas de
ciertos biotipos de alfa-naftilamina y 3
Enterobacter agglomerans gotas de ácido
reducen los nitratos. sulfanílico.
Los organismos que
reducen nitratos tienen la
capacidad de obtener
oxígeno de los nitratos
para formar nitritos y
otros productos de
reducción.
Determinar la capacidad  En una caja con Positivo.- Si se forma un
HIDRÓLISIS DE de un microorganismo agar almidón se halo claro alrededor de la
ALMIDÓN para secretar la enzima Agar almidón. procede a inocular estría.
amilasa para la por estrías simple
degradación de almidón la placa
en moléculas más
pequeñas para ser  Incubar la caja a Negativo.- No se forma un
utilizadas en su 35°C durante 24 h. halo claro alrededor de la
metabolismo. *Después de la incubación estría.
añadir unas gotas de lugol
cubriendo la superficie de
la placa.
 Determinar la movilidad, Siembra por picadura Producción de H2S:
producción de indol y de  35°C Presencia de un
sulfuro de hidrógeno en un SIM  24 horas precipitado color negro
mismo tubo. Después añadir 3 alrededor de la picadura o
gotas del reactivo en todo el tubo
SIM (MOVILIDAD,
PRODUCCIÓN DE ÁCIDO de Kovac’s Producción de Indol:
Presencia de un anillo de
SULFHÍDRICO)
color rojo en la superficie
al adicionarle el reactivo de
Kovac’s.
Movilidad: Turbidez
alrededor de la picadura.
Determinar si un Siembra por estría abierta Positivo: Desarrollo
microorganismo es capaz en forma de “S” en un tubo abundante con o sin
de utilizar citrato como Citrato de Simmons  35 °C alcalinización (color azul).
única fuente de carbono y  24 horas. Negativa: No hay
UTILIZACIÓN DEL compuestos amoniacales desarrollo (medio de color
CITRATO como única fuente de verde).
nitrógeno en su
metabolismo, provocando
una alcalinización del
medio.
Capacidad de un  Por inoculación Hemólisis alfa: es una
microorganismo realizar la directa del material hemólisis parcial y la zona
lisis de los glóbulos rojos Agar Sangre en estudio, estriar de crecimiento aparece
(hemólisis) producida por sobre la superficie rodeada de un halo de
la acción de una enzima del medio de color verdoso.
HEMÓLISIS llamada hemolisina cultivo. Hemólisis beta: en este
 Bacterias de fácil caso la hemólisis es total y
crecimiento: en el halo que rodea a las
aerobiosis, a 35-37 colonias es totalmente
ºC hasta 48 horas. transparente.
Bacterias exigentes Hemólisis gamma (no
 en sus hemólisis): el
requerimientos microorganismo en
nutricionales: en cuestión no es capaz de
atmósfera con 5 % realizar la hemólisis y por
de CO2, a 35-37 ºC tanto no existe halo
durante 24-48 alrededor de la colonia.
horas
Permite diferenciar  Se emulsionan Positivo: formación de un
Staphylococcus aureus varias colonias en coagulo
(coagulasa positivo) del Plasma citratado de conejo un tubo con 0,5ml
resto de especies de de plasma citratado Negativo: sin cambios
Staphylococcus de conejo. Se
COAGULASA
(coagulasas negativos). La incuba a 35º y se
técnica en tubo detecta chequea la
coagulasa libre y ligada. formación del
coágulo a las 4
horas.
Prueba Fundamento medios Forma de Resultados

inoculación

La urea es una diamida Inocular un tubo con Positiva: Color rosa fucsia en el
del ácido carbónico y esta caldo urea con una asada medio.
es fácilmente hidrolizada de la suspensión Negativa: Sin cambio de color
Producción de Caldo urea microbiana, si se utiliza
con la liberación de en el medio.
agar urea se estría la
amoníaco y dióxido de (es un medio diferencial) superficie del medio se
urea carbono. La enzima incuba a 35 ° C durante
ureasa que posee un 24 h.
microorganismo puede
hidrolizar a la urea que
esta presente en el medio
de cultivo de acuerdo con
la siguiente reacción: El
amoníaco reaccionan en
solución para formar
carbonato de amonio,
produciéndose una
alcalinización y un
aumento del pH del
medio
 Prueba Fundamento medios Forma de inoculación Resultados

En el medio de cultivo, el extracto de 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo

carne y la pluripeptona, aportan los
nutrientes adecuados para el
TSI (fermentación de
desarrollo bacteriano. La lactosa,
sacarosa y glucosa son los hidratos
glucosa, producción de de carbono fermentables. El
tiosulfato de sodio es el sustrato
ácido sulfhídrico y necesario para la producción de
ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro
producción de gas) y amonio, es la fuente de iones
Fe3+ , los cuales se combinan con el
ácido sulfhídrico y producen sulfuro
de hierro, de color negro. El rojo de
fenol es el indicador de pH, y el
cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico.
Por fermentación de azúcares, se
producen ácidos, que se detectan
por medio del indicador rojo de
fenol,el cual vira al color amarillo en
medio ácido. El tiosulfato de sodio
se reduce a sulfuro de hidrógeno el
que reacciona luego con una sal de
hierro proporcionando el típico
sulfuro de hierro de color negro.
A partir de un cultivo
puro, sembrar en amarillo): el microorganismo solamente
Agar TSI
fermenta la glucosa.
TSI, picando el fondo
(es un medio diferencial) y extendiendo sobre 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo
la superficie del amarillo): el microorganismo fermenta
medio. glucosa, lactosa y/o sacarosa.
Se incuba a 35-37°C
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo
durante 24 horas, en
rojo): el microorganismo es no fermentador
aerobiosis. de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del
medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el
microorganismo produce ácido sulfhídrico.
Prueba Fundamento Medio Inoculación Resultados
Caldo nutritivo Medio no selectivo, Examinar los tubos para evaluar el
contiene pluripeptona Caldo nutritivo Se inocula directa crecimiento por turbiedad.
y extracto de carne Agar nutritivo de la muestra ya sea
que constituyen la estría simple o
fuente de carbono y cruzada a según sea
nitrógeno necesarias el análisis.
para el adecuado Se incuba en
desarrollo aerobiosis, a 35-37
bacteriano. ºC durante 24 horas.
Puede ser utilizado
además, como
preenriquecimiento
en la búsqueda de
Salmonella spp. a
partir de alimentos,
ya que permite
recuperar células
dañadas, diluir
metabolitos tóxicos y
sustancias
inhibitorias.
Prueba Fundamento Medio Inoculacion Resultados
Los discos contienen En tubo a partir de un
oxalato de dimetil-para- Agar Tripticasa soya cultivo puro, hacer una Positivo: observación de color rojo-
Prueba de fenilendiamina, el cual suspensión densa en fucsia en el disco y/o solución.
Oxidasa es el sustrato de la 0.2 ml de agua
enzima oxidasa. destilada estéril, y Negativo: el disco permanece sin
Los microorganismos agregar un disco de cambio de color.
que producen la OX.
enzima oxidasa se
evidencian porque en
presencia de oxígeno En portaobjetos:
atmosférico y citocromo humedecer el disco de
c, se oxida el sustrato OX con una gota de
presente en los discos agua y luego colocar
a un compuesto de sobre él la colonia en
color rojo-fucsia. estudio.

Generalmente dentro
del minuto, y a
temperatura ambiente
se detectan los
resultados positivos.
Una reacción lenta,
pasado los 2 minutos,
debe considerarse
negativa.